组合iPSC衍生的效应细胞类型以用于免疫疗法用途的制作方法

本公开与现成的免疫细胞产物领域广泛地相关。更具体地说，本公开与研发能够体内递送治疗相关特性的多功能效应细胞的策略相关。根据本公开研发的细胞产物解决了患者来源的细胞疗法的关键限制。

背景技术：

1、过继性细胞疗法领域目前的重点是使用患者来源的细胞和供体来源的细胞，这使得实现癌症免疫疗法的持续制造以及向所有可能受益的患者递送疗法尤其困难。还需要改善过继转移的淋巴细胞的功效和存留，以促进良好的患者结果。淋巴细胞(诸如t细胞和自然杀伤(nk)细胞)是有效的抗肿瘤效应子，其在先天性和适应性免疫中起重要作用。然而，将这些免疫细胞用于过继性细胞疗法仍然有挑战性，并且尚未满足改善的需求。因此，在过继性免疫疗法中，仍有大量机会来利用t细胞和nk细胞或其他淋巴细胞的全部潜能。

技术实现思路

1、需要在功能上改善的效应细胞，以在以下范围内解决问题：从反应速率、细胞耗竭、输血细胞损失(存活和/或存留)、肿瘤经由标靶损失或谱系转换逃逸、肿瘤靶向精确度、脱靶毒性、肿瘤外效应到针对实体瘤的功效，即肿瘤微环境和相关免疫抑制、募集、运输和浸润。

2、本发明的一个目的是用以产生由单一细胞衍生ipsc(诱导性多能干细胞)克隆系分化的衍生非多能细胞的方法和组合物，该ipsc系包含在其基因组中的一种或几种基因修饰。所述一种或几种基因修饰包括dna插入、缺失和取代，并且该修饰在分化、扩增、传代和/或移植后在随后衍生细胞中保留并且保持功能性。

3、本技术的ipsc衍生非多能细胞包括但不限于cd34细胞、生血内皮细胞、hsc(造血干细胞和祖细胞)、造血多能祖细胞、t细胞祖细胞、nk细胞祖细胞、t细胞、nkt细胞、nk细胞和b细胞。本技术的ipsc衍生非多能细胞通过由包含相同基因修饰的ipsc分化在它们的基因组中包含一种或多种基因修饰。用于获得基因工程改造的衍生细胞的工程改造的克隆ipsc分化策略要求ipsc在定向分化中的发育潜能不会受到ipsc中的工程改造模式的不利影响，并且也要求工程改造模式如预期一般在衍生细胞中起作用。此外，这一策略克服工程改造的原代淋巴细胞(例如由外周血获得的t细胞或nk细胞)的现有障碍，因此细胞难以工程改造，并且工程改造这类细胞通常缺乏再现性和均匀性，使得细胞展现伴随高细胞死亡和低细胞扩增的不良细胞存留。此外，这一策略避免产生使用起始时是异源的原代细胞源以其它方式获得的异源效应细胞群。

4、本发明的一些方面提供使用包含(i)、(ii)或(iii)的方法获得的基因组工程改造的ipsc，分别反映了在重编程过程之后、同时和之前的基因组工程改造的策略：

5、(i)：按任何次序利用(i)和(ii)中的一者或两者对ipsc进行基因工程改造：(i)将一个或多个构建体引入ipsc中以允许在所选位点进行靶向整合；(ii)(a)使用一种或多种能够进行所选位点识别的核酸内切酶在所选位点将一个或多个双链断裂引入ipsc中；以及(b)培养步骤(i)(ii)(a)中的ipsc以允许进行内源dna修复，以在所选位点生成靶向插入/缺失；从而获得能够分化成部分或完全分化细胞的基因组工程改造的ipsc。

6、(ii)：通过以下方式对重编程非多能细胞进行基因工程改造，以获得基因组工程改造的ipsc：(i)使非多能细胞与一种或多种重编程因子和任选小分子组合物接触，以启动非多能细胞重编程，该小分子组合物包含tgfβ受体/alk抑制剂、mek抑制剂、gsk3抑制剂和/或rock抑制剂；以及(ii)在步骤(ii)(i)的重编程期间按任何次序将(a)和(b)中的一者或两者引入重编程非多能细胞中：(a)允许在所选位点进行靶向整合的一个或多个构建体；(b)使用至少一种能够进行所选位点识别的核酸内切酶在所选位点的一个或多个双链断裂，然后培养步骤(ii)(ii)(b)中的细胞以允许进行内源dna修复，从而在所选位点生成靶向插入/缺失；因此所获基因组工程改造的ipsc包含至少一种功能性靶向基因组编辑，并且所述基因组工程改造的ipsc能够分化成部分或完全分化细胞。

7、(iii)：通过(i)和(ii)对重编程的非多能细胞进行基因工程改造以获得基因组工程改造的ipsc：(i)按任何次序将(a)和(b)中的一者或两者引入非多能细胞中：(a)允许在所选位点进行靶向整合的一个或多个构建体；(b)使用至少一种能够进行所选位点识别的核酸内切酶在所选位点的一个或多个双链断裂，其中培养步骤(iii)(i)(b)中的细胞以允许进行内源dna修复，从而在所选位点生成靶向插入/缺失；以及(ii)使步骤(iii)(i)中的细胞与一种或多种重编程因子和任选小分子组合物接触，以获得在所选位点处包含靶向编辑的基因组工程改造的ipsc，该小分子组合物包含tgfβ受体/alk抑制剂、mek抑制剂、gsk3抑制剂和/或rock抑制剂；由此获得基因组工程改造的ipsc，其包含至少一种功能性靶向基因组编辑，并且所述基因组工程改造的ipsc能够分化成部分分化细胞或完全分化细胞。

8、在上述方法的一个实施方案中，在一个或多个所选位点处的至少一种靶向基因组编辑包含一种或多种外源多核苷酸的插入，该外源多核苷酸编码安全开关蛋白质、靶向模式、受体、信号传导分子、转录因子、医药学活性蛋白质和肽、药物标靶候选物或促进基因组工程改造ipsc或其衍生细胞移植、运输、归巢、活力、自我更新、存留和/或存活的蛋白质。在一些实施方案中，用于插入的外源多核苷酸可操作地连接到(1)一种或多种外源启动子，其包含cmv、ef1α、pgk、cag、ubc或其他组成性、诱导性、时间特异性、组织特异性或细胞类型特异性启动子；或者(2)所选位点中包含的一种或多种内源启动子，所选位点包含aavs1、ccr5、rosa26、胶原蛋白、htrp、h11、β-2微球蛋白、gapdh、tcr或runx1或满足基因组安全港准则的其他基因座。在一些实施方案中，使用上述方法产生的基因组工程改造的ipsc包含一种或多种不同的外源多核苷酸，该外源多核苷酸编码包含胱天蛋白酶、胸苷激酶、胞嘧啶脱氨酶、经过修饰的egfr或b细胞cd20的蛋白质，其中当基因组工程改造的ipsc包含两种或更多种自杀基因时，该自杀基因整合在不同的安全港基因座中，该安全港基因座包含aavs1、ccr5、rosa26、胶原蛋白、htrp、h11、h11、β-2微球蛋白、gapdh、tcr或runx1。在一些实施方案中，外源多核苷酸编码il2、il4、il6、il7、il9、il10、il11、il12、il15、il18、il21和/或它们的相应受体的部分或全部肽。在一些实施方案中，由外源多核苷酸编码的il2、il4、il6、il7、il9、il10、il11、il12、il15、il18、il21和/或它们的相应受体的部分或全部肽呈融合蛋白形式。

9、在一些其他实施方案中，使用本文所提供的方法产生的基因组工程改造ipsc包含位于一种或多种与以下相关的内源基因处的插入/缺失：靶向模式、受体、信号传导分子、转录因子、药物标靶候选物、免疫反应调控和调节或抑制ipsc或其衍生细胞移植、运输、归巢、活力、自我更新、存留和/或存活的蛋白质。在一些实施方案中，用于中断的内源基因包含以下中的至少一种：b2m、tap1、tap2、tap相关蛋白(tapasin)、nlrc5、pd1、lag3、tim3、rfxank、ciita、rfx5、rfxap和染色体6p21区域中的任何基因。

10、在又一些其他实施方案中，使用本文所提供的方法产生的基因组工程改造的ipsc包含位于aavs1基因座的编码胱天蛋白酶的外源多核苷酸，以及位于h11基因座的编码胸苷激酶的外源多核苷酸。

11、在另外一些其他实施方案中，方法(i)、(ii)和/或(iii)还包括：使基因组工程改造ipsc与包含mek抑制剂、gsk3抑制剂和rock抑制剂的小分子组合物接触，以维持所获得的基因组工程改造ipsc的多能性。在一个实施方案中，包含至少一种靶向基因组编辑的所获得的基因组工程改造ipsc具有功能性、能有效分化并且能够分化成包括相同功能性基因组编辑的非多能细胞。

12、因此，在一个方面，本发明还提供了包含两种或更多种合成细胞群的组合物，其中组合物包含：(i)包含ipsc衍生nk细胞的第一合成细胞群，其中ipsc衍生nk细胞包含：(a)外源cd16或其变体；以及(b)第一嵌合抗原受体(car)和细胞表面表达的外源细胞因子和/或其受体的部分或全长肽中的一者或两者；以及(ii)包含ipsc衍生t细胞的第二合成细胞群，其中该ipsc衍生t细胞包含：至少第二嵌合抗原受体(car)，并且其中第二car在tcr基因座的内源启动子的控制下表达。在各种实施方案中，外源cd16或其变体是高亲和力不可裂解的cd16(hncd16)；或者外源cd16或其变体包含以下中的至少一者：(a)cd16的胞外域中的f176v和s197p；(b)源自cd64的全部或部分胞外域；(c)非原生(或非cd16)跨膜域；(d)非原生(或非cd16)胞内域；(e)非原生(或非cd16)信号传导域；(f)非原生刺激域；或者(g)并非源自cd16并且源自相同或不同多肽的跨膜域、信号传导域和刺激域。在组合物的某些实施方案中，(a)非原生跨膜域衍生自cd3d、cd3e、cd3g、cd3ζ、cd4、cd8、cd8a、cd8b、cd27、cd28、cd40、cd84、cd166、4-1bb、ox40、icos、icam-1、ctla-4、pd-1、lag-3、2b4、btla、cd16、il7、il12、il15、kir2dl4、kir2ds1、nkp30、nkp44、nkp46、nkg2c、nkg2d或t细胞受体(tcr)多肽；(b)非原生刺激域衍生自cd27、cd28、4-1bb、ox40、icos、pd-1、lag-3、2b4、btla、dap10、dap12、ctla-4或nkg2d多肽；(c)非原生信号传导域衍生自cd3ζ、2b4、dap10、dap12、dnam1、cd137(4-1bb)、il21、il7、il12、il15、nkp30、nkp44、nkp46、nkg2c或nkg2d多肽；或者(d)非原生跨膜域衍生自nkg2d，非原生刺激域衍生自2b4，并且非原生信号传导域衍生自cd3ζ。

13、在组合物的各种实施方案中，第一car和第二car在靶向特异性方面相同或不同，并且第一car或第二car是：(i)t细胞特异性或nk细胞特异性；(ii)双特异性抗原结合car；(iii)可切换的car；(iv)二聚化car；(v)分离car；(vi)多链car；(vii)诱导性car；(viii)与另一个car共表达；(ix)任选地在单独构建体中或在双顺反子构建体中，与细胞表面表达的外源细胞因子和/或其受体的部分或全长肽共表达；(x)任选地在单独构建体中或在双顺反子构建体中，与检查点抑制剂共表达；(xi)对cd19或bcma具有特异性；和/或(xii)对以下中的任一者具有特异性：adgre2、碳酸酐酶ix(caix)、ccri、ccr4、癌胚抗原(cea)、cd3、cd5、cd7、cd8、cd10、cd20、cd22、cd30、cd33、cd34、cd38、cd41、cd44、cd44v6、cd49f、cd56、cd70、cd74、cd99、cd123、cd133、cd138、cds、clec12a、巨细胞病毒(cmv)感染的细胞的抗原、上皮糖蛋白2(egp 2)、上皮糖蛋白-40(egp-40)、上皮细胞粘附分子(epcam)、egfrviii、受体酪氨酸-蛋白激酶erb-b2,3,4、egfir、egfr-viii、erbb叶酸结合蛋白(fbp)、胎儿型乙酰胆碱受体(achr)、叶酸受体a、神经节苷脂g2(gd2)、神经节苷脂g3(gd3)、人类表皮生长因子受体2(her-2)、人类端粒酶逆转录酶(htert)、icam-1、整合素b7、白细胞介素-13受体亚基α-2(il-13rα2)、κ-轻链、激酶插入域受体(kdr)、路易斯a(ca19.9)、路易斯y(ley)、l1细胞粘附分子(l1-cam)、lilrb2、黑色素瘤抗原家族a1(mage-a1)、mica/b、粘蛋白1(muc-1)、粘蛋白16(muc-16)、间皮素(msln)、nkcsi、nkg2d配体、c-met、癌症-睾丸抗原ny-eso-1、癌胚抗原(h5t4)、prame、前列腺干细胞抗原(psca)、prame前列腺特异性膜抗原(psma)、肿瘤相关糖蛋白72(tag-72)、tim-3、trbc1、trbc2、血管内皮生长因子r2(vegf-r2)、威尔姆斯肿瘤蛋白质(wilms tumor protein；wt-1)和病原体抗原。在一些实施方案中，细胞表面表达的外源细胞因子和/或其受体的部分或全长肽：(a)包含il2、il4、il6、il7、il9、il10、il11、il12、il15、il18、il21以及它们的相应受体中的至少一者；或者(b)包含以下中的至少一者：(i)通过使用自我裂解肽进行il15和il15rα的共表达；(ii)il15和il15rα的融合蛋白；(iii)il15rα的胞内域截短的il15/il15rα融合蛋白；(iv)il15和il15rα的结合膜的寿司域的融合蛋白；(v)il15和il15rβ的融合蛋白；(vi)il15和共同受体γc的融合蛋白，其中该共同受体γc是原生的或经过修饰的；以及(vii)il15rβ的同源二聚体；其中(i)-(vii)中的任一者可与car在单独构建体中或在双顺反子构建体中共表达，并且任选地，(c)瞬时表达。

14、在组合物的一些实施方案中，ipsc衍生nk细胞或ipsc衍生t细胞还包含以下中的一者或多者：(i)ihla-i缺乏；(ii)hla-ii缺乏；(iii)hla-g或不可裂解的hla-g的表达引入；(iv)lig-、inr+、cs-cd3+、en+和ab+中的至少一者；其中(1)lig-在表达的同种异体抗原中是阴性的；(2)inr+在对应于阴性同种异体抗原的表达的失活-car中是阳性的；(3)cs-cd3+在细胞表面表达的cd3中是阳性的；(4)en+在至少一种表达的衔接子中是阳性的，其中衔接子包括双特异性t细胞衔接子(bite)或三特异性杀伤细胞衔接子(trike)；以及(5)ab+在至少一种表达的抗体或检查点抑制剂中是阳性的；(v)tap1、tap2、tap相关蛋白、nlrc5、pd1、lag3、tim3、rfxank、rfx5、rag1、rfxap和染色体6p21区域中的任何基因中的至少一者的缺失或表达减少；以及(vi)hla-e、hla-g、41bbl、cd4、cd8、cd16、cd47、cd113、cd131、cd137、cd80、pdl1、a2ar、tcr、fc受体和用于与双特异性或多特异性或通用衔接子偶联的表面触发受体中的至少一者的表达引入或增加。在某些实施方案中，(i)同种异体抗原包括cd40l、ox40或4-1bb；(ii)失活-car包括cd40l-car、ox40-car或4-1bb-car；(iii)bite或trike识别(a)免疫细胞表面分子，包含cd3、cd28、cd5、cd16、nkg2d、cd64、cd32、cd89、nkg2c或它们的嵌合fc受体；以及(b)肿瘤表面分子，包含b7h3、bcma、cd10、cd19、cd20、cd22、cd24、cd30、cd33、cd34、cd38、cd44、cd79a、cd79b、cd123、cd138、cd179b、cea、clec12a、cs-1、dll3、egfr、egfrviii、epcam、flt-3、folr1、folr3、gd2、gpa33、her2、hm1.24、lgr5、msln、mcsp、mica/b、psma、pama、p-钙粘素或ror1；(iv)bite包含cd3-cd19、cd16-cd30、cd64-cd30、cd16-bcma、cd64-bcma或cd3-cd33；(v)trike包含cd16-il15-epcam、cd64-il15-epcam、cd16-il15-cd33、cd64-il15-cd33或nkg2c-il15-cd33；(vi)抗体包含抗cd20、抗her2、抗cd52、抗egfr、抗cd123、抗gd2、抗pdl1或抗cd38抗体；或者(vii)检查点抑制剂包含(a)针对检查点分子的拮抗剂，该检查点分子包含pd-1、pdl-1、tim-3、tigit、lag-3、ctla-4、2b4、4-1bb、4-1bbl、a2ar、bate、btla、cd39、cd47、cd73、cd94、cd96、cd160、cd200、cd200r、cd274、ceacam1、csf-1r、foxpl、garp、hvem、ido、edo、tdo、lair-1、mica/b、nr4a2、mafb、oct-2、rara(视黄酸受体α)、tlr3、vista、nkg2a/hla-e或抑制性kir；(b)阿特珠单抗、阿维鲁单抗、度伐单抗、伊匹单抗、iph4102、iph43、iph33、利瑞木单抗、莫纳利珠单抗、纳武单抗、帕博利珠单抗和它们的衍生物或功能等效物中的一者；或者(c)阿特珠单抗、纳武单抗和帕博利珠单抗中的一者。

15、在组合物的各种实施方案中，ipsc衍生nk细胞或ipsc衍生t细胞包含：(i)整合在一个期望的整合位点中的一种或多种外源多核苷酸；或者(ii)整合在不同期望整合位点中的超过两种外源多核苷酸。在某些实施方案中，期望的整合位点包括aavs1、ccr5、rosa26、胶原蛋白、htrp、h11、gapdh、runx1、b2m、tap1、tap2、tap相关蛋白、nlrc5、ciita、rfxank、rfx5、rfxap、tcrα或β恒定区、nkg2a、nkg2d、cd25、cd38、cd40l、cd44、cd54、cd56、cd58、cd69、cd71、ox40、4-1bb、cis、cbl-b、socs2、pd1、ctla4、lag3、tim3和tigit中的至少一者。在其他实施方案中，期望的整合位点包括tcrα或β恒定区、cd25、cd38、cd40l、cd44、cd54、cd58、cd69、cd71、ox40或4-1bb；并且任选地，其中由于在相应整合位点处整合所述一种或多种外源多核苷酸，敲除tcrα或tcrβ、cd25、cd38、cd40l、cd44、cd54、cd58、cd69、cd71、ox40或4-1bb。

16、在组合物的各种实施方案中，ipsc衍生nk细胞或ipsc衍生t细胞与从外周血、脐带血或任何其他供体组织中获得的其原生对应细胞相比具有以下特性中的至少一个特性：(i)改善的持久性和/或存活率，(ii)对原生免疫细胞的抗性增加，(iii)细胞毒性增加，(iv)改善的肿瘤渗透性，(v)增强或获取的adcc，(vi)将旁观者免疫细胞迁移到肿瘤部位和/或激活或募集旁观者免疫细胞的能力增强，(vii)降低肿瘤免疫抑制的能力增强；以及(viii)挽救肿瘤抗原逃逸的能力提高。在组合物的各种实施方案中，ipsc衍生nk细胞或ipsc衍生t细胞与从外周血、脐带血或任何其他供体组织中获得的它们的相应原生对应细胞相比包含更长的端粒。在组合物的各种实施方案中，离体调节第一合成细胞群或第二合成细胞群。在某些实施方案中，与未被调节的第一合成细胞群相比，包含ipsc衍生nk细胞的经调节的第一合成细胞群包含增加数目或比例的i型nkt细胞和/或适应性nk细胞；或者其中与未被调节的第二合成细胞群相比，包含ipsc衍生t细胞的经调节的第二合成细胞群包含增加数目或比例的初始t细胞、干细胞记忆t细胞和/或中枢记忆t细胞。

17、在组合物的各种实施方案中，(i)ipsc衍生nk细胞和ipsc衍生t细胞的比例范围为100:1至1:100；(ii)组合物还包含一种或多种附加细胞群；或者(iii)组合物还包含一种或多种治疗剂。在某些实施方案中，附加细胞群包含调控细胞。在其中附加细胞群包含调控细胞的一些实施方案中，调控细胞是ipsc衍生免疫调控细胞或骨髓衍生抑制细胞(mdsc)。在其中组合物还包含一种或多种治疗剂的一些实施方案中，一种或多种治疗剂包含肽、细胞因子、检查点抑制剂、丝裂原、生长因子、小rna、dsrna(双链rna)、单核血细胞、饲养细胞、饲养细胞组分或其置换因子、包含一种或多种所关注多核酸的载体、抗体、化学治疗剂或放射性部分或免疫调节药物(imid)。在其中一种或多种治疗剂包含检查点抑制剂的一些实施方案中，检查点抑制剂包含：(a)一种或多种拮抗剂检查点分子，其包含pd-1、pdl-1、tim-3、tigit、lag-3、ctla-4、2b4、4-1bb、4-1bbl、a2ar、bate、btla、cd39、cd47、cd73、cd94、cd96、cd160、cd200、cd200r、cd274、ceacam1、csf-1r、foxpl、garp、hvem、ido、edo、tdo、lair-1、mica/b、nr4a2、mafb、oct-2、rara(视黄酸受体α)、tlr3、vista、nkg2a/hla-e或抑制性kir；(b)阿特珠单抗、阿维鲁单抗、度伐单抗、伊匹单抗、iph4102、iph43、iph33、利瑞木单抗、莫纳利珠单抗、纳武单抗、帕博利珠单抗和它们的衍生物或功能等效物中的一者或多者；或者(c)阿特珠单抗、纳武单抗和帕博利珠单抗中的至少一者。在其中一种或多种治疗剂包含抗体的一些实施方案中，抗体包含：(a)抗cd20、抗her2、抗cd52、抗egfr、抗cd123、抗gd2、抗pdl1和/或抗cd38抗体；(b)雷妥昔单抗(retuximab)、维妥珠单抗(veltuzumab)、奥法木单抗(ofatumumab)、乌布里图昔单抗(ublituximab)、奥卡拉珠单抗(ocaratuzumab)、奥比珠单抗(obinutuzumab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、帕妥珠单抗(pertuzumab)、阿仑单抗(alemtuzumab)、西妥昔单抗(certuximab)、迪努妥昔单抗(dinutuximab)、阿维鲁单抗、达土木单抗(daratumumab)、艾沙妥昔单抗(isatuximab)、mor202、7g3、csl362、埃罗妥珠单抗(elotuzumab)和它们的人源化或经过fc修饰的变体或片段和它们的功能等效物和生物类似物中的一者或多者；或者(c)达土木单抗。

18、在组合物的各种实施方案中，第一合成细胞群和第二合成细胞群是单独的群或组合成混合群。

19、在另一个方面，本发明提供了本文组合物的治疗用途，该治疗用途通过将组合物引入适于过继性细胞疗法的受试者体内，其中受试者患有自身免疫病症；血液系统恶性肿瘤；实体瘤；癌症或病毒感染。

20、在又一个方面，本发明提供了改善car-t细胞群的肿瘤杀伤和/或清除的方法，该方法包括：向car-t细胞群提供包含ipsc衍生nk细胞的合成细胞群以获得组合细胞群，其中ipsc衍生nk细胞包含：(a)外源cd16或其变体；以及(b)第一嵌合抗原受体(car)和细胞表面表达的外源细胞因子和/或其受体的部分或全长肽中的一者或两者；并且其中ipsc衍生nk细胞的第一car包含与car-t细胞相同或不同的car靶向特异性。在各种实施方案中，car-t细胞是指来自任何来源的携带car的t细胞。例如，t细胞可以是原代细胞或者可以是来自细胞系的细胞，可以是自体的或同种异体细胞，并且可以从ipsc分化。

21、在改善肿瘤杀伤和/或清除的方法的一些实施方案中，与仅没有ipsc衍生nk细胞的组合的car-t细胞群的肿瘤杀伤和/或清除相比，组合细胞群包含具有以下性质的细胞：(i)改善的持久性和/或存活率，(ii)对原生免疫细胞的抗性增加，(iii)细胞毒性增加，(iv)改善的肿瘤渗透性，(v)增强或获取的adcc，(vi)将旁观者免疫细胞迁移到肿瘤部位和/或激活或募集旁观者免疫细胞的能力增强，(vii)降低肿瘤免疫抑制的能力增强；以及(viii)挽救肿瘤抗原逃逸的能力提高。在该方法的一些实施方案中，外源cd16或其变体是高亲和力不可裂解的外源cd16(hncd16)；或者其中外源cd16或其变体包含以下中的至少一者：(a)cd16的胞外域中的f176v和s197p；(b)源自cd64的全部或部分胞外域；(c)非原生(或非cd16)跨膜域；(d)非原生(或非cd16)胞内域；(e)非原生(或非cd16)信号传导域；(f)非原生刺激域；以及(g)并非源自cd16并且源自相同或不同多肽的跨膜域、信号传导域和刺激域。

22、在该方法的一些实施方案中，(a)非原生跨膜域衍生自cd3d、cd3e、cd3g、cd3ζ、cd4、cd8、cd8a、cd8b、cd27、cd28、cd40、cd84、cd166、4-1bb、ox40、icos、icam-1、ctla-4、pd-1、lag-3、2b4、btla、cd16、il7、il12、il15、kir2dl4、kir2ds1、nkp30、nkp44、nkp46、nkg2c、nkg2d或t细胞受体(tcr)多肽；(b)非原生刺激域衍生自cd27、cd28、4-1bb、ox40、icos、pd-1、lag-3、2b4、btla、dap10、dap12、ctla-4或nkg2d多肽；(c)非原生信号传导域衍生自cd3ζ、2b4、dap10、dap12、dnam1、cd137(4-1bb)、il21、il7、il12、il15、nkp30、nkp44、nkp46、nkg2c或nkg2d多肽；或者(d)非原生跨膜域衍生自nkg2d，非原生刺激域衍生自2b4，并且非原生信号传导域衍生自cd3ζ。在该方法的其他实施方案中，细胞表面表达的外源细胞因子和/或其受体的部分或全长肽：(a)包含il2、il4、il6、il7、il9、il10、il11、il12、il15、il18、il21和/或它们的相应受体中的至少一者；或者(b)包含以下中的至少一者：(i)通过使用自我裂解肽进行il15和il15rα的共表达；(ii)il15和il15rα的融合蛋白；(iii)il15rα的胞内域截短的il15/il15rα融合蛋白；(iv)il15和il15rα的结合膜的寿司域的融合蛋白；(v)il15和il15rβ的融合蛋白；(vi)il15和共同受体γc的融合蛋白，其中该共同受体γc是原生的或经过修饰的；以及(vii)il15rβ的同源二聚体；其中(i)-(vii)中的任一者都可在单独构建体中或在双顺反子构建体中与car共表达；以及任选地，(c)瞬时表达。在该方法的一些实施方案中，car-t细胞从工程改造的ipsc分化，并且/或者其中car-t细胞包含car，该car对以下中的任一者具有靶向特异性：adgre2、碳酸酐酶ix(calx)、ccr1、ccr4、癌胚抗原(cea)、cd3、cd5、cd7、cd8、cd10、cd20、cd22、cd30、cd33、cd34、cd38、cd41、cd44、cd44v6、cd49f、cd56、cd70、cd74、cd99、cd123、cd133、cd138、cds、clec12a、巨细胞病毒(cmv)感染的细胞的抗原、上皮糖蛋白2(egp-2)、上皮糖蛋白-40(egp-40)、上皮细胞粘附分子(epcam)、egfrviii、受体酪氨酸-蛋白激酶erb-b2,3,4、egfir、egfr-viii、erbb叶酸结合蛋白(fbp)、胎儿型乙酰胆碱受体(achr)、叶酸受体a、神经节苷脂g2(gd2)、神经节苷脂g3(gd3)、人类表皮生长因子受体2(her-2)、人类端粒酶逆转录酶(htert)、icam-1、整合素b7、白细胞介素-13受体亚基α-2(il-13rα2)、κ-轻链、激酶插入域受体(kdr)、路易斯a(ca19.9)、路易斯y(ley)、l1细胞粘附分子(l1-cam)、lilrb2、黑色素瘤抗原家族a1(mage-a1)、mica/b、粘蛋白1(muc-1)、粘蛋白16(muc-16)、间皮素(msln)、nkcsi、nkg2d配体、c-met、癌症-睾丸抗原ny-eso-1、癌胚抗原(h5t4)、prame、前列腺干细胞抗原(psca)、prame前列腺特异性膜抗原(psma)、肿瘤相关糖蛋白72(tag-72)、tim-3、trbc1、trbc2、血管内皮生长因子r2(vegf-r2)、威尔姆斯肿瘤蛋白质(wt-1)和病原体抗原。

23、在改善肿瘤杀伤和/或清除的方法的一些实施方案中，ipsc衍生nk细胞和/或car-t细胞还包含以下中的一者或多者：(i)ihla-i缺乏；(ii)hla-ii缺乏；(iii)hla-g或不可裂解的hla-g的表达引入；(iv)lig-、inr+、cs-cd3+、en+和ab+中的至少一者；其中(1)lig-在表达的同种异体抗原中是阴性的；(2)inr+在对应于阴性同种异体抗原的表达的失活-car中是阳性的；(3)cs-cd3+在细胞表面表达的cd3中是阳性的；(4)en+在至少一种表达的衔接子中是阳性的，其中衔接子包括双特异性t细胞衔接子(bite)或三特异性杀伤细胞衔接子(trike)；以及(5)ab+在至少一种表达的抗体或检查点抑制剂中是阳性的；(v)b2m、ciita、tap1、tap2、tap相关蛋白、nlrc5、pd1、lag3、tim3、rfxank、rfx5、rag1、rfxap和染色体6p21区域中的任何基因中的至少一者的缺失或表达减少；以及(vi)hla-e、hla-g、4-1bbl、cd4、cd8、cd16、cd47、cd113、cd131、cd137、cd80、pdl1、a2ar、tcr、fc受体和用于与双特异性或多特异性或通用衔接子偶联的表面触发受体中的至少一者的表达引入或增加。在某些实施方案中，(i)同种异体抗原包括cd40l、ox40或4-1bb；(ii)失活-car包括cd40l-car、ox40-car或4-1bb-car；(iii)bite或trike识别(a)免疫细胞表面分子，包含cd3、cd28、cd5、cd16、nkg2d、cd64、cd32、cd89、nkg2c或它们的嵌合fc受体；以及(b)肿瘤表面分子，包含b7h3、bcma、cd10、cd19、cd20、cd22、cd24、cd30、cd33、cd34、cd38、cd44、cd79a、cd79b、cd123、cd138、cd179b、cea、clec12a、cs-1、dll3、egfr、egfrviii、epcam、flt-3、folr1、folr3、gd2、gpa33、her2、hm1.24、lgr5、msln、mcsp、mica/b、psma、pama、p-钙粘素或ror1；(iv)bite包含cd3-cd19、cd16-cd30、cd64-cd30、cd16-bcma、cd64-bcma或cd3-cd33；(v)trike包含cd16-il15-epcam、cd64-il15-epcam、cd16-il15-cd33、cd64-il15-cd33或nkg2c-il15-cd33；(vi)抗体包含抗cd20、抗her2、抗cd52、抗egfr、抗cd123、抗gd2、抗pdl1或抗cd38抗体；或者(vii)检查点抑制剂包含(a)针对检查点分子的拮抗剂，该检查点分子包含pd-1、pdl-1、tim-3、tigit、lag-3、ctla-4、2b4、4-1bb、4-1bbl、a2ar、bate、btla、cd39、cd47、cd73、cd94、cd96、cd160、cd200、cd200r、cd274、ceacam1、csf-1r、foxpl、garp、hvem、ido、edo、tdo、lair-1、mica/b、nr4a2、mafb、oct-2、rara(视黄酸受体α)、tlr3、vista、nkg2a/hla-e或抑制性kir；(b)阿特珠单抗、阿维鲁单抗、度伐单抗、伊匹单抗、iph4102、iph43、iph33、利瑞木单抗、莫纳利珠单抗、纳武单抗、帕博利珠单抗和它们的衍生物或功能等效物中的一者；或者(c)阿特珠单抗、纳武单抗和帕博利珠单抗中的一者。

24、在改善肿瘤杀伤和/或清除的方法的一些实施方案中，该方法还包括提供一种或多种治疗剂，其中一种或多种治疗剂包含肽、细胞因子、检查点抑制剂、抗体、丝裂原、生长因子、小rna、dsrna(双链rna)、单核血细胞、饲养细胞、饲养细胞组分或其置换因子、包含一种或多种所关注多核酸的载体、化学治疗剂或放射性部分或免疫调节药物(imid)。在改善肿瘤杀伤和/或清除的方法的一些实施方案中，其中一种或多种治疗剂包含检查点抑制剂，该检查点抑制剂包含：(a)一种或多种拮抗剂检查点分子，其包含pd-1、pdl-1、tim-3、tigit、lag-3、ctla-4、2b4、4-1bb、4-1bbl、a2ar、bate、btla、cd39、cd47、cd73、cd94、cd96、cd160、cd200、cd200r、cd274、ceacam1、csf-1r、foxpl、garp、hvem、ido、edo、tdo、lair-1、mica/b、nr4a2、mafb、oct-2、rara(视黄酸受体α)、tlr3、vista、nkg2a/hla-e或抑制性kir；(b)阿特珠单抗、阿维鲁单抗、度伐单抗、伊匹单抗、iph4102、iph43、iph33、利瑞木单抗、莫纳利珠单抗、纳武单抗、帕博利珠单抗和它们的衍生物或功能等效物中的一者或多者；或者(c)阿特珠单抗、纳武单抗和帕博利珠单抗中的至少一者。在改善肿瘤杀伤和/或清除的方法的一些实施方案中，其中一种或多种治疗剂包含抗体，该抗体包含：(a)抗cd20、抗her2、抗cd52、抗egfr、抗cd123、抗gd2、抗pdl1和/或抗cd38抗体；(b)雷妥昔单抗、维妥珠单抗、奥法木单抗、乌布里图昔单抗、奥卡拉珠单抗、奥比珠单抗、曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、阿仑单抗、西妥昔单抗、迪努妥昔单抗、阿维鲁单抗、达土木单抗、艾沙妥昔单抗、mor202、7g3、csl362、埃罗妥珠单抗和它们的人源化或经过fc修饰的变体或片段和它们的功能等效物和生物类似物中的一者或多者；或者(c)达土木单抗。

25、在另一个方面，本发明提供了使用本文所述的组合物治疗受试者的方法，其中该方法包括：(i)向受试者施用包含ipsc衍生nk细胞的第一合成细胞群，其中ipsc衍生nk细胞包含：(a)外源cd16或其变体；以及(b)第一嵌合抗原受体(car)和细胞表面表达的外源细胞因子或其受体的部分或全长肽中的一者或两者；以及(ii)向受试者施用包含ipsc衍生t细胞的第二合成细胞群，其中ipsc衍生t细胞包含：至少第二嵌合抗原受体(car)，其中第二car在tcr基因座的内源启动子的控制下表达，并且其中第一car和第二car在靶向特异性方面相同或不同。在某些实施方案中，受试者患有包括以下的病况：自身免疫病症；血液系统恶性肿瘤；实体瘤；癌症，或病毒感染；并且/或者其中与单独使用第一合成细胞群或第二合成细胞群相比，该方法提供病况的增强改善。在一些实施方案中，第一合成细胞群和第二合成细胞群同时施用，或以任何次序依次施用。在使用本文所述的组合物治疗受试者的方法的各种实施方案中，第一合成细胞群和第二合成细胞群是单独的群或在施用于受试者之前组合成混合群。在使用本文所述的组合物治疗受试者的方法的一些实施方案中，该方法还包括施用一种或多种治疗剂；以及/或者施用附加细胞群，其中一种或多种治疗剂和/或附加细胞群与第一合成细胞群或第二合成细胞群同时或依次施用。在一些实施方案中，当该方法包括施用附加细胞群时，附加细胞群包含调控细胞。在一些实施方案中，调控细胞是ipsc衍生免疫调控细胞或骨髓衍生抑制细胞(mdsc)。在其中该方法包括施用一种或多种治疗剂的一些实施方案中，一种或多种治疗剂包含肽、细胞因子、检查点抑制剂、丝裂原、生长因子、小rna、dsrna(双链rna)、单核血细胞、饲养细胞、饲养细胞组分或其置换因子、包含一种或多种所关注多核酸的载体、抗体、化学治疗剂或放射性部分或免疫调节药物(imid)。

26、在使用本文所述的组合物治疗受试者的方法的各种实施方案中，该方法还包括向受试者施用：(i)对以下有特异性的bite或trike：(a)免疫细胞表面分子，包含cd3、cd28、cd5、cd16、nkg2d、cd64、cd32、cd89、nkg2c或它们的嵌合fc受体；以及(b)肿瘤表面分子，包含b7h3、bcma、cd10、cd19、cd20、cd22、cd24、cd30、cd33、cd34、cd38、cd44、cd79a、cd79b、cd123、cd138、cd179b、cea、clec12a、cs-1、dll3、egfr、egfrviii、epcam、flt-3、folr1、folr3、gd2、gpa33、her2、hm1.24、lgr5、msln、mcsp、mica/b、psma、pama、p-钙粘素或ror1；(ii)bite，包含cd3-cd19、cd16-cd30、cd64-cd30、cd16-bcma、cd64-bcma或cd3-cd33；(iii)trike，包含cd16-il15-epcam、cd64-il15-epcam、cd16-il15-cd33、cd64-il15-cd33或nkg2c-il15-cd33；(iv)抗体，包含抗cd20、抗her2、抗cd52、抗egfr、抗cd123、抗gd2、抗pdl1或抗cd38抗体；或者(v)检查点抑制剂，包含(a)针对检查点分子的拮抗剂，该检查点分子包含pd-1、pdl-1、tim-3、tigit、lag-3、ctla-4、2b4、4-1bb、4-1bbl、a2ar、bate、btla、cd39、cd47、cd73、cd94、cd96、cd160、cd200、cd200r、cd274、ceacam1、csf-1r、foxpl、garp、hvem、ido、edo、tdo、lair-1、mica/b、nr4a2、mafb、oct-2、rara(视黄酸受体α)、tlr3、vista、nkg2a/hla-e或抑制性kir；(b)阿特珠单抗、阿维鲁单抗、度伐单抗、伊匹单抗、iph4102、iph43、iph33、利瑞木单抗、莫纳利珠单抗、纳武单抗、帕博利珠单抗和它们的衍生物或功能等效物中的一者；或者(c)阿特珠单抗、纳武单抗和帕博利珠单抗中的一者。

27、在另一个方面，本发明提供了制备本文所述的组合物的方法，该方法包括：(i)分化第一基因工程改造的ipsc以获得包含ipsc衍生nk细胞的第一合成细胞群，其中第一ipsc包含多核苷酸，该多核苷酸编码(a)外源cd16或其变体；以及(b)第一嵌合抗原受体(car)和细胞表面表达的外源细胞因子和/或其受体的部分或全长肽中的一者或两者，其中ipsc衍生nk细胞包含(a)和(b)；以及(ii)分化第二基因工程改造的ipsc以获得包含ipsc衍生t细胞的第二合成细胞群，其中第二ipsc包含编码至少第二嵌合抗原受体(car)的多核苷酸，其中第二car在tcr基因座的内源启动子的控制下表达，并且其中ipsc衍生t细胞包含第二car，从而制造本文所述的组合物。在制造方法的一些实施方案中，外源cd16或其变体是高亲和力不可裂解的外源cd16(hncd16)；或者其中外源cd16或其变体包含以下中的至少一者：(a)cd16的胞外域中的f176v和s197p；(b)源自cd64的全部或部分胞外域；(c)非原生(或非cd16)跨膜域；(d)非原生(或非cd16)胞内域；(e)非原生(或非cd16)信号传导域；(f)非原生刺激域；以及(g)并非源自cd16并且源自相同或不同多肽的跨膜域、信号传导域和刺激域。在制造方法的一些实施方案中，(a)非原生跨膜域衍生自cd3d、cd3e、cd3g、cd3ζ、cd4、cd8、cd8a、cd8b、cd27、cd28、cd40、cd84、cd166、4-1bb、ox40、icos、icam-1、ctla-4、pd-1、lag-3、2b4、btla、cd16、il7、il12、il15、kir2dl4、kir2ds1、nkp30、nkp44、nkp46、nkg2c、nkg2d或t细胞受体(tcr)多肽；(b)非原生刺激域衍生自cd27、cd28、4-1bb、ox40、icos、pd-1、lag-3、2b4、btla、dap10、dap12、ctla-4或nkg2d多肽；(c)非原生信号传导域衍生自cd3ζ、2b4、dap10、dap12、dnam1、cd137(4-1bb)、il21、il7、il12、il15、nkp30、nkp44、nkp46、nkg2c或nkg2d多肽；或者(d)非原生跨膜域衍生自nkg2d，非原生刺激域衍生自2b4，并且非原生信号传导域衍生自cd3ζ。

28、在制造方法的一些实施方案中，第一car和第二car在靶向特异性方面相同或不同，并且第一car或第二car是：(i)t细胞特异性或nk细胞特异性；(ii)双特异性抗原结合car；(iii)可切换的car；(iv)二聚化car；(v)分离car；(vi)多链car；(vii)诱导性car；(viii)与另一个car共表达；(ix)任选地在单独构建体中或在双顺反子构建体中，与细胞表面表达的外源细胞因子和/或其受体的部分或全长肽共表达；(x)任选地在单独构建体中或在双顺反子构建体中，与检查点抑制剂共表达；(xi)对cd19或bcma具有特异性；和/或(xii)对以下中的任一者具有特异性：adgre2、碳酸酐酶ix(caix)、ccr1、ccr4、癌胚抗原(cea)、cd3、cd5、cd7、cd8、cd10、cd20、cd22、cd30、cd33、cd34、cd38、cd41、cd44、cd44v6、cd49f、cd56、cd70、cd74、cd99、cd123、cd133、cd138、cds、clec12a、巨细胞病毒(cmv)感染的细胞的抗原、上皮糖蛋白2(egp-2)、上皮糖蛋白-40(egp-40)、上皮细胞粘附分子(epcam)、egfrviii、受体酪氨酸-蛋白激酶erb-b2,3,4、egfir、egfr-viii、erbb叶酸结合蛋白(fbp)、胎儿型乙酰胆碱受体(achr)、叶酸受体a、神经节苷脂g2(gd2)、神经节苷脂g3(gd3)、人类表皮生长因子受体2(her-2)、人类端粒酶逆转录酶(htert)、icam-1、整合素b7、白细胞介素-13受体亚基α-2(il-13rα2)、κ-轻链、激酶插入域受体(kdr)、路易斯a(ca19.9)、路易斯y(ley)、l1细胞粘附分子(l1-cam)、lilrb2、黑色素瘤抗原家族a1(mage-a1)、mica/b、粘蛋白1(muc-1)、粘蛋白16(muc-16)、间皮素(msln)、nkcsi、nkg2d配体、c-met、癌症-睾丸抗原ny-eso-1、癌胚抗原(h5t4)、prame、前列腺干细胞抗原(psca)、prame前列腺特异性膜抗原(psma)、肿瘤相关糖蛋白72(tag-72)、tim-3、trbc1、trbc2、血管内皮生长因子r2(vegf-r2)、威尔姆斯肿瘤蛋白质(wt-1)和病原体抗原。在制造方法的其他实施方案中，细胞表面表达的外源细胞因子和/或其受体的部分或全长肽：(a)包含il2、il4、il6、il7、il9、il10、il11、il12、il15、il18、il21和/或它们的相应受体中的至少一者；或者(b)包含以下中的至少一者：(i)通过使用自我裂解肽进行il15和il15rα的共表达；(ii)il15和il15rα的融合蛋白；(iii)il15rα的胞内域截短的il15/il15rα融合蛋白；(iv)il15和il15rα的结合膜的寿司域的融合蛋白；(v)il15和il15rβ的融合蛋白；(vi)il15和共同受体γc的融合蛋白，其中该共同受体γc是原生的或经过修饰的；以及(vii)il15rβ的同源二聚体；其中(i)-(vii)中的任一者都可在单独构建体中或在双顺反子构建体中与car共表达；以及任选地，(c)瞬时表达。

29、在制造方法的一些实施方案中，第一基因工程改造的ipsc或第二基因工程改造的ipsc还包含以下中的一者或多者：(i)ihla-i缺乏；(ii)hla-ii缺乏；(iii)hla-g或不可裂解的hla-g的表达引入；(iv)lig-、inr+、cs-cd3+、en+和ab+中的至少一者；其中(1)lig-在表达的同种异体抗原中是阴性的；(2)inr+在对应于阴性同种异体抗原的表达的失活-car中是阳性的；(3)cs-cd3+在细胞表面表达的cd3中是阳性的；(4)en+在至少一种表达的衔接子中是阳性的，其中衔接子包括双特异性t细胞衔接子(bite)或三特异性杀伤细胞衔接子(trike)；以及(5)ab+在至少一种表达的抗体或检查点抑制剂中是阳性的；(v)b2m、ciita、tap1、tap2、tap相关蛋白、nlrc5、pd1、lag3、tim3、rfxank、rfx5、rag1、rfxap和染色体6p21区域中的任何基因中的至少一者的缺失或表达减少；以及(vi)hla-e、hla-g、41bbl、cd4、cd8、cd16、cd47、cd113、cd131、cd137、cd80、pdl1、a2ar、tcr、fc受体和用于与双特异性或多特异性或通用衔接子偶联的表面触发受体中的至少一者的表达引入或增加。在某些实施方案中，(i)同种异体抗原包括cd40l、ox40或4-1bb；(ii)失活-car包括cd40l-car、ox40-car或4-1bb-car；(iii)bite或trike对以下有特异性：(a)免疫细胞表面分子，包含cd3、cd28、cd5、cd16、nkg2d、cd64、cd32、cd89、nkg2c或它们的嵌合fc受体；以及(b)肿瘤表面分子，包含b7h3、bcma、cd10、cd19、cd20、cd22、cd24、cd30、cd33、cd34、cd38、cd44、cd79a、cd79b、cd123、cd138、cd179b、cea、clec12a、cs-1、dll3、egfr、egfrviii、epcam、flt-3、folr1、folr3、gd2、gpa33、her2、hm1.24、lgr5、msln、mcsp、mica/b、psma、pama、p-钙粘素或ror1；(iv)bite包含cd3-cd19、cd16-cd30、cd64-cd30、cd16-bcma、cd64-bcma或cd3-cd33；(v)trike包含cd16-il15-epcam、cd64-il15-epcam、cd16-il15-cd33、cd64-il15-cd33或nkg2c-il15-cd33；(vi)抗体包含抗cd20、抗her2、抗cd52、抗egfr、抗cd123、抗gd2、抗pdl1或抗cd38抗体；或者(vii)检查点抑制剂包含(a)针对检查点分子的拮抗剂，该检查点分子包含pd-1、pdl-1、tim-3、tigit、lag-3、ctla-4、2b4、4-1bb、4-1bbl、a2ar、bate、btla、cd39、cd47、cd73、cd94、cd96、cd160、cd200、cd200r、cd274、ceacam1、csf-1r、foxpl、garp、hvem、ido、edo、tdo、lair-1、mica/b、nr4a2、mafb、oct-2、rara(视黄酸受体α)、tlr3、vista、nkg2a/hla-e或抑制性kir；(b)阿特珠单抗、阿维鲁单抗、度伐单抗、伊匹单抗、iph4102、iph43、iph33、利瑞木单抗、莫纳利珠单抗、纳武单抗、帕博利珠单抗和它们的衍生物或功能等效物中的一者；或者(c)阿特珠单抗、纳武单抗和帕博利珠单抗中的一者。

30、在制造方法的一些实施方案中，第一基因工程改造的ipsc或第二基因工程改造的ipsc包含：(i)整合在一个期望的整合位点中的一种或多种外源多核苷酸；或者(ii)整合在不同期望整合位点中的超过两种外源多核苷酸。在某些实施方案中，期望的整合位点包括aavs1、ccr5、rosa26、胶原蛋白、htrp、h11、gapdh、runx1、b2m、tap1、tap2、tap相关蛋白、nlrc5、ciita、rfxank、rfx5、rfxap、tcrα或β恒定区、nkg2a、nkg2d、cd25、cd38、cd40l、cd44、cd54、cd56、cd58、cd69、cd71、ox40、4-1bb、cis、cbl-b、socs2、pd1、ctla4、lag3、tim3和tigit中的至少一者。在其他实施方案中，期望的整合位点包括tcrα或β恒定区、cd25、cd38、cd40l、cd44、cd54、cd58、cd69、cd71、ox40或4-1bb；并且任选地，其中由于在相应整合位点处整合所述一种或多种外源多核苷酸，敲除tcrα或tcrβ、cd25、cd38、cd40l、cd44、cd54、cd58、cd69、cd71、ox40或4-1bb。

31、在制造方法的一些实施方案中，ipsc衍生nk细胞或ipsc衍生t细胞与从外周血、脐带血或任何其他供体组织中获得的其原生对应细胞相比具有以下特性中的至少一个特性：(i)改善的持久性和/或存活率，(ii)对原生免疫细胞的抗性增加，(iii)细胞毒性增加，(iv)改善的肿瘤渗透性，(v)增强或获取的adcc，(vi)将旁观者免疫细胞迁移到肿瘤部位和/或激活或募集旁观者免疫细胞的能力增强，(vii)降低肿瘤免疫抑制的能力增强；以及(viii)挽救肿瘤抗原逃逸的能力提高。在制造方法的各种实施方案中，离体调节第一合成细胞群或第二合成细胞群。在某些实施方案中，与未被调节的第一合成细胞群相比，包含ipsc衍生nk细胞的经调节的第一合成细胞群包含增加数目或比例的i型nkt细胞和/或适应性nk细胞；或者其中与未被调节的第二合成细胞群相比，包含ipsc衍生t细胞的经调节的第二合成细胞群包含增加数目或比例的初始t细胞、干细胞记忆t细胞和/或中枢记忆t细胞。

32、在制造方法的一些实施方案中，(i)ipsc衍生nk细胞和ipsc衍生t细胞的比例范围为100:1至1:100；(ii)该方法还包括将一种或多种附加细胞群添加到所产生的第一合成细胞群和第二合成细胞群中；或者(iii)该方法还包括将一种或多种治疗剂添加到所产生的第一合成细胞群和第二合成细胞群中。在某些实施方案中，一种或多种附加细胞群包含调控细胞。在其中一种或多种附加细胞群包含调控细胞的一些实施方案中，调控细胞是ipsc衍生免疫调控细胞或骨髓衍生抑制细胞(mdsc)。在其中该方法还包括将一种或多种治疗剂添加到所产生的第一合成细胞群和第二合成细胞群中的一些实施方案中，一种或多种治疗剂包含肽、细胞因子、检查点抑制剂、丝裂原、生长因子、小rna、dsrna(双链rna)、单核血细胞、饲养细胞、饲养细胞组分或其置换因子、包含一种或多种所关注多核酸的载体、抗体、化学治疗剂或放射性部分或免疫调节药物(imid)。在其中一种或多种治疗剂包含检查点抑制剂的一些实施方案中，检查点抑制剂包含：(a)一种或多种拮抗剂检查点分子，其包含pd-1、pdl-1、tim-3、tigit、lag-3、ctla-4、2b4、4-1bb、4-1bbl、a2ar、bate、btla、cd39、cd47、cd73、cd94、cd96、cd160、cd200、cd200r、cd274、ceacam1、csf-1r、foxpl、garp、hvem、ido、edo、tdo、lair-1、mica/b、nr4a2、mafb、oct-2、rara(视黄酸受体α)、tlr3、vista、nkg2a/hla-e或抑制性kir；(b)阿特珠单抗、阿维鲁单抗、度伐单抗、伊匹单抗、iph4102、iph43、iph33、利瑞木单抗、莫纳利珠单抗、纳武单抗、帕博利珠单抗和它们的衍生物或功能等效物中的一者或多者；或者(c)阿特珠单抗、纳武单抗和帕博利珠单抗中的至少一者。在其中一种或多种治疗剂包含抗体的一些实施方案中，抗体包含：(a)抗cd20、抗her2、抗cd52、抗egfr、抗cd123、抗gd2、抗pdl1和/或抗cd38抗体；(b)雷妥昔单抗、维妥珠单抗、奥法木单抗、乌布里图昔单抗、奥卡拉珠单抗、奥比珠单抗、曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、阿仑单抗、西妥昔单抗、迪努妥昔单抗、阿维鲁单抗、达土木单抗、艾沙妥昔单抗、mor202、7g3、csl362、埃罗妥珠单抗和它们的人源化或经过fc修饰的变体或片段和它们的功能等效物和生物类似物中的一者或多者；或者(c)达土木单抗。在制造方法的各种实施方案中，该方法还包括将第一合成细胞群和第二合成细胞群组合成混合群。

33、通过结合附图进行的以下描述，如本文所提供的组合物和方法的各个目的和优势将变得显而易见，在所述附图中借助于说明和实例阐述本发明的某些实施方案。