一种阿霉素和环钯抗癌药物的纳米胶束的制备方法

mmol)和naoac
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3h2o (140 mg, 1.0 mmol)的甲醇(30 ml)溶液中，室温搅拌24 h，将反应混合物在真空下干燥。用氯仿提取该产物，以chcl3/meoh(9.5:0.5)为洗脱液，通过硅胶柱层析法进行纯化。洗脱溶液的浓缩为c2。
8.（3）将步骤（2）所得产物(170 mg, 0.2 mmol)加入含4-二苯基磷苯甲酸(3g，10 mmol)的丙酮(10 ml)溶液中，室温搅拌2小时，在真空下干燥。二氯甲烷提取该产物，并以石油醚：乙酸乙酯=4：1洗脱液通过硅胶柱层析法进行纯化。将红色洗脱液由二氯甲烷/正己烷(1:5)进行重结晶得到产物cp。
9.（4）室温下将三乙胺（tea）(1.3eq)溶液5ml中缓慢加dox
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hcl（52.3mg，1eq）的 dcm，随后加入 115mg步骤（3）中产物cp、35mg edci，室温避光搅拌反应过夜、氮气保护，tlc检测反应进度。反应结束后用稀盐酸水溶液洗 3 次，饱和食盐水洗 2 次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液中加入乙醚，有沉淀析出，分离沉淀和溶液，取上层溶液在 4℃冰箱放置继续沉淀，合并收集到的沉淀即得目标化合物cp-dox。
10.（5）1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐）（edc）（33.5mg，0.175mmol）和n-羟基硫代琥珀酰亚胺（nhss）( 38.0mg，0.175mol)加入到含有聚乙二醇（mpeg）(500mg, 0.1mmol)的pbs溶液中，在室温下搅拌30分钟。然后加入β-环糊精（0.09mol），室温搅拌24 h。用过量去离子水透析得到的溶液5天(白天每4小时换一次水)。冻干后得到的mpeg-cd为白色粉末。
11.（6）将mpeg-cd和cp-dox以1:1摩尔比溶解于合适的dmso中，然后放入去离子水中进行超声。通过透析除去dmso，得到cp-dox/mpeg-cd。
12.可选地，在步骤（1）中，所使用的二茂铁化合物为二茂铁甲醛。
13.可选地，在步骤（1）中，所使用的胺为(s)-(+)-四氢呋喃胺。
14.可选地，在步骤（4）中，所用的保护气氛为氮气或氩气。
15.可选地，在步骤（5）中，环糊精选用的是β-环糊精。
16.可选地，在步骤（5）中，聚乙二醇的分子量为5000。
17.本发明的创新之处和有益效果是：（1）本发明以二茂铁环钯化合物作为连接体，一边和β-环糊精形成非共价键，一边在离子键和π-π键的作用下连接阿霉素。在ros和酸性条件刺激下，释放出阿霉素和环钯化合物，阿霉素和环钯化合物有协同作用。
18.（2）本发明制备简单。
19.附图说明：图1是本发明实施实例cp-dox/mpeg-cd结构和释放示意图；图2为本发明实施实例cp-dox的合成图；图3为本发明实施实例cp-dox/mpeg
2k-cd、cp-dox/mpeg
5k-cd、cp-dox/mpeg
20k-cd的结构表征图。
20.图4 为本发明实施实例cp-dox/mpeg
2k-cd、cp-dox/mpeg
5k-cd、cp-dox/mpeg
20k-cd的透射电子电镜图（tem）。
21.图5为本发明实施实在37℃h2o2或ph=5.5刺激4 h纳米胶束cp-dox/mpeg-cd的丁达尔效应。
22.图6为本发明实施实例在37℃h2o2或ph=5.5刺激下阿霉素（dox）的释放图。
23.具体实施方式：为了更好的理解本发明，下面结合实施实例和附图对本发明作进一步地详细说明。但需要特别说明的是，实施实例仅用于对本发明进行进一步说明，本发明要求保护的范围并不局限于此。
24.实施实例1：将二茂铁甲醛(2.14 g)和(s)-(+)-四氢呋喃胺(1.01 g)溶于干燥甲苯中。将装有反应混合物的烧瓶与装有dean-stark装置的冷凝器相连，回流约6小时,然后转移到schlenk管,进5
ǻ
分子筛(3.0 g)除水。混合物再回流18h，然后用正己烷清洗。将所得产物(297 mg, 1.0 mmol)加入含有napdcl
4 (290 mg)和naoac
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3h2o (140 mg)的甲醇(30 ml)溶液中，室温搅拌24 h，干燥后用氯仿提取该产物，通过硅胶柱层析法进行纯化、浓缩。将所得产物(170 mg)加入含4-二苯基磷苯甲酸(3g)的丙酮(10 ml)溶液中，室温搅拌2小时后真空干燥。二氯甲烷提取该产物通过硅胶柱层析法进行纯化。洗脱液由二氯甲烷/正己烷(1:5)进行重结晶得到产物cp。 室温下将三乙胺（tea）(1.3eq)溶液5ml中缓慢加dox
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hcl（52.3mg，1eq）的 dcm，随后加入 115mg cp、35mg edci，室温避光搅拌反应过夜、氮气保护。反应结束后用稀盐酸水溶液洗3次，饱和食盐水洗2次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液中加入乙醚，有沉淀析出，分离沉淀和溶液，取上层溶液在 4℃冰箱放置继续沉淀，合并收集到的沉淀即得目标化合物cp-dox。1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐）（edc）（33.5mg）和n-羟基硫代琥珀酰亚胺（nhss）( 38.0mg)加入到含有聚乙二醇（mpeg）(500mg)的pbs溶液中，在室温下搅拌30分钟。然后加入β-环糊精（0.09mol），室温搅拌24 h。用过量去离子水透析得到的溶液5天(白天每4小时换一次水)。冻干后得到的mpeg
5k-cd为白色粉末。将mpeg-cd和cp-dox以1:1摩尔比溶解于合适的dmso中，然后放入去离子水中进行超声。通过透析除去dmso，得到cp-dox/mpeg
5k-cd。
25.实施实例2：将二茂铁甲醛(2.14 g)和(s)-(+)-四氢呋喃胺(1.01 g)溶于干燥甲苯中。将装有反应混合物的烧瓶与装有dean-stark装置的冷凝器相连，回流约6小时,然后转移到schlenk管,进5
ǻ
分子筛(3.0 g)除水。混合物再回流18h，然后用正己烷清洗。将所得产物(297 mg, 1.0 mmol)加入含有napdcl
4 (290 mg)和naoac
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3h2o (140 mg)的甲醇(30 ml)溶液中，室温搅拌24 h，干燥后用氯仿提取该产物，通过硅胶柱层析法进行纯化、浓缩。将所得产物(170 mg)加入含4-二苯基磷苯甲酸(3g)的丙酮(10 ml)溶液中，室温搅拌2小时后真空干燥。二氯甲烷提取该产物通过硅胶柱层析法进行纯化。洗脱液由二氯甲烷/正己烷(1:5)进行重结晶得到产物cp。 室温下将三乙胺（tea）(1.3eq)溶液5ml中缓慢加dox
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hcl（52.3mg，1eq）的 dcm，随后加入 115mg cp、35mg edci，室温避光搅拌反应过夜、氮气保护。反应结束后用稀盐酸水溶液洗3次，饱和食盐水洗2次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液中加入乙醚，有沉淀析出，分离沉淀和溶液，取上层溶液在 4℃冰箱放置继续沉淀，合并收集到的沉淀即得目标化合物cp-dox。1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐）（edc）（33.5mg）和n-羟基硫代琥珀酰亚胺（nhss）( 38.0mg)加入到含有聚乙二醇（mpeg）(200mg)的pbs溶液中，在室温下搅拌30分钟。然后加入β-环糊精（0.09mol），室温搅拌24 h。用过量去离子水透析得到的溶液5天(白天每4小时换一次水)。冻干后得到的mpeg
2k-cd为白色粉末。将mpeg-cd和cp-dox以1:1摩尔比溶解于合适的dmso中，然后放入去离子水中进行超声。
通过透析除去dmso，得到cp-dox/mpeg
2k-cd。
26.实施实例3：将二茂铁甲醛(2.14 g)和(s)-(+)-四氢呋喃胺(1.01 g)溶于干燥甲苯中。将装有反应混合物的烧瓶与装有dean-stark装置的冷凝器相连，回流约6小时,然后转移到schlenk管,进5
ǻ
分子筛(3.0 g)除水。混合物再回流18h，然后用正己烷清洗。将所得产物(297 mg, 1.0 mmol)加入含有napdcl
4 (290 mg)和naoac
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3h2o (140 mg)的甲醇(30 ml)溶液中，室温搅拌24 h，干燥后用氯仿提取该产物，通过硅胶柱层析法进行纯化、浓缩。将所得产物(170 mg)加入含4-二苯基磷苯甲酸(3g)的丙酮(10 ml)溶液中，室温搅拌2小时后真空干燥。二氯甲烷提取该产物通过硅胶柱层析法进行纯化。洗脱液由二氯甲烷/正己烷(1:5)进行重结晶得到产物cp。 室温下将三乙胺（tea）(1.3eq)溶液5ml中缓慢加dox
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hcl（52.3mg，1eq）的 dcm，随后加入 115mg cp、35mg edci，室温避光搅拌反应过夜、氮气保护。反应结束后用稀盐酸水溶液洗3次，饱和食盐水洗2次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液中加入乙醚，有沉淀析出，分离沉淀和溶液，取上层溶液在 4℃冰箱放置继续沉淀，合并收集到的沉淀即得目标化合物cp-dox。1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐）（edc）（33.5mg）和n-羟基硫代琥珀酰亚胺（nhss）( 38.0mg)加入到含有聚乙二醇（mpeg）(2000mg)的pbs溶液中，在室温下搅拌30分钟。然后加入β-环糊精（0.09mol），室温搅拌24 h。用过量去离子水透析得到的溶液5天(白天每4小时换一次水)。冻干后得到的mpeg
2k-cd为白色粉末。将mpeg-cd和cp-dox以1:1摩尔比溶解于合适的dmso中，然后放入去离子水中进行超声。通过透析除去dmso，得到cp-dox/mpeg
20k-cd。
27.为考察本发明所提出的cp-dox/mpeg-cd 可在许多癌细胞系中过表达的ros刺激下被破坏。此外，dox-cp加合物在大多数实体肿瘤存在的酸性环境下可失活，进一步释放两种药物。通过h-h noesy nmr、动态光散射(dls)和透射电子显微镜(tem)对其进行表征。在体外研究了cp-dox/mpeg
5k-cd在0.1mmh2o2和ph=5.5及ph=7.4刺激下的释放数据。