一种控制动物寄生虫感染的外用制剂的制作方法

1.本发明属于药物制剂技术领域，涉及一种兽用抗菌药物的外用制剂，特别涉及一种控制动物寄生虫感染的外用制剂。
技术背景
2.控制动物群的寄生虫感染一直是一项重要的全球性的任务。致病生物可以被分类为线虫纲、绦虫纲和吸虫纲或原生动物门的内寄生生物，或节肢动物门的外寄生生物。前者包括胃，肠道，淋巴系统，组织，肝脏，肺，心脏和脑的传染。后者则涉及外寄生虫包括蜱、螨虫、虱子、苍蝇和跳蚤，这些生物经常作为体内寄生虫对动物寄主传播的媒介和中间宿主。
3.尽管许多杀外寄生虫药和杀内寄生虫药处于使用中，但这些药存在许多问题，如有限的活性谱，需要重复治疗，以及在许多情况下寄生产生的抗药性。
4.异唑啉类化合物，是一种广谱性杀虫剂，对蜱目、蚤目、虱目、半翅目和双翅目等害虫均具有良好的杀虫活性，其毒力高于或与常用杀虫剂相当。大环内酯类化合物是由基因重组的新菌株发酵而成的一类抗生素，其对很多动物体内、体外寄生虫都有广泛的抑制和杀灭作用，包括蚤类、疥螨、蜱、钩虫、虱、线虫和犬恶丝虫等，有着疗效较好、毒性小等优点。
5.异唑啉类化合物和大环内酯类化合物的组合在杀虫活性谱方面具有明显的优势，对不同寄生虫均具有明显抑制效果。外用制剂与口服片剂药效基本保持一致，外用制剂使用更加方便，起效快、靶向作用明显，异噁唑啉和大环内酯的组合外用制剂对绝大部分体内、体外寄生虫均有明显的抑制和杀灭作用，因此，异噁唑啉和大环内酯药物适合制备成外用制剂用于驱除寄生虫。
6.但目前上市外用制剂均加入一定比例人工合成抗氧化剂丁羟甲苯以保证外用溶剂的稳定性。丁羟甲苯(bht)是常见的油脂抗氧化剂，用于外用制剂以提高剂型的稳定性。化妆品中用作防腐剂，添加量一般较少。世界卫生组织、欧共体儿童保护组织、英国生物工业协会等多个组织机构研究表明，丁羟甲苯会被皮肤吸收，长期使用或者一次过量使用均易引起皮肤炎症及过敏，甚至会对肝、脾、肺产生不利影响，同时丁羟甲苯在光、湿和热等条件下均会发生变色和活性丧失，导致其抗氧作用明显降低。
7.药物制剂的成分较化妆品的成分对机体的刺激性更大，对药剂的稳定性要求更高，稳定剂的用量相比需要增加，为了避免药剂对皮肤的副作用，同时持续维持药剂的性状和功效的稳定性，急需对外用抗菌药物制剂的成分进行改进。


技术实现要素：

8.基于以上实际运用中存在的问题，本发明旨在提供一种控制动物寄生虫感染的外用制剂。该组合物的杀虫活性更广谱，外用制剂对皮肤无不良反应，且稳定性更持久。
9.为实现上述目的，本发明技术方案为：提供的一种含有异噁唑啉和大环内酯药物组合物的外用制剂，该制剂包括异噁唑啉类化合物和大环内酯类化合物、可接受的液体载体媒介物、抗氧化剂。
10.一种控制动物寄生虫感染的外用制剂，其特征在于，所述外用制剂包括异噁唑啉类化合物、可接受的液体载体媒介物、抗氧化剂。
11.优选地，抗氧化剂为3-脱氢莽草酸。
12.更优选地，抗氧化剂可以为3-脱氢莽草酸或3-脱氢莽草酸与2-苯基色原酮、维生素e、β-胡萝卜素、抗坏血酸、环己六醇磷酸酯、羟基酪醇、松脂醇、儿茶素中的一种或多种的组合。
13.外用制剂中的异噁唑啉类化合物选自但不限于氟雷拉纳、阿福拉纳、沙罗拉纳、洛替拉纳中的一种或几种。
14.液体载体媒介物为溶剂和共溶剂，溶剂为二丙二醇单乙醚、二丙二醇单丙醚、二丙二醇单丁醚、丙二醇单甲醚、丙二醇单乙醚、丙二醇单丙醚、丙二醇单丁醚中的一种或多种的混合物。共溶剂选自二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、二甲基丙酰胺、二乙基甲酰胺、二甲基亚砜、二异丙基甲酰胺、丙酮、乙醇、异丙醇中的一种或多种的混合物。
15.外用制剂为多类型药物化合物的复配，可以与大环内酯化合物组合以扩大抗菌的广谱性，大环内酯化合物可以选为伊维菌素、莫西菌素、美贝霉素、塞拉菌素、埃玛菌素、拉替菌素或雷皮菌素中的一种或多种的组合物。
16.外用制剂中按质量与外用制剂总体积(w/v)比计，含异噁唑啉类化合物10～200mg/ml，大环内酯化合物10～60mg/ml。
17.优选地，外用制剂中按质量与外用制剂总体积(w/v)比计，含异噁唑啉类化合物50～160mg/ml，大环内酯化合物20～50mg/ml。
18.更优选地，外用制剂中按质量与外用制剂总体积比计，还包括3-脱氢莽草酸0.5～2.0mg/ml；所述溶剂的用量为占制剂溶液总体积的85～95％，所述共溶剂的用量为占制剂溶液总体积的5～15％。
19.本发明所述的一种控制动物寄生虫感染的外用制剂的制备方法，具体步骤为：取处方量的异噁唑啉类化合物、大环内酯化合物和抗氧化剂，加入共溶剂，之后先加入溶剂用量的80％，控制温度30～40℃，澄清后，再加入剩余溶剂，灌装至低分子量聚乙烯密封罐中即得。
20.本发明所提及的丁羟甲苯(bht)，又名二丁基羟基甲苯(butylated hydox
y toluene)别名2,6-二叔丁基对甲酚，是一种抗氧化剂、防腐剂，具有抗油脂氧化的成分，添加过量易引起皮肤炎症及过敏。化妆品成分审核委员会证实，保养品中的bht浓度通常少于0.1％，bht虽然会被皮肤吸收，但是并不会进入到血流里，且低浓度的bht不会造成敏感，也不会有致癌的风险。
21.本发明所提及的3-脱氢莽草酸(dhs)是微生物及植物体内芳香族氨基酸生物合成代谢途径中的一种重要中间产物。3-脱氢莽草酸还是一种十分有效的抗氧化剂，其活性优于没食子酸、丙基没食子酸、丁基羟基茴香醚、丁羟甲苯等一些商品化的抗氧化剂，具有重要的应用价值。
22.共溶剂也叫助溶剂，它是能提高主溶剂在溶液中溶解度的辅助溶剂。大多数共溶剂本身就是有机溶剂，但加用少量即可提高主溶剂的溶解能力。常用于配制乳油和油剂，以提高乳油和油剂的有效成分浓度。尤其是在配制高浓度乳油和超低容量油剂时，须选用一定的助溶剂。
23.本发明提供的控制动物寄生虫感染的外用制剂具有以下优点：
24.1.采用组合溶剂，助溶剂增加溶剂对药物的溶解，有助于提高制剂的有效物质含量以及制剂的稳定性。
25.2.采用3-脱氢莽草酸(dhs)等抗氧化剂，刺激性小，增加用量不会带来副反应和危害，并且与组分溶剂和有效药物的相融性较好，提高药物制剂的抗氧化性，有助于持续的稳定性。
26.3.选择具有还原性的共溶剂以及天然抗氧化剂提高外用制剂稳定性，同时通过透皮实验表明具有透皮促进作用，对寄生虫具有明显的抑制和杀灭作用。
附图说明
27.图1使用本发明实施例1产品后氟雷拉纳的血药浓度-时间曲线；
28.图2使用本发明实施例1产品后塞拉菌素的血药浓度-时间曲线。
具体实施方式
29.下面将通过实施例对本发明作进一步的描述，这些描述并不是对本发明内容作进一步的限定。本领域的技术人员应理解，对本发明的技术特征所作的等同替换，或相应的改进，仍属于本发明的保护范围之内。
30.本实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得，下述实施例中所涉及的实验方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。
31.实施例1～5按照本技术方法不同组分的控制动物寄生虫感染的外用制剂组合物的制备
32.实施例1
33.活性成分：氟雷拉纳1000mg，塞拉菌素300mg
34.溶剂：二丙二醇单乙醚8.5ml
35.共溶剂：n,n-二甲基乙酰胺1.5ml
36.抗氧化剂：3-脱氢莽草酸10mg
37.制备方法：取处方量的氟雷拉纳、塞拉菌素和3-脱氢莽草酸，加入1.5ml n,n-二甲基乙酰胺，加入80％的二丙二醇单乙醚，控制温度30～40℃，澄清后，加入剩余溶剂，灌装至低分子量聚乙烯密封罐中即得。
38.实施例2
39.活性成分：氟雷拉纳800mg，塞拉菌素240mg
40.溶剂：二丙二醇单乙醚9ml
41.共溶剂：n,n-二甲基乙酰胺1ml
42.抗氧化剂：3-脱氢莽草酸8mg
43.制备方法：取处方量的氟雷拉纳、塞拉菌素和3-脱氢莽草酸，加入1ml n,n-二甲基乙酰胺，加入80％的二丙二醇单乙醚，控制温度30～40℃，澄清后，加入剩余溶剂，灌装至低分子量聚乙烯密封罐中即得。
44.实施例3
45.活性成分：氟雷拉纳1200mg，塞拉菌素360mg
46.溶剂：二丙二醇单乙醚9.5ml
47.共溶剂：n,n-二甲基乙酰胺0.5ml
48.抗氧化剂：3-脱氢莽草酸12mg
49.制备方法：取处方量的氟雷拉纳、塞拉菌素和3-脱氢莽草酸，加入1ml n,n-二甲基乙酰胺，加入80％的二丙二醇单乙醚，控制温度30～40℃，澄清后，加入剩余溶剂，灌装至低分子量聚乙烯密封罐中即得。
50.实施例4
51.活性成分：沙罗拉纳100mg，塞拉菌素300mg
52.溶剂：二丙二醇单乙醚9ml
53.共溶剂：n,n-二甲基乙酰胺1ml
54.抗氧化剂：3-脱氢莽草酸10mg
55.制备方法：取处方量的沙罗拉纳、塞拉菌素和3-脱氢莽草酸，加入1ml n,n-二甲基乙酰胺，加入80％的二丙二醇单乙醚，控制温度30～40℃，澄清后，加入剩余溶剂，灌装至低分子量聚乙烯密封罐中即得。
56.实施例5
57.活性成分：氟雷拉纳1000mg，莫西菌素100mg
58.溶剂：二丙二醇单乙醚9ml
59.共溶剂：n,n-二甲基乙酰胺1ml
60.抗氧化剂：3-脱氢莽草酸10mg
61.制备方法：取处方量的氟雷拉纳、莫西菌素和3-脱氢莽草酸，加入1ml n,n-二甲基乙酰胺，加入80％的二丙二醇单乙醚，控制温度30～40℃，澄清后，加入剩余溶剂，灌装至低分子量聚乙烯密封罐中即得。
62.实施例6不同组分的控制动物寄生虫感染的外用制剂组合物的制备
63.对比例1
64.活性成分：氟雷拉纳100mg，塞拉菌素300mg
65.溶剂：二丙二醇单乙醚10ml
66.制备方法：取处方量的氟雷拉纳、塞拉菌素，加入80％的二丙二醇单乙醚，控制温度30～40℃，澄清后加入剩余溶剂，灌装至低分子量聚乙烯密封罐中即得。
67.对比例2
68.活性成分：氟雷拉纳1000mg，塞拉菌素300mg
69.溶剂：二丙二醇单乙醚10ml
70.抗氧化剂：丁羟甲苯1mg
71.制备方法：取处方量的氟雷拉纳、塞拉菌素和丁羟甲苯，加入80％的二丙二醇单乙醚，控制温度30～40℃，澄清后定容灌装至低分子量聚乙烯密封管中即得。
72.对比例3
73.活性成分：氟雷拉纳1000mg，塞拉菌素300mg
74.溶剂：二丙二醇单乙醚8.5ml
75.共溶剂：n,n-二甲基乙酰胺1.5ml
76.制备方法：取处方量的氟雷拉纳、塞拉菌素，加入80％的二丙二醇单乙醚，控制温度30～40℃，加入1.5ml n,n-二甲基乙酰胺，澄清后，加入剩余溶剂，灌装至低分子量聚乙烯密封罐中即得。
77.对比例4
78.活性成分：氟雷拉纳1000mg，塞拉菌素300mg
79.溶剂：二丙二醇单乙醚10ml
80.抗氧化剂：3-脱氢莽草酸10mg
81.制备方法：取处方量的氟雷拉纳、塞拉菌素和3-脱氢莽草酸，加入80％的二丙二醇单乙醚，控制温度30～40℃，澄清后，加入剩余溶剂，灌装至低分子量聚乙烯密封罐中即得。
82.对比例5
83.活性成分：沙罗拉纳100mg，塞拉菌素300mg
84.溶剂：二丙二醇单乙醚300ml
85.制备方法：取处方量的沙罗拉纳、塞拉菌素，加入80％的二丙二醇单乙醚，控制温度30～40℃，澄清后，加入剩余溶剂，灌装至低分子量聚乙烯密封罐中即得。
86.对比例6
87.活性成分：沙罗拉纳100mg，塞拉菌素300mg
88.溶剂：二丙二醇单乙醚10ml
89.抗氧化剂：丁羟甲苯1mg
90.制备方法：取处方量的沙罗拉纳、塞拉菌素和丁羟甲苯，加入80％的二丙二醇单乙醚，控制温度30～40℃，澄清后，加入剩余溶剂，灌装至低分子量聚乙烯密封罐中即得。
91.对比例7
92.活性成分：沙罗拉纳100mg，塞拉菌素300mg
93.溶剂：二丙二醇单乙醚9ml
94.共溶剂：n,n-二甲基乙酰胺1ml
95.制备方法：取处方量的沙罗拉纳、塞拉菌素，加入1ml n,n-二甲基乙酰胺，加入80％的二丙二醇单乙醚，控制温度30～40℃，澄清后，加入剩余溶剂，灌装至低分子量聚乙烯密封罐中即得。
96.对比例8
97.活性成分：沙罗拉纳100mg，塞拉菌素300mg
98.溶剂：二丙二醇单乙醚10ml
99.抗氧化剂：3-脱氢莽草酸10mg
100.制备方法：取处方量的沙罗拉纳、塞拉菌素和3-脱氢莽草酸，加入80％的二丙二醇单乙醚，控制温度30～40℃，澄清后，加入剩余溶剂，灌装至低分子量聚乙烯密封罐中即得。
101.对比例9
102.活性成分：氟雷拉纳1000mg，莫西菌素100mg
103.溶剂：二丙二醇单乙醚10ml
104.制备方法：取处方量的氟雷拉纳、莫西菌素，加入80％的二丙二醇单乙醚，控制温度30～40℃，澄清后，加入剩余溶剂，灌装至低分子量聚乙烯密封罐中即得。
105.对比例10
106.活性成分：氟雷拉纳1000mg，莫西菌素100mg
107.溶剂：二丙二醇单乙醚10ml
108.抗氧化剂：丁羟甲苯8mg
109.制备方法：取处方量的氟雷拉纳、莫西菌素和丁羟甲苯，加入80％的二丙二醇单乙醚，控制温度30～40℃，澄清后，加入剩余溶剂，灌装至低分子量聚乙烯密封罐中即得。
110.对比例11
111.活性成分：氟雷拉纳1000mg，莫西菌素100mg
112.溶剂：二丙二醇单乙醚9ml
113.共溶剂：n,n-二甲基乙酰胺1ml
114.制备方法：取处方量的氟雷拉纳、莫西菌素，加入1ml n,n-二甲基乙酰胺，加入80％的二丙二醇单乙醚，控制温度30～40℃，澄清后，加入剩余溶剂，灌装至低分子量聚乙烯密封罐中即得。
115.对比例12
116.活性成分：氟雷拉纳1000mg，莫西菌素100mg
117.溶剂：二丙二醇单乙醚10ml
118.抗氧化剂：3-脱氢莽草酸16mg
119.制备方法：取处方量的氟雷拉纳、莫西菌素和3-脱氢莽草酸，加入80％的二丙二醇单乙醚，控制温度30～40℃，澄清后，加入剩余溶剂，灌装至低分子量聚乙烯密封罐中即得。
120.实施例7稳定性试验
121.将实施例1～5和对比例1～12中的外用制剂溶液，于温度为40
±
2℃，相对湿度rh75％
±
5％的恒温恒湿箱中放置，于3个月和6个月末分别取样，检测其性状、含量。检测结果如表1～表3所示：
122.表1外用溶液加速3个月和6月检测结果
[0123][0124]
表2外用溶液加速3个月和6月检测结果
[0125][0126]
表3外用溶液加速3个月和6月检测结果
[0127][0128]
由表1～3可以看出本发明外用制剂经过加速实验，含量稳定，通过对比多个异噁唑啉和大环内酯化合物的hplc纯度发现，单独使用还原性溶剂和3-脱氢莽草酸的外用制剂稳定性均优于丁羟甲苯，同时使用还原性溶剂和3-脱氢莽草酸复配的外用制剂的稳定性最优，加速6个月条件下，氟雷拉纳和塞拉菌素的hplc纯度基本保持一致。
[0129]
通过目前处方可以得到含量稳定的异噁唑啉和大环内酯的组合制剂，通过药效实验对比发现较其他上市产品相比杀虫效果更优，同时避免人工合成抗氧化剂的使用，适用于未来商业化生产。
[0130]
实施例8复方外用滴剂驱虫疗效评价试验
[0131]
(1)体外驱虫(蜱)
[0132]
在该评价中，使用混合性别的比格犬，分配给空白对照组、市售阳性组和本发明实施例1～3组，实验犬被50只未进食成年蜱侵袭(血红扇头蜱)。
[0133]
在40mg/kg b.w.的氟雷拉纳和6mg/kg b.w.的塞拉菌素的剂量下，在第0天犬接受治疗。使用移液管给予制剂。在颅骨底部的背颈部以线的形式施用所述剂量。
[0134]
给药后第0天、5天、10天、20天及30天分别统计各组药物对犬体外蜱虫的平均检出率，并在给予治疗后第1天、第2天和第7天，观察犬对治疗的任何即时反应，并观察治疗后的不良反应、皮肤刺激和测试制剂的特性。
[0135]
表4药物对犬体外蜱虫的平均检出率
[0136][0137]
(2)体内驱虫
[0138]
在该评价中，使用混合性别的比格犬，分配给空白对照组、市售阳性组和实验组，实验犬经实验室粪便漂浮法和直接涂片法镜检发现感染有大量的肠道寄生虫(包括钩虫、鞭虫、蛔虫、绦虫等)。
[0139]
在40mg/kg b.w.的氟雷拉纳和6mg/kg b.w.的塞拉菌素的剂量下，在第0天犬接受治疗。使用移液管给予制剂。在颅骨底部的背颈部以线的形式施用所述剂量。
[0140]
给药后第0天、5天、10天、20天及30天分别统计各组药物对犬体内线虫、绦虫的平均检出率，并在给予治疗后第1天、第2天和第7天，观察犬对治疗的任何即时反应，并观察治疗后的不良反应、皮肤刺激和测试制剂的特性。
[0141]
表5药物对犬体内寄生虫的检出率
[0142][0143][0144]
从表可以看出，本发明对犬体内外寄生虫均有明显的杀虫效果，检出率均低于空白对照组和市售阳性组，并且作用时间长，在30天时仍有很好的体内外驱虫效果。试验结果表明，本发明实施例制备的控制动物寄生虫感染的长效外用液体制剂对犬体内外寄生虫在30天的时间内，有良好的驱杀寄生虫的作用。
[0145]
实施例9血药浓度检测试验
[0146]
以氟雷拉纳、塞拉菌素为基础的复方制剂单次给犬透皮给药，氟弗雷拉纳(40mg/kg b.w.)、塞拉菌素(6mg/kg b.w.)给药，观察犬对治疗的局部和全身耐受性并评价给药部位的美容外观。在第0天、第1天、第3天、第5天、第7天和随后的每周直至第35天，在给药前和
给药后2小时、4小时、8小时采集所有犬的血浆样品。针对氟雷拉纳和塞拉菌素浓度分析血浆。
[0147]
结果：犬中氟雷拉纳和塞拉菌素的平均血浆浓度在图1、图2中示出，没有观察到局部或全身不良反应。美容外观为可接受的。
[0148]
实施例10安全性试验
[0149]
选取20g左右的昆明种小白鼠40只，随机将其分为4组，每组10只，公母各半。第1组为对照组，肌肉注射0.5m1生理盐水；第2-4组为试验组，选用不同剂量(高剂量、中剂量和低剂量)的本发明实施例的长效复方驱虫药物液体制剂制备，5.0ml、3.0ml和1.0ml肌肉注射1次，之后连续观察3-5个月，期间记录小鼠的进食、饮水、行为变化及死亡情况，试验结束后对各组小鼠随机挑选3只进行解剖，观察脏器的病变情况，并记录。
[0150]
结果：对照组和试验2-4组小鼠在试验期间均未出现死亡，进食和饮水正常，行为未发生明显异常，通过剖检，试验2-4组小鼠心肝、脾、肺、肾、胃、肠道、均未有异常病变，与对照组无明显差异。结果表明本发明制备的控制动物寄生虫感染的长效外用液体制剂使用安全。