用于抑制脂蛋白(a)的RNA组合物和方法与流程

发明领域本发明涉及靶向lpa mrna和调节lp(a)血浆水平的dsrna，以及治疗与lpa基因表达相关的一种或多种病症的方法。

背景技术：

1、脂蛋白是在输送血浆中的脂质起关键作用的脂蛋白颗粒。这些颗粒具有包括apoa、apob、apoc和apoe等嵌入载脂蛋白(结合脂质的蛋白)的单层磷脂和胆固醇膜。膜包裹正在输送的脂质。由于脂质不溶于水，因此脂蛋白可有效地充当乳化剂。

2、脂蛋白(a)或lp(a)，仅在人类和旧大陆猴中发现并且包括低密度脂蛋白(ldl)颗粒。lp(a)与其它脂蛋白的不同之处在于存在独特的脂蛋白，即载脂蛋白(a)/[apo(a)]，所述载脂蛋白通过双硫键与ldl颗粒外表面的apob100相连(参见，例如kronenberg和utermann，《内科医学》(2013年)273(1)：6-30)；guerra等人，《循环》(2005年)111：1471-9)。apo(a)主要在肝脏中表达，并且包含非活性肽酶结构域。apo(a)由高度多态性lpa基因进行编码。基因中不同数量的环状结构(k)iv 2型重复序列导致apo(a)的异构体大小范围广泛。lpa基因由纤溶酶原基因(plg)进化而来，并且这两个基因序列是高度同源的(kronenberg，supra)。

3、血浆lp(a)水平在个体之间存在近1000倍的差异，约20-30％的人的血浆lp(a)水平高度升高(约≥50mg/dl)。参见，例如hopewell等人，《内科医学》(2013年)273(1)：260-8；wilson等人，《临床脂质学杂志》(2019年)13(3)：374-92。高血浆lp(a)水平和小apo(a)异构体大小与心血管疾病风险(包括冠心病、心肌梗塞、中风、外周动脉病、钙化性主动脉瓣疾病和动脉粥样硬化)的增加有关。

4、wo 2019/092283与wo 2020/099476均公开了用于抑制细胞中lpa表达的核酸。另外，wo 2014/179625公开了用于调节载脂蛋白(a)表达的组合物和方法。

5、双链rna分子(dsrna)已被证明可在被称为rna干扰(rnai)的一种高度保守的调控机制中阻断基因表达。这似乎是一种不同于反义寡核苷酸、抗mirna分子和同型替代抗体等单链寡核苷酸的作用机制。在rna干扰技术中，小干扰rna(sirna)等双链rna与rna诱导沉默复合体(”risc”)结合，其中一条链(“随从链”或“正义链”)被替代，剩下的一条链(“导向链”或“反义链”)与risc合作，以结合互补rna(靶向rna)。一旦结合，靶向rna被risc中的rna内切酶ago蛋白质(ago)裂解，随后被rna外切酶进一步降解。rnai现在已用于开发一类新的治疗剂，用于治疗由基因的异常表达或不必要表达引发的紊乱。

6、由于lp(a)在输送胆固醇和氧化磷脂以及提供溶血磷脂酸方面的重要性，以及与lp(a)升高和动脉粥样硬化促进脂质有关的疾病患病率，迫切需要确定lpa表达的抑制剂，并且测试这种抑制剂的疗效和细胞毒性等不需要的副作用。

技术实现思路

1、本公开提供了一种双链核糖核酸(dsrna)，通过靶向lpa基因的rna转录物上的靶序列来抑制人lpa基因表达，其中dsrna包括包含正义序列的正义链和包含反义序列的反义链，其中靶序列是seq id no：1632的核苷酸220-238、223-241、302-320、1236-1254、2946-2964、2953-2971、2954-2972、2958-2976、2959-2977、4635-4653、4636-4654、4639-4657、4842-4860、4980-4998、4982-5000、6385-6403、或6470-6488，并且其中正义序列与靶序列至少是90％相同的。在一些实施例中，正义链与反义链在15至25个连续核苷酸的区域中相互互补。在一些实施例中，正义链与反义链的长度不超过30个核苷酸。在特定实施例中，靶序列是seq id no：1632的核苷酸2958-2976、4639-4657或4982-5000。

2、最优选的靶序列是核苷酸2958-2976、4639-4657和4982-5000。

3、在一些实施例中，dsrna的一条或两条链包括具有以下结构的一种或多种化合物：

4、

5、其中：

6、-b是杂环核碱基，

7、-l1和l2中的一个是连接式(i)化合物与链的核苷间连接基，l1和l2中的另一个是h、保护基、磷部分或连接式(i)化合物与链的核苷间连接基，

8、-y是o、nh、nr1或n-c(＝o)-r1，其中r1是：

9、·(c1-c20)烷基，所述(c1-c20)烷基可选地由选自卤原子、(c1-c6)烷基，(c3-c8)环烷基、(c3-c14)杂环、(c6-c14)芳基、(c5-c14)杂芳基、-o-z1、-n(z1)(z2)、-s-z1，-cn、-c(＝j)-o-z1、-o-c(＝j)-z1、-c(＝j)-n(z1)(z2)、和-n(z1)-c(＝j)-z2中的一个或多个基团取代，其中

10、j是o或s，

11、z1和z2中的每一个独立地是h、(c1-c6)烷基，所述z1和所述z2中的每一个可选地由选自卤原子和(c1-c6)烷基的一个或多个基团取代，

12、·(c3-c8)环烷基，所述(c3-c8)环烷基可选地由选自卤原子和(c1-c6)烷基的一个或多个基团取代，

13、·-[c(＝o)]m-r2-(o-ch2-ch2)p-r3基，其中

14、m是为0或1的整数，

15、p是为0到10的整数，

16、r2是可选地由(c1-c6)烷基、-o-z3、-n(z3)(z4)、-s-z3、-cn、-c(＝k)-o-z3、-o-c(＝k)-z3、-c(＝k)-n(z3)(z4)、或-n(z3)-c(＝k)-z4取代的(c1-c20)亚烃基，其中

17、k是o或s，

18、z3和z4中的每一个独立地是h、(c1-c6)烷基，所述z3和z4中的每一个可选地由选自卤原子和(c1-c6)烷基的一个或多个基团取代，

19、和

20、r3选自由氢原子、(c1-c6)烷基、(c1-c6)烷氧基、(c3-c8)环烷基、(c3-c14)杂环、(c6-c14)芳基或(c5-c14)杂芳基组成的组，

21、或者r3是细胞靶向部分，

22、-x1和x2分别独立地是氢原子、(c1-c6)烷基，并且

23、-ra、rb、rc和rd中的每一个独立地是h或(c1-c6)烷基，

24、或其药学上可接受的盐。

25、在另一个方面中，本公开提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括本发明的dsrna和药学上可接受的赋形剂，以及dsrna和药物组合物，用于抑制lpa表达，降低lp(a)水平，或治疗有需要的人中的lp(a)相关病症。在一些实施例中，人类患脂代谢紊乱或心血管疾病(cvd)或具有患脂代谢紊乱或心血管疾病的风险。在进一步实施例中，人类患高胆固醇血症、血脂异常、心肌梗塞、粥样硬化性心血管疾病、动脉粥样硬化、外周动脉疾病、钙化性主动脉瓣疾病、血栓形成、或中风，或具有患高胆固醇血症、血脂异常、心肌梗塞、粥样硬化性心血管疾病、动脉粥样硬化、外周动脉疾病、钙化性主动脉瓣疾病、血栓形成、或中风的风险。