一种甲钴胺注射液的制备方法与流程

1.本公开涉及制药技术领域，尤其涉及一种甲钴胺注射液的制备方法。


背景技术：

2.甲钴胺(mecobalamin)为内源性维生素b12，存在于血液、髓液中，与维生素b12相比，其对神经元的传导有良好的改善作用，可通过甲基转换反应促进核酸-蛋白-脂肪代谢，其作为甲硫氨酸合成酶的辅酶，可使高半胱氨酸转化为甲硫氨酸，参与脱氧核苷合成胸腺嘧啶过程，促进核酸、蛋白合成，促进轴索内输送和轴索再生及髓鞘的形成，防止轴突变性，修复被损害的神经组织。临床研究表明，甲钴胺口服给药后3小时达到血药浓度峰值，其吸收呈剂量依赖性，可依次从血液、肾、肾上腺、胰、肝、胃组织中检测到本品，且浓度较高，而肌肉、睾丸、脑神经等处的浓度则较低。服用后8小时，尿中总b12的排泄量为用药后24小时排泄量的40％～80％。
3.甲钴胺的光稳定性极差，尤其是在加入注射用水后，会立即溶解，且在自然光下降解迅速，因此在配置甲钴胺注射液时，需要考虑多因素以降低其降解失效率，且甲钴胺注射液的热稳定较差，在制备过程中需要重点关注。
4.cn112494436a公开了一种注射用甲钴胺及其制备方法，所述制备方法包括在避光条件下将甲钴胺与赋形剂溶解于注射用水中，从而配置成注射用甲钴胺药液，然后再将甲钴胺注射液通过灌装半压塞后进入真空冷冻干燥机进行速冻，从而得到注射用甲钴胺；该专利申请虽然制备了甲钴胺药液，但是制备的甲钴胺药液只能现用现配，然后冻干，无法长期稳定保存。
5.鉴于甲钴胺对于光热的稳定性较差，缩短溶液配制时间，降低不稳定因素的影响，优化现有甲钴胺注射液的制备工艺，存在较大空间。


技术实现要素：

6.为了解决上述技术问题或者至少部分地解决上述技术问题，本公开提供了一种甲钴胺注射液的制备方法。采用本公开提供的制备方法，能够大大缩短甲钴胺注射液的配置时间，降低因配液时间过长导致药液暴露降解和污染的风险。
7.第一方面，本公开提供了一种甲钴胺注射液的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
8.(1)原料药的溶解：在氮气氛围下，将甲钴胺溶于70-90wt％的注射用水中；
9.(2)渗透压调节剂的溶解：在步骤(1)得到的甲钴胺溶液中加入甘露醇溶解至澄清；
10.(3)定容：将剩余的注射用水加入步骤(2)得到的溶液混合均匀；
11.(4)过滤除菌：依次使用0.45μm聚醚砜滤膜和0.22μm的聚醚砜滤膜进行过滤除菌；
12.(5)灌装：将过滤除菌后的药液进行灌装，得到所述甲钴胺注射液。
13.步骤(1)所述的70-90wt％的注射用水，例如可以是75wt％、80wt％、85wt％、
90wt％等的注射用水。
14.目前，在甲钴胺注射液的溶液配制过程中，为了减少甲钴胺在溶液中的停留时间，降低降解风险，通常采用的方法是先利用注射用水溶解甘露醇然后再加入甲钴胺原料药，但是此种方法制备溶液所需时间仍然较长。而本公开发现通过控制溶液配置过程中甲钴胺和甘露醇的溶解顺序和注射用水分配比例，可以降低甲钴胺和甘露醇的总体溶解时间，从而大大降低甲钴胺注射液的配置时间，进而可以减少生产成本的同时，还可以降低因配液时间过长导致药液暴露降解和污染的风险，保证甲钴胺较低的降解失效率。
15.同时，在氮气保护下进行可以有效提高产品质量的稳定性。
16.相较于目前常用的流通蒸汽辅助灭菌的方式会加速甲钴胺降解为羟钴胺以及其他杂质，本公开采用过滤除菌的方式，可以避免溶液在湿热灭菌的高温条件下杂质的增长。
17.作为本公开的一种优选技术方案，步骤(1)中的注射用水的量为总注射用水量的90wt％。
18.本公开发现当采用90wt％的注射用水溶解甲钴胺，而后与甘露醇混合的方式，可以进一步减少溶液配置总时间。
19.甲钴胺的光稳定性较差，在自然光下会迅速降解，控制在避光条件下，可以降低甲钴胺的降解，作为本公开的一种优选技术方案，所述制备方法在避光条件下进行。
20.作为本公开的一种优选技术方案，所述避光条件为红外灯5lx以下，例如4lx、3lx、2lx、1lx等。
21.作为本公开的一种优选技术方案，以所述甲钴胺注射液的总量为1ml计，所述甲钴胺的用量为0.5mg，所述甘露醇的用量为50mg，其余为注射用水。
22.作为本公开的一种优选技术方案，所述灌装在氮气保护下进行，所述甲钴胺注射液的溶氧量低于2mg/l，例如1mg/l，残氧量低于3％，例如2％、1％。
23.在氮气保护下进行可以有效提高产品质量的稳定性，其中当氮气中溶氧量和残氧量较低时，制备的甲钴胺注射液中的总杂质含量明显降低。
24.第二方面，本公开提供了一种第一方面所述的制备方法得到的甲钴胺注射液。
25.作为本公开的一种优选技术方案，所述甲钴胺注射液的ph值为6-6.4，例如6.1、6.2、6.3等。
26.作为本公开的一种优选技术方案，所述甲钴胺注射液中羟钴胺的含量小于0.3％，例如0.2％、0.1％等。
27.作为本公开的一种优选技术方案，所述甲钴胺注射液中最大未知单杂质的含量小于0.3％，例如0.2％、0.1％等。
28.作为本公开的一种优选技术方案，所述甲钴胺注射液中总杂质的含量小于0.8％，例如0.7％、0.6％、0.5％、0.4％等。
29.本公开所述的羟钴胺、最大未知单杂质或总杂质的含量，均是指，以甲钴胺注射液的总体积为100％计，其中的羟钴胺、最大未知单杂质或总杂质的质量体积比。
30.本公开实施例提供的技术方案与现有技术相比具有如下优点：
31.(1)本公开发现通过控制溶液配置过程中甲钴胺和甘露醇的溶解顺序和注射用水分配比例，可以降低甲钴胺和甘露醇的总体溶解时间，从而大大降低甲钴胺注射液的配置时间，进而可以减少生产成本的同时，还可以降低因配液时间过长导致药液暴露降解和污
染的风险，保证甲钴胺较低的降解失效率；
32.(2)同时，本公开提供的制备方法在氮气氛围、避光条件下进行，且通过配合过滤除菌的方法，可以进一步提高甲钴胺注射液的稳定性，降低甲钴胺注射液中的杂质含量，提高甲钴胺注射液的质量。
具体实施方式
33.为了能够更清楚地理解本公开的上述目的、特征和优点，下面将对本公开的方案进行进一步描述。需要说明的是，在不冲突的情况下，本公开的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
34.在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本公开，但本公开还可以采用其他不同于在此描述的方式来实施；显然，说明书中的实施例只是本公开的一部分实施例，而不是全部的实施例。
35.实施例1
36.本实施例提供了一种甲钴胺注射液的制备方法。
37.所述甲钴胺注射液的组成成分见表1：
38.表1
39.名称用途单位剂量(mg)甲钴胺活性成分0.5甘露醇渗透压调节剂50注射用水溶剂至1ml
40.制备方法如下：
41.(1)溶解原料药和渗透压调节剂；
42.(2)除菌和灌装。
43.性能测试1：物料溶解研究
44.参照实施例1提供的甲钴胺注射液组成成分，进行如下探究：
45.首先，按照通常配制方法中采用的先溶解甘露醇再溶解原料药的方式配制注射液，并选用不同初始注射用水量进行配制，结果如下表2所示：
46.表2
[0047][0048]
显然，选择90％初始注射用水用量能显著缩短溶液配制时间，减少甲钴胺降解风
险。
[0049]
其次，发明人考察了不同原料与辅料的溶解顺序对溶解时间的影响，具体结果见表3：
[0050]
表3
[0051][0052]
由表2和表3可知，先溶解甲钴胺再溶解甘露醇明显较其他两种方式配液时间短；初始溶解用水量结果表明，70％～90％的初始溶解用水量条件下，90％初始溶解用水量配液时间明显较短，溶解效果最佳。因此，最终选择以90％初始溶解用注射液量先溶解原料药，再溶解甘露醇的方法，实验结果也证明，该方法时间也仅为6-8分钟，大大缩短了溶液配制时间。
[0053]
即本公开先溶解原料药再溶解甘露醇可缩短本品的配液时间，减小生产成本和降低了配液时间过长药液暴露降解和污染的风险。
[0054]
性能测试2：除菌方法研究
[0055]
利用性能测试1确定的甲钴胺和甘露醇的溶解顺序和注射用水分配比例，本性能测试提供了两种不同的除菌方法，分别为过滤除菌和高温灭菌，探究除菌方法对甲钴胺注射液杂质含量的影响，杂质含量的测定利用液相色谱进行，结果见表4：
[0056]
表4
[0057][0058]
由表4可知，若采用流通蒸汽辅助灭菌，这种灭菌方式在f0不能达到8的同时也加速了甲钴胺降解为羟钴胺以及其他杂质，在采用流通蒸汽100℃灭菌时，有关物质随着时间
的延长呈增长趋势，而采用湿热灭菌121℃/8min，有关物质增长更为剧烈，因此采用本公开提供的灭菌方式可避免杂质的增加，同时避免甲钴胺的降解。
[0059]
性能测试3：灌装方式研究
[0060]
利用性能测试1确定的甲钴胺和甘露醇的溶解顺序和注射用水分配比例，性能测试2确定的除菌方法进行甲钴胺注射液的制备，然后在灌装时，分别采用下述两种方式充氮，测试其稳定性；
[0061]
方式1：配液充氮，灌装后充氮2s(氮气流速小)；
[0062]
方式2：配液充氮，灌装后充氮5s(氮气流速大)。
[0063]
测试结果见表5：
[0064]
表5
[0065][0066][0067]
由表5可知，随着残氧量的降低，总杂明显降低(羟钴胺为非氧化降解杂质，此处不作重点关注)，因此本品灌装时需要充氮，控制残氧量应＜3％。
[0068]
即充氮可有效提高产品质量稳定性，因此建议产品在配液和灌装过程中均充氮保护，拟定溶氧量应＜2mg/l，残氧量应＜3％。
[0069]
综上，利用上述性能测试确定了最佳的制备方法如下：
[0070]
实施例2
[0071]
本实施例提供了一种甲钴胺注射液的制备方法。
[0072]
所述甲钴胺注射液的组成成分与实施例1相同(见表1)。
[0073]
制备方法如下：
[0074]
(1)原料药的溶解：全程充氮，控制残氧量＜3％，溶氧量小于2mg/l，称取处方量90％注射用水，在室温下加入甲钴胺搅拌溶解至澄清；
[0075]
(2)渗透压调节剂的溶解：加入甘露醇搅拌溶解至澄清；
[0076]
(3)定容：加注射用水至全量，搅拌混匀5min，并测定ph；
[0077]
(4)过滤：依次过滤0.45μm聚醚砜滤膜、0.22μm聚醚砜滤膜；
[0078]
(5)灌封：将药液灌装至1ml棕色中硼硅安瓿中，充氮熔封。
[0079]
性能测试4
[0080]
对实施例2提供的甲钴胺注射液进行性能测试，方法如下：
[0081]
(1)质量评价：采用实施例的方法重复三次制备三批甲钴胺注射液，每批注射液的总体积为200ml，测定其ph值、杂质以及甲钴胺含量，测试结果见表6：
[0082]
表6
[0083]
样品实施例2-1实施例2-2实施例2-3参比性状红色澄明液体红色澄明液体红色澄明液体红色澄明液体ph值6.0506.3046.3675.3～7.3羟钴胺/％0.0570.1480.095≤2.0最大未知单杂/％0.1680.2540.242≤0.5总杂/％0.3960.7160.496≤2.5含量(100％)98.698.4101.390-110
[0084]
由表6可知，采用本公开提供的制备方法制备得到的甲钴胺注射液各项质量指标均符合限度要求(远低于限度)，且批间差异小、重现性好。
[0085]
生产过程中，甲钴胺注射液配制和过滤完毕后，在灌装之前可能会置于配制罐中暂存一段时间，为保证产品质量，在实验室初步考察溶液的稳定时间以指导生产。
[0086]
(2)稳定性测试：置于20℃和40℃条件下存放2h、5h和8h后检测有关物质，考察中在20℃～40℃其稳定性情况，见表7：
[0087]
表7
[0088][0089]
由表7可知，甲钴胺注射液在20℃～40℃条件下放置8h，有关物质较0h并无明显差异，可见中间产品在此条件下稳定性良好。
[0090]
需要说明的是，在本文中，诸如“第一”和“第二”等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个
……”
限定的要素，并不排除
在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
[0091]
以上所述仅是本公开的具体实施方式，使本领域技术人员能够理解或实现本公开。对这些实施例的多种修改对本领域的技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本公开的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本公开将不会被限制于本文所述的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。