三氧化二砷联合沙利度胺在治疗胃肠道间质瘤中的应用的制作方法

本发明涉及医药领域，具体涉及一种经典药物——三氧化二砷联合沙利度胺的新应用，是在尚未攻克的胃肠道间质瘤耐药的难题上的应用，且大大缓解患者经济负担。

背景技术：

胃肠道间质瘤是最常见的消化道间叶源性肿瘤，伊马替尼靶向治疗初始疗效显著，然而一般在平均治疗24个月后，将产生耐药，大大影响患者预后，所以伊马替尼继发性耐药是临床的一大难点。三氧化二砷即砒霜，以毒入药的经典，在治疗急性早幼粒细胞白血病上取得了突出疗效，可以诱导细胞凋亡。沙利度胺是经典的抗血管生成、调节免疫的药物，常作为辅助治疗用药。目前，没有三氧化二砷联合沙利度胺用于治疗对伊马替尼继发性耐药的胃肠道间质瘤的相关研究。

技术实现要素：

为了克服胃肠道间质瘤对伊马替尼的继发性耐药,本发明解决现有技术中的缺陷和技术不足，借助本团队前期发明的胃肠道间质瘤耐药细胞及裸鼠移植瘤模型，提供一种三氧化二砷联合沙利度胺在伊马替尼耐药的胃肠道间质瘤的新应用。

三氧化二砷联合沙利度胺在治疗胃肠道间质瘤中的应用，用于制备治疗伊马替尼耐药的胃肠道间质瘤的细胞毒药物，三氧化二砷通过抑制细胞增殖相关mapk通路，提高胃肠道间质瘤对伊马替尼的敏感性，促进癌细胞凋亡；沙利度胺作用于内环境，靶向抗肿瘤血管生成，起到协同效应克服耐药胃肠道间质瘤耐药。

所述的细胞毒药物，三氧化二砷在耐药胃肠道间质瘤细胞的剂量是2ug/ml（药物加入培养基后作用14h，24h，48h后检测，14h已经起效，48h作用明显），在相应裸鼠移植瘤模型的剂量为5mg/kg（腹腔注射给药，每天1次）；沙利度胺在耐药胃肠道间质瘤细胞的剂量是37.5umol（药物加入培养基后作用14h，24h，48h后检测，14h已经起效），在相应裸鼠移植瘤模型的剂量为200mg/kg（灌胃给药，每天1次）。

所述的细胞毒药物，包括临床上可接受的盐、复方药物组合物，以及临床上可接受的制剂。

所述的细胞毒药物中，三氧化二砷制剂形式包括注射剂、冻干粉针剂、散剂；沙利度胺制剂形式包括溶液剂、乳剂、口服液、混悬剂、散剂、颗粒剂、丸剂、片剂。

本发明是三氧化二砷联合沙利度胺在耐药胃肠道间质瘤的新应用，有益效果是，通过抑制细胞增殖相关mapk通路，靶向抗肿瘤血管生成，克服胃肠道间质瘤耐药，大大提高患者疗效，且具有很好的卫生经济学效应，减轻国民的经济负担。

附图说明

图1为三氧化二砷联合沙利度胺抑制胃肠道间质瘤耐药株细胞增殖（as2o3和沙利度胺对imatinib耐药gist-882细胞株活力的影响）。

图2为三氧化二砷联合沙利度胺抑制胃肠道间质瘤耐药株mapk信号通路（rtk-ras-raf-mek1/2-erk1/2信号通路wb结果）。

图3为三氧化二砷联合沙利度胺促进耐药胃肠道间质瘤细胞移植瘤裸鼠瘤体缩小（对肿瘤生长曲线的影响）。

图4为三氧化二砷联合沙利度胺促进耐药胃肠道间质瘤细胞移植瘤裸鼠瘤体缩小（动物原始图片）。

图5为三氧化二砷联合沙利度胺通过抑制mapk通路，起到逆转耐药作用。

图6为三氧化二砷联合沙利度胺抗肿瘤血管生成作用。

图中imatinib.伊马替尼，as2o3.三氧化二砷，ck、耐药株、imatinib耐药、耐药模型组.均为阴性对照组，thal、thalidomide.均为沙利度胺，联合、a+t.均为联合用药组。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例和附图，对本发明作进一步的阐述，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。

实施例

检测三氧化二砷和沙利度胺单用和联合对胃肠道间质瘤细胞增殖、周期和凋亡的影响，分为：三氧化二砷组、沙利度胺组、联合组、阴性对照组。利用cck-8法检测用药对各组细胞增殖的影响，三氧化二砷组（μg/ml）：0，0.1，1，2，4，8，沙利度胺组（μmol）：3.75，18.75，37.5，75，150，300。发现三氧化二砷在2ug/ml浓度时抑制率接近50%，沙利度胺在37.5umol浓度时没有毒副作用。利用流式细胞术annexinv-fitc/pi双染技术检测药物对细胞周期及凋亡的影响，三氧化二砷组：2ug/ml，沙利度胺组：37.5umol。经药物处理后的细胞，从中提取的蛋白采用westernblot法检测imatinib耐药的gist细胞经药物处理前后细胞增殖转录相关蛋白表达的变化。balb/c/nu/nu品系裸鼠，鼠龄3～4周，体重19.0±2.0g。收集胃肠道间质瘤耐药gist-r细胞系和胃肠道间质瘤敏感gist882细胞系数目约1×10⁷接种于裸鼠背部皮下，建立人胃肠道间质瘤的裸鼠移植瘤模型，观察gist-r细胞系接种裸鼠观察成瘤情况；待肿瘤长到100mm³将荷瘤小鼠按肿瘤体积随机分为4组：对照组，三氧化二砷组，沙利度胺组，联合组，每组10只。三氧化二砷组：生理盐水溶解为0.5mg/ml工作液，全程避光，腹腔给药，剂量为5mg/kg，每天一次，连续给药28d。沙利度胺组：将沙利度胺用研钵碾碎，生理盐水混匀制成20mg/ml混悬液，全程避光，灌胃给药，剂量为200mg/kg，每天一次，连续给药28d。联合组：分别给予5mg/kg的三氧化二砷和200mg/kg的沙利度胺，每天一次，连续给药28d。对照组给予等体积生理盐水。应用免疫组织化学方法检测移植瘤组织中mapk通路表达情况，免疫组化检测cd34来观察肿瘤微血管密度，探索其机制。

图1显示，三氧化二砷对gist-882imatinib耐药株细胞的ic50测定结果为156.9μm，有明确的体外抗肿瘤作用，在2ug/ml浓度时抑制率接近50%，沙利度胺在37.5umol浓度时没有毒副作用，作为后续研究的用药浓度。

图2显示，三氧化二砷对mapk信号通路抑制作用较强，braf，p-erk1/2表达都有明显下调；thal对肿瘤细胞生长增殖无明显作用；联合用药有强协同作用，进一步下调braf，p-erk1/2表达。wb结果与细胞增殖实验结果基本一致，说明联合组有强抗肿瘤活性，mapk信号通路是其可能的作用靶点。

图3和图4显示，与耐药株组比，三氧化二砷组和联合组肿瘤体积在给药3d后有减小。

图5显示，三氧化二砷在体内对mapk信号通路抑制作用较强，kras，braf，erk1/2，p-erk1/2表达都有明显下调；thal对肿瘤细胞生长增殖无明显作用；联合用药有强协同作用，进一步下调erk1/2和p-erk1表达。

图6显示，与对照组相比，三氧化二砷和沙利度胺单独作用对胃肠道间质瘤cd34的表达有一定的抑制趋势，联合作用具有显著性差异（p<0.01）。

以上所述的实施例，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。