一种冻干粉溶媒液及其制备方法和应用与流程

1.本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种冻干粉溶媒液及其制备方法和应用。


背景技术：

2.皮肤是人体的第一道生理屏障，健康的皮肤能够抵御外界污染、刺激、损伤和日光侵害，同时还具有保湿及调节作用。然而，由于生活环境、作息习惯和护肤方式等原因，皮肤屏障极易受损，使得皮肤自身防御能力不足，进而导致皮肤出现泛油光、毛孔粗大、敏感、痤疮、炎症、老化等一系列皮肤问题。
3.人们对皮肤修复产品的需求量日益增涨，皮肤修复产品必须可有效预防和延缓由内因和外因造成的肌肤受损问题。目前市面上的护肤品主要的功效还是以保湿为主，功效单一片面，对于皮肤修复方面的功效较为薄弱。
4.cn110237022a公开了一种冻干粉、溶媒及其应用，其中溶媒按质量百分比包括以下组分：水解透明质酸钠0.1-10.0％、糖原0.1-10.0％、水解胶原蛋白0.1-10.0％、维生素0.2-10.0％、透皮促渗剂0.2-20.0％和余量的水；但是溶媒的主要功效在于促进皮肤对冻干粉成分的吸收，并通过提高水溶性成分含量来增强保湿效果，但是所得产品修复效果不明显。
5.因此如何提供一种冻干粉溶媒，使其本身就具有改善和提升皮肤综合状态的功效，已经成为目前亟待解决的问题。


技术实现要素：

6.针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种冻干粉溶媒液及其制备方法和应用。本发明提供的冻干粉溶媒液中各种成分相互配合，协同增效，可以增加皮肤水分，提高肌肤抗氧化能力；提高皮肤弹性，减少皱纹，还能够防止色素沉着，具有改善和提升皮肤综合状态的功效。
7.为达此目的，本发明采用以下技术方案：
8.第一方面，本发明提供一种冻干粉溶媒液，所述冻干粉溶媒液的制备原料包括水、甘油、丙二醇、1,2-己二醇、对羟基苯乙酮、丁二醇、糖类同分异构体、海藻糖和燕麦肽。
9.糖类同分异构体，英文名称是saccharide isomerate，别名：异构寡糖。糖类同分异构体又称是一种萃取自天然植物糖类综合体的天然保湿剂，类似于人体内的碳水化合物的复合体，亲肤性能佳。通过与角质层细胞中角蛋白上的赖氨酸的自由氨基酸基团结合，协助角质层的角蛋白结合水分，因不能被轻易洗掉，以达到持久的保湿效果。
10.在本发明中糖类同分异构体、海藻糖和燕麦肽相互配合，可以促进肌肤对水分、营养物质的吸收，使得肌肤水嫩光滑有弹性，并且可以加强肌肤抵御外界伤害的能力。
11.在本发明中，所述冻干粉溶媒液的制备原料按重量份数计包括水80-90份(例如可以是80份、81份、82份、83份、84份、85份、86份、87份、88份、89份、90份等)、甘油4-6份(例如可以是4份、4.5份、5份、5.5份、6份等)、丙二醇4-6份(例如可以是4份、4.5份、5份、5.5份、6
份等)、1,2-己二醇0.4-0.8份(例如可以是0.4份、0.5份、0.6份、0.7份、0.8份等)、对羟基苯乙酮0.4-0.6份(例如可以是0.4份、0.45份、0.5份、0.55份、0.6份等)、丁二醇0.2-0.4份(例如可以是0.2份、0.25份、0.3份、0.35份、0.4份等)、糖类同分异构体0.1-0.3份(例如可以是0.1份、0.15份、0.2份、0.25份、0.3份等)、海藻糖0.05-0.2份(例如可以是0.05份、0.1份、0.15份、0.2份等)和燕麦肽0.05-0.15份(例如可以是0.05份、0.1份、0.15份、0.2份等)。
12.在本发明中，所述冻干粉溶媒液的制备原料还包括水解燕麦蛋白、聚谷氨酸、寡肽-1、乙酰基六肽-8或可溶性胶原中的任意一种或至少两种的组合，优选为水解燕麦蛋白、聚谷氨酸、寡肽-1、乙酰基六肽-8和可溶性胶原。
13.优选地，所述冻干粉溶媒液的制备原料按重量份数计还包括水解燕麦蛋白0.03-0.1份(例如可以是0.03份、0.04份、0.05份、0.06份、0.07份、0.08份、0.09份、0.1份等)、聚谷氨酸0.01-0.05份(例如可以是0.01份、0.02份、0.03份、0.04份、0.05份等)、寡肽-1 0.005-0.015份(例如可以是0.005份、0.007份、0.009份、0.01份、0.013份、0.015份等)、乙酰基六肽-8 0.00005-0.00015份(例如可以是0.00005份、0.0001份、0.00015份等)和可溶性胶原0.00001-0.0001份(例如可以是0.00001份、0.00003份、0.00005份、0.00007份、0.00009份、0.0001份等)。
14.在本发明中，所述冻干粉溶媒液的制备原料还包括磷脂酰胆碱、聚甘油-10油酸酯和羟乙基纤维素。
15.优选地，所述冻干粉溶媒液的制备原料按重量份数计还包括磷脂酰胆碱0.01-0.05份(例如可以是0.01份、0.02份、0.03份、0.04份、0.05份等)、聚甘油-10油酸酯0.01-0.05份(例如可以是0.01份、0.02份、0.03份、0.04份、0.05份等)和羟乙基纤维素0.005-0.015份(例如可以是0.005份、0.007份、0.009份、0.01份、0.013份、0.015份等)。
16.在本发明中，所述冻干粉溶媒液的制备原料还包括透明质酸钠、神经酰胺np和甘油辛酸酯。
17.优选地，所述冻干粉溶媒液的制备原料按重量份数计还包括透明质酸钠0.01-0.05份(例如可以是0.01份、0.02份、0.03份、0.04份、0.05份等)、神经酰胺np 0.005-0.015份(例如可以是0.005份、0.007份、0.009份、0.01份、0.013份、0.015份等)和甘油辛酸酯0.001-0.005份(例如可以是0.001份、0.002份、0.003份、0.004份、0.005份等)。
18.在本发明中，所述冻干粉溶媒液的制备原料还包括植物提取物、其他醇类物质和无机盐。
19.优选地，所述植物提取物包括玉米须丝提取物、芦荟提取物、库拉索芦荟叶提取物、稻提取物、欧锦葵花/叶/茎提取物、母菊花提取物、迭迭香叶提取物、积雪草提取物、黄芩根提取物、虎杖根提取物、光果甘草根提取物和茶叶提取物。
20.在本发明中，玉米须丝提取物、芦荟提取物、库拉索芦荟叶提取物、稻提取物、欧锦葵花/叶/茎提取物、母菊花提取物、迭迭香叶提取物、积雪草提取物、黄芩根提取物、虎杖根提取物、光果甘草根提取物和茶叶提取物相互配合，协同增效，具有保湿滋润美白抗氧化功效，并能赋予皮肤一定的弹性和光泽，可以修复皮肤屏障。
21.优选地，所述冻干粉溶媒液的制备原料按重量份数计还包括玉米须丝提取物0.05-0.15份(例如可以是0.05份、0.07份、0.09份、0.11份、0.13份、0.15份等)、芦荟提取物0.05-0.15份(例如可以是0.05份、0.07份、0.09份、0.11份、0.13份、0.15份等)、库拉索芦荟
叶提取物0.03-0.09份(例如可以是0.03份、0.04份、0.05份、0.06份、0.07份、0.08份、0.09份等)、稻提取物0.03-0.09份(例如可以是0.03份、0.04份、0.05份、0.06份、0.07份、0.08份、0.09份等)、欧锦葵花/叶/茎提取物0.005-0.015份(例如可以是0.005份、0.007份、0.009份、0.011份、0.013份、0.015份等)、母菊花提取物0.001-0.01份(例如可以是0.001份、0.003份、0.005份、0.007份、0.01份等)、迭迭香叶提取物0.001-0.01份(例如可以是0.001份、0.003份、0.005份、0.007份、0.01份等)、积雪草提取物0.001-0.01份(例如可以是0.001份、0.003份、0.005份、0.007份、0.01份等)、黄芩根提取物0.001-0.01份(例如可以是0.001份、0.003份、0.005份、0.007份、0.01份等)、虎杖根提取物0.001-0.01份(例如可以是0.001份、0.003份、0.005份、0.007份、0.01份等)、光果甘草根提取物0.001-0.01份(例如可以是0.001份、0.003份、0.005份、0.007份、0.01份等)和茶叶提取物0.001-0.01份(例如可以是0.001份、0.003份、0.005份、0.007份、0.01份等)。
22.在本发明中，所述其他醇类物质包括1,2-戊二醇、植物甾醇类、乙基己基甘油和辛甘醇。
23.优选地，所述冻干粉溶媒液的制备原料按重量份数计还包括1,2-戊二醇0.05-0.15份(例如可以是0.05份、0.07份、0.09份、0.11份、0.13份、0.15份等)、植物甾醇类0.005-0.015份(例如可以是0.005份、0.007份、0.009份、0.011份、0.013份、0.015份等)、乙基己基甘油0.0003-0.001份(例如可以是0.0003份、0.0004份、0.0005份、0.0006份、0.0007份、0.0008份、0.0009份、0.001份等)和辛甘醇0.0002-0.0008份(例如可以是0.0002份、0.0003份、0.0004份、0.0005份、0.0006份、0.0007份、0.0008份等)。
24.优选地，所述无机盐包括磷酸二氢钠和磷酸氢二钠。
25.优选地，所述冻干粉溶媒液的制备原料按重量份数计还包括磷酸二氢钠0.0001-0.0005份(例如可以是0.0001份、0.0002份、0.0003份、0.0004份、0.0005份等)和磷酸氢二钠0.0001-0.0005份(例如可以是0.0001份、0.0002份、0.0003份、0.0004份、0.0005份等)。
26.第二方面，本发明提供一种根据第一方面所述冻干粉溶媒液的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
27.(1)将水、甘油和丙二醇进行混合，得到第一混合物；
28.(2)将步骤(1)得到的第一混合物、1,2-己二醇、对羟基苯乙酮、丁二醇、糖类同分异构体、海藻糖和燕麦肽混合，得到所述冻干粉溶媒液。
29.在本发明中，步骤(1)中，所述混合的温度为90-100℃(例如可以是90℃、91℃、92℃、93℃、94℃、95℃、96℃、97℃、98℃、99℃、100℃等)，时间为20-30min(例如可以是20min、21min、22min、23min、24min、25min、26min、27min、28min、29min、30min等)，转速为30-40rpm(例如可以是30rpm、31rpm、32rpm、33rpm、34rpm、35rpm、36rpm、37rpm、38rpm、39rpm、40rpm等)。
30.优选地，步骤(2)中，所述混合的温度为35-45℃(例如可以是35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃、41℃、42℃、43℃、44℃、45℃等)。
31.优选地，步骤(2)中，所述混合还包括水解燕麦蛋白、聚谷氨酸、寡肽-1、乙酰基六肽-8、可溶性胶原、磷脂酰胆碱、聚甘油-10油酸酯、羟乙基纤维素、透明质酸钠、神经酰胺np、甘油辛酸酯、玉米须丝提取物、芦荟提取物、库拉索芦荟叶提取物、稻提取物、欧锦葵花/叶/茎提取物、母菊花提取物、迭迭香叶提取物、积雪草提取物、黄芩根提取物、虎杖根提取
物、光果甘草根提取物、茶叶提取物、1,2-戊二醇、植物甾醇类、乙基己基甘油、辛甘醇、磷酸二氢钠和磷酸氢二钠中的任意一种或至少两种的组合。
32.第三方面，本发明提供一种根据第一方面所述的冻干粉溶媒液在制备化妆品中的应用。
33.第四方面，本发明提供一种化妆品，所述化妆品包括冻干粉和根据第一方面所述的冻干粉溶媒液。
34.相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
35.本发明提供的冻干粉溶媒液中各种成分相互配合，协同增效，具有优良的保湿抗皱功效，提升皮肤水合能力，促进弹性蛋白生成，使细胞富有弹性；并可提高肌肤抗氧化能力，有效防止黑色素沉淀并保持肌肤光亮，维持肌肤的健康与清新；提高肌肤的修复效果。
具体实施方式
36.下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
37.以下测试例中冻干粉均购买自广州丽彦妆生物科技有限公司(厂家)，货号为lyz20220615002。
38.实施例1
39.本实施例提供一种冻干粉溶媒液，所述冻干粉溶媒液的制备原料按重量份数计包括以下组分：
40.41.[0042][0043]
所述冻干粉溶媒液的制备方法包括以下步骤：将水、甘油和丙二醇加入乳化锅，开搅拌35r/min，加热至95℃后，保温搅拌25分钟。开启冷却水，冷却至40℃后，将剩余原料分别加入乳化锅中搅拌均匀。冷却至常温后检测出料，待检测合格后灌装，灌装完毕后成品送检，合格后入库。
[0044]
实施例2
[0045]
本实施例提供一种冻干粉溶媒液，所述冻干粉溶媒液的制备原料按重量份数计包括以下组分：
[0046]
[0047]
[0048][0049]
所述冻干粉溶媒液的制备方法包括以下步骤：将水、甘油和丙二醇加入乳化锅，开搅拌30r/min，加热至100℃后，保温搅拌30分钟。开启冷却水，冷却至35℃后，将剩余原料分别加入乳化锅中搅拌均匀。冷却至常温后检测出料，待检测合格后灌装，灌装完毕后成品送检，合格后入库。
[0050]
实施例3
[0051]
本实施例提供一种冻干粉溶媒液，所述冻干粉溶媒液的制备原料按重量份数计包括以下组分：
[0052]
[0053]
[0054][0055]
所述冻干粉溶媒液的制备方法包括以下步骤：将水、甘油和丙二醇加入乳化锅，开搅拌40r/min，加热至90℃后，保温搅拌20分钟。开启冷却水，冷却至45℃后，将剩余原料分别加入乳化锅中搅拌均匀。冷却至常温后检测出料，待检测合格后灌装，灌装完毕后成品送检，合格后入库。
[0056]
实施例4
[0057]
本实施例提供一种冻干粉溶媒液，与实施例1的区别仅在于，将玉米须丝提取物替换为同等重量份数的芦荟提取物，其他制备原料及其制备方法同实施例1。
[0058]
实施例5
[0059]
本实施例提供一种冻干粉溶媒液，与实施例1的区别仅在于，将芦荟提取物替换为同等重量份数的玉米须丝提取物，其他制备原料及其制备方法同实施例1。
[0060]
实施例6
[0061]
本实施例提供一种冻干粉溶媒液，与实施例1的区别仅在于，将库拉索芦荟叶提取物替换为同等重量份数的稻提取物，其他制备原料及其制备方法同实施例1。
[0062]
实施例7
[0063]
本实施例提供一种冻干粉溶媒液，与实施例1的区别仅在于，将稻提取物替换为同等重量份数的库拉索芦荟叶提取物，其他制备原料及其制备方法同实施例1。
[0064]
实施例8
[0065]
本实施例提供一种冻干粉溶媒液，与实施例1的区别仅在于，将欧锦葵花/叶/茎提取物替换为同等重量份数的母菊花提取物，其他制备原料及其制备方法同实施例1。
[0066]
实施例9
[0067]
本实施例提供一种冻干粉溶媒液，与实施例1的区别仅在于，将母菊花提取替换为同等重量份数的欧锦葵花/叶/茎提取物，其他制备原料及其制备方法同实施例1。
[0068]
实施例10
[0069]
本实施例提供一种冻干粉溶媒液，与实施例1的区别仅在于，不含有迭迭香叶提取物，将积雪草提取物的重量份数增加至0.006份，将黄芩根提取物的重量份数增加至0.006份，将虎杖根提取物的重量份数增加至0.006份；将光果甘草根提取物的重量份数增加至0.006份，将茶叶提取物的重量份数增加至0.006份，其他制备原料及其制备方法同实施例1。
[0070]
实施例11
[0071]
本实施例提供一种冻干粉溶媒液，与实施例1的区别仅在于，不含有积雪草提取物，将迭迭香叶提取物的重量份数增加至0.006份，将黄芩根提取物的重量份数增加至0.006份，将虎杖根提取物的重量份数增加至0.006份；将光果甘草根提取物的重量份数增加至0.006份，将茶叶提取物的重量份数增加至0.006份，其他制备原料及其制备方法同实施例1。
[0072]
实施例12
[0073]
本实施例提供一种冻干粉溶媒液，与实施例1的区别仅在于，不含有黄芩根提取物，将迭迭香叶提取物的重量份数增加至0.006份，将积雪草提取物的重量份数增加至0.006份，将虎杖根提取物的重量份数增加至0.006份；将光果甘草根提取物的重量份数增加至0.006份，将茶叶提取物的重量份数增加至0.006份，其他制备原料及其制备方法同实施例1。
[0074]
实施例13
[0075]
本实施例提供一种冻干粉溶媒液，与实施例1的区别仅在于，不含有虎杖根提取物，将迭迭香叶提取物的重量份数增加至0.006份，将积雪草提取物的重量份数增加至0.006份，将黄芩根提取物的重量份数增加至0.006份；将光果甘草根提取物的重量份数增加至0.006份，将茶叶提取物的重量份数增加至0.006份，其他制备原料及其制备方法同实施例1。
[0076]
实施例14
[0077]
本实施例提供一种冻干粉溶媒液，与实施例1的区别仅在于，不含有光果甘草根提取物，将迭迭香叶提取物的重量份数增加至0.006份，将积雪草提取物的重量份数增加至0.006份，将黄芩根提取物的重量份数增加至0.006份；将虎杖根提取物的重量份数增加至0.006份，将茶叶提取物的重量份数增加至0.006份，其他制备原料及其制备方法同实施例1。
[0078]
实施例15
[0079]
本实施例提供一种冻干粉溶媒液，与实施例1的区别仅在于，不含有茶叶提取物，将迭迭香叶提取物的重量份数增加至0.006份，将积雪草提取物的重量份数增加至0.006份，将黄芩根提取物的重量份数增加至0.006份；将虎杖根提取物的重量份数增加至0.006份，将光果甘草根提取物的重量份数增加至0.006份，其他制备原料及其制备方法同实施例1。
[0080]
对比例1
[0081]
本对比例提供一种冻干粉溶媒液，与实施例1的区别仅在于，制备原料中不含有糖类同分异构体，将海藻糖的重量份数增加至0.24份，将燕麦肽的重量份数增加至0.195份，其他制备原料及其制备方法同实施例1。
[0082]
对比例2
[0083]
本对比例提供一种冻干粉溶媒液，与实施例1的区别仅在于，制备原料中不含有海藻糖，将糖类同分异构体的重量份数增加至0.29份，将燕麦肽的重量份数增加至0.145份，其他制备原料及其制备方法同实施例1。
[0084]
对比例3
[0085]
本对比例提供一种冻干粉溶媒液，与实施例1的区别仅在于，制备原料中不含有燕麦肽，将糖类同分异构体的重量份数增加至0.264份，将海藻糖的重量份数增加至0.171份，其他制备原料及其制备方法同实施例1。
[0086]
测试例1
[0087]
保湿效果测试
[0088]
测试样本：实施例1-15和对比例1-3提供的冻干粉溶媒液。
[0089]
测试方法：选取180名皮肤健康的18-40岁的志愿者，男女比例各占一半，随机分成18组，每组5名男性、5名女性，分别使用实施例1-15和对比例1-3提供的冻干粉溶媒液。每天早上洗完脸之后使用，连续使用30天，通过皮肤测试仪(mc750，德国ck)测定志愿者使用前和使用后皮肤含水量；
[0090]
在使用前以及连续使用30天后分别测试各位受试者的面部皮肤含水量，每个数据测试三次，取平均值后，计算每组平均值，保留小数点后一位，按照如下公式计算皮肤含水量变化率：
[0091]
面部皮肤含水量变化率(％)＝【(使用后30天面部皮肤含水量-使用前面部皮肤含水量)/使用前面部皮肤含水量】
×
100％；
[0092]
测试结果如表1所示：
[0093]
表1
[0094][0095][0096]
由表1的测试结果可以看出，采用实施例1-15提供的冻干粉溶媒液面部含水量变化率在28.5％以上，高于采用对比例1-3提供的冻干粉溶媒液。通过实施例1、实施4-15和对比例1-3的对比可知，本发明中植物提取物、糖类同分异构体、海藻糖和燕麦肽各组分相互
配合，协同增效，提高面部含水量，帮助强化和恢复肌肤保湿状态。
[0097]
测试例2
[0098]
抗衰祛皱效果测试
[0099]
测试样本：实施例1-15和对比例1-3提供的冻干粉溶媒液。
[0100]
测试方法：
[0101]
促进弹性蛋白生成实验：将人成纤维细胞按照2
×
104个/孔的密度接种在96孔板上，加入新鲜培养基在37℃培养箱中培养24h，待细胞贴壁后，更换新的培养基，并分别加入实施例1-15和对比例1-3提供的冻干粉溶媒液(每孔加入冻干粉溶媒液200μl)，以20mmol/l的pbs溶液作为空白对照，然后在37℃培养箱中培养2天。
[0102]
培养结束后，利用细胞裂解液将细胞洗脱下来，并超声破碎。采用biocolor弹性蛋白检测试剂盒对弹性蛋白的含量进行检测：用弹性蛋白沉淀剂处理样本，使弹性蛋白沉淀下来，离心分离，去除上清液，向沉淀中加入染料和反应液，反应形成弹性蛋白-染料复合物，离心分离并用pbs溶液洗涤三次，去除未结合的染料，添加染料释放剂，使弹性蛋白-染料复合物中的染料释放出来，采用分光光度计测定样品在513nm处的吸光度。根据吸光度-染料浓度标准曲线计算弹性蛋白的表达量(实施例和对比例中弹性蛋白表达量是相对于空白组的相对表达量，空白组的表达量计为1)，测试结果见表2。
[0103]
表2
[0104][0105][0106]
由表2的测试结果可以看出，采用实施例1-15提供的冻干粉溶媒液弹性蛋白表达量在6以上，弹性蛋白表达量远远高于采用对比例1-3提供的冻干粉溶媒液。通过实施例1、实施4-15和对比例1-3的对比可知，本发明中植物提取物、糖类同分异构体、海藻糖和燕麦肽各组分相互配合，协同增效，共同促进弹性蛋白的表达，修复皮肤屏障，具有很好的抗衰
祛皱功效。
[0107]
测试例3
[0108]
抗氧化效果测试
[0109]
测试样本：实施例1-15和对比例1-3提供的冻干粉溶媒液。
[0110]
测试方法：将测试样本用dmso稀释为质量分数2％的待测样品，进行下面试验，向试管中加入质量浓度为45.8mg/l的dpph测试液2.0ml和一定量的待测样品，总体积用无水乙醇补充至3ml，摇匀，避光反应30min后，用1cm比色皿在517nm波长处测定吸光度，记为a
10
；向试管中加入无水乙醇2ml和相应体积的待测样品，总体积用无水乙醇补充至3ml，测得的吸光度记为a
11
；向试管中加入dpph测试液2ml和无水乙醇1ml，测得的吸光度记为a
12
，计算待测液对dpph自由基清除率(y')；
[0111]
dpph自由基清除率的计算公式为：测试结果如下表3所示：
[0112]
表3
[0113]
测试样品dpph自由基清除率(％)实施例174.5实施例272.8实施例373.5实施例461.8实施例558.4实施例662.3实施例760.9实施例857.6实施例959.7实施例1063.1实施例1156.9实施例1258.4实施例1357.1实施例1460.3实施例1557.4对比例147.2对比例249.5对比例348.7
[0114]
由表3数据可知，本实施例1-15提供的冻干粉溶媒液dpph自由基清除率在56.9％以上。通过实施例1、实施4-15和对比例1-3的对比可知，本发明中植物提取物、糖类同分异构体、海藻糖和燕麦肽各组分相互配合，协同增效，具有很好的清除自由基的功效，恢复皮肤抗氧化的保护能力。
[0115]
测试例4
[0116]
美白效果测试(酪氨酸酶活性以及黑色素合成抑制实验)
[0117]
测试样本：实施例1-15和对比例1-3提供的冻干粉溶媒液。
[0118]
测试方法：
[0119]
酪氨酸酶是黑色素代谢中目前唯一己知的酶，它是一种含铜的金属酶，由黑素细胞合成的，在黑色素产生的过程中饰演了举足轻重的角色。酪氨酸酶活性增加，黑色素细胞产生黑色素的能力就相应增强；反之相应降低。若抑制酪氨酸酶的活性，从而其吸光度发生变化，液体褪色程度与酶抑制成化学计量关系，可用分光光度法进行定量分析。
[0120]
酪氨酸酶活性抑制试验：取对数生长期的小鼠黑色素瘤b16细胞，接种于6孔细胞培养板，培养过夜。分别加入终体积分数为1％的受试样品，以未处理组作细胞对照组，每组2个复孔。培养48h后用pbs洗涤1次，每孔加入100ul裂解液，刮取收集细胞，离心取上清液。取50ul细胞上清液至96孔板，再加入50ul1％l-多巴溶液，于37℃孵育1h，m3读板仪于475nm处读取吸光度值。
[0121]
相对酪氨酸酶活性(％)＝(测定孔吸光度值-空白对照组吸光度值)/(细胞对照组吸光度值-空白对照组吸光度值)
×
100％。
[0122]
黑色素合成抑制实验：取对数生长期的小鼠黑色素瘤b16细胞，接种于t25细胞培养瓶，培养过夜。分别加入终体积分数为1％的受试样品，以未处理组作为细胞对照组。培养48h后用pbs洗涤1次，加入1ml 1mol/l naoh溶液，刮取收集细胞，放入80℃水浴中30min，取上清液加入96孔板，m3读板仪于475nm处读取吸光度值。
[0123]
相对黑色素含量(％)＝(测定孔吸光度值-空白对照组吸光度值)/(细胞对照组吸光度值-空白对照组吸光度值)
×
100％。酪氨酸酶活性以及黑色素合成抑制实验结果如下表4所示，其中对照组的酪氨酸酶活性为100％，对照组的黑色素含量为100％。
[0124]
表4
[0125][0126][0127]
由表4结果可知，本发明提供的冻干粉溶媒液对酪氨酸酶的抑制效果较好，同时也能明显降低细胞中的黑色素含量。通过实施例1、实施4-15和对比例1-3的对比可知，本发明中植物提取物、糖类同分异构体、海藻糖和燕麦肽各组分相互配合，协同增效，可以抑制酪氨酸活性，降低细胞中的黑色素含量。
[0128]
测试例5
[0129]
安全性测试
[0130]
测试样本：实施例1-15和对比例1-3提供的冻干粉溶媒液。
[0131]
测试方法：参考《化妆品卫生规范》进行人体皮肤斑贴试验。选择18-60岁身体健康、无过敏性疾病的180名志愿者作为受试对象，受试对象分为18组，每组10人，试验期间不能使用其他护肤产品。选用面积为6mm
×
6mm的斑试器，使用乳胶手套将冻干粉推入冻干粉溶酶液内，轻轻摇晃，然后将冻干粉-冻干粉溶媒液放入斑试器小室内，用量为0.025g，将加有受试物的斑试器用低致敏胶带贴敷于受试者的背部，用手掌轻压使之均匀地贴敷于皮肤上，持续24h。分别于去除受试物斑试器后30min(待压痕消失后)、24h和48h。按表5所示标准观察皮肤反应，并记录观察结果。
[0132]
表5
[0133][0134][0135]
测试结果显示本发明实施例1-15和对比例1-3提供的冻干粉溶媒液评分等级均为0，表明本发明提供的冻干粉溶媒液非常温和，对皮肤无刺激性。
[0136]
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种冻干粉溶媒液及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。