一种具有抗衰老作用的人参地上部位活性成分提取物的制备方法及其应用与流程

1.本发明涉及化妆品领域，具体为一种具有抗衰老作用的人参地上部位活性成分提取物的制备方法以及该提取物在化妆品制备中的应用。


背景技术：

2.人参在化妆品中的功效很多，其抗衰老功能广为人知。
3.人参在抗自然老化，抗光老化以及在基因抗老方面有很好的功效。
4.现有的人参产品常用药用部位为人参根及根茎(地下部位)，人参地上部位，包括人参茎叶及花，常常被人们所忽略，其整体应用的报道尚未见报道。
5.随着人类生活水平的提高，人们对抗辐射的防护意识不断增强，筛选出一种天然有效的抗辐射药物已经成为许多科研工作者的研究热点。
6.研究表明，人参具有较为显著的抗辐射、抗氧化衰老的作用，在开发新型抗辐射损伤药物及护肤产品方向具有很高的研究价值。
7.本发明通过抗氧化实验(dpph法)、细胞抗辐射筛选包括cck
‑
8法检测生存率、elisa法检测相关指标、流式细胞术检测凋亡与周期，对人参地上及地下部位抗皮肤衰老进行了比较，结果表明人参地上部位具有更好的抗辐射作用，为进一步开发抗辐射损伤药物及护肤品提供了理论依据。
8.本发明提供了人参地上部分提取物的制备方法。
9.本发明提供了人参地上部分提取物，适用于制备化妆品。
10.地上部位与地下部位相比，在抗皮肤衰老方面具有更加显著的效果。


技术实现要素：

11.本发明提出具有抗衰老作用的人参地上部位活性成分的制备，以及人参地上部位在化妆品中的应用研究。
12.本发明公开的人参制备为人参地上部位通过超高压提取物技术制备，研究人参地上部位的活性；本发明通过细胞辐射模型的建立，通过优化筛选有效浓度。经过检测提取制备的人参地上部位具有抗辐射，抗氧化、抗衰老的作用。
13.本发明的技术方案是这样实现的：通过人参地上部位(茎、叶、花)的提取制备。人参地上部位例如是，茎、叶、花等。
14.在本申请中，人参地上部位是指人参的茎叶花之一，或者两者、三者的混合物。
15.进一步地，利用不同溶剂萃取不用活性成分。
16.进一步地，利用dpph法研究不同溶剂萃取出的活性成分的抗氧化活性。
17.进一步地，利用筛选出的活性成分进行抗辐射和抗衰老的功效研究。
18.本发明提供了一种具有抗衰老作用的人参地上部位活性成分提取物的制备方法，包括用有机溶剂处理人参地上部位，在超高压条件下，提取出所述具有抗衰老作用的人参
地上部位活性成分提取物。
19.优选地，人参地上部位为人参的根茎叶。
20.优选地，人参地上部位为6月份花期的人参地上部位。
21.优选地，人参地上部位利用45℃低温干燥，利用超高压，结合乙醇提取，离心过滤，通过不同溶剂萃取活性成分。
22.提取工艺参数为乙醇浓度72％、提取压力423mpa、料液比1:50(g:ml)、保留时间为4分钟。
23.提取工艺参数也可以是一下范围：乙醇浓度40％
‑
90％、提取压力100
‑
600mpa、料液比1:20
‑
1:80(g:ml)、保留时间为2
‑
10分钟。
24.提取人参地上部位的有机溶剂是乙酸乙酯。
25.乙酸乙酯提取物具有抗氧化能力。
26.一种具有抗衰老作用的人参地上部位活性成分提取物在化妆品中的应用。是指在抗辐射、抗氧化、抗衰老中的应用。
27.所述具有抗衰老作用的人参地上部位活性成分提取物是用下述方法制备的，包括用有机溶剂处理人参地上部位，在超高压条件下，提取出所述具有抗衰老作用的人参地上部位活性成分提取物。
28.本发明公开的有抗衰老作用的人参地上部位活性成分，具有以下有益效果：
29.1.本发明公开的有抗衰老作用的人参地上部位经过超高压提取技术制备而得。通过正交对提取物工艺优化。利用不同萃取剂，进行萃取，得到不同极性萃取物，干燥保存。
30.2.对不同极性的人参地上部位萃取物进行dpph法评估萃取物的活性，筛选出活性好的萃取物。
31.3.对筛选出的人参地上部位萃取物进行辐射的测量，人参地上部位对抗辐射和抗衰老有很好的效果。
附图说明
32.图1显示不同uvb照射剂量对hacat细胞生存率的影响。横坐标是照射剂量。纵坐标是细胞生存率。
33.图2显示人参地上及地下部位不同浓度乙酸乙酯相对hacat细胞生存率的影响。横坐标显示人参地上及地下部位乙酸乙酯相的浓度，维生素a为阳性对照药。纵坐标是细胞生存率。
34.图3显示人参地上及地下部位不同浓度乙酸乙酯相对hacat细胞生存率的影响。图中每组1、2、3表示药物浓度12.5、50、100μg/ml，uvb照射处理细胞后引起细胞存活率的极显著下降(p＜0.01)。
35.图4显示人参地上及地下部位不同浓度乙酸乙酯相对uvb照射诱导凋亡细胞sod、mda、cox
‑
2、mmp
‑
9活性的影响。图中每组1、2、3表示药物浓度12.5、25、50μg/ml，与空白对照组比较，uvb模型组的sod活性明显降低(p<0.01)，mda水平显著升高(p<0.01)，cox
‑
2、mmp
‑
9水平明显降低(p<0.01)；而与uvb模型组比较，给药处理组(人参地上、地下部位乙酸乙酯相及阳性药维生素a)sod活性明显增高(p<0.01)，mda水平显著降低(p<0.01)，cox
‑
2、mmp
‑
9水平明显升高(p<0.01)，且表明三种药物对hacat细胞辐照后sod、cox
‑
2、mmp
‑
9含量上调、sod
含量下调作用显著，其中以50mg/l给药组最为明显，与阳性药维生素a结果相当。
36.图5显示流式细胞仪检测细胞凋亡结果。与空白组相比，hacat细胞经0.72j/cm2的uvb辐射后，凋亡细胞数量显著增加(p＜0.01)，经药物处理后均可明显减少细胞凋亡数量(p＜0.01)，其中人参地上部位相比于地下部位具有更好的抑制细胞凋亡作用。
37.图6显示流式细胞仪检测细胞周期结果。与空白组相比，hacat细胞经0.72j/cm2的uvb辐射后，发生了明显的s期阻滞。加入人参地下部位乙酸乙酯相处理后，s期细胞数量增多，无统计学差异(p＞0.05)；加入人参地上部位乙酸乙酯相及阳性药维生素a处理后，s期细胞数量呈显著性下降(p＜0.01)，表明人参地上部位能够明显减轻uvb辐射后hacat细胞周期的阻滞。
具体实施方式
38.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
39.实施例
40.1.提取工艺参数
41.最佳提取工艺参数为乙醇浓度72％、提取压力423mpa、料液比1：50(g：ml)和保压时间4min。
42.2.本发明通过应用dpph法测定抗氧化活性对各实施例及对比例进行有效性分析。
43.分别精密称取人参地上及地下各极性部位(石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相、正丁醇相)样品，用无水乙醇分别溶解并配制成一系列浓度梯度的样品溶液，待测。人参不同部位不同极性物质的dpph自由基清除能力以ic
50
值表示，以抗氧化剂2,6
‑
二叔丁基对甲基苯酚(bht)为阳性对照，评价其体外抗氧化活性。
44.不同极性部位对dpph自由基的清除能力差异明显，其中人参地上部位乙酸乙酯相对于其他部位抗氧化能力最好(表1)。
45.表1人参不同极性部位对dpph自由基的清除能力(n＝3,g/l)
[0046][0047]
3.不同uvb照射剂量对hacat细胞生存率的影响
[0048]
结果见图1，随着照射剂量的增加，细胞生存率呈递减趋势，实验选取细胞活力抑
制50％时的照射剂量0.72j/cm2，进行后续实验。
[0049]
4.人参地上及地下部位不同浓度乙酸乙酯相对hacat细胞生存率的影响
[0050]
结果见图2，在0mg/l～100mg/l浓度范围内，人参地上及地下部位乙酸乙酯相作用于hacat细胞的存活率≥90％。因此，在该浓度范围内药物对细胞安全(图1)。维生素a为阳性对照药。
[0051]
5.人参地上及地下部位不同浓度乙酸乙酯相对hacat细胞生存率的影响
[0052]
结果见图3(图中每组1，2，3表示药物浓度12.5、50、100μg/ml)，uvb照射处理细胞后引起细胞存活率的极显著下降(p＜0.01)。人参不同部位提取物可有效防止uvb照射对细胞的损伤，与uvb照射组相比，人参根及种子50mg/l乙酸乙酯相能够提高hacat细胞存活率(p＜0.05)，人参地上、地下部位50mg/l乙酸乙酯相及阳性药维生素a能够显著提升hacat细胞存活率(p＜0.01)。
[0053]
图3是不同浓度乙酸乙酯相对uvb照射诱导凋亡hacat细胞生存率的影响。
[0054]
注：与空白组比，δp<0.05，δδp<0.01；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01。
[0055]
6.人参地上及地下部位不同浓度乙酸乙酯相对uvb照射诱导凋亡细胞sod、mda、cox
‑
2、mmp
‑
9活性的影响
[0056]
结果见图4(图中每组1，2，3表示药物浓度12.5、25、50μg/ml)，与空白对照组比较，uvb模型组的sod活性明显降低(p<0.01)，mda水平显著升高(p<0.01)，cox
‑
2、mmp
‑
9水平明显降低(p<0.01)；而与uvb模型组比较，给药处理组(人参地上、地下部位乙酸乙酯相及阳性药维生素a)sod活性明显增高(p<0.01)，mda水平显著降低(p<0.01)，cox
‑
2、mmp
‑
9水平明显升高(p<0.01)，且表明三种药物对hacat细胞辐照后sod、cox
‑
2、mmp
‑
9含量上调、sod含量下调作用显著，其中以50mg/l给药组最为明显，与阳性药维生素a结果相当，故以此浓度作为后续实验浓度。
[0057]
图4是不同浓度乙酸乙酯相对uvb照射诱导凋亡细胞相关指标的影响。
[0058]
(a.sod b.mda c.cox
‑
2d.mmp
‑
9)
[0059]
注：与空白组比，δp<0.05，δδp<0.01；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01。
[0060]
7.流式细胞仪检测细胞凋亡结果
[0061]
由图5及表3可见，与空白组相比，hacat细胞经0.72j/cm2的uvb辐射后，凋亡细胞数量显著增加(p＜0.01)，经药物处理后均可明显减少细胞凋亡数量(p＜0.01)，其中人参地上部位相比于地下部位具有更好的抑制细胞凋亡作用。
[0062]
图5是uvb照射hacat细胞药物治疗后细胞凋亡分析(a.对照组b.uvb模型组c.人参地上部位组d.人参地下部位组e.维生素a组)。
[0063]
表3 annexin
ꢀⅴ‑
fitc/pi法检测细胞凋亡(n＝3,％)
[0064][0065][0066]
注：与空白组比#p<0.05，##p<0.01，；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01。
[0067]
8.流式细胞仪检测细胞周期结果
[0068]
由图6及表4可见，与空白组相比，hacat细胞经0.72j/cm2的uvb辐射后，发生了明显的s期阻滞。加入人参地下部位乙酸乙酯相处理后，s期细胞数量增多，无统计学差异(p＞0.05)；加入人参地上部位乙酸乙酯相及阳性药维生素a处理后，s期细胞数量呈显著性下降(p＜0.01)，表明人参地上部位能够明显减轻uvb辐射后hacat细胞周期的阻滞。
[0069]
图6是uvb照射hacat细胞药物治疗后细胞周期分析(a.对照组b.uvb模型组c.人参地上部位组d.人参地下部位组e.维生素a组)
[0070]
表4 annexin
ꢀⅴ‑
fitc/pi法检测细胞凋亡(n＝3,％)
[0071][0072]
注：与空白组比#p<0.05，##p<0.01，；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01。
[0073]
本发明已经采用实施例，结合附图进行了详细而示例性说明，在不背离本发明的精神和实质的情况下，所做的改进和改变也属于本发明的保护范围。本发明的保护范围仅由权利要求所表明。本发明的各类技术方案可以进行相互组合，所描述的技术特征可以在不同技术方案之间进行移植和组合，将会产生更多的技术方案，这些都在本发明的保护范
围之内。
[0074]
基于本发明中的制作工艺和实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。