一种含有miRNA-873的药物组合物及其用图
【技术领域】
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[0001]本发明属于生物制药技术领域，涉及一种内源性非编码小RNA的新药及其用途，尤其是一种含有miRNA-873的药物组合物及其预防或治疗心脏疾病的用途。
【背景技术】
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[0002]心血管疾病是人类健康和生命的主要威胁，是人类健康的头号杀手，全世界范围内每年有一千七百多万人死于心血管疾病，其死亡率已接近所有癌症死亡率的总和；随着人民生活水平日益提高和饮食结构的改变，心血管疾病死亡率呈明显上升趋势，已超过癌症成为第一大致死原因。根据国家卫生部近期公布的最新统计结果表明，我国18岁及以上居民高血压患病率为18.8%，估计全国患病人数1.6亿多，由此造成的心肌肥厚、心肌梗死、冠心病、以及心力衰竭等凋亡相关心脏疾病的病人达几千万。目前关于心脏疾病发病机理尚不完全清楚，心脏疾病的预防、诊断和治疗尚不能达到让人满意的效果，急需开发新的技术、方法用于心脏病的诊断、防治。miRNA是新近研究发现的一类内源性非编码小RNA分子，许多研究表明miRNA对于维持心脏正常生理功能具有重要作用，心脏中的miRNA异常表达与许多心脏疾病的发生相关。因此，将miRNA作为心脏疾病治疗的靶点，开发相关药物具有潜在的临床应用价值。单一的miRNA可以同时作用于多个靶基因的mRNA的表达，药物作用于一个miRNA可以调节多个参与心脏发病基因的表达，影响多个信号通路，从整体上达到治疗疾病的目的。由于miRNA在心脏病理状态下表达水平不同，因此可以通过检测miRNA的表达水平来预测诊断疾病。
[0003]心肌细胞死亡是许多心血管疾病的细胞学基础。细胞死亡主要包括凋亡和坏死两种形式，过去的观点认为细胞凋亡受信号通路调控，而坏死不受信号通路调控，是一种被动的细胞死亡形式。近年来研究发现细胞坏死(Necroptosi s)，是一个主动的、高度有序的、由基因控制及一系列酶参与的过程，对正常胚胎发育，维持细胞群体及恶性病变过程中均起重要作用，在保证多细胞生物的健康生存过程中扮演着关键的角色。细胞坏死信号通路调控，涉及蛋白激酶RIPl和RIP3等分子，同时细胞坏死的调控分子与炎症、神经系统疾病、免疫功能异常密切相关。在许多心肌损伤或心脏病理状态下，如心肌缺血再灌注损伤、心肌肥大、心力衰竭等，心肌细胞均会发生坏死。然而心肌细胞坏死的信号通路还远未阐明，miRNA在调控心肌细胞坏死过程中的通路也有待进一步研究，所以寻找心脏中特异表达的、参与心肌细胞坏死的miRNA，阐明其作用机理，对于开发以miRNA为策略的心脏疾病的诊断、治疗具有及其重要的意义和应用前景。
【发明内容】
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[0004]本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，寻求提供一种含有miRNA-873的药物组合物及其预防或治疗心脏疾病的用途。
[0005]为了实现上述目的，本发明涉及的含有miRNA-873的药物组合物包括miRNA-873、1,2- 二油酰基-3-三甲氨基丙烷(DOTAP)、DC胆固醇、1，2- 二油酰基-3-磷脂酰乙醇胺(DOPE)、聚乙二醇2000 (PEG2000)和磷酸盐缓冲液，每毫升含有miRNA-873的药物组合物中1，2_ 二油酰基-3-三甲氨基丙烷(DOTAP)含量为0.5-25mg，miRNA-873与1，2_ 二油酰基-3-三甲氨基丙烷(DOTAP)的摩尔比为1:150-205，DC胆固醇含量为0.l_5mg，l，2-二油酰基-3-磷脂酰乙醇胺(DOPE)含量为0.l-20mg，聚乙二醇2000(PEG2000)含量为l_80mg，其余为磷酸盐缓冲液。
[0006]本发明所述miRNA-873 的序列为 5’ -GCAGGAACUUGUGA⑶CUCCU-3’。
[0007]本发明所述磷酸盐缓冲液的pH值为6.0-8.00
[0008]本发明的含有miRNA-873的药物组合物，用于治疗心肌梗死、心肌缺血损伤、心肌肥厚或心肌纤维化的心脏疾病。
[0009]本发明涉及的含有miRNA-873的药物组合物在心脏中高表达，心肌缺血损伤和H2O2诱导的心肌细胞死亡过程中，miRNA-873表达显著下调；通过转染miRNA-873药物组合物或miRNA-873转基因小鼠加强miRNA-873的表达能够抑制心肌细胞坏死及心肌缺血损伤，心肌梗死面积减少；心肌缺血再灌注损伤后，过表达miRNA-873能够减轻缺血再灌注损伤所致的坏死，减小心肌梗死面积，过表达miRNA-873还能改善缺血再灌注损伤所致的心功能的损伤；miRNA-873通过抑制心肌细胞坏死对心脏具有保护作用，miRNA-873对许多心脏疾病具有潜在的预防和治疗价值。
[0010]本发明设计的药物组合物与现有技术相比，H2O2诱导或心肌缺血损伤过程中miRNA-873表达显著下调，miRNA-873的下调能诱导心肌细胞坏死的发生；miRNA_873在缺血再灌注动物模型的心肌组织中表达下调，过表达miRNA-873的心脏特异性转基因小鼠，可以抵抗心肌缺血再灌注损伤，心肌梗死面积减少，心功能显著改善。通过将miRNA-873药物组合从冠状动脉注射入小鼠心脏，发现心肌缺血损伤程度明显被抑制，动物模型证明miRNA-873对缺血性心脏病的治疗作用，将miRNA-873与载体包装形成药物分子，通过口服或注射用于防治心脏疾病和改善心脏功能，阻止心肌纤维化及心肌重构的发生；其药物组合物制备工艺简单，药效明显，使用方便，治疗环境友好。
【附图说明】
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[0011]图1为心肌缺血损伤及H2O2诱导的心肌细胞死亡过程中miRNA-873表达水平的变化的试验结果示意图，图中A为原代心肌细胞H2O2处理miRNA-873表达水平的试验结果示意图；B为小鼠心肌缺血miRNA-873表达水平的试验结果示意图。
[0012]图2为miRNA-873过表达抑制H2O2诱导的心肌细胞坏死的实验结果示意图。原代心肌细胞转染miRNA-873药物组合物，检测miRNA-873过量表达对H2O2诱导的心肌细胞坏死的作用。图中使用碘化丙啶(PI)染色标记坏死心肌细胞，DAPI染色标记心肌细胞的细胞核，计算发生坏死的细胞数占心肌细胞数目的百分比。
[0013]图3为miRNA-873过表达抑制心肌缺血损伤实验结果示意图，图中A为小鼠经冠动脉注射miRNA-873药物组合物后，其心脏的左心室面积(LV)所占的百分比和危险区总面积(AAR)所占的百分比实验结果示意图；图中B为小鼠经冠动脉注射miRNA-873药物组合物后对缺血再灌注手术(I/R)引起的心肌坏死的实验结果示意图。
【具体实施方式】