一种幽门螺杆菌口服缓释疫苗及其制备与应用的制作方法

本发明涉及生物制药技术领域，更具体的说是涉及一种幽门螺杆菌口服缓释疫苗及其制备与应用。

背景技术：

幽门螺杆菌是定植在人胃黏膜表层的革兰氏阴性菌，幽门螺杆菌感染会造成慢性胃炎和胃溃疡。预防幽门螺杆菌在胃内定植，有利于降低胃相关疾病的发生，减轻幽门螺杆菌疾病造成的临床负担。目前幽门螺杆菌疫苗的报道已较多，且有相关研究进入临床阶段，但至今未见幽门螺杆菌疫苗上市销售。

缓释胶囊或缓释制剂可以延缓药物在体内的释放、吸收、分布、代谢和排泄过程。幽门螺杆菌疫苗临床前研究的模型主要集中在小鼠模型中，但目前疫苗的免疫效果不甚理想，且能给小鼠灌胃的缓释疫苗还未见上市。

综上，如何提供一种免疫效果好的幽门螺杆菌口服缓释疫苗是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明提供了一种幽门螺杆菌口服缓释疫苗及其制备与应用。口服幽门螺杆菌疫苗的唾液iga抗体滴度为1:8，10天后阳转率为40％，32天后阳转率为100％；血清igg抗体滴度为1:25600，10天后阳转率为50％，32天后阳转率为100％，达到了缓释的效果。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种幽门螺杆菌口服缓释疫苗，包括1mg/ml的penicillin-bindingproteinactivatorlpob重组蛋白、1mg/ml的lt(b)5重组蛋白、5.00％w/v的羧甲淀粉钠、10.00％w/v的羧甲基纤维素钠、2.00％w/v的壳聚糖、4.50％w/v的d-半乳糖、1.17％w/v的氯化钠、0.03％w/v的碳酸钠、0.18％w/v的碳酸氢钠和5％v/v的甘油，余量为水。

其中：5.00％w/v的羧甲淀粉钠代表5g羧甲淀粉钠溶于100ml溶剂中；5％v/v的甘油代表5ml的甘油溶于100ml溶剂中。

penicillin-bindingproteinactivatorlpob重组蛋白的氨基酸序列为：

thrtyrglnasnvalasnaspalathrlysasnthrthralaserileasnserthraspleuleuleuthralaasnalametleuaspsermetpheseraspproasnphegluglnleulysglylyshisleuilegluvalseraspvalileasnaspthrthrglnproasnleuaspmetasnleuleuthrthrgluilealaargglnleuargleuargserasnglyargpheasnilethrargalaserglyglyserglyilealaalaaspserargmetvallysglnargglulysgluargglusergluglutyrasnglnaspthrthrvalglulysglythrleulysalaalaaspleuserleuserglylysvalserserilealaalaserileserserserargglnargleuasptyraspphethrleuserleuthrasnarglysthrglyglugluvaltrpseraspvallysproilevallysasnalaserasnlysargmetphe；seqidno.1；

lt(b)5重组蛋白的氨基酸序列为：

alaproglnserilethrgluleucysserglutyrargasnthrglniletyrthrileasnasplysileleusertyrthrglusermetalaglylysargglumetvalileilethrphelysserglyalathrpheglnvalgluvalproglyserglnhisileaspserglnlyslysalailegluargmetlysaspthrleuargilethrtyrleuthrgluthrlysileasplysleucysvaltrpasnasnlysthrproasnserilealaalailesermetgluasnalaproglnserilethrgluleucysserglutyrargasnthrglniletyrthrileasnasplysileleusertyrthrglusermetalaglylysargglumetvalileilethrphelysserglyalathrpheglnvalgluvalproglyserglnhisileaspserglnlyslysalailegluargmetlysaspthrleuargilethrtyrleuthrgluthrlysileasplysleucysvaltrpasnasnlysthrproasnserilealaalailesermetgluasnalaproglnserilethrgluleucysserglutyrargasnthrglniletyrthrileasnasplysileleusertyrthrglusermetalaglylysargglumetvalileilethrphelysserglyalathrpheglnvalgluvalproglyserglnhisileaspserglnlyslysalailegluargmetlysaspthrleuargilethrtyrleuthrgluthrlysileasplysleucysvaltrpasnasnlysthrproasnserilealaalailesermetgluasnalaproglnserilethrgluleucysserglutyrargasnthrglniletyrthrileasnasplysileleusertyrthrglusermetalaglylysargglumetvalileilethrphelysserglyalathrpheglnvalgluvalproglyserglnhisileaspserglnlyslysalailegluargmetlysaspthrleuargilethrtyrleuthrgluthrlysileasplysleucysvaltrpasnasnlysthrproasnserilealaalailesermetgluasnalaproglnserilethrgluleucysserglutyrargasnthrglniletyrthrileasnasplysileleusertyrthrglusermetalaglylysargglumetvalileilethrphelysserglyalathrpheglnvalgluvalproglyserglnhisileaspserglnlyslysalailegluargmetlysaspthrleuargilethrtyrleuthrgluthrlysileasplysleucysvaltrpasnasnlysthrproasnserilealaalailesermetgluasn；seqidno.2。

penicillin-bindingproteinactivatorlpob重组蛋白为抗原，产生效价，发挥保护作用；lt(b)5重组蛋白为佐剂，可促进抗原发挥效价。

羧甲淀粉钠、羧甲基纤维素钠和壳聚糖为药物制剂中常规缓释制剂成分。羧甲淀粉钠和羧甲基纤维素钠在水中形成胶体状溶液，是常规的稳定剂和分散剂；壳聚糖溶解后，具有较强的吸附能力，具有缓慢释放作用。当制剂中羧甲淀粉钠、羧甲基纤维素钠和壳聚糖以一定比例混合时，可形成分散的、稳定的、具有缓释作用的胶装溶液，当口服此溶液时，其疫苗成分在肠道中停留时间比水溶液长，即延长了疫苗成分在肠道中释放时间、增加了肠黏膜上皮细胞对疫苗成分的吸收，达到了常规缓释制剂的作用效果，从而提高了免疫效价。

一种幽门螺杆菌口服缓释疫苗的制备方法，包括如下步骤：

将1mg/ml的penicillin-bindingproteinactivatorlpob重组蛋白、1mg/ml的lt(b)5重组蛋白、4.50％w/v的d-半乳糖、1.17％w/v的氯化钠、0.03％w/v的碳酸钠、0.18％w/v的碳酸氢钠、5％v/v的甘油和余量为水混合均匀后置于4℃冰箱中预冷，之后加入5.00％w/v的羧甲淀粉钠、10.00％w/v的羧甲基纤维素钠和2.00％w/v的壳聚糖，采用磁力搅拌混匀。

一种提高幽门螺杆菌口服缓释疫苗免疫效果的方法，所述方法包括：采用上述幽门螺杆菌口服缓释疫苗，共采取三轮免疫，每轮免疫分别在一天内分三次免疫；

每次免疫间隔时间为2～4h；

第一次免疫体积为0.4ml，第二次免疫体积为0.2～0.4ml，第三次免疫体积为0.2～0.4ml，且三次免疫的总体积为1ml。

进一步的，所述三轮免疫为分别在0d、7d、28d进行免疫。

进一步的，每次免疫间隔时间为3h。

进一步的，第一次免疫体积为0.4ml，第二次免疫体积为0.3ml，第三次免疫体积为0.3ml。

一种提高幽门螺杆菌口服缓释疫苗免疫效果的实验设计方法，包括：共采取三轮免疫，每轮免疫分别在一天内分三次免疫；

所述三轮免疫为分别在0d、7d、28d进行免疫；

每次免疫间隔时间为3h；

第一次免疫体积为0.4ml，第二次免疫体积为0.3ml，第三次免疫体积为0.3ml。

经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明取得的有益效果为：通过本发明方法进行的口服幽门螺杆菌疫苗的唾液唾液iga抗体滴度为1:8，10天后阳转率为40％，32天后阳转率为100％。血清igg抗体滴度为1:25600，10天后阳转率为50％，32天后阳转率为100％，该疫苗使鼠唾液iga抗体滴度增加了2倍，血清igg抗体滴度增加了32倍，达到了缓释的效果，为口服幽门螺杆菌疫苗的进一步开发提供了新的思路。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。

图1附图为本发明实施例2不同免疫间隔时间末次免疫后10天唾液iga和血清igg效价检测结果；

图2附图为本发明实施例2不同免疫间隔时间末次免疫后32天唾液iga和血清igg效价检测结果；

图3附图为本发明实施例3不同疫苗体积末次免疫后10天唾液iga和血清igg效价检测结果；

图4附图为本发明实施例3不同疫苗体积末次免疫后32天唾液iga和血清igg效价检测结果；

图5附图为本发明实施例4免疫放大末次免疫后唾液iga和血清igg效价检测结果；

图6附图为本发明对比例1中唾液iga和血清igg效价检测结果。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明实施例中所需药剂为常规实验药剂，采购自市售渠道；实施例中未提及的实验方法为常规实验方法，在此不再一一赘述。

实施例1

(1)将1mg/ml的penicillin-bindingproteinactivatorlpob重组蛋白、1mg/ml的lt(b)5重组蛋白、4.50％w/v的d-半乳糖、1.17％w/v的氯化钠、0.03％w/v的碳酸钠、0.18％w/v的碳酸氢钠、5％v/v的甘油和余量的水混合均匀后放入4℃冰箱中预冷1h。

(2)在预冷的上述液体中缓慢加入5.00％w/v的羧甲淀粉钠，采用磁力搅拌子缓慢搅拌5min。

(3)在(2)中混悬液中缓慢加入10.00％w/v的羧甲基纤维素钠，采用磁力搅拌子缓慢搅拌5min。

(4)在(3)中混悬液中缓慢加入2.00％w/v的壳聚糖，采用磁力搅拌子缓慢搅拌10min。

(5)上述混悬液现用现制备。

实施例2

(1)实验动物：以6周龄雌性balb/c小鼠为实验动物，30只，18±2g；

(2)饲养条件：温度为22±4℃，湿度为55±10％，一周换1次垫料，每天光照为12小时白昼交替，24小时换气通风，每周定期对环境消毒，饲料为常规饲料，水为纯水仪制备后经高压灭菌获得，自由进食进水。

(3)实验分组：采用随机分组法对鼠进行分组，10只/笼，每笼中鼠的体重、健康状况等无明显差异。每组10只。

(4)实验前工作：过渡饲养1天以上进行免疫实验。

免疫次数为3次，免疫时间点为0天、7天、28天。

在免疫前24h给鼠断食断水。

用无菌注射器吸取溶液a，在口服免疫前60min采用腹腔注射方式给鼠注射250μl溶液a。

溶液a组成如下：0.04％w/v的奥美拉唑，溶剂为无菌生理盐水。

免疫前的幽门螺杆菌口服缓释疫苗现用现制备。

具体实验方案：

用无菌注射器吸取幽门螺杆菌口服缓释疫苗，采用口服灌胃方式，每个免疫时间点一天内分3次给鼠灌胃0.8ml疫苗；第一次灌胃体积为0.4ml，第二次灌胃体积为0.2ml，第三次灌胃体积为0.2ml。

疫苗组成如下：1.25mg/ml的penicillin-bindingproteinactivatorlpob重组蛋白、1.25mg/ml的lt(b)5重组蛋白、5.00％w/v的羧甲淀粉钠、10.00％w/v的羧甲基纤维素钠、2.00％w/v的壳聚糖、4.50％w/v的d-半乳糖、1.17％w/v的氯化钠、0.03％w/v的碳酸钠、0.18％w/v的碳酸氢钠和5％v/v的甘油，余量为水。疫苗的ph为8.5。

口服灌胃间隔时间分别为2h、3h、4h。

免疫结束后2h恢复食水。

每次免疫操作均相同。

末次免疫结束后第10天、第32天采集鼠的血和唾液进行检测。

(6)具体检测方法：

采血和采唾液前鼠需断食断水24h；

第10天采集鼠尾静脉血，第32天采集鼠眼眶静脉血，血采集后室温静置4h，采用3000g离心2min，吸上清，后再重复上述操作一次，将分离的血清放置在-80℃保存备用。

采集鼠唾液前，需给鼠腹腔注射5mg/ml毛果芸香碱20μl，采集唾液放置在-80℃保存备用。

采用elisa间接法对血清igg和唾液iga进行检测，所用试剂如下：

封闭液组成如下：0.01mpbs，1％bsa，溶剂为水；

pbst洗涤液组成如下：0.01mpbs，0.05ml/100mltween-20，溶剂为水；

抗体稀释液组成如下：0.01mpbs，0.05ml/100mltween-20，0.5％bsa，溶剂为水；

底物缓冲液组成如下：磷酸氢二钠1.4％，一水合柠檬酸1％，溶剂为水；

2m硫酸组成如下：浓硫酸11.22ml/100ml，溶剂为水；

1mg/mltmb组成如下：tmb0.1％，溶剂为dmso；

显色液组成如下：1mg/mltmb：底物缓冲液：30％双氧水配制体积比例为100:900:1。

elisa间接法具体操作步骤：

用2μg/ml免疫抗原包被酶标板，包被条件为37℃下孵育2h，后用pbst洗涤液洗板三次。300μl/孔将封闭液加入上述酶标板，放入4℃冰箱中，封闭过夜。再用pbst洗涤液洗上述酶标板三次，将此酶标板命名为酶标板1并放入4℃冰箱保存备用；

将血清样本用抗体稀释液以1:25600进行稀释，100μl/孔加入酶标板1中，37℃、孵育45min，pbst洗涤液洗板三次，此酶标板命名为酶标板2；

将羊抗鼠igg二抗用抗体稀释液1:10000进行稀释，100μl/孔加入酶标板2，37℃、孵育45min，pbst洗涤液洗板三次，此酶标板命名为酶标板3；

将显色液按100μl/孔加入酶标板3中，37℃、孵育15min，后按50μl/孔加入2mh2so4终止液，此酶标板命名为酶标板4；

将酶标板4放入酶标分析仪中，选择od450进行检测，将检测数据保存并进行后续分析。

检测结果的判定：将样本(免疫组)/阴性(空白组)值≧定义为阳性；

将免疫组效价检测阳性小鼠/免疫组小鼠×100％定义为阳转率。

将唾液样本用抗体稀释液以1:8进行稀释，100μl/孔加入酶标板1中，37℃、孵育45min，pbst洗涤液洗板三次，此酶标板命名为酶标板5；

将羊抗鼠iga二抗用抗体稀释液1:5000进行稀释，100μl/孔加入酶标板5，37℃、孵育45min，pbst洗涤液洗板三次，此酶标板命名为酶标板6；

将显色液按100μl/孔加入酶标板6中，37℃、孵育15min，后按50μl/孔加入2mh2so4终止液，此酶标板命名为酶标板7；

将酶标板7放入酶标分析仪中，选择od450进行检测，将检测数据保存并进行后续分析。

检测结果的判定：将样本(免疫组)/阴性(空白组)值≧定义为阳性；

将免疫组效价检测阳性小鼠/免疫组小鼠×100％定义为阳转率。

(7)实验结果：结果如图1、2所示。

根据图1(末次免疫结束后第10天)，缓释间隔时间为2h时，其唾液抗体iga阳转率为20％，血清igg阳转率为40％；缓释间隔时间3h时，其唾液抗体iga阳转率为30％，血清igg阳转率为100％；缓释间隔时间4h时，其唾液抗体iga阳转率为50％，血清igg阳转率为100％。根据图2(末次免疫结束后第32天)，缓释间隔时间为2h时，其唾液抗体iga阳转率为10％，血清igg阳转率为40％；缓释间隔时间3h时，其唾液抗体iga阳转率为30％，血清igg阳转率为100％；缓释间隔时间4h时，其唾液抗体iga阳转率为40％，血清igg阳转率为100％。

根据上述结果缓释间隔时间为2h时，其唾液抗体iga阳转率和血清igg阳转率均低于缓释间隔时间3h和4h。当免疫间隔时间为4h时，其整个免疫操作时间超过12h，故从整个免疫操作出发，选择免疫间隔时间3h。

实施例3

(1)实验动物：以6周龄雌性balb/c小鼠为实验动物，30只，18±2g；

(2)饲养条件：温度为22±4℃，湿度为55±10％，一周换1次垫料，每天光照为12小时白昼交替，24小时换气通风，每周定期对环境消毒，饲料为常规饲料，水为纯水仪制备后经高压灭菌获得，自由进食进水。

(3)实验分组：采用随机分组法对鼠进行分组，10只/笼，每笼中鼠的体重、健康状况等无明显差异。每组10只。

(4)实验前工作：过渡饲养1天以上进行免疫实验。

免疫次数为3次，免疫时间点为0天、7天、28天。

在免疫前24h给鼠断食断水。

用无菌注射器吸取溶液a，在口服免疫前60min采用腹腔注射方式给鼠注射250μl溶液a。

溶液a组成如下：0.04％w/v的奥美拉唑，溶剂为无菌生理盐水。

免疫前的幽门螺杆菌口服缓释疫苗现用现制备。

具体实验方案：

第一组的幽门螺杆菌疫苗组成如下：1.25mg/ml的penicillin-bindingproteinactivatorlpob重组蛋白、1.25mg/ml的lt(b)5重组蛋白、5.00％w/v的羧甲淀粉钠、10.00％w/v的羧甲基纤维素钠、2.00％w/v的壳聚糖、4.50％w/v的d-半乳糖、1.17％w/v的氯化钠、0.03％w/v的碳酸钠、0.18％w/v的碳酸氢钠和5％v/v的甘油，余量为水,疫苗ph为8.5。第一次口服灌胃体积为0.4ml，第二次口服灌胃体积为0.2ml，第三次口服灌胃体积为0.2ml。

第二组的幽门螺杆菌疫苗组成如下：1mg/ml的penicillin-bindingproteinactivatorlpob重组蛋白、1mg/ml的lt(b)5重组蛋白、5.00％w/v的羧甲淀粉钠、10.00％w/v的羧甲基纤维素钠、2.00％w/v的壳聚糖、4.50％w/v的d-半乳糖、1.17％w/v的氯化钠、0.03％w/v的碳酸钠、0.18％w/v的碳酸氢钠和5％v/v的甘油，余量为水,疫苗ph为8.5。第一次口服灌胃体积为0.4ml，第二次口服灌胃体积为0.3ml，第三次口服灌胃体积为0.3ml。

第三组的幽门螺杆菌疫苗组成如下：0.83mg/ml的penicillin-bindingproteinactivatorlpob重组蛋白、0.83mg/ml的lt(b)5重组蛋白、5.00％w/v的羧甲淀粉钠、10.00％w/v的羧甲基纤维素钠、2.00％w/v的壳聚糖、4.50％w/v的d-半乳糖、1.17％w/v的氯化钠、0.03％w/v的碳酸钠、0.18％w/v的碳酸氢钠和5％v/v的甘油，余量为水,疫苗ph为8.5。第一次口服灌胃体积为0.4ml，第二次口服灌胃体积为0.4ml，第三次口服灌胃体积为0.4ml。

每次免疫间隔时间为3h。

其余操作均同实施例2。

唾液iga、血清igg效价检测结果如图3、4。

根据图3(末次免疫结束后第10天)、图4(末次免疫结束后第32天)，缓释体积为0.8ml时，其唾液抗体iga阳转率均为20％血清igg阳转率均为100％；缓释体积为1ml，唾液抗体iga阳转率均为40％，血清igg阳转率均为100％；缓释体积为1.2ml时，唾液抗体iga阳转率均为10％，血清igg阳转率均为10％。

综上，缓释体积为1.2ml时其唾液抗体iga阳转率和血清抗体igg阳转率均低于缓释体积1ml；且当缓释体积为1.2ml时，在第三次免疫后，部分小鼠存在拉稀，即疫苗未被充分吸收，直接排除体外。当缓释体积为0.8ml时，其唾液抗体iga阳转率低于缓释体积1ml。故选择缓释体积为1ml。

实施例4幽门螺杆菌疫苗口服缓释免疫放大

(1)实验动物：以6周龄雌性balb/c小鼠为实验动物，20只，18±2g；

(2)饲养条件：温度为22±4℃，湿度为55±10％，一周换1次垫料，每天光照为12小时白昼交替，24小时换气通风，每周定期对环境消毒，饲料为常规饲料，水为纯水仪制备后经高压灭菌获得，自由进食进水。

(3)实验分组：采用随机分组法对鼠进行分组，10只/笼，每笼中鼠的体重、健康状况等无明显差异。

(4)实验前工作：过渡饲养1天以上进行免疫实验。

免疫次数为3次，免疫时间点为0天、7天、28天。

在免疫前24h给鼠断食断水。

用无菌注射器吸取溶液a，在口服免疫前60min采用腹腔注射方式给鼠注射250μl溶液a。

溶液a组成如下：0.04％w/v的奥美拉唑，溶剂为无菌生理盐水。

免疫前的幽门螺杆菌口服缓释疫苗现用现制备。

幽门螺杆菌疫苗组成如下：1mg/ml的penicillin-bindingproteinactivatorlpob重组蛋白、1mg/ml的lt(b)5重组蛋白、5.00％w/v的羧甲淀粉钠、10.00％w/v的羧甲基纤维素钠、2.00％w/v的壳聚糖、4.50％w/v的d-半乳糖、1.17％w/v的氯化钠、0.03％w/v的碳酸钠、0.18％w/v的碳酸氢钠和5％v/v的甘油，余量为水,疫苗ph为8.5。用无菌注射器吸取幽门螺杆菌疫苗，采用口服灌胃方式，一天内分3次给小鼠灌胃1ml疫苗。

灌胃体积次序为：第一次口服灌胃体积为0.4ml，第二次口服灌胃体积为0.3ml，第三次口服灌胃体积为0.3ml。

每次免疫间隔时间为3h。

末次免疫结束后2h恢复食水。

每次免疫操作均相同。

唾液iga、血清igg效价检测结果如图5。

结论：采用口服缓释灌胃免疫balb/c小鼠，唾液iga抗体滴度为1:8，10天后阳转率为40％，32天后阳转率为100％。血清igg抗体滴度为1:25600，10天后阳转率为50％，32天后阳转率为100％。

对比例1：口服免疫一次balb/c小鼠

(一)口服免疫一次balb/c小鼠免疫前准备

6周龄雌性balb/c小鼠，20只。

幽门螺杆菌疫苗组成如下：2.5mg/ml的penicillin-bindingproteinactivatorlpob重组蛋白、2.5mg/ml的lt(b)5重组蛋白、4.50％w/v的d-半乳糖、1.17％w/v的氯化钠、0.03％w/v的碳酸钠、0.18％w/v的碳酸氢钠和5％v/v的甘油，，余量为水，疫苗ph为8.5。

共免疫3次，免疫时间点为0天、7天、28天。

免疫前24h给鼠断食断水，口服免疫前注射溶液a。

口服灌胃免疫1次balb/c小鼠，灌胃体积为0.4ml。

通过elisa间接法检测末次免疫结束后第10天、第32天小鼠唾液iga和血清igg，检测结果如图6。

由图6可知，口服免疫一次balb/c小鼠，唾液iga抗体滴度为1:4，10天后阳转率为40％，32天后阳转率为100％。口服免疫一次后balb/c小鼠，血清igg抗体滴度为1:800，10天后阳转率为40％。32天后阳转率为80％。

本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

序列表

<110>成都亿妙生物科技有限公司

<120>一种幽门螺杆菌口服缓释疫苗及其制备与应用

<160>2

<170>siposequencelisting1.0

<210>1

<211>182

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>1

thrtyrglnasnvalasnaspalathrlysasnthrthralaserile

151015

asnserthraspleuleuleuthralaasnalametleuaspsermet

202530

pheseraspproasnphegluglnleulysglylyshisleuileglu

354045

valseraspvalileasnaspthrthrglnproasnleuaspmetasn

505560

leuleuthrthrgluilealaargglnleuargleuargserasngly

65707580

argpheasnilethrargalaserglyglyserglyilealaalaasp

859095

serargmetvallysglnargglulysgluargglusergluglutyr

100105110

asnglnaspthrthrvalglulysglythrleulysalaalaaspleu

115120125

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130135140

argglnargleuasptyraspphethrleuserleuthrasnarglys

145150155160

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165170175

serasnlysargmetphe

180

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<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>2

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151015

iletyrthrileasnasplysileleusertyrthrglusermetala

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