双官能分子及其使用方法与流程

背景技术：

1、rna翻译的调节在调节细胞事件和对生物体内疾病状态的反应中起着基本作用，在细胞以及组织水平都是如此。当一种或多种蛋白的表达增加时，某些疾病状态可以得到改善，这可以通过增加rna翻译来实现。

2、靶rna和蛋白之间的结合特异性可以提供有效递送分子的工具，以增加特定靶标的mrna翻译。

技术实现思路

1、在一方面，本公开提供一种增加细胞中靶核糖核酸(rna)翻译的方法，所述方法包括：向所述细胞施用合成双官能分子，所述合成双官能分子包括：第一结构域，其包含反义寡核苷酸(aso)或第一小分子，其中所述第一结构域特异性地结合靶rna的rna序列；以及第二结构域，其包含第二小分子或适体，其中所述第二结构域特异性地结合靶多肽。在一些实施方案中，合成双官能分子进一步包含缀合第一结构域和第二结构域的接头。在一些实施方案中，靶多肽直接或间接地促进、增强或增加细胞中靶rna的翻译。在一些实施方案中，靶多肽是靶蛋白。

2、在一些实施方案中，第一结构域包含aso。在一些实施方案中，第一结构域是aso。在一些实施方案中，aso包含一个或多个锁核苷酸、一个或多个修饰的核碱基，或者它们的组合。在一些实施方案中，aso包含5’锁末端核苷酸、3’锁末端核苷酸，或者5’和3’锁末端核苷酸。在一些实施方案中，aso包含位于aso内部位置的锁核苷酸。在一些实施方案中，aso包括含有30％-60％ gc含量的序列。在一些实施方案中，aso包含8-30个核苷酸的长度。在一些实施方案中，aso包含12-25个核苷酸的长度。在一些实施方案中，aso包含14-24个核苷酸的长度。在一些实施方案中，aso包含16-20个核苷酸的长度。在一些实施方案中，aso与海肾萤光素酶(rluc)rna结合。在一些实施方案中，接头在aso的5’末端或3’末端缀合。

3、在一些实施方案中，所述细胞是人细胞。在一些实施方案中，所述人细胞感染有病毒。在一些实施方案中，所述人细胞是癌细胞。在一些实施方案中，所述细胞是细菌细胞。

4、在一些实施方案中，第一结构域包含小分子。在一些实施方案中，所述小分子选自表2。在一些实施方案中，第二结构域包含小分子。在一些实施方案中，所述小分子是分子量为900道尔顿或更小的有机化合物。在一些实施方案中，第二小分子包括依鲁替尼(ibrutinib)或依鲁替尼-mpea。

5、在一些实施方案中，第二结构域是适体。在一些实施方案中，接头包括：

6、

7、在一些实施方案中，靶核酸序列是核rna或胞质rna。在一些实施方案中，核rna或胞质rna是长非编码rna(lncrna)、前mrna(pre-mrna)、mrna、微小rna(microrna)、增强子rna、转录的rna、新生rna(nascent rna)、染色体富集rna、核糖体rna、膜富集rna或线粒体rna。在一些实施方案中，靶rna的亚细胞定位选自细胞核、高尔基体、内质网、液泡、溶酶体和线粒体。在一些实施方案中，靶rna位于靶rna的内含子、外显子、5’utr或3’utr。

8、在一些实施方案中，靶多肽包括eif4e。在一些实施方案中，靶多肽包括ythdf1。在一些实施方案中，靶多肽是内源性的。在一些实施方案中，靶多肽是细胞内的。在一些实施方案中，靶多肽是酶、支架蛋白或调节蛋白。在一些实施方案中，核糖核酸与疾病或病症有关。

9、在一些实施方案中，靶多肽是外源性的。在一些实施方案中，靶多肽是融合蛋白或重组蛋白。

10、在一些实施方案中，第二结构域特异性地结合靶多肽上的活性位点或别构位点。在一些实施方案中，第二结构域与靶多肽的结合是非共价或共价的。在一些实施方案中，第二结构域与靶多肽的结合是共价和可逆的，或者共价和不可逆的。

11、在一些实施方案中，靶rna在选自表3或表4的基因的转录物中。在一些实施方案中，靶rna与疾病或病症有关。在一些实施方案中，靶rna与表4的疾病有关。在一些实施方案中，所述疾病是由生物体引起的任何病症。在一些实施方案中，所述生物体是朊病毒、细菌、病毒、真菌或寄生虫。在一些实施方案中，所述疾病或病症是癌症、代谢病、炎性疾病、自身免疫病、心血管疾病、感染性疾病、遗传病或神经系统疾病(neurological disease)。在一些实施方案中，所述疾病是癌症，并且其中靶基因是癌基因。在一些实施方案中，第二结构域特异性地结合蛋白-rna相互作用结构域，并且所述蛋白-rna相互作用的rna与选自表3或表4的基因有关。在一些实施方案中，蛋白-rna相互作用阻止效应蛋白与rna序列结合。在一些实施方案中，蛋白-rna相互作用与疾病或病症有关。在一些实施方案中，所述疾病是由生物体引起的任何病症。在一些实施方案中，所述生物体是朊病毒、细菌、病毒、真菌或寄生虫。在一些实施方案中，所述疾病或病症是癌症、代谢病、炎性疾病、自身免疫病、心血管疾病、感染性疾病、遗传病或神经系统疾病。在一些实施方案中，所述疾病是癌症，并且其中靶基因是癌基因。

12、在一些方面，本公开还提供一种用于增加细胞中的靶核糖核酸(rna)分子翻译的合成双官能分子，所述合成双官能分子包括：第一结构域，其包含第一小分子或反义寡核苷酸(aso)，其中所述第一结构域特异性地结合靶rna的rna序列；以及第二结构域，其包含第二小分子或适体，其中所述第二结构域特异性地结合靶多肽。在一些实施方案中，第一结构域和第二结构域是上文描述的那些。在一些实施方案中，合成双官能分子包含缀合第一结构域与第二结构域的接头。在一些实施方案中，靶多肽直接或间接地促进、增强或增加细胞中靶rna的翻译。在一些实施方案中，所述靶多肽是靶蛋白。在一些实施方案中，接头包括：

13、

14、在一些实施方案中，接头包括位置异构体(regioisomer)的混合物。在一些实施方案中，位置异构体的混合物是本文描述的接头2。在一些实施方案中，靶多肽包括eif4e。在一些实施方案中，靶多肽包括ythdf1。

技术特征：

1.一种增加细胞中靶核糖核酸(rna)翻译的方法，所述方法包括：

2.权利要求1的方法，其中所述靶多肽是靶蛋白。

3.前述权利要求中任一项的方法，其中所述第一结构域包含aso。

4.前述权利要求中任一项的方法，其中所述第一结构域包含aso，并且所述aso包含一种或多种锁核酸(lna)、一种或多种修饰的核碱基，或其组合。

5.前述权利要求中任一项的方法，其中所述第一结构域包含aso，并且所述aso包含5’锁末端核苷酸、3’锁末端核苷酸或者5’和3’锁末端核苷酸。

6.前述权利要求中任一项的方法，其中所述第一结构域包含aso，并且所述aso包含在aso内部位置的锁核苷酸。

7.前述权利要求中任一项的方法，其中所述第一结构域包含aso，并且所述aso包含含有30％-60％的gc含量的序列。

8.前述权利要求中任一项的方法，其中所述第一结构域包含aso，并且所述aso包含8-30个核苷酸的长度。

9.前述权利要求中任一项的方法，其中所述第一结构域包含aso，并且所述aso结合海肾萤光素酶(rluc)rna。

10.前述权利要求中任一项的方法，其中所述第一结构域包含aso，所述接头缀合在aso的5’末端或3’末端。

11.前述权利要求中任一项的方法，其中所述细胞是人细胞。

12.权利要求1或2的方法，其中所述第一结构域包含第一小分子。

13.前述权利要求中任一项的方法，其中所述第二结构域包含第二小分子。

14.权利要求13的方法，其中所述小分子是分子量为900道尔顿或更小的有机化合物。

15.权利要求13的方法，其中所述第二小分子包含依鲁替尼或依鲁替尼-mpea。

16.权利要求1-12中任一项的方法，其中所述第二结构域包含适体。

17.前述权利要求中任一项的方法，其中所述接头包含：

18.前述权利要求中任一项的方法，其中所述靶核糖核酸是核rna或胞质rna。

19.权利要求18的方法，其中所述核rna或胞质rna是长非编码rna(lncrna)、前mrna、mrna、微小rna、增强子rna、转录的rna、新生rna、染色体富集rna、核糖体rna、膜富集rna或线粒体rna。

20.前述权利要求中任一项的方法，其中所述靶rna的亚细胞定位选自细胞核、细胞质、高尔基体、内质网、液泡、溶酶体和线粒体。

21.前述权利要求中任一项的方法，其中所述靶rna位于靶rna的内含子、外显子、5’utr或3’utr。

22.前述权利要求中任一项的方法，其中所述靶多肽包含eif4e。

23.前述权利要求中任一项的方法，其中所述靶多肽包含ythdf1。

24.前述权利要求中任一项的方法，其中所述靶多肽是内源多肽。

25.前述权利要求中任一项的方法，其中所述靶多肽是胞内多肽。

26.前述权利要求中任一项的方法，其中所述靶多肽是酶或调节蛋白。

27.前述权利要求中任一项的方法，其中所述rna与疾病或病症有关。

28.前述权利要求中任一项的方法，其中所述rna与肿瘤抑制基因或单倍剂量不足基因有关。

29.一种用于增加细胞中靶核糖核酸(rna)翻译的合成双官能分子，所述合成双官能分子包含：

30.权利要求29的方法，其中所述靶多肽是靶蛋白。

31.权利要求29或30的方法，其中所述接头包含

32.权利要求29-31中任一项的方法，其中所述靶多肽是ythdf1或eif4e。

技术总结
本公开一般涉及合成双官能分子的组合物，所述双官能分子包含特异性地结合靶核糖核酸的第一结构域和特异性地结合靶蛋白的第二结构域，以及它们的用途。

技术研发人员：N·W·斯特宾斯,B·A·波特尼,E·B·瓦勒,J·R·鲁宾斯,K·达涅什瓦尔,A·R·斯奈德,M·格特曼
受保护的技术使用者：旗舰创业股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12