一种野山菌提取物的制备方法及应用与流程

1.本发明属于野山菌深加工领域，公开了一种野山菌提取物的制备方法及应用。


背景技术：

2.皮肤是人体最大的器官，其最重要的作用就是屏障功能，即防止外界刺激对皮肤产生伤害，同时防止皮肤内部水分散失。随着自然衰老，表皮皮肤首先呈现屏障的破坏，导致皮肤含水量下降，角质形成细胞的增殖能力变弱，表皮变薄，皮肤出现细纹。屏障受损导致皮肤保护能力变差，皮肤更容易受到外界伤害而导致mmps激活，降解真皮中的胶原蛋白和弹性蛋白，同时，真皮中成纤维细胞细胞液呈现衰老，因线粒体供氧、细胞核中基因的端粒缩短等原因，导致成纤维细胞增殖能力减弱，分泌胶原蛋白和弹性蛋白能力减缩，进一步加剧了真皮细胞外基质物质减少，真皮对皮肤的支撑作用随着年纪增长而减弱，皮肤逐渐呈现松弛和下垂。而在衰老问题中，由于肌肉不断收缩，表情纹日积月累，使皮肤呈现老态，表情纹是皮肤呈现衰老状态的一个重要的因素。皮肤功能的实现均依赖于呼吸作用产生的能量，线粒体在产生能量的同时也会产生大量的ros，细胞衰老导致清除自由基能力变弱，过量的ros会导致一系列的皮肤问题。目前大部分的抗衰老产品的设计还是从单纯的胶原蛋白、抗氧化、抗糖化等进行设计的。
3.野山菌是在自然界完全处于野生状态下的食用真菌，它们通常生长在人迹罕至的深山老林中。当生长环境发生变化或受到外来污染时，野山菌便不能生长甚至消失，是真正意义上的原生态、纯天然食品。世界上已经发现的可食用的野山菌就有两千多种。野山菌中含有丰富的单糖、双糖和多糖。德国科学家已经发现一些野山菌中含有丰富的葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖、核糖以及其他的醛糖和酮糖，野生菌中还含有高分子多糖可以显著提高机体免疫系统的功能。野山菌的蛋白质含量大大超过其他普通蔬菜，同时避免了动物性食品的高脂肪、高胆固醇危险。据测定，菌类所含蛋白质约占干重的30％～45％，是大白菜、白萝卜、番茄等普通蔬菜的3～6倍。野山菌不仅蛋白质总量高，而且组成蛋白质的氨基酸种类也十分齐全，约有十七八种。尤其是人类必需的八种氨基酸，几乎都可以在野山菌中找到。丰富的蛋白质提供鲜味，这也是野山菌口味鲜美的奥妙所在。野山菌中的铁、锌、铜、硒、铬含量较多，经常食用野山菌既可补充微量元素的不足，又克服了盲目滥用某些微量元素强化食品而引起的微量元素失。市场上有的野山菌产品包括干品、速冻产品、风味野山菌、野山菌深加工制品等目。还缺乏对于复合野山菌提取物用于制备天然护肤品的报道，值得进一步的研究。


技术实现要素：

4.为了解决上述问题，本发明公开了一种野山菌提取物的制备方法及应用。
5.本发明的技术方案如下：
6.一种野山菌提取物的制备方法,包括以下步骤：
7.1)清洗：分别取新鲜的黑松露，羊肚菌、美味牛肝菌、松茸、鸡油菌、鸡枞菌、黑虎掌
菌、松菇分别放入清洗液中，超声清洗除杂，捞起后再用去离子水洗净残留的清洗液；
8.2)真空低温烘干：将上述原料分别放入真空干燥箱中，低温干燥，真空度小于133pa,温度50-70℃，干燥至含水量低于10％；
9.3)粉碎研磨：分别将上述烘干的原料放入粉碎机粉碎，随后放入研磨机研磨成菌粉保存；
10.4)混合：将上述的菌粉放入混料机均匀混合成粉料a；
11.5)酶解：将上述粉料a放入酶解罐中，加入2-4倍质量的含有纤维素酶的酶解液；将酶解液ph调节至4-5之间，酶解温度30-40摄氏度，温和搅拌条件下酶解16-48h，酶解完成后过滤分离滤饼a和滤液a；
12.6)醇提：将上述滤饼a放入醇提罐中，搅拌条件下，用乙醇提取，乙醇浓度40-55％wt，温度50-60℃，醇提12-24h，过滤，分离滤饼b和滤液b；
13.7)水提：将滤饼b用去离子水洗净后，放入水提罐中进行水提，每次加入水的质量为滤饼b质量的2-4倍，当水蒸发至原来的20-30％时，收集提取液，重复数次，合并提取液，得到滤液c；
14.8)合并滤液再过滤：将滤液a、b、c合并为滤液d，再将滤液通过0.45微米滤膜过滤，得到滤液e；
15.9)树脂洗脱：将滤液e上大孔树脂柱，先用体积分数为10-15/wt％的乙醇水溶液洗脱除杂；接着再用35-45/wt％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；
16.10)旋转蒸发除醇：将洗脱液减压旋转蒸发，使得乙醇含量至5-10％停止蒸发，得到提取液；
17.11)真空喷雾制粒：将上述提取液加入制粒辅料，不断搅拌制成混悬液，再用泵通过高压喷雾器喷雾于干燥室内的热气流中，使水分迅速蒸发以直接制成球形干燥细颗粒，平均粒径5-30μm，得到所述野山菌提取物。
18.进一步的，上述一种野山菌提取物的制备方法，所述步骤1)中，清洗液含有2-6％wt乙醇，1-2％/wt椰油基葡糖苷,2-4％wt草酸，余量为水。
19.进一步的，上述一种野山菌提取物的制备方法，所述步骤3)中，菌粉过100-200目筛。
20.进一步的，上述一种野山菌提取物的制备方法，所述步骤4)中，粉料a由以下重量份的菌粉组成：
21.黑松露10份，羊肚菌5-10份、美味牛肝菌4-8份、松茸3-6份、鸡油菌1-2份、鸡枞菌1-2份、黑虎掌菌0.5-1份、松菇0.3-0.8份。
22.其中的黑松露含有丰富的蛋白质、18种氨基酸以及鞘脂类、脑苷脂、神经酰胺、三萜、雄性酮、腺苷、松露酸、甾醇、松露多糖、松露多肽等大量的代谢产物，具有极高的保健价值；羊肚菌富含多种人体需要的氨基酸和有机锗；松茸能够易畅健胃、止痛、理气化痰、驱虫；鸡油菌含有丰富的矿物元素，性平，味甘，具有清肝、明目、利肺、益肠胃的功效；鸡枞菌含人体所必需的蛋白质、脂肪，还含有各种维生素和钙、磷、核黄酸等物质；美味牛肝菌丰富的蛋白质、膳食纤维、维生素b2、钾、铁；黑虎掌菌性平味甘，有追风散寒、舒筋活血之功效，松菇的主要营养成分为多糖类、多肽类、氨基酸类、菌蛋白类、矿物质类、微量元素类及醇类。
23.进一步的，上述一种野山菌提取物的制备方法，所述步骤5)中，酶解液由1-2g/l纤维素酶、2-4g/l果胶酶、1-2g/lα-甘露糖苷酶和去离子水组成。
24.进一步的，上述一种野山菌提取物的制备方法，所述步骤9)中，大孔树脂为amberlitetmxad761离子交换大孔吸附树脂。
25.进一步的，上述一种野山菌提取物的制备方法，所述步骤10)中，旋转蒸发压力范围为0.02-0.04mpa，蒸发的加热温度不超过65℃。
26.进一步的，上述一种野山菌提取物的制备方法，所述步骤11)中，制粒辅料为终浓度为50-100g/l的果糖浆、50-100g/l的β-环糊精，10-20g/l的cmc-na粘合剂。
27.进一步的，上述一种野山菌提取物的制备方法所制备获得的野山菌提取物。
28.进一步的，上述野山菌提取物在制备护肤品中的用途，所述护肤品由野山菌提取物和基质组成，所述基质包括超纯水、植物精油、卵磷脂、琼脂和甘油；
29.上述原料按重量份如下：水100份、野山菌提取物5-10份、植物精油10-20份、卵磷脂10-15份、琼脂10-20份、甘油10-20份；
30.上述护肤品的制备方法包括以下步骤：
31.s1.按比例称取野山菌提取物、超纯水、植物精油、卵磷脂和琼脂条；
32.s2.将超纯水和琼脂条一起放入玻璃烧杯中，静置20分钟，然后倒入植物精油；
33.s3.在金属锅中放入适量的水，放入烧杯，隔水加热至60-70℃，至琼脂条完全融化；
34.s4.将烧杯从金属锅中拿出，缓慢倒入甘油，搅拌几分钟，使烧杯的温度保持在50-60℃；
35.s5.将卵磷脂滴入烧杯中，倒入过程中不可搅拌；
36.s6.继续搅拌，直到烧杯完全冷却至常温，得到泛白的乳霜状护肤品。
37.相比现有技术，本发明具有如下有益效果：
38.本发明公开了一种野山菌提取物的制备方法，含有多种野山菌的提取物，其中的黑松露含有丰富的蛋白质、18种氨基酸以及鞘脂类、脑苷脂、神经酰胺、三萜、雄性酮、腺苷、松露酸、甾醇、松露多糖、松露多肽等大量的代谢产物，具有极高的保健价值；羊肚菌富含多种人体需要的氨基酸和有机锗；松茸能够易畅健胃、止痛、理气化痰、驱虫；鸡油菌含有丰富的矿物元素，性平，味甘，具有清肝、明目、利肺、益肠胃的功效；鸡枞菌含人体所必需的蛋白质、脂肪，还含有各种维生素和钙、磷、核黄酸等物质；美味牛肝菌丰富的蛋白质、膳食纤维、维生素b2、钾、铁；黑虎掌菌性平味甘，有追风散寒、舒筋活血之功效，松菇的主要营养成分为多糖类、多肽类、氨基酸类、菌蛋白类、矿物质类、微量元素类及醇类。另外本发明公开的野山菌提取物的提取方法，通过酶解，醇提、水提以及大孔树脂浓缩特定成分的步骤，充分的提取并浓缩野山菌中的有效成分，具有美白，抗衰老的作用，作为活性成分添加在化妆品特别是护肤品中，具有良好的天然抗氧化美白作用，而且作为纯的天然提取物，无毒无副作用，作为绿色成分，可以长期使用。
附图说明
39.图1为本发明所述的野山菌提取物的制备方法流程图；
40.图2为测试例1中野山菌提取物的重量(g)对比；
41.图3为测试例1中野山菌提取物中的神经酰胺含量(mg/g)的对比；
42.图4为测试例1中野山菌提取物中的腺苷含量(mg/g)的对比；
43.图5为测试例2中野山菌提取物对酪氨酸酶的抑制率(％)的对比；
44.图6为测试例3中护肤品使用满意度得分的对比。
具体实施方式
45.如图1所示，一种野山菌提取物的制备方法,包括以下步骤：
46.1)清洗：分别取新鲜的黑松露，羊肚菌、美味牛肝菌、松茸、鸡油菌、鸡枞菌、黑虎掌菌、松菇分别放入清洗液中，超声清洗除杂，捞起后再用去离子水洗净残留的清洗液；
47.2)真空低温烘干：将上述原料分别放入真空干燥箱中，低温干燥，真空度小于133pa,温度50-70℃，干燥至含水量低于10％；
48.3)粉碎研磨：分别将上述烘干的原料放入粉碎机粉碎，随后放入研磨机研磨成菌粉保存；
49.4)混合：将上述的菌粉放入混料机均匀混合成粉料a；
50.5)酶解：将上述粉料a放入酶解罐中，加入2-4倍质量的含有纤维素酶的酶解液；将酶解液ph调节至4-5之间，酶解温度30-40摄氏度，温和搅拌条件下酶解16-48h，酶解完成后过滤分离滤饼a和滤液a；
51.6)醇提：将上述滤饼a放入醇提罐中，搅拌条件下，用乙醇提取，乙醇浓度40-55％wt，温度50-60℃，醇提12-24h，过滤，分离滤饼b和滤液b；
52.7)水提：将滤饼b用去离子水洗净后，放入水提罐中进行水提，每次加入水的质量为滤饼b质量的2-4倍，当水蒸发至原来的20-30％时，收集提取液，重复数次，合并提取液，得到滤液c；
53.8)合并滤液再过滤：将滤液a、b、c合并为滤液d，再将滤液通过0.45微米滤膜过滤，得到滤液e；
54.9)树脂洗脱：将滤液e上大孔树脂柱，先用体积分数为10-15/wt％的乙醇水溶液洗脱除杂；接着再用35-45/wt％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；
55.10)旋转蒸发除醇：将洗脱液减压旋转蒸发，使得乙醇含量至5-10％停止蒸发，得到提取液；
56.11)真空喷雾制粒：将上述提取液加入制粒辅料，不断搅拌制成混悬液，再用泵通过高压喷雾器喷雾于干燥室内的热气流中，使水分迅速蒸发以直接制成球形干燥细颗粒，平均粒径5-30μm，得到所述野山菌提取物；
57.所述步骤1)中，清洗液含有2-6％wt乙醇，1-2％/wt椰油基葡糖苷,2-4％wt草酸，余量为水；
58.所述步骤3)中，菌粉过100-200目筛；
59.所述步骤4)中，粉料a由以下重量份的菌粉组成：
60.黑松露10份，羊肚菌5-10份、美味牛肝菌4-8份、松茸3-6份、鸡油菌1-2份、鸡枞菌1-2份、黑虎掌菌0.5-1份、松菇0.3-0.8份；
61.所述步骤5)中，酶解液由1-2g/l纤维素酶、2-4g/l果胶酶、1-2g/lα-甘露糖苷酶和去离子水组成；
62.所述步骤9)中，大孔树脂为amberli tetmxad761离子交换大孔吸附树脂；
63.所述步骤10)中，旋转蒸发压力范围为0.02-0.04mpa，蒸发的加热温度不超过65℃；
64.所述步骤11)中，制粒辅料为终浓度为50-100g/l的果糖浆、50-100g/l的β-环糊精，10-20g/l的cmc-na粘合剂。
65.下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
66.本发明实施例中使用的试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
67.纤维素酶购自阿拉丁试剂网，货号c128646-5g。
68.壳聚糖购自阿拉丁试剂网，货号c105802-500g。
69.所述维生素原料为食品级。
70.实施例1
71.一种野山菌提取物的制备方法,包括以下步骤：
72.1)清洗：分别取新鲜的黑松露，羊肚菌、美味牛肝菌、松茸、鸡油菌、鸡枞菌、黑虎掌菌、松菇分别放入清洗液中，超声清洗除杂，捞起后再用去离子水洗净残留的清洗液；
73.2)真空低温烘干：将上述原料分别放入真空干燥箱中，低温干燥，真空度小于133pa,温度50-70℃，干燥至含水量低于10％；
74.3)粉碎研磨：分别将上述烘干的原料放入粉碎机粉碎，随后放入研磨机研磨成菌粉保存；
75.4)混合：将上述的菌粉放入混料机均匀混合成粉料a；
76.5)酶解：将上述粉料a放入酶解罐中，加入2倍质量的含有纤维素酶的酶解液；将酶解液ph调节至4-5之间，酶解温度30摄氏度，温和搅拌条件下酶解16-48h，酶解完成后过滤分离滤饼a和滤液a；
77.6)醇提：将上述滤饼a放入醇提罐中，搅拌条件下，用乙醇提取，乙醇浓度40％wt，温度50℃，醇提12h，过滤，分离滤饼b和滤液b；
78.7)水提：将滤饼b用去离子水洗净后，放入水提罐中进行水提，每次加入水的质量为滤饼b质量的2倍，当水蒸发至原来的20％时，收集提取液，重复数次，合并提取液，得到滤液c；
79.8)合并滤液再过滤：将滤液a、b、c合并为滤液d，再将滤液通过0.45微米滤膜过滤，得到滤液e；
80.9)树脂洗脱：将滤液e上大孔树脂柱，先用体积分数为10/wt％的乙醇水溶液洗脱除杂；接着再用35/wt％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；
81.10)旋转蒸发除醇：将洗脱液减压旋转蒸发，使得乙醇含量至5％停止蒸发，得到提取液；
82.11)真空喷雾制粒：将上述提取液加入制粒辅料，不断搅拌制成混悬液，再用泵通过高压喷雾器喷雾于干燥室内的热气流中，使水分迅速蒸发以直接制成球形干燥细颗粒，平均粒径5-30μm，得到所述野山菌提取物；
83.所述步骤1)中，清洗液含有2％wt乙醇，1％/wt椰油基葡糖苷,2％wt草酸，余量为水；
84.所述步骤3)中，菌粉过100-200目筛；
85.所述步骤4)中，粉料a由以下重量份的菌粉组成：
86.黑松露10g，羊肚菌5g、美味牛肝菌4g、松茸3g、鸡油菌1g、鸡枞菌1g、黑虎掌菌0.5g、松菇0.3g；
87.所述步骤5)中，酶解液由1g/l纤维素酶、2g/l果胶酶、1g/lα-甘露糖苷酶和去离子水组成；
88.所述步骤9)中，大孔树脂为amberlitetmxad761离子交换大孔吸附树脂；
89.所述步骤10)中，旋转蒸发压力范围为0.02-0.04mpa，蒸发的加热温度不超过65℃；
90.所述步骤11)中，制粒辅料为终浓度为50g/l的果糖浆、50g/l的β-环糊精，10g/l的cmc-na粘合剂。
91.实施例2
92.一种野山菌提取物的制备方法,包括以下步骤：
93.1)清洗：分别取新鲜的黑松露，羊肚菌、美味牛肝菌、松茸、鸡油菌、鸡枞菌、黑虎掌菌、松菇分别放入清洗液中，超声清洗除杂，捞起后再用去离子水洗净残留的清洗液；
94.2)真空低温烘干：将上述原料分别放入真空干燥箱中，低温干燥，真空度小于133pa,温度50-70℃，干燥至含水量低于10％；
95.3)粉碎研磨：分别将上述烘干的原料放入粉碎机粉碎，随后放入研磨机研磨成菌粉保存；
96.4)混合：将上述的菌粉放入混料机均匀混合成粉料a；
97.5)酶解：将上述粉料a放入酶解罐中，加入3倍质量的含有纤维素酶的酶解液；将酶解液ph调节至4-5之间，酶解温度37摄氏度，温和搅拌条件下酶解32h，酶解完成后过滤分离滤饼a和滤液a；
98.6)醇提：将上述滤饼a放入醇提罐中，搅拌条件下，用乙醇提取，乙醇浓度50％wt，温度55℃，醇提18h，过滤，分离滤饼b和滤液b；
99.7)水提：将滤饼b用去离子水洗净后，放入水提罐中进行水提，每次加入水的质量为滤饼b质量的3倍，当水蒸发至原来的25％时，收集提取液，重复数次，合并提取液，得到滤液c；
100.8)合并滤液再过滤：将滤液a、b、c合并为滤液d，再将滤液通过0.45微米滤膜过滤，得到滤液e；
101.9)树脂洗脱：将滤液e上大孔树脂柱，先用体积分数为12/wt％的乙醇水溶液洗脱除杂；接着再用40/wt％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；
102.10)旋转蒸发除醇：将洗脱液减压旋转蒸发，使得乙醇含量至5-10％停止蒸发，得到提取液；
103.11)真空喷雾制粒：将上述提取液加入制粒辅料，不断搅拌制成混悬液，再用泵通过高压喷雾器喷雾于干燥室内的热气流中，使水分迅速蒸发以直接制成球形干燥细颗粒，平均粒径5-30μm，得到所述野山菌提取物；
104.所述步骤1)中，清洗液含有4％wt乙醇，1.5％/wt椰油基葡糖苷,3％wt草酸，余量为水；
105.所述步骤3)中，菌粉过100-200目筛；
106.所述步骤4)中，粉料a由以下重量份的菌粉组成：
107.黑松露10g，羊肚菌8g、美味牛肝菌6g、松茸5g、鸡油菌1.5g、鸡枞菌1.5g、黑虎掌菌0.75g、松菇0.5g
108.所述步骤5)中，酶解液由1.5g/l纤维素酶、3g/l果胶酶、1.5g/lα-甘露糖苷酶和去离子水组成；
109.所述步骤9)中，大孔树脂为amberli tetmxad761离子交换大孔吸附树脂；
110.所述步骤10)中，旋转蒸发压力范围为0.02-0.04mpa，蒸发的加热温度不超过65℃；
111.所述步骤11)中，制粒辅料为终浓度为75g/l的果糖浆、75g/l的β-环糊精，15g/l的cmc-na粘合剂。
112.实施例3
113.一种野山菌提取物的制备方法,包括以下步骤：
114.1)清洗：分别取新鲜的黑松露，羊肚菌、美味牛肝菌、松茸、鸡油菌、鸡枞菌、黑虎掌菌、松菇分别放入清洗液中，超声清洗除杂，捞起后再用去离子水洗净残留的清洗液；
115.2)真空低温烘干：将上述原料分别放入真空干燥箱中，低温干燥，真空度小于133pa,温度50-70℃，干燥至含水量低于10％；
116.3)粉碎研磨：分别将上述烘干的原料放入粉碎机粉碎，随后放入研磨机研磨成菌粉保存；
117.4)混合：将上述的菌粉放入混料机均匀混合成粉料a；
118.5)酶解：将上述粉料a放入酶解罐中，加入4倍质量的含有纤维素酶的酶解液；将酶解液ph调节至4-5之间，酶解温度40摄氏度，温和搅拌条件下酶解48h，酶解完成后过滤分离滤饼a和滤液a；
119.6)醇提：将上述滤饼a放入醇提罐中，搅拌条件下，用乙醇提取，乙醇浓度55％wt，温度60℃，醇提24h，过滤，分离滤饼b和滤液b；
120.7)水提：将滤饼b用去离子水洗净后，放入水提罐中进行水提，每次加入水的质量为滤饼b质量的4倍，当水蒸发至原来的30％时，收集提取液，重复数次，合并提取液，得到滤液c；
121.8)合并滤液再过滤：将滤液a、b、c合并为滤液d，再将滤液通过0.45微米滤膜过滤，得到滤液e；
122.9)树脂洗脱：将滤液e上大孔树脂柱，先用体积分数为15/wt％的乙醇水溶液洗脱除杂；接着再用45/wt％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；
123.10)旋转蒸发除醇：将洗脱液减压旋转蒸发，使得乙醇含量至10％停止蒸发，得到提取液；
124.11)真空喷雾制粒：将上述提取液加入制粒辅料，不断搅拌制成混悬液，再用泵通过高压喷雾器喷雾于干燥室内的热气流中，使水分迅速蒸发以直接制成球形干燥细颗粒，平均粒径5-30μm，得到所述野山菌提取物；
125.所述步骤1)中，清洗液含有6％wt乙醇，2％/wt椰油基葡糖苷,4％wt草酸，余量为水；
126.所述步骤3)中，菌粉过100-200目筛；
127.所述步骤4)中，粉料a由以下重量份的菌粉组成：
128.黑松露10g，羊肚菌10g、美味牛肝菌8g、松茸6g、鸡油菌2g、鸡枞菌2g、黑虎掌菌1g、松菇0.8g；
129.所述步骤5)中，酶解液由2g/l纤维素酶、4g/l果胶酶、2g/lα-甘露糖苷酶和去离子水组成；
130.所述步骤9)中，大孔树脂为amberlitetmxad761离子交换大孔吸附树脂；
131.所述步骤10)中，旋转蒸发压力范围为0.02-0.04mpa，蒸发的加热温度不超过65℃；
132.所述步骤11)中，制粒辅料为终浓度为100g/l的果糖浆、100g/l的β-环糊精，20g/l的cmc-na粘合剂。
133.对比例1
134.不含有酶解过程，直接醇提，其他同实施例2。
135.对比例2
136.不含有醇提过程，直接水提，其他同实施例2。
137.对比例3
138.不含有水提过程，其他同实施例2。
139.测试例1
140.分别收集实施例2和对比例1-3制备的野山菌提取物，测定其重量以及每g产物中代表性的神经酰胺以及腺苷的含量，反映提取物的浓度和质量。
141.其测试方法按照hplc法，对照标准品进行。
142.结果见图2、图3、图4。
143.表1提取物重量以及神经酰胺以及腺苷的含量
[0144][0145]
由上述数据可见，本发明所述的野山菌提取物的制备方法，通过酶解，醇提、水提以及大孔树脂浓缩特定成分的步骤，充分的提取并浓缩野山菌中的有效成分。
[0146]
测试例2
[0147]
美白能力测试，以业界通用的酪氨酸酶抑制能力作为标准。
[0148]
实验过程：
[0149]
96孔板中加入浓度为2.0mmol/l的l-酪氨酸180ul，再分别加入1、2、4、6、8、10mg实施例2以及对比例1-3所得野山菌提取物，吹打混匀，30℃保温10min。加入酪氨酸酶溶液10ul，摇匀。30℃保温条件下，475nm处每隔1min测试吸光度值，共测试25min。根据酶促动力学曲线，得出样品组的斜率a1，和空白组斜率a0，抑制率计算公式为
[0150]
抑制率(％)＝1-a1/a0[0151]
经过计算，抑制率如下表2和图5所示。
[0152]
表2酪氨酸酶抑制率
[0153] 酪氨酸酶抑制率(％)实施例255.6对比例127.8对比例231.3对比例334.2
[0154]
结果显示，本发明所述的野山菌提取物的酪氨酸酶抑制能力为55.6％，相比对比例证明其具有较好的美白能力。
[0155]
测试例3
[0156]
制备成护肤品后进行主观评测
[0157]
取实施例2以及对比例1-3制备的野山菌提取物制备成护肤品霜进行测试，制备过程如下：
[0158]
原料按重量份如下：水100g、野山菌提取物8g、植物精油15g、卵磷脂12g、琼脂15g、甘油15g；
[0159]
上述护肤品的制备方法包括以下步骤：
[0160]
s1.按比例称取野山菌提取物、超纯水、植物精油、卵磷脂和琼脂；
[0161]
s2.将超纯水和琼脂一起放入玻璃烧杯中，静置20分钟，然后倒入植物精油；
[0162]
s3.在金属锅中放入适量的水，放入烧杯，隔水加热至60-70℃，至琼脂完全融化；
[0163]
s4.将烧杯从金属锅中拿出，缓慢倒入甘油，搅拌几分钟，使烧杯的温度保持在50-60℃；
[0164]
s5.将卵磷脂滴入烧杯中，倒入过程中不可搅拌；
[0165]
s6.继续搅拌，直到烧杯完全冷却至常温，得到泛白的乳霜状护肤品。
[0166]
主观测试：
[0167]
选取100位20-40岁女性志愿者，随机分成5组，每组20人，分别为实施例2组，对比例1-3组，以及阳性对照组(使用市场销售的普通美白面霜)，每日早晚各涂抹脸部一次，经过1个月使用，邀请其对使用效果进行打分，很不满意1分，不满意2分，普通3份，满意4分，非常满意5分，累加后做成表3以及图6，为护肤品使用满意度得分表。
[0168]
表3护肤品使用满意度得分表
[0169] 实施例2对比例1对比例2对比例3阳性对照满意度打分8465687267
[0170]
由表3数据可知，使用本发明所述的野山菌提取物制备成的护肤品具有较好的使用满意度。
[0171]
上述实施例只是本发明的有限几种优选实施方式，其描述较为具体和详细，但并
不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。