一种藏红花花瓣精制醇提物及其制备方法和应用

本发明属于藏红花活性成分提取
技术领域：
，具体涉及一种藏红花花瓣精制醇提物及其制备方法和应用。
背景技术：
：藏红花，又名番红花、西红花、泪夫蓝、撒法即，为鸢尾科番红花属多年生草本植物，是西南亚原生种，明朝时传入中国，最早由希腊人人工栽培，主要分布在欧洲、地中海及中亚等地。据《中华人名共和国药典》巧载，其药用部位为干燥的花柱，藏红花作为传统中药其功效为：活血化疯，凉血解毒，解郁安神。用于经质痛瘤，产后疯阻，温毒发斑，忧郁疮闷，惊倭发狂等。但藏红花只是柱头入药，产量极低，又因为其资源极其有限，致使其价格昂贵，一直被誉为＂植物黄金＂。我国历来都是进口供药用，虽然进行引种栽培，提供少量商品，但是因种源少、适宜栽培的地区有限、条件苛刻等因素，满足不了市场的需求，因此出现了供不应求的局面。同时，大量的非药用部位一花瓣在藏红花的制药工业中成为副产品，造成极大的资源浪费。藏红花花瓣长期被人们忽视，其是否具有应用价值也鲜为人知。幸而目前已有不少学者将注意力转移到藏红花花瓣上，而且研究结果显示，虽然花柱与花被的化学成分有所不同，但是在清除自由基、降血压、对抑郁症的治疗等方面都有相似的效果。但是现今对其有效成分的提取工艺还很欠缺，活性成分的提取率低，效果不显著。如申请号为为cn201811188951.0公开了藏红花花瓣精制醇提物及其制备方法和应用。本发明提供了藏红花花瓣精制醇提物的制备方法，属于藏红花活性成分提取
技术领域：
，包括以下步骤：将藏红花花瓣粉末与乙醇以1g:(15～25)ml的比例混合置于65～75℃提取1.5～2.5h，共提取3次；将三次提取液混合获得藏红花花瓣粗提液；将所述藏红花花瓣粗提液经干燥获得的棕褐色固体粉末用乙醇水溶液溶解，过大孔树脂进行纯化获得藏红花花瓣精制醇提物，色谱柱的径高比为1:(8～12)；上样体积为(0.8～1.1)倍柱体积，上样浓度为85～115mg/ml；所述大孔树脂循环吸附时间为1.5～2.5h，动态解吸附时间为1.5～2.5h。本发明所述方法藏红花花瓣精制醇提物得率高，抗氧化、降血脂活性高。该发明将藏红花花瓣粉末直接进行醇提，通过三次提取的方式提高提取率，很显然对于提高提取率还是远远不够的。技术实现要素：本发明的目的是针对现有的问题，提供了一种藏红花花瓣精制醇提物及其制备方法和应用。本发明是通过以下技术方案实现的：一种藏红花花瓣精制醇提物的制备方法，包括如下步骤：s1、低温等离子体处理：采摘新鲜的藏红花花瓣置于冷等离子体处理设备中进行冷等离子体处理，完成后取出藏红花花瓣备用；s2、深冷处理：将步骤s1中低温等离子体处理后的藏红花花瓣置于液氮中进行深冷处理；s3、超微粉碎处理：将步骤s2中深冷处理后的藏红花花瓣取出后立马置于超微粉碎机内进行超微粉碎处理，完成后得藏红花花瓣粉末备用；s4、低温真空干燥处理：将步骤s3中超微粉碎处理后所得的藏红花花瓣粉末置于真空干燥箱内，在低温真空条件下进行干燥处理，完成后取出藏红花花瓣粉末备用；s5、一次醇提：以乙醇作为浸提剂，利用索式提取装置对步骤s4中的藏红花花瓣粉末进行一次醇提，分别收集一次醇提物和料渣备用；s6、二次醇提：将步骤s5中所得的料渣置于电晕放电仪内进行电晕处理，完成后取出置于索式提取装置内进行二次醇提，收集二次醇提物备用；s7、纯化处理：将步骤s5中所得的一次醇提物和步骤s6中所得的二次醇提物混合后，采用柱层析法进行纯化即可。进一步地，步骤s1中所述的冷等离子体处理时的控制剂量为120～200w，处理时间为15～25s。通过采用上述技术方案，首先将藏红花花瓣置于低温等离子环境种进行冷等离子体处理，提高藏红花花瓣的通透性，一方面有助于推动后续的干燥以及醇提，另一方面由于花瓣通透增加，加快水分的散失，此时进行深冷处理，由于急速降温，花瓣表面的水分立即冷却结冰附着在花瓣的表面，同时由于急速降温会在花瓣内外产生极大的内外温差，但是由于外层冰的束缚作用，在极短的时间内会产生极大的内应力，再将所得的藏红花花瓣置于超微粉碎机内进行超微粉碎处理，在机械力的作用下，花瓣内的内应力会在极短的时间内冲破冰层的束缚，花瓣细胞壁遭到破坏，此时得到均质细化的粉末，利用此粉末进行醇提，有效成分会快速有效的浸出，从而提高醇提物的提取效率。进一步地，步骤s4中所述的干燥处理时控制真空干燥箱内的真空度为1.4～2pa，温度为30～40℃，干燥至含水率为0.8～2％。进一步地，步骤s5中所述的一次醇提的时间控制为3～4h。进一步地，步骤s6中所述的电晕处理时控制处理电压为10～14kv，处理时间为30～50s。进一步地，步骤s6中所述的二次醇提的时间控制为1～2h。一种藏红花花瓣精制醇提物，按照权利要求1～6任意一项方法制备而成。一种藏红花花瓣精制醇提物的应用，所述藏红花醇提物具体在药品、保健品和化妆品中的应用。通过采用上述技术方案，将所得的藏红花花瓣粉末在低温真空条件下进行干燥处理，去除花瓣中存在的自由水，防止自由水的存在影响醇提物的质量，并且低温真空条件能在提高花瓣粉末渗透性，提升醇提效率的前提下，有效的防止花瓣粉末中活性成分的挥发或者失活，保障有效成分的活性。采用索式提取装置进行反复浸提，提高浸提效率，将一次醇提所得的料渣置于电晕放电仪内进行电晕处理，通过放电，在料渣的表面形成低温等离子区，从而提高料渣的表面活性，从而促进二次醇提时有效成分的浸出，进一步提高藏红花花瓣醇提物的提取效率。最后将两次所得的醇提物混合后进行纯化即可。本发明相比现有技术具有以下优点：本申请提供了一种藏红花花瓣精制醇提物及其制备方法和应用，将制备的藏红花花瓣精制醇提物对小鼠进行灌胃后，其体重增加量、摄食量与正常对照组相比，均无显著性差异，可见本申请方法制备的藏红花花瓣精制醇提物对小鼠的食欲影响较低，对小鼠的消化系统的刺激较小。通过本申请方法制备的藏红花花瓣精制醇提物具有明显的降血脂活性，也即本申请方法制备的藏红花花瓣精制醇提物的提取率高，并且具有较高的活性。具体实施方式一种藏红花花瓣精制醇提物的制备方法，包括如下步骤：s1、低温等离子体处理：采摘新鲜的藏红花花瓣置于冷等离子体处理设备中进行冷等离子体处理，控制剂量为120～200w，处理时间为15～25s，完成后取出藏红花花瓣备用；s2、深冷处理：将步骤s1中低温等离子体处理后的藏红花花瓣置于液氮中进行深冷处理；s3、超微粉碎处理：将步骤s2中深冷处理后的藏红花花瓣取出后立马置于超微粉碎机内进行超微粉碎处理，完成后得藏红花花瓣粉末备用；s4、低温真空干燥处理：将步骤s3中超微粉碎处理后所得的藏红花花瓣粉末置于真空干燥箱内，在低温真空条件下进行干燥处理，控制真空干燥箱内的真空度为1.4～2pa，温度为30～40℃，干燥至含水率为0.8～2％，完成后取出藏红花花瓣粉末备用；s5、一次醇提：以乙醇作为浸提剂，利用索式提取装置对步骤s4中的藏红花花瓣粉末进行一次醇提3～4h，分别收集一次醇提物和料渣备用；s6、二次醇提：将步骤s5中所得的料渣置于电晕放电仪内进行电晕处理，控制处理电压为10～14kv，处理30～50s后取出置于索式提取装置内进行二次醇提1～2h，收集二次醇提物备用；s7、纯化处理：将步骤s5中所得的一次醇提物和步骤s6中所得的二次醇提物混合后，采用柱层析法进行纯化即可。为了对本发明做更进一步的解释，下面结合下述具体实施例进行阐述。实施例1一种藏红花花瓣精制醇提物的制备方法，包括如下步骤：s1、低温等离子体处理：采摘新鲜的藏红花花瓣置于冷等离子体处理设备中进行冷等离子体处理，控制剂量为120w，处理时间为15s，完成后取出藏红花花瓣备用；s2、深冷处理：将步骤s1中低温等离子体处理后的藏红花花瓣置于液氮中进行深冷处理；s3、超微粉碎处理：将步骤s2中深冷处理后的藏红花花瓣取出后立马置于超微粉碎机内进行超微粉碎处理，完成后得藏红花花瓣粉末备用；s4、低温真空干燥处理：将步骤s3中超微粉碎处理后所得的藏红花花瓣粉末置于真空干燥箱内，在低温真空条件下进行干燥处理，控制真空干燥箱内的真空度为1.4pa，温度为30℃，干燥至含水率为0.8％，完成后取出藏红花花瓣粉末备用；s5、一次醇提：以乙醇作为浸提剂，利用索式提取装置对步骤s4中的藏红花花瓣粉末进行一次醇提3h，分别收集一次醇提物和料渣备用；s6、二次醇提：将步骤s5中所得的料渣置于电晕放电仪内进行电晕处理，控制处理电压为10kv，处理30s后取出置于索式提取装置内进行二次醇提1h，收集二次醇提物备用；s7、纯化处理：将步骤s5中所得的一次醇提物和步骤s6中所得的二次醇提物混合后，采用柱层析法进行纯化即可。实施例2一种藏红花花瓣精制醇提物的制备方法，包括如下步骤：s1、低温等离子体处理：采摘新鲜的藏红花花瓣置于冷等离子体处理设备中进行冷等离子体处理，控制剂量为160w，处理时间为20s，完成后取出藏红花花瓣备用；s2、深冷处理：将步骤s1中低温等离子体处理后的藏红花花瓣置于液氮中进行深冷处理；s3、超微粉碎处理：将步骤s2中深冷处理后的藏红花花瓣取出后立马置于超微粉碎机内进行超微粉碎处理，完成后得藏红花花瓣粉末备用；s4、低温真空干燥处理：将步骤s3中超微粉碎处理后所得的藏红花花瓣粉末置于真空干燥箱内，在低温真空条件下进行干燥处理，控制真空干燥箱内的真空度为1.7pa，温度为35℃，干燥至含水率为1.4％，完成后取出藏红花花瓣粉末备用；s5、一次醇提：以乙醇作为浸提剂，利用索式提取装置对步骤s4中的藏红花花瓣粉末进行一次醇提3.5h，分别收集一次醇提物和料渣备用；s6、二次醇提：将步骤s5中所得的料渣置于电晕放电仪内进行电晕处理，控制处理电压为12kv，处理40s后取出置于索式提取装置内进行二次醇提1.5h，收集二次醇提物备用；s7、纯化处理：将步骤s5中所得的一次醇提物和步骤s6中所得的二次醇提物混合后，采用柱层析法进行纯化即可。实施例3一种藏红花花瓣精制醇提物的制备方法，包括如下步骤：s1、低温等离子体处理：采摘新鲜的藏红花花瓣置于冷等离子体处理设备中进行冷等离子体处理，控制剂量为200w，处理时间为25s，完成后取出藏红花花瓣备用；s2、深冷处理：将步骤s1中低温等离子体处理后的藏红花花瓣置于液氮中进行深冷处理；s3、超微粉碎处理：将步骤s2中深冷处理后的藏红花花瓣取出后立马置于超微粉碎机内进行超微粉碎处理，完成后得藏红花花瓣粉末备用；s4、低温真空干燥处理：将步骤s3中超微粉碎处理后所得的藏红花花瓣粉末置于真空干燥箱内，在低温真空条件下进行干燥处理，控制真空干燥箱内的真空度为2pa，温度为40℃，干燥至含水率为2％，完成后取出藏红花花瓣粉末备用；s5、一次醇提：以乙醇作为浸提剂，利用索式提取装置对步骤s4中的藏红花花瓣粉末进行一次醇提4h，分别收集一次醇提物和料渣备用；s6、二次醇提：将步骤s5中所得的料渣置于电晕放电仪内进行电晕处理，控制处理电压为14kv，处理50s后取出置于索式提取装置内进行二次醇提2h，收集二次醇提物备用；s7、纯化处理：将步骤s5中所得的一次醇提物和步骤s6中所得的二次醇提物混合后，采用柱层析法进行纯化即可。实施例4一种藏红花花瓣精制醇提物的制备方法，包括如下步骤：s1、深冷处理：将藏红花花瓣置于液氮中进行深冷处理；s2、超微粉碎处理：将步骤s1中深冷处理后的藏红花花瓣取出后立马置于超微粉碎机内进行超微粉碎处理，完成后得藏红花花瓣粉末备用；s3、低温真空干燥处理：将步骤s2中超微粉碎处理后所得的藏红花花瓣粉末置于真空干燥箱内，在低温真空条件下进行干燥处理，控制真空干燥箱内的真空度为1.7pa，温度为35℃，干燥至含水率为1.4％，完成后取出藏红花花瓣粉末备用；s4、一次醇提：以乙醇作为浸提剂，利用索式提取装置对步骤s3中的藏红花花瓣粉末进行一次醇提3.5h，分别收集一次醇提物和料渣备用；s5、二次醇提：将步骤s4中所得的料渣置于电晕放电仪内进行电晕处理，控制处理电压为12kv，处理40s后取出置于索式提取装置内进行二次醇提1.5h，收集二次醇提物备用；s6、纯化处理：将步骤s4中所得的一次醇提物和步骤s5中所得的二次醇提物混合后，采用柱层析法进行纯化即可。实施例5一种藏红花花瓣精制醇提物的制备方法，包括如下步骤：s1、低温等离子体处理：采摘新鲜的藏红花花瓣置于冷等离子体处理设备中进行冷等离子体处理，控制剂量为160w，处理时间为20s，完成后取出藏红花花瓣备用；s2、超微粉碎处理：将步骤s1中低温等离子体处理后的藏红花花瓣取出后立马置于超微粉碎机内进行超微粉碎处理，完成后得藏红花花瓣粉末备用；s3、低温真空干燥处理：将步骤s2中超微粉碎处理后所得的藏红花花瓣粉末置于真空干燥箱内，在低温真空条件下进行干燥处理，控制真空干燥箱内的真空度为1.7pa，温度为35℃，干燥至含水率为1.4％，完成后取出藏红花花瓣粉末备用；s4、一次醇提：以乙醇作为浸提剂，利用索式提取装置对步骤s3中的藏红花花瓣粉末进行一次醇提3.5h，分别收集一次醇提物和料渣备用；s5、二次醇提：将步骤s4中所得的料渣置于电晕放电仪内进行电晕处理，控制处理电压为12kv，处理40s后取出置于索式提取装置内进行二次醇提1.5h，收集二次醇提物备用；s6、纯化处理：将步骤s4中所得的一次醇提物和步骤s5中所得的二次醇提物混合后，采用柱层析法进行纯化即可。实施例6一种藏红花花瓣精制醇提物的制备方法，包括如下步骤：s1、超微粉碎处理：将藏红花花瓣取出后立马置于超微粉碎机内进行超微粉碎处理，完成后得藏红花花瓣粉末备用；s2、低温真空干燥处理：将步骤s1中超微粉碎处理后所得的藏红花花瓣粉末置于真空干燥箱内，在低温真空条件下进行干燥处理，控制真空干燥箱内的真空度为1.7pa，温度为35℃，干燥至含水率为1.4％，完成后取出藏红花花瓣粉末备用；s3、一次醇提：以乙醇作为浸提剂，利用索式提取装置对步骤s2中的藏红花花瓣粉末进行一次醇提3.5h，分别收集一次醇提物和料渣备用；s4、二次醇提：将步骤s3中所得的料渣置于电晕放电仪内进行电晕处理，控制处理电压为12kv，处理40s后取出置于索式提取装置内进行二次醇提1.5h，收集二次醇提物备用；s5、纯化处理：将步骤s3中所得的一次醇提物和步骤s4中所得的二次醇提物混合后，采用柱层析法进行纯化即可。实施例7一种藏红花花瓣精制醇提物的制备方法，包括如下步骤：s1、低温等离子体处理：采摘新鲜的藏红花花瓣置于冷等离子体处理设备中进行冷等离子体处理，控制剂量为160w，处理时间为20s，完成后取出藏红花花瓣备用；s2、深冷处理：将步骤s1中低温等离子体处理后的藏红花花瓣置于液氮中进行深冷处理；s3、超微粉碎处理：将步骤s2中深冷处理后的藏红花花瓣取出后立马置于超微粉碎机内进行超微粉碎处理，完成后得藏红花花瓣粉末备用；s4、一次醇提：以乙醇作为浸提剂，利用索式提取装置对步骤s3中的藏红花花瓣粉末进行一次醇提3.5h，分别收集一次醇提物和料渣备用；s5、二次醇提：将步骤s4中所得的料渣置于电晕放电仪内进行电晕处理，控制处理电压为12kv，处理40s后取出置于索式提取装置内进行二次醇提1.5h，收集二次醇提物备用；s6、纯化处理：将步骤s4中所得的一次醇提物和步骤s5中所得的二次醇提物混合后，采用柱层析法进行纯化即可。实施例8一种藏红花花瓣精制醇提物的制备方法，包括如下步骤：s1、低温等离子体处理：采摘新鲜的藏红花花瓣置于冷等离子体处理设备中进行冷等离子体处理，控制剂量为160w，处理时间为20s，完成后取出藏红花花瓣备用；s2、深冷处理：将步骤s1中低温等离子体处理后的藏红花花瓣置于液氮中进行深冷处理；s3、超微粉碎处理：将步骤s2中深冷处理后的藏红花花瓣取出后立马置于超微粉碎机内进行超微粉碎处理，完成后得藏红花花瓣粉末备用；s4、低温真空干燥处理：将步骤s3中超微粉碎处理后所得的藏红花花瓣粉末置于真空干燥箱内，在低温真空条件下进行干燥处理，控制真空干燥箱内的真空度为1.7pa，温度为35℃，干燥至含水率为1.4％，完成后取出藏红花花瓣粉末备用；s5、一次醇提：以乙醇作为浸提剂，利用索式提取装置对步骤s4中的藏红花花瓣粉末进行一次醇提3.5h，分别收集一次醇提物和料渣备用；s6、二次醇提：将步骤s5中所得的料渣置于索式提取装置内进行二次醇提1.5h，收集二次醇提物备用；s7、纯化处理：将步骤s5中所得的一次醇提物和步骤s6中所得的二次醇提物混合后，采用柱层析法进行纯化即可。实施例9一种藏红花花瓣精制醇提物的制备方法，包括如下步骤：s1、低温等离子体处理：采摘新鲜的藏红花花瓣置于冷等离子体处理设备中进行冷等离子体处理，控制剂量为160w，处理时间为20s，完成后取出藏红花花瓣备用；s2、深冷处理：将步骤s1中低温等离子体处理后的藏红花花瓣置于液氮中进行深冷处理；s3、超微粉碎处理：将步骤s2中深冷处理后的藏红花花瓣取出后立马置于超微粉碎机内进行超微粉碎处理，完成后得藏红花花瓣粉末备用；s4、低温真空干燥处理：将步骤s3中超微粉碎处理后所得的藏红花花瓣粉末置于真空干燥箱内，在低温真空条件下进行干燥处理，控制真空干燥箱内的真空度为1.7pa，温度为35℃，干燥至含水率为1.4％，完成后取出藏红花花瓣粉末备用；s5、一次醇提：以乙醇作为浸提剂，利用索式提取装置对步骤s4中的藏红花花瓣粉末进行一次醇提3.5h，分别收集一次醇提物和料渣备用；s6、纯化处理：将步骤s5中所得的一次醇提物采用柱层析法进行纯化即可。对照组申请号为：cn201811188951.0公开的藏红花花瓣精制醇提物及其制备方法和应用。为了对比本申请技术效果，分别用上述实施例1～9以及对照组的方法对应制备藏红花花瓣精制醇提物，然后测试其降血脂性能，具体为：(1)试验动物spf级健康km小鼠，约5周龄，体重35±2g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，许可证号：scxk(湘)2016-0002。(2)试验设计小鼠被随机分成11组，每组12只小鼠，其中雌雄各6只，适应性饲养5d后，禁食12h。第1组为正常对照组(灌胃蒸馏水)，其余10组为实验组(分别灌胃实施例1～9以及对照组的方法对应制备藏红花花瓣精制醇提物)，灌胃总体积为1.2ml分三次灌完，每次间隔4h，灌胃后连续观察两晚，并进行相关指标观察。(3)各组藏红花精制醇提物对高血脂症的预防作用取120只健康的4月龄雄性sd大鼠，适应喂养7d后，给予高脂饲料饲喂，饲喂20天后，眼底丛静脉取血分离血清，分别测定血清中甘油三酯(tg)、胆固醇(tc)的含量，确定高脂模型建立成功后，将高脂sd大鼠随机分成10组，每组12只，每组tg、tc水平无明显差异。然后分别用上述实施例1～9以及对照组的方法对应制备的藏红花精制醇提物对各组高脂大鼠进行灌胃，灌胃时间每天上午8:00～9:00，灌胃期间各组自由饮水和饮食，实验期间每天观察各组大鼠的毛色和精神状况，灌胃过程中每周称重，连续灌胃36天后禁食12h，正常饮水，然后取尾部静脉血，分离血清，分别测定血清中tg、tc水平。(5)试验结果表1小鼠灌胃前后体重的变化初始体重(g)2周后体重(g)变化率(％)正常对照组35.61±1.3243.57±1.8722.36实施例135.65±1.3244.07±1.8923.63实施例235.63±1.3343.51±1.7922.13实施例335.52±1.3444.05±1.8524.02实施例435.61±1.3242.86±1.6820.36实施例535.63±1.3243.24±1.7921.36实施例635.68±1.2942.32±1.7518.63实施例735.61±1.3142.49±1.7319.32实施例835.59±1.3243.18±1.8121.32实施例935.46±1.3342.73±1.7520.51对照组35.56±1.2942.29±1.7918.93表2小鼠摄食量与体重增加量的变化由上表1和2可以看出，本申请提供了一种藏红花花瓣精制醇提物及其制备方法，将制备的藏红花花瓣精制醇提物对小鼠进行灌胃后，其体重增加量、摄食量与正常对照组相比，均无显著性差异，可见本申请方法制备的藏红花花瓣精制醇提物对小鼠的食欲影响较低，对小鼠的消化系统的刺激较小。表3大鼠中甘油三酯(tg)、胆固醇(tc)的含量tc(mmol/l)tg(mmol/l)实施例11.310.62实施例21.260.58实施例31.250.59实施例41.320.63实施例51.300.60实施例61.830.75实施例71.540.63实施例81.420.65实施例91.530.68对照组1.930.78注：高脂模型建立成功后测量的大鼠平均tc含量为2.35±0.32mmol/l、tg含量为0.89±0.14mmol/l。通过表3可以看出，本申请方法制备的藏红花花瓣精制醇提物具有明显的降血脂活性，也即本申请方法制备的藏红花花瓣精制醇提物的提取率高，并且具有较高的活性。以上所述仅为本发明的较佳实施例，但本发明不以所示限定实施范围，凡是依照本发明的构想所作的改变，或修改为等同变化的等效实施例，仍未超出说明书所涵盖的精神时，均应在本发明的保护范围内。当前第1页12