一种抗胰腺癌的疫苗、及其医药用途的制作方法

本发明涉及一种融合蛋白的应用，具体涉及一种含有人muc1的融合蛋白用于制备预防和治疗胰腺癌的药物中的用途。

背景技术：

1、胰腺癌五年生存率小于5％，被称为”癌王”。胰腺癌早期症状不明显，容易被忽视，胰腺癌被诊断时一般达到了癌症晚期。胰腺周围有丰富的血管、神经和肾、肝等重要的器官，难以手术，而且由于一般发现晚，只有10-15％早期患者适合于手术治疗。大部分患者只能用吉西他滨进行治疗，并联合卡铂、卡培他滨等，但不论哪种方案，治疗效果也只是比不治疗略好。晚期和转移的胰腺癌患者的存活时间一般只有几个月。胰腺癌在进展时会利用周围组织基质的免疫的、血管的、结缔组织损伤后修复反应来创造一个有利的肿瘤微环境，便于肿瘤生长。虽然免疫点监测疗法在多种癌症中治疗效果不错，但是对于胰腺癌，治疗反应非常差。

2、肿瘤细胞疫苗有可能激活免疫系统，让它们直面癌症细胞。肿瘤疫苗诱导肿瘤特异的免疫反应，激活免疫系统进攻带有特殊抗原的癌细胞。在众多免疫抗原中，粘蛋白muc1被赋予希望。最初发现muc1具有保护和润滑上皮的功能。后来陆续发现它在细胞信号传导以及从恶性细胞转化到肿瘤扩散的肿瘤发生的所有阶段均起着重要作用。muc1是一种高度糖基化的跨膜蛋白，是一种i型跨膜蛋白，具有高度糖基化的胞外结构域，从细胞表面延伸200-500纳米。全长分为胞外区、跨膜区和胞内区。胞外区由脯氨酸，苏氨酸和富含丝氨酸的(pts)域和sea域组成。pts域，也叫可变数目串联重复序列(vntr)区，由高度多态的外显子编码，该外显子编码多个20-21个氨基酸序列重复序列组成，而muc1的胞内区(ct)是高度保守的。muc1的过表达通常与结肠癌，乳腺癌，卵巢癌，肺癌和胰腺癌有关。muc1被证明存在于各种腺癌中。在一项原发性肝癌的病人治疗研究中，muc1高表达的病人比例高达68％。同时手术后复发的比例也是最高，跟muc1表达强度呈正相关。另外，muc1在一些血液恶性肿瘤的也是过度表达。肿瘤组织和正常组织的muc1不仅在表达量上有差异，肿瘤与正常组织的muc1糖基化也存在差异。低糖基化的muc1是在肿瘤细胞的整个表面过度表达，使肿瘤细胞粘附力的降低，为肿瘤转移提供了便利。已经形成的肿瘤中，大量muc1可以抑制nk细胞对肿瘤细胞的杀伤作用，还可以抑制细胞毒淋巴细胞(ctl)的增殖,甚至可以诱导ctl凋亡。

3、疫苗接种可以为宿主提供长期的保护作用，且几乎没有副作用，是治疗癌症的重要方法之一。理论上muc1应该是一个非常好的疫苗抗原，但在人体临床试验中的临床效果并不理想。疫苗产生的抗体大多不能与肿瘤细胞很好地结合，无法有效保护机体杀灭肿瘤。

4、我们的研究表明muc1可以被连接到细菌或者病毒上的蛋白质，产生针对癌细胞的t细胞反应，产生抗肿瘤效应。目前研究较为火热的新生抗原(neoantigen)疫苗需要高通量的测序和生物信息学的筛选，时间花费和资源需求较大，难以造福患者。开发花费较低、效果更好的治疗性癌症疫苗被寄予厚望。本发明公开一种可用于价格低廉的治疗性癌症疫苗制备的、适用于大肠杆菌生产且抑制胰腺癌细胞生长的重组蛋白质的基因优化方法。

技术实现思路

1、为了提供更为有效的胰腺癌预防和治疗生物制剂，本发明提供了一种融合蛋白在制备抗肿瘤药物，尤其是胰腺癌药物中的用途。本发明通过如下技术方案实现：

2、一种融合蛋白在制备预防和/或治疗肿瘤药物中的用途。

3、根据本发明，所述肿瘤为muc1阳性的肿瘤，例如表达muc1的腺癌或表达muc1的血液肿瘤，更优选所述肿瘤为胰腺癌。

4、本发明还提供一种融合蛋白在制备预防和/或治疗胰腺癌药物中的用途。

5、根据本发明，所述融合蛋白包括麦芽糖结合蛋白mbp和/或蛋白muc1-n。

6、根据本发明，所述融合蛋白由麦芽糖结合蛋白mbp和/或蛋白muc1-n串联而成。

7、更进一步地，所述muc1-n的基因核苷酸序列如seq id no.3所示，所述mbp的基因核苷酸序列如seq id no.6所示。

8、更进一步地，所述融合蛋白的氨基酸序列如seq id no.7所示。

9、本发明还提供了一种抑制胰腺癌的肿瘤细胞生长的方法，所述方法包括给与本发明所述的融合蛋白。

10、本发明提供一种药物组合物，其包含本发明的融合蛋白。

11、根据本发明，所述药物用于治疗肿瘤，优选地，所述肿瘤为muc1阳性的肿瘤，例如表达muc1的腺癌或表达muc1的血液肿瘤，更优选胰腺癌。

12、根据本发明，所述药物用于治疗胰腺癌。

13、根据本发明，所述融合蛋白包括麦芽糖结合蛋白mbp和/或蛋白muc1-n。

14、根据本发明，所述融合蛋白由麦芽糖结合蛋白mbp和/或黏蛋白muc1-n串联而成。

15、更进一步地，所述muc1-n的基因核苷酸序列如seq id no.3所示，所述mbp的基因核苷酸序列如seq id no.6所示。

16、更优选地，所述融合蛋白的氨基酸序列如seq id no.7所示。

17、本发明还提供了一种融合蛋白在保健品、化妆品、食品或食品添加剂中的应用，其特征在于，其中所述融合蛋白包括麦芽糖结合蛋白mbp和/或蛋白muc1-n。

18、根据本发明，所述保健品、化妆品、食品或食品添加剂可用于抑制肿瘤。

19、优选地，所述肿瘤为muc1阳性的肿瘤，例如表达muc1的腺癌或表达muc1的血液肿瘤，更优选所述肿瘤为胰腺癌。

20、本申请优选实施方式，所述融合蛋白由麦芽糖结合蛋白mbp和蛋白muc1-n串联而成。

21、更进一步地，所述muc1-n基因的核苷酸序列如seq id no.3所示，所述mbp基因核苷酸序列如seq id no.6所示。

22、更优选地，所述融合蛋白的氨基酸序列如seq id no.7所示。

23、本发明还提供了蛋白mbp基因和/或蛋白muc1-n基因在制备预防和/或治疗肿瘤药物中的用途，其特征在于，所述muc1-n基因的核苷酸序列如seq id no.3所示，所述mbp基因如seq id no.6所示。

24、根据本发明，所述肿瘤包括所有表达muc1的肿瘤，包括表达muc1的腺癌或表达muc1的血液肿瘤，更优选所述肿瘤为胰腺癌。

25、本发明还提供了蛋白mbp基因和/或蛋白muc1-n基因在制备预防和/或治疗胰腺癌药物中的用途，其特征在于，所述muc1-n基因的核苷酸序列如seq id no.3所示，所述mbp基因的核苷酸序列如seq id no.6所示。

26、本发明通过动物实验证明本发明的融合蛋白和基因对于不同剂量的胰腺癌细胞生长均具有显著的抑制作用，对于胰腺癌具有显著的预防和治疗效果。

1.一种融合蛋白在制备用于预防和/或治疗肿瘤药物中的用途，其特征在于，所述肿瘤为muc1阳性的肿瘤，表达muc1的腺癌或表达muc1的血液肿瘤，优选地，所述肿瘤为胰腺癌。

2.一种融合蛋白在制备预防和/或治疗胰腺癌药物中的用途。

3.根据权利要求1-2中任一所述用途，其特征在于，其中所述融合蛋白含有蛋白mbp基因和/或蛋白muc1-n基因。优选地，所述融合蛋白含有麦芽糖结合蛋白mbp基因和/或黏蛋白muc1-n基因。

4.根据权利要求1-3中任一所述用途，其特征在于，其中所述融合蛋白由麦芽糖结合蛋白mbp基因和黏蛋白muc1-n基因串联而成。

5.根据权利要求3或4所述用途，其特征在于，其中所述muc1-n基因的核苷酸序列如seqid no.3所示，所述mbp基因的核苷酸序列如seq id no.6所示。

6.一种融合蛋白在保健品、化妆品、食品或食品添加剂中的应用，其特征在于，其中所述融合蛋白含有蛋白mbp基因或蛋白和/或muc1-n基因或蛋白。优选为麦芽糖结合蛋白mbp基因或蛋白和/或黏蛋白muc1-n基因或蛋白。

7.根据权利要求6所述用途，其特征在于，所述融合蛋白由结合蛋白mbp基因和黏蛋白muc1-n基因串联而成。

8.mbp基因或蛋白和/或muc1-n基因或蛋白在制备预防和/或治疗肿瘤药物中的用途，其特征在于，所述muc1-n基因的核苷酸序列如seq id no.3所示，所述mbp基因如seqidno.6所示。

9.蛋白mbp基因和/或蛋白muc1-n基因在制备预防和/或治疗胰腺癌药物中的用途，其特征在于，所述muc1-n基因的核苷酸序列如seq id no.3所示，所述mbp基因如seq id no.6所示。