酸浆苦素B在制备治疗急性肺损伤的药物中的应用

本发明涉及中医药技术领域，更具体的说是涉及酸浆苦素b在制备治疗急性肺损伤的药物中的应用。

背景技术：

急性肺损伤(acutelunginjury，ali)是一种常见的临床危重病症。临床上以急性肺部炎症暴发、顽固性低氧血症等为其主要症状，进而形成急性进行性呼吸窘迫，最终导致肺组织功能衰竭，病死率极高，严重威胁重症患者生活质量乃至生命。据统计，ali的发病率为每年59/10万～79/10万，随着年龄的增加而上升，在75至84岁年龄段的患者中可达到306/10万。在全球，ali的病死率则高达40～60％。

ali病因病机复杂多样，目前治疗ali的西药主要包括：抗炎药物、血管扩张剂、抗氧化剂及其他药物(表面活性剂、β受体激动剂、抗凝血剂等)。虽然临床药物种类繁多，但无法明显改善患者的生活质量及降低病死率，无法真正满足病人内心的迫切需求，如何有效防治ali成为危重病医学亟需解决的重点和难点之一。

锦灯笼(physalisalkekengilvar.franchetii(mast.)makino)为茄科酸浆属多年生草本植物的干燥宿萼或带果实的宿萼，又称红姑娘、挂金灯等。其长期以来用于治疗呼吸道系统的疾病，此外还被制成饮料、果酱等日常食品，具有很高的营养和药用价值。酸浆苦素类化合物是锦灯笼化学成分研究的主要方向，其母核上一般都会有28个位置固定的碳原子，这种化合物的基本骨架为13,14-裂环-16,24-环麦角甾烷，氧化性很高。早期研究的科研人员通过味觉感知，因其味道偏苦，所以命名酸浆苦素。现己经分离得到单体化合物酸浆苦素a、b、c、d、e、f、g、h、i、j、k、l、m、n、o、p、r、s；酸浆苦素b(physalinb，pb)为酸浆苦素的一种，其分子式为c28h30o9，相对分子质量为510。现代药理研究证实:酸浆苦素p对香烟烟雾暴露所致急性肺损伤疾病实验模型的肺功能有保护作用，对大鼠肺部病理变化有逆转作用；对香烟诱导的copd大鼠血清、balf中促炎因子il-6的表达有抑制作用，而对抑炎因子il-10的表达有促进作用，从而减轻气道炎症；酸浆苦素e具有一定的抗炎、抗菌作用；酸浆苦素h显著抑制小鼠耳廓肿胀程度和体内炎症细胞因子interleukin-2和interleukin-6的分泌。

因此，如何提供酸浆苦素b在制备治疗急性肺损伤的药物中的新应用是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现要素：

本发明的目的在于针对现有技术中的不足，提供酸浆苦素b在制备治疗急性肺损伤的药物中的应用。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

酸浆苦素b在制备治疗急性肺损伤的药物中的应用，所述酸浆苦素b具有如下化学结构：

优选地，所述酸浆苦素b制成任何一种药学上可接受的剂型。

优选地，所述任何一种药学上可接受的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、乳剂、口服液、丸剂、注射剂、散剂、吸入制剂、喷雾剂、气雾剂、糖浆剂和口服溶液制剂。

本发明用于制备治疗急性肺损伤疾病的药物时，其口服或非口服给药均是安全的。在口服情况下，其可以是任何常规形式给药，如散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、滴丸、软胶囊、漂浮剂、口服液、悬浮液、糖浆、口腔含片、喷雾剂或气雾剂等；当该药物非口服给药时，可采用任何常规形式，如栓剂、注射剂：静脉注射、肌肉注射、软膏剂、吸入剂等。

一种制备治疗急性肺损伤的药物制剂，由有效量的酸浆苦素b和药学上可接受的辅料组成。

优选地，所述酸浆苦素b的有效量为10-20mg/kg。

优选地，辅料为崩解剂，填充剂，润滑剂，润湿剂，乳化剂或粘合剂。

本发明制备治疗急性肺损伤的药物时是与固体或液体的赋形剂一起构成的，这里使用的固体或液体赋形剂在本领域是众所周知的，下面举几个具体例子，固体制剂的赋形剂有乳糖、淀粉、浆糊精、碳酸钙、合成或天然硫酸铝、氯化镁、硬脂酸镁、碳酸氢钠、干燥酵母等；液体制剂的赋形剂有水、甘油、丙二醇、单糖浆、乙醇、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇等；软膏剂的赋形剂可以使用脂油，含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂蜡、木腊、液体石蜡、树脂、高级蜡等组合成的疏水剂或亲水剂。

含有上述酸浆苦素b的药物组合物在制备治疗急性肺损伤疾病药物中的应用。

目前有研究发现，急性肺损伤ali病人，以急性肺部炎症暴发、顽固性低氧血症等为其主要症状，中性粒细胞、巨噬细胞以及淋巴细胞等分泌的类炎症介质、细胞因子参与了ali发病过程。在参与ali炎症的诸多细胞因子中，促炎性因子tnf-α，il-6和il-1β是起主要作用的炎症因子，促炎性因子tnf-α，il-6和il-1β的表达水平能够代表该病的严重程度。il-6在ali急性肺部炎症爆发病人的诱导痰与血清中均被检测到升高，且il-6水平随着ali级数的增大而逐渐上升，反映了ali的炎症严重程度；tnf-α主要分布在气道上皮细胞和巨噬样细胞，机体发生感染时,诱导tnf-α大量释放，导致中性粒细胞和单核巨噬细胞等炎性细胞聚集，血管通透性增加，引起急性肺损伤；细胞凋亡是ali患者的重要病理机制之一，由于细胞凋亡过程中依赖与caspase-1的活化，而该通道是接到il-1β活化合成的重要信号，其在炎症瀑布效应与级联效应中起到重要作用，能够放大炎症反应从而导致机体启动“病理性自杀”过程，表面ali的发生发展和il-1β的参与有关。

本发明结合以往相关研究基础，采用酸浆苦素b进行动物实验。lps诱导的ali是一种表征良好的、可重复的、高度相似的ali模型，用于检测酸浆苦素b的治疗潜力。采用lps诱导的ali大鼠模型，并用酸浆苦素b干预动物，实验结果显示：1、灌胃给予15mg/kg的酸浆苦素b预防给药后明显减轻了lps诱导的病理改变；2、酸浆苦素b对肺泡-血管屏障的完整性、肺水肿和细胞损伤具有较强的保护作用；3、酸浆苦素b对lps诱导的ali小鼠的肺呼吸功能有保护作用；4、酸浆苦素b的上述作用与抑制小鼠血清和balf中促炎因子il-6的表达、细胞因子tnf-α和il-1β的表达相关，类似于在组织病理学和微血管通透性分析中ali对酸浆苦素b治疗相关的保护作用，从而减轻气道炎症；5、酸浆苦素b治疗可以抑制ali小鼠肺部的凋亡。本发明的酸浆苦素b可作为药物活性成分，以及药物学上可接受的载体制备防治急性肺损伤疾病的药物组合物，为ali的预防和治疗提供临床指导与依据，进而减轻患者痛苦，提高身体健康，改善生活质量，本发明的剂量可以根据服用方式，病人的年龄和体重及病情严重程度和其它类似的因素而改变。

经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开了酸浆苦素b在制备治疗急性肺损伤的药物中的应用，具有以下技术效果：本发明提供的酸浆苦素b在制备治疗急性肺损伤的药物中的应用，其治疗急性肺损伤效果显著，能作为防治急性肺损伤的有效药物，本发明的酸浆苦素b作为药物活性成分，为ali的预防和治疗提供临床指导与依据，进而减轻患者痛苦，提高身体健康，改善生活质量。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。

图1附图为本发明试验例1中鼠肺组织病理染色图(h&e染色)(100倍放大，n＝3)。

图2附图为本发明试验例2中酸浆苦素b对lps诱导的小鼠ali的保护作用的检测数据图；

其中，(a)为肺湿/干(w/d)比。(b)为肺组织中mpo活性检测。(c)为balf和血清中炎症细胞总数。与空白组比较，###p<0.001；与lps组比较，***p<0.001，n＝6。

图3附图为本发明试验例4中酸浆苦素b抑制lps诱导的小鼠ali炎症反应的检测数据图；

其中，(a、b)为elisa测定balf和血清中tnf-α、il-1β、il-6的表达；(c)为rt-pcr测定tnf-α、il-1β、il-6的表达。(n＝6；与对照组比较，###p<0.001；与lps组比较，***p<0.001)。

图4附图为本发明试验例5中肺组织中lps诱导的ali肺损伤细胞凋亡的检测数据图；

其中，(a、b)为蛋白质印迹分析测定肺组织中bcl-2和bax蛋白水平，n＝4；(c、d)为elisa检测caspase-3、caspase-9的活性，n＝4。与空白组比较，###p<0.001；与lps组比较，**p<0.01，***p<0.001。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

本发明所涉及中药有效成分酸浆苦素b的制备方法，具体包括如下内容：

取干燥锦灯笼宿萼，用75％乙醇回流提取3次，每次2h，减压浓缩得浸膏。该提取物以ab-8型大孔树脂色谱柱吸附，用30％、50％、70％、90％的乙醇洗脱。50％乙醇部分(230g)置于硅胶柱色谱，依次以二氯甲烷:甲醇(9:1、5:1、1:1、0:1)和水洗脱，采用薄层色谱分析可知得到9个组分(frs.p-2-1～frs.p-2-9)。将frs.p-2-1置于硅胶柱上，用二氯甲烷、二氯甲烷:甲醇(9:1)洗脱，得到3个组分(frs.p2-2-1～p2-2-3)。由frs.p2-2-1可获得无色针晶状化合物7(102mg)。通过¹h-nmr、¹³c-nmr、ms质谱分析，鉴定化合物7为酸浆苦素b。经hplc-uv检测，酸浆苦素b的纯度>99％。酸浆苦素b的¹hnmr(300mhz,dmso-d6)数据如下：

实施例2

本发明所涉及中药有效成分酸浆苦素b制成片剂的方法，具体包括如下内容：

按以下处方比例：酸浆苦素b20g，交联聚维酮50g，硫酸钙400g，滑石粉2.5g，硬脂酸镁2.5g，称取酸浆苦素b，崩解剂和填充剂，混合均匀，以适量40％peg6000为粘合剂制粒，过20目筛，60℃干燥，过40目筛整粒，压制成片(控制片剂的硬度为6～8kg·cm^－2)，包衣或喷薄膜衣即得。

下边通过药效学试验来进一步说明本发的效果。

急性肺损伤模型的建立及给药，具体包括如下内容：

72只雄性balb/c小鼠，体重20～22g，随机分为6组：空白组、模型组、阳性药组(地塞米松5mg/kg)、酸浆苦素b给药高(20mg/kg)、中(10mg/kg)、低(5mg/kg)剂量组，每组12只。适应性喂养3天。正式实验开始后，酸浆苦素b组均灌胃给予相应剂量的酸浆苦素b，空白组和模型组给予同体积蒸馏水，阳性药组灌胃给予地塞米松(5mg/kg)，酸浆苦素b组连续给药7天，每天1次。最后一次给药6h后，除空白组小鼠腹腔注射同体积生理盐水外，其他组小鼠均分别腹腔注射lps5mg/kg，6h后称重，麻醉小鼠进行取血随后处死取小鼠完整肺部进行各生化指标测定和组织病理学分析。根据病理学分析结果，确定酸浆苦素b最优剂量并选取四分组(即空白组、模型组、酸浆苦素b治疗组、酸浆苦素b单给药组)进一步分析。

试验例1：酸浆苦素b能减轻lps引起的肺组织病理学改变。

lps诱导的ali是一种表征良好的、可重复的、高度相似的ali模型，用于检测酸浆苦素b的治疗潜力。为了探讨不同剂量的酸浆苦素b的治疗效果，ali小鼠经酸浆苦素b处理，肺组织剥离后用苏木精和伊红染色(h&e)。通过观察肺部组织的病理变化(如附图1所示)，空白组未见明显异常，与空白组相比，模型组有了明显的组织学改变，包括间质水肿、肺泡壁增厚和大量炎性细胞浸润肺泡腔。经酸浆苦素b给药后明显减轻了lps诱导的病理改变，且效果呈现剂量依赖性，酸浆苦素b高剂量组(20mg/kg)最为显著。

试验例2：酸浆苦素b对lps诱导的小鼠ali的保护作用。

为进一步评价实验中酸浆苦素b(20mg/kg)对ali小鼠的保护机制，对lps诱导的肺水肿和微血管通透性相关的几个参数进行了量化，如湿/干肺重量比(w/d)、肺组织mpo活性、肺泡灌洗液(balf)和血清中炎症细胞总数。肺取右肺中叶，称重。肺组织在80℃恒温烤箱中加热48小时，然后称重以确定肺的基线干重；使用mpo检测试剂盒(购自深圳达科为生物公司)对肺组织中的mpo活性进行了评估。在460nm处测量光密度(od)值的变化以计算mpo活性。酸浆苦素b治疗基本消除了lps诱导的肺水肿和微血管通透性，肺湿重/干重比显著降低(附图2a)；肺组织mpo活性(附图2b)；balf和血清中的炎症细胞总数(附图2c)。表面酸浆苦素b对肺泡-血管屏障的完整性、肺水肿和细胞损伤具有较强的保护作用。

试验例3：酸浆苦素b对肺呼吸功能的影响。

血气分析用于检测呼吸功能和识别各种呼吸综合征。表1显示，与空白组比较，lps促使ph、hco3^-、hgb、pco2、po2、be上升；经pb治疗后前述指标都有所减轻。表明酸浆苦素b对lps诱导的ali小鼠有保护作用。

表1小鼠血气分析(n＝10,)

与空白组比较，^##p<0.01；与lps组比较，*p<0.05,**p<0.01

试验例4：酸浆苦素b能降低肺组织中tnf-α、il-1β、il-6的含量。

由于促炎性因子tnf-α，il-6和il-1β的局部表达已显示在ali进展中对肺中性粒细胞的浸润至关重要，因此我们还研究了酸浆苦素b是否在体内下调了这些细胞因子的表达。通过酶联免疫吸附测定法(elisa)对它们的水平在血清和balf中进行测定(附图3a、b)，并且在肺组织中评估了tnf-α，il-6和il-1β的相对mrna表达(附图3c)。elisa试剂盒购自深圳达科为生物公司。结果表明，酸浆苦素b抑制了ali小鼠中lps介导的tnf-α，il-6和il-1β的上调，类似于在组织病理学和微血管通透性分析中ali对酸浆苦素b治疗相关的保护作用。

试验例5：酸浆苦素b能抑制lps诱导的细胞凋亡。

bcl-2和bax是bcl-2家族中调节线粒体外膜通透性的两种主要蛋白，lps诱导的细胞凋亡伴随着抗凋亡蛋白bcl-2的表达降低以及促凋亡蛋白bax的表达增加。caspase酶可调控多种与凋亡相关的细胞和生化变化，其中caspase-3和caspase-8以及caspase-9为典型的促凋亡蛋白。为了确定酸浆苦素b是否减少了ali小鼠的凋亡以及随后的组织损伤，我们使用蛋白质印迹法(westernblot)和酶联免疫吸附法(elisa)测定肺组织中凋亡蛋白的水平。如附图4所示，与预期一样，lps处理组凋亡细胞明显增多，bcl-2/bax比值明显下降，caspase-3、9表达水平高于对照组。而酸浆苦素b处理可显著减少凋亡细胞数量，提高bcl-2/bax比值水平，降低caspase-3、9的表达。这些结果表明，酸浆苦素b治疗可以抑制ali小鼠肺部的凋亡。

本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。对于实施例公开的装置而言，由于其与实施例公开的方法相对应，所以描述的比较简单，相关之处参见方法部分说明即可。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。