用于递送RNA的组合物和方法与流程

本公开整体涉及用于治疗纤维化疾病和肝病的端粒酶逆转录酶(tert)信使核糖核酸(mrna)疗法。

背景技术：

1、纤维化疾病和肝病的药物治疗仍然是难以攻克的，这些疾病的高死亡率证明了这一点。目前，破坏性活动或疾病的终止是治疗纤维化(例如，肝脏纤维化)和肝病的主要方法。因此，需要药物疗法来治疗纤维化疾病和肝病。

技术实现思路

1、本公开涉及用于治疗纤维化疾病和病症(例如肝脏的纤维化疾病和病症)以及肝病和病症的端粒酶逆转录酶(tert)信使核糖核酸(mrna)疗法。用包含tert mrna的组合物治疗可以预防、逆转或治疗纤维化以及纤维化疾病和/或肝病的其他病理特征，从而使整体器官功能和受试者健康得以改善。因此，在一些实施方案中，本文提供了包含一种或多种合成信使核糖核酸(mrna)的组合物，所述信使核糖核酸编码端粒酶逆转录酶(tert)。

2、在一些实施方案中，所述组合物包含：(i)编码端粒酶逆转录酶(tert)的核糖核酸(rna)，和(ii)递送媒介物，其中(i)的所述rna包含一种或多种经修饰的核苷酸，并且其中(ii)的所述递送媒介物可操作地连接至(i)的所述rna。

3、在本公开的组合物的一些实施方案中，所述递送媒介物包括以下中的一者或多者：纳米颗粒、脂质体、阳离子脂质、外泌体、胞外囊泡、脂质纳米颗粒、天然脂蛋白颗粒和人工脂蛋白颗粒。

4、在本公开的组合物的一些实施方案中，所述递送媒介物包括脂质纳米颗粒(lnp)。在一些实施方案中，所述递送媒介物包括可电离和/或阳离子脂质。

5、在一些实施方案中，所述递送媒介物包含靶向部分。在一些实施方案中，所述靶向部分使所述递送媒介物与肝细胞特异性地或选择性地相互作用。在一些实施方案中，所述靶向部分包含胆固醇。在一些实施方案中，所述靶向部分是脂质、肽和/或抗体。在一些实施方案中，

6、所述lnp包含可电离脂质、磷脂、胆固醇和/或聚乙二醇化脂质。在一些实施方案中，所述lnp包含摩尔比为约30至70摩尔的可电离脂质与约0.1至约20摩尔的磷脂、约20至约60摩尔的胆固醇和约0.1至约5.5摩尔的聚乙二醇化脂质。

7、在本公开的组合物的一些实施方案中，包括其中所述递送媒介物是脂质纳米颗粒(lnp)的那些，所述递送媒介物包含式i的化合物：

8、

9、其中r1a和r1b各自独立地表示具有1至6个碳原子的亚烷基基团，其中xa和xb各自独立地是具有1至6个碳原子和1个叔氨基基团或2至5个碳原子的无环烷基叔氨基基团，以及具有1至2个叔氨基基团的环状亚烷基叔氨基基团，其中r2a和r2b各自独立地表示具有8个或更少的碳原子或氧基二亚烷基基团的亚烷基基团，其中ya和yb各自独立地表示酯键、酰胺键、氨基甲酸酯键、醚键或脲键；其中za和zb各自独立地是源自具有3至16个碳原子、具有至少一个芳环并且任选地具有杂原子的芳族化合物的二价基团，并且其中r3a和r3b各自独立地表示源自具有羟基基团的脂溶性维生素与琥珀酸酐或戊二酸酐的反应产物的残基，或源自具有羟基基团的甾醇衍生物与琥珀酸酐或戊二酸酐的反应产物的残基，或具有12至22个碳原子的脂族烃基团。

10、在本公开的组合物的一些实施方案中，包括其中所述递送媒介物是脂质纳米颗粒(lnp)的那些，所述式i的化合物是：

11、

12、在本公开的组合物的一些实施方案中，包括其中所述递送媒介物是脂质纳米颗粒(lnp)的那些，所述式i的化合物是：

13、

14、在本公开的组合物的一些实施方案中，包括其中所述递送媒介物是脂质纳米颗粒(lnp)的那些，所述式i的化合物是：

15、

16、在本公开的组合物的一些实施方案中，包括其中所述递送媒介物是脂质纳米颗粒(lnp)的那些，所述式i的化合物是：

17、

18、在本公开的组合物的一些实施方案中，包括其中所述递送媒介物是脂质纳米颗粒(lnp)的那些，所述式i的化合物是：

19、

20、在本公开的组合物的一些实施方案中，包括其中所述递送媒介物是脂质纳米颗粒(lnp)的那些，所述式i的化合物是：

21、

22、在一些实施方案中，所述rna包含与seq id no:1-5、30-31或37-40中的任一者具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。

23、在本公开的组合物的一些实施方案中，包括其中所述递送媒介物是脂质纳米颗粒(lnp)的那些，所述rna包含5'帽。在一些实施方案中，所述5'帽包含抗反向帽类似物(arca)。在一些实施方案中，所述arca包含3'-o-me-m7g(5')ppp(5')g结构。在一些实施方案中，所述5'帽包含m7g(5')ppp(5')(2'omea)pg。在一些实施方案中，所述5'帽包含m7(3'omeg)(5')ppp(5')(2'omea)pg。

24、在本公开的组合物的一些实施方案中，包括其中所述递送媒介物是脂质纳米颗粒(lnp)的那些，所述rna还包含至少一个非翻译区(utr)。所述utr可以包含与seq id no:32-36中的任一者具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些实施方案中，所述至少一个utr定位于(i)所述编码tert的rna的5'端。在一些实施方案中，所述至少一个utr定位于(i)的所述rna的3'端。在一些实施方案中，所述utr包含人类序列。在一些实施方案中，所述utr包含非人类或合成序列。在一些实施方案中，所述utr包含嵌合序列。在一些实施方案中，所述utr增加稳定性、增加半衰期、提高转录速率或减少(i)的所述rna的转录起始的时间。在一些实施方案中，所述utr包含与分离自或衍生自α-珠蛋白、β-珠蛋白、c-fos和烟草蚀纹病毒中的一者或多者的utr序列具有至少70％同一性的序列。

25、在本公开的组合物的一些实施方案中，包括其中所述递送媒介物是脂质纳米颗粒(lnp)的那些，(i)的所述rna的所述一种或多种经修饰的核苷酸包含以下中的一者或多者：经修饰的腺嘌呤或其类似物、经修饰的胞苷或其类似物、经修饰的鸟苷或其类似物以及经修饰的尿苷或其类似物。在一些实施方案中，(i)的所述rna的所述一种或多种经修饰的核苷酸包含以下中的一者或多者：1-甲基假尿苷也称为n1-甲基假尿苷、假尿苷(n1m)、2-硫代尿苷和5-甲基胞苷。在一些实施方案中，(i)的所述rna的所述一种或多种经修饰的核苷酸包含5-甲氧基尿苷(5-mou)。在一些实施方案中，(i)的所述rna的所述一种或多种经修饰的核苷酸包含以下中的一者或多者：m1a 1-甲基腺苷、m6a n6-甲基腺苷、am 2′-o-甲基腺苷、i6a n6-异戊烯基腺苷、io6a n6-(顺式-羟基异戊烯基)腺苷、ms2io6a 2-甲基硫代-n6-(顺式-羟基异戊烯基)腺苷、g6a n6-甘氨酰氨基甲酰腺苷、t6a n6-苏氨酰氨基甲酰腺苷、ms2t6a 2-甲基硫代-n6-苏氨酰氨基甲酰腺苷、ar(p)2′-o-核糖基腺苷(磷酸)、m6 2a n6,n6-二甲基腺苷、m6am n6,2′-o-二甲基腺苷、m6 2am n6,n6,2′-o-三甲基腺苷、m1am 1,2′-o-二甲基腺苷、m3c 3-甲基胞苷、m5c 5-甲基胞苷、cm 2′-o-甲基胞苷、ac4c n4-乙酰基胞苷、f5c 5-甲酰基胞苷、m4c n4-甲基胞苷、hm5c 5-羟甲基胞苷、f5cm 5-甲酰基-2′-o-甲基胞苷、m1g 1-甲基鸟苷、m2g n2-甲基鸟苷、m7g 7-甲基鸟苷、gm 2′-o-甲基鸟苷、m2 2g n2,n2-二甲基鸟苷、gr(p)2′-o-核糖基鸟苷(磷酸)、yw怀丁苷、o2yw过氧怀丁苷、ohyw羟基怀丁苷、ohyw*不完全修饰的羟基怀丁苷、img怀俄苷、m2,7g n2,7-二甲基鸟苷、m2,2,7g n2,n2,7-三甲基鸟苷i肌苷、m1i 1-甲基肌苷、im 2′-o-甲基肌苷、q辫苷、galq半乳糖基-辫苷、manq甘露糖基-辫苷、ψ假尿苷、d二氢尿苷、m5u 5-甲基尿苷、um 2′-o-甲基尿苷、m5um 5,2′-o-二甲基尿苷、m1ψ1-甲基假尿苷、ψm 2′-o-甲基假尿苷、s2u 2-硫代尿苷、ho5u 5-羟基尿苷、chm5u 5-(羧基羟甲基)尿苷、mchm5u 5-(羧基羟甲基)尿苷、甲酯mcm5u 5-甲氧基羰基甲基尿苷、mcm5um 5-甲氧基羰基甲基-2′-o-甲基尿苷、mcm5s2u 5-甲氧基羰基甲基-2-硫代尿苷、ncm5u 5-氨基甲酰甲基尿苷、ncm5um 5-氨基甲酰甲基-2'-o-甲基尿苷、cmnm5u 5-羧甲基氨基甲基尿苷、m3u 3-甲基尿苷、m1acp3ψ1-甲基-3-(3-氨基-3-羧基丙基)假尿苷、cm5u 5-羧甲基尿苷、m3um 3,2′-o-二甲基尿苷、m5d 5-甲基二氢尿苷、τm5u 5-牛磺酰甲基尿苷、τm5s2u 5-牛磺酰甲基-2-硫代尿苷、2-氨基腺苷、2-氨基-6-氯嘌呤核糖核苷、8-氮杂腺苷、6-氯嘌呤核糖核苷、5-碘胞苷、5-碘尿苷、肌苷、2'-o-甲基肌苷、黄嘌呤核苷、4-硫代尿苷、o6-甲基鸟苷、5,6-二氢尿苷、2-硫代胞苷、6-氮杂胞苷、6-氮杂尿苷、2'-o-甲基-2-氨基腺苷、2'-o-甲基假尿苷、n1-甲基腺苷、2'-o-甲基-5-甲基尿苷、7-脱氮鸟苷、8-叠氮腺苷、5-溴胞苷、5-溴尿苷、7-脱氮腺苷、5-氨基烯丙基尿苷、5-氨基烯丙基胞苷、8-氧代鸟苷、2-氨基嘌呤-核糖核苷、假异胞苷、n1-甲基假尿苷、5,6-二氢-5-甲基尿苷、n6-甲基-2-氨基腺苷、5-羧基胞苷、5-羟甲基尿苷、噻吩并鸟苷、5-羟基胞苷、5-甲酰基尿苷、5-羧基尿苷、5-甲氧基尿苷、5-甲氧基胞苷、噻吩并尿苷、5-羧甲基酯尿苷、噻吩并胞苷、8-氧代腺苷、异鸟苷、n1-乙基假尿苷、n1-甲基-2'-o-甲基假尿苷、n1-甲氧基甲基假尿苷、n1-丙基假尿苷、2'-o-甲基-n6-甲基腺苷、2-氨基-6-cl-嘌呤-2'-脱氧核糖核苷、2-氨基-2'-脱氧腺苷、2-氨基嘌呤-2'-脱氧核糖核苷、5-溴-2'-脱氧胞苷、5-溴-2'-脱氧尿苷、6-氯嘌呤-2'-脱氧核糖核苷、7-脱氮-2'-脱氧腺苷、7-脱氮-2'-脱氧鸟苷、2'-脱氧肌苷、5-丙炔基-2'-脱氧胞苷、5-丙炔基-2'-脱氧尿苷、5-氟-2'-脱氧尿苷、5-碘-2'-脱氧胞苷、5-碘-2'-脱氧尿苷、n6-甲基-2'-脱氧腺苷、5-甲基-2'-脱氧胞苷、o6-甲基-2'-脱氧鸟苷、n2-甲基-2'-脱氧鸟苷、8-氧代-2'-脱氧腺苷、8-氧代-2'-脱氧鸟苷、2-硫代胸苷、2'-脱氧-p-核苷、5-羟基-2'-脱氧胞苷、4-硫代胸苷、2-硫代-2'-脱氧胞苷、6-氮杂-2'-脱氧尿苷、6-硫代-2'-脱氧鸟苷、8-氯-2'-脱氧腺苷、5-氨基烯丙基-2'-脱氧胞苷、5-氨基烯丙基-2'-脱氧尿苷、n4-甲基-2'-脱氧胞苷、2'-脱氧泽布拉林、5-羟甲基-2'-脱氧尿苷、5-羟甲基-2'-脱氧胞苷、5-炔丙基氨基-2'-脱氧胞苷、5-炔丙基氨基-2'-脱氧尿苷、5-羧基-2'-脱氧胞苷、5-甲酰基-2'-脱氧胞苷、5-[(3-吲哚基)丙酰胺-n-烯丙基]-2'-脱氧尿苷、5-羧基-2'-脱氧尿苷、5-甲酰基-2'-脱氧尿苷、7-脱氮-7-炔丙基氨基-2'-脱氧腺苷、7-脱氮-7-炔丙基氨基-2'-脱氧鸟苷、生物素-16-氨基烯丙基-2'-dutp、生物素-16-氨基烯丙基-2'-dctp、生物素-16-氨基烯丙基胞苷、n4-生物素-obea-2'-脱氧胞苷、生物素-16-氨基烯丙基尿苷、偶氮苯甲酸(dabcyl)-5-3-氨基烯丙基-2'-dutp、脱硫代生物素-6-氨基烯丙基-2'-脱氧胞苷、脱硫代生物素-16-氨基烯丙基-尿苷、生物素-16-7-脱氮-7-炔丙基氨基-2'-脱氧鸟苷、花青3-5-炔丙基氨基-2'-脱氧胞苷、花青3-6-炔丙基氨基-2'-脱氧尿苷、花青5-6-炔丙基氨基-2'-脱氧胞苷、花青5-6-炔丙基氨基-2'-脱氧尿苷、花青3-氨基烯丙基胞苷、花青3-氨基烯丙基尿苷、花青5-氨基烯丙基胞苷、花青5-氨基烯丙基尿苷、花青7-氨基烯丙基尿苷、2'-氟-2'-脱氧腺苷、2'-氟-2'-脱氧胞苷、2'-氟-2'-脱氧鸟苷、2'-氟-2'-脱氧尿苷、2'-o-甲基腺苷、2'-o-甲基胞苷、2'-o-甲基鸟苷、2'-o-甲基尿苷、嘌呤霉素、2'-氨基-2'-脱氧胞苷、2'-氨基-2'-脱氧尿苷、2'-叠氮基-2'-脱氧胞苷、2'-叠氮基-2'-脱氧尿苷、阿糖胞苷、阿糖尿苷、2'-叠氮基-2'-脱氧腺苷、2'-氨基-2'-脱氧腺苷、阿糖腺苷、2'-氟-胸苷、3'-o-甲基腺苷、3'-o-甲基胞苷、3'-o-甲基鸟苷、3'-o-甲基尿苷、2'-叠氮基-2'-脱氧鸟苷、阿糖鸟苷、2'-脱氧尿苷、3'-o-(2-硝基苄基)-2'-脱氧腺苷、3'-o-(2-硝基苄基)-2'-脱氧肌苷、3'-脱氧腺苷、3'-脱氧鸟苷、3'-脱氧胞苷、3'-脱氧-5-甲基尿苷、3'-脱氧尿苷、2',3'-二脱氧腺苷、2',3'-二脱氧鸟苷、2',3'-二脱氧尿苷、2',3'-二脱氧胸苷、2',3'-二脱氧胞苷、3'-叠氮基-2',3'-二脱氧腺苷、3'-叠氮基-2',3'-二脱氧胸苷、3'-氨基-2',3'-二脱氧腺苷、3'-氨基-2',3'-二脱氧胞苷、3'-氨基-2',3'-二脱氧鸟苷、3'-氨基-2',3'-二脱氧胸苷、3'-叠氮基-2',3'-二脱氧胞苷、3'-叠氮基-2',3'-二脱氧尿苷、5-溴-2',3'-二脱氧尿苷、2',3'-二脱氧肌苷、2'-脱氧腺苷-5'-o-(1-硫代磷酸)、2'-脱氧胞苷-5'-o-(1-硫代磷酸)、2'-脱氧鸟苷-5'-o-(1-硫代三磷酸)、2'-脱氧胸苷-5'-o-(1-硫代磷酸)、腺苷-5'-o-(1-硫代磷酸)、胞苷-5'-o-(1-硫代磷酸)、鸟苷-5'-o-(1-硫代磷酸)、尿苷-5'-o-(1-硫代磷酸)、2',3'-二脱氧腺苷-5'-o-(1-硫代磷酸)、2',3'-二脱氧胞苷-5'-o-(1-硫代磷酸)、2',3'-二脱氧鸟苷-5'-o-(1-硫代磷酸)、3'-脱氧胸苷-5'-o-(1-硫代磷酸)、3'-叠氮基-2',3'-二脱氧胸苷-5'-o-(1-硫代磷酸)、2',3'-二脱氧尿苷-5'-o-(1-硫代磷酸)、2'-脱氧腺苷-5'-o-(1-硼代磷酸)、2'-脱氧胞苷-5'-o-(1-硼代磷酸)、2'-脱氧鸟苷-5'-o-(1-硼代磷酸)和2'-脱氧胸苷-5'-o-(1-硼代磷酸)。

26、在本公开的组合物的一些实施方案中，包括其中所述递送媒介物是脂质纳米颗粒(lnp)的那些，所述递送媒介物包含所述编码tert的rna。在一些实施方案中，所述递送媒介物的表面、层或容量中的一者或多者包含所述编码tert的rna。在一些实施方案中，所述表面包括外表面或内表面。在一些实施方案中，所述层包括脂质单层或脂质双层。在一些实施方案中，所述容量包括内部容量。

27、在一些实施方案中，本公开提供了一种组合物，所述组合物包含(i)编码端粒酶逆转录酶(tert)的核糖核酸(rna)，和(ii)递送媒介物，其中(i)的所述rna包含一种或多种经修饰的核苷酸，并且其中(ii)的所述递送媒介物可操作地连接至(i)的所述rna。

28、在本公开的组合物的一些实施方案中，包括其中所述递送媒介物是脂质纳米颗粒(lnp)的那些，所述组合物还包含编码端粒酶rna组分(terc)的核糖核酸(rna)。在一些实施方案中，所述递送媒介物可操作地连接至编码端粒酶rna组分(terc)的核糖核酸(rna)。在一些实施方案中，所述递送媒介物包含所述编码terc的rna。在一些实施方案中，所述递送媒介物的表面、层或容量中的一者或多者包含所述编码terc的rna。在一些实施方案中，所述表面包括外表面或内表面。在一些实施方案中，所述层包括脂质单层或脂质双层。在一些实施方案中，所述容量包括内部容量。

29、在一些实施方案中，所述编码tert的rna包含与seq id no:1-5、7、9、14-17、19、21、23、25、27、29-31、37-40中的任一者具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，所述编码tert的rna包含utr序列，任选地utr序列与seq id no:32-34、35和36中的任一者具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％序列同一性。

30、在一些实施方案中，所述rna包括自复制rna。在一些实施方案中，所述rna包括环状rna。

31、本公开提供了一种增加细胞中的端粒酶活性的方法，所述方法包括使所述细胞与本公开的组合物接触。在一些实施方案中，所述细胞是体内的、离体的或体外的。

32、本公开提供了一种延伸细胞中的端粒的方法，所述方法包括使所述细胞与本公开的组合物接触。在一些实施方案中，所述细胞是体内的、离体的或体外的。

33、本公开提供了一种细胞，所述细胞包含本公开的组合物。

34、本公开提供了一种制剂，所述制剂包含本公开的细胞，所述细胞包含本公开的组合物。在所述制剂的一些实施方案中，多种细胞包括本公开的细胞，所述细胞包含本公开的组合物。在所述制剂的一些实施方案中，所述多种细胞中的每种细胞是本公开的细胞，所述细胞包含本公开的组合物。

35、本公开提供了一种治疗疾病或障碍的方法，所述方法包括将有效量的本公开的组合物施用于受试者。

36、本公开提供了一种治疗疾病或障碍的方法，所述方法包括将有效量的本公开的细胞施用于受试者，所述细胞包含本公开的组合物。

37、本公开提供了一种治疗疾病或障碍的方法，所述方法包括将有效量的本公开的制剂施用于受试者。

38、本公开提供了一种延迟疾病的发作的方法，所述方法包括将有效量的本公开的组合物施用于受试者。

39、本公开提供了一种延迟疾病的发作的方法，所述方法包括将有效量的本公开的细胞施用于受试者，所述细胞包含本公开的组合物。

40、本公开提供了一种延迟疾病的发作的方法，所述方法包括将有效量的本公开的制剂施用于受试者。

41、在一些实施方案中，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的纤维化疾病的方法，所述方法包括：将有效量的组合物施用于受试者，所述组合物包含一种或多种编码端粒酶逆转录酶(tert)的合成信使核糖核酸(mrna)。

42、在所述方法的一些实施方案中，所述组合物包含递送媒介物，任选地其中所述递送媒介物是纳米颗粒，任选地脂质纳米颗粒(lnp)。在一些实施方案中，所述lnp包含可电离脂质、磷脂、胆固醇和/或聚乙二醇化脂质。

43、在一些实施方案中，所述lnp包含摩尔比为约50至约60摩尔的可电离脂质与约4至约6摩尔的磷脂、约35至约45摩尔的胆固醇和约1.0至约2.0摩尔的聚乙二醇化脂质。

44、在一些实施方案中，所述lnp包含摩尔比为约30至40摩尔的可电离脂质与约14至约18摩尔的磷脂、约40至约50摩尔的胆固醇和约2.0至约3.0摩尔的聚乙二醇化脂质。

45、在一些实施方案中，所述lnp包含摩尔比为约55摩尔的可电离脂质与约5摩尔的磷脂、约40摩尔的胆固醇和约1.5摩尔的聚乙二醇化脂质。

46、在一些实施方案中，所述lnp包含摩尔比为约52.5摩尔的可电离脂质与约7.5摩尔的磷脂、约40摩尔的胆固醇和约1.5摩尔的聚乙二醇化脂质。

47、在一些实施方案中，所述tert合成mrna包含来自表1b中的列表的至少一种经修饰的核苷。在一些实施方案中，所述经修饰的核苷是假尿苷或假尿苷类似物，任选地其中所述假尿苷类似物是n-1-甲基假尿苷。在一些实施方案中，所述经修饰的核苷是5-甲氧基尿苷。

48、在一些实施方案中，所述tert合成mrna包含非翻译区(utr)。在一些实施方案中，所述utr包含与seq id no:32-36中的任一者具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。

49、在一些实施方案中，所述tert合成mrna包含5'帽结构，其中所述5'帽结构是ires、cap0、capl、arca、肌苷、nl-甲基-鸟苷、2'氟-鸟苷、7-脱氮-鸟苷、cleancaptm、m7(3'omeg)(5')ppp(5')(2'omea)pg、8-氧代-鸟苷、2-氨基-鸟苷、lna-鸟苷、2-叠氮基-鸟苷、cap2、cap4、cap-003或cap-225。

50、在一些实施方案中，所述tert合成mrna包含编码区的3'端的多聚腺苷(多聚a)核苷酸序列。

51、在一些实施方案中，所述tert合成mrna包含链终止核苷酸，其中所述核苷酸是3'-脱氧腺苷(虫草素)、3'-脱氧尿苷、3'-脱氧胞嘧啶、3'-脱氧鸟苷、3'-脱氧胸腺嘧啶、2',3'-二脱氧核苷、2',3'-二脱氧腺苷、2',3'-二脱氧尿苷、2',3'-二脱氧胞嘧啶、2',3'-二脱氧鸟苷、2',3'-二脱氧胸腺嘧啶、2'-脱氧核苷或-o-甲基核苷。

52、在一些实施方案中，所述tert合成mrna是经密码子优化的。在一些实施方案中，所述tert合成mrna包含与seq id no:1、2、7、9、30、39或40中的任一者具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性。

53、在一些实施方案中，所述递送媒介物是脂质体、可电离脂质、胞外囊泡或外泌体。在一些实施方案中，所述递送媒介物是外泌体的胞外囊泡，任选地其中所述胞外囊泡或外泌体包含脂质、肽或抗体中的一者或多者的靶向部分。

54、在一些实施方案中，所述方法减少纤维化。

55、在一些实施方案中，所述受试者是人类。

56、在一些实施方案中，本公开描述了一种使用的组合物。在一些实施方案中，所述使用的组合物是药物组合物，所述药物组合物包含一种或多种药学上可接受的溶剂或赋形剂。

57、在一些实施方案中，本公开提供了一种用于治疗受试者的纤维化疾病的试剂盒，所述试剂盒包含组合物及其使用说明书。

58、在一些实施方案中，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的肝病的方法，所述方法包括将组合物施用于所述受试者，所述组合物包含一种或多种编码端粒酶逆转录酶(tert)的合成信使核糖核酸(mrna)。

59、在一些实施方案中，所述方法减少肝纤维化。在一些实施方案中，所述肝病是非酒精性脂肪性肝炎(nash)或非酒精性脂肪性肝病(nafld)。

60、在一些实施方案中，所述肝病是酒精性肝炎、肝硬化、肝纤维化、代偿性肝硬化、失偿性肝硬化、慢加急性肝衰竭、纤维化f4期非酒精性脂肪性肝炎(nash)、胆道闭锁、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎和/或慢性肝病、血色素沉着症、威尔逊氏(wilson)病或缺血性肝炎。

61、以引用的方式并入

62、本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均以引用的方式并入本文，如果每个单独的出版物、专利或专利申请均被具体地和单独地指示为以引用的方式并入的程度。