一种杂芳环衍生物在制备治疗或预防恶病质药物中的应用的制作方法

一种杂芳环衍生物在制备治疗或预防恶病质药物中的应用
1.本发明要求享有于2022年8月19日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202211000234.7，名称为“一种杂芳环衍生物在制备治疗或预防恶病质药物中的应用”的在先申请的优先权。该在先申请的全文通过引用的方式结合于本发明中。
技术领域
2.本发明属于医药领域，具体涉及一种杂芳环衍生物在制备治疗或预防恶病质药物中的应用。


背景技术：

3.肿瘤恶病质是一种由肿瘤导致的消耗性综合征，并伴随进展性体重减轻及系统炎症，而进展性体重减轻主要是由脂肪组织及骨骼肌的消耗造成的，这种状况不能通过常规的营养补充完全逆转，并最终导致机体功能障碍和损伤[fearon et al,2011]。一般地，肿瘤患者不自主的体重减轻是由于热量摄入不足，不能满足增加的基础代谢，以及某些尚不明确的因素导致分解代谢大于合成代谢，产生的体内代谢失衡状态，又称肿瘤恶病质综合征，恶病质患者常常出现身体功能衰退，心理困扰、治疗不耐受以及死亡率增加[tuca et al,2013]。
[0004]
据统计，肿瘤恶病质影响着大约50％-80％的肿瘤患者，且约有20％的肿瘤患者死于恶病质。肿瘤恶病质的发生与肿瘤类型有关，在消化道肿瘤(如胃癌、胰腺癌、食管癌)患者中尤为常见。
[0005]
恶病质是一种多因素综合征，其主要特点包括骨骼肌和脂肪质量下降和系统性炎症反应[argiles et al,2014]，复杂的宿主一肿瘤间相互作用是导致体重下降的重要因素[anandavadivelan et al,2016]。其中，引起以上问题的关键物质就是蛋白质二硫键异构酶，又称脯氨酸4-羟化酶β亚基(p4hb)。
[0006]
p4hb作为蛋白质二硫键异构酶家族的一员，在体内发挥着多种作用：
[0007]
(1)p4hb的催化活性：p4hb是一个巯基-二硫键氧化还原异构酶，其活性位点a或a’结构域能够催化氧化、还原和异构化三类巯基-二硫键的交换反应。p4hb能够将底物中的巯基转化为二硫键状态，从而将底物氧化；也能够将底物中的二硫键转化为巯基状态，从而将底物还原；p4hb能够将巯基和二巯键重排，使得底物蛋白异构化，底物呈现不同异构形式的二硫键状态。由于二硫键的异构反应通常是蛋白质折叠的限速因子，因此，二硫键的异构反应是p4hb一个非常重要的功能[huth et al,1993；land et al,2003]。
[0008]
(2)p4hb的分子伴侣活性：分子伴侣目前在功能上被定义为一类不相关的蛋白质家族，其可协助体内其他含多肽结构的蛋白正确非共价组装，但是当它们执行其正常的生物学功能时，它们本身并不是这些组装结构的组成部分。p4hb的分子伴侣功能是在与gapdh的反应中检测发现的。由于gapdh中不存在二硫键，因此与异构酶的活性无关，p4hb通过以类似于伴侣蛋白的作用方式抑制其聚集，从而将gapdh折叠成活性状态[cai et a1,1994]。
[0009]
体内外研究发现，p4hb能够在人食管鳞癌组织以及在能够诱导食管鳞癌恶病质表
型的细胞系及其他能够诱导恶病质的细胞系胃腺癌、胰腺癌以及lewis肺腺癌分泌的外泌体中高表达；p4hb促进肌肉细胞凋亡和抑制肌肉细胞生长，即p4hb促进食管鳞癌恶病质骨骼肌降解表型。
[0010]
对于癌症合并恶病质的治疗，目前的治疗方式是补充营养加上药物治疗，如：高剂量黄体素、类固醇，以促进食欲、改善体质。2021年1月22日，以癌症恶病质为治疗对象的adlumiz得到批准。anamorelin是一种“胃饥饿素(ghrelin)受体激动剂”，其作用与体内肽胃饥饿素相同。从本质上讲，只能改善食欲，调节体质，不能解决持续性的脂肪和骨骼肌萎缩，“治标不治本”；而类固醇系抗炎药由于副作用强而难以长期使用。
[0011]
目前，临床尚没有针对肿瘤恶病质有效的药物干预方法。需要开发新的更有效的药物用于治疗肿瘤恶病质。


技术实现要素：

[0012]
为改善上述技术问题，本发明提供了一种式(i)所示的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗或预防恶病质药物中的应用；
[0013][0014]
其中，a选自无取代或任选被一个、两个或更多个ra取代的下列基团：c
6-14
芳基或5-14元杂芳基；每个ra相同或不同，彼此独立地选自h、卤素、c
1-12
烷基、c
1-12
烷氧基、卤代c
1-12
烷基、卤代c
1-12
烷氧基；
[0015]
x1选自n或ch；
[0016]
r1、r2相同或不同，彼此独立地选自h、无取代或任选被一个、两个或更多个rb取代的下列基团：c
1-12
烷基、c
3-12
环烷基、c
2-12
烯基、c
6-14
芳基或5-14元杂芳基；每个rb相同或不同，彼此独立地选自h、卤素、c
1-12
烷基、c
1-12
烷氧基、c
3-12
环烷基、卤代c
1-12
烷基、卤代c
1-12
烷氧基；
[0017]
每个r3相同或不同，彼此独立地选自h、卤素、c
1-12
烷基、c
1-12
烷氧基、c
3-12
环烷基、-c(＝o)-rc；rc选自nh2、oh、c
1-12
烷基、c
1-12
烷氧基、c
3-12
环烷基；n选自0、1、2、3或4。
[0018]
根据本发明的实施方案，a选自无取代或任选被一个、两个或更多个ra取代的c
6-10
芳基；每个ra相同或不同，彼此独立地选自h、f、cl、br、i、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
3-6
环烷基、卤代c
1-6
烷基；
[0019]
根据本发明的实施方案，a选自无取代或任选被一个、两个或更多个ra取代的下列基团：苯基、萘基；每个ra相同或不同，彼此独立地选自h、f、cl、-cf3、-chf2；
[0020]
根据本发明的实施方案，a选自
[0021][0022]
根据本发明的实施方案，r1为h；r2选自无取代或任选被一个、两个或更多个rb取代的下列基团：c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基、c
2-6
烯基、5-10元杂芳基；每个rb相同或不同，彼此独立地选自h、c
1-6
烷基、卤代c
1-6
烷基；
[0023]
根据本发明的实施方案，r1为h；r2选自无取代或任选被rb取代的下列基团：c
3-6
环烷基、c
2-6
烯基、恶唑基、异恶唑基；每个rb相同或不同，彼此独立地选自h、甲基、叔丁基、-cf3、-chf2；
[0024]
根据本发明的实施方案，r1为h；r2选自环丙基、环丁基、环烷基、乙烯基、
[0025]
根据本发明的实施方案，每个r3相同或不同，彼此独立地选自h、f、cl、br、i、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
3-6
环烷基、-c(＝o)-rc；rc选自nh2、oh、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基；n选自0、1或2；
[0026]
根据本发明的实施方案，每个r3相同或不同，彼此独立地选自h、甲氧基、-c(＝o)-nh2。
[0027]
根据本发明的实施方案，式(i)所示化合物选自如下结构：
[0028]
[0029]
[0030][0031]
根据本发明的实施方案，所述药学上可接受的盐为式(i)所示化合物与酸形成的盐，所述酸为甲磺酸、盐酸、醋酸、三氟乙酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、氢溴酸、磷酸、硫酸、三氟甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、1-萘磺酸、2-萘磺酸、乳酸、草酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、水杨酸、苯甲酸、苯乙酸或扁桃酸。
[0032]
根据本发明的实施方案，所述药物可以为p4hb抑制剂。
[0033]
根据本发明的实施方案，所述恶病质可以为与癌症相关的恶病质、与获得性免疫缺陷综合征(aids)相关的恶病质、与充血性心力衰竭(chf)相关的恶病质；与慢性肾病(ckd)相关的恶病质；与其他慢性疾病治疗相关的恶病质。
[0034]
根据本发明的实施方案，所述恶病质为肿瘤恶病质；所述肿瘤恶病质包括肿瘤组织导致的肌肉萎缩，肿瘤组织导致的脂肪减少，肿瘤组织导致的食欲降低，肿瘤组织导致的炎症反应，以及消化道相关癌症、肝癌和肺癌、结肠癌导致的肿瘤恶病质；如食管鳞癌恶病质骨骼肌降解。
[0035]
根据本发明的实施方案，所述恶病质为p4hb介导的恶病质。
[0036]
根据本发明的实施方案，所述恶病质为p4hb高表达的肿瘤恶病质。
[0037]
本发明还提供一种治疗或预防恶病质的药物组合物，包括式(i)所示的化合物或其药学上可接受的盐。
[0038]
根据本发明的实施方案，所述药物组合物还包括一种或多种药学上可接受的辅料。
[0039]
根据本发明的实施方案，所述药物组合物还可以进一步含有一种或多种另外的治疗剂。
[0040]
本发明提供一种治疗或预防恶病质的方法，包括给予患者治疗有效量的式(i)所示的化合物或其药学上可接受的盐。
[0041]
本发明还提供如下具体化合物：
[0042][0043]
有益效果
[0044]
本发明发现式(i)所示化合物或其药学上可接受的盐具有p4hb抑制活性，可以作为p4hb抑制剂用于制备治疗或预防肿瘤恶病质的药物，该化合物可以通过抑制p4hb使得p4hb基因表达下调，从而治疗或预防肿瘤恶病质。该化合物有望作为治疗食管鳞癌恶病质骨骼肌降解的药物。
附图说明
[0045]
图1为本发明化合物对kyse410肿瘤细胞内p4hb蛋白的蛋白免疫印迹图(gapdh为内参)。
[0046]
图2为化合物2和lenvatinib(化合物14)对kyse410肿瘤细胞内p4hb蛋白免疫印迹图(β-actin为内参)。
[0047]
图3为化合物2和lenvatinib(化合物14)对kyse410肿瘤细胞内p4hb蛋白的表达水平柱状图。
[0048]
图4为给予20mg/kg的化合物2，12天后，llc模型动物去瘤体重柱状图。
[0049]
图5为给予20mg/kg的化合物2，24天后，llc模型动物去瘤体重柱状图。
[0050]
图6为给予动物20mg/kg的化合物2，12天后，llc模型动物心、脾、肌肉及脂肪组织质量变化柱状图。
[0051]
图7为给予动物20mg/kg的化合物2，24天后，llc模型动物心、脾、肌肉及脂肪组织质量变化柱状图。
[0052]
图8为化合物2对异位接种了鼠源lewis肺癌细胞系llc肿瘤细胞的小鼠肿瘤中p4hb蛋白免疫印迹图(gapdh为内参)。
[0053]
图9为恶病质早期模型中，化合物2对异位接种了鼠源lewis肺癌细胞系llc肿瘤细胞的小鼠肿瘤中p4hb蛋白的表达水平的影响。
[0054]
术语定义与说明
[0055]
除非另有说明，本技术说明书和权利要求书中记载的基团和术语定义，包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中具体化合物的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。这样的组合和结合后的基团定义及化合物结构，应当被理解为本技术说明书和/或权利要求书记载的范围内。
[0056]
本技术通式定义中的术语“任选的”(或“任选地”、“任选”)意味着被零个、一个或多个取代基所取代的情形，例如“任选被一个、两个或更多个r取代”意味着可以不被r取代(无取代)或可以选择被一个、两个或更多个r取代。
[0057]“更多个”表示三个或三个以上。
[0058]
除非另有说明，本说明书和权利要求书记载的数值范围相当于至少记载了其中每一个具体的整数数值。例如，数值范围“1-12”相当于记载了数值范围“1-12”中的每一个整数数值，即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12。
[0059]
术语“c
1-12
烷基”应理解为表示具有1～12个碳原子的直链和支链烷基，“c
1-8
烷基”表示具有1、2、3、4、5、6、7、或8个碳原子的直链和支链烷基，“c
1-6
烷基”表示具有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链和支链烷基。所述烷基是例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基或1,2-二甲基丁基等或它们的异构体。
[0060]
术语“c
2-12
烯基”应理解为表示直连或支链的一价烃基，其包含一个或多个双键并且具有2～12个碳原子，优选“c
2-10
烯基”。“c
2-10
烯基”应理解为优选表示直连或支链的一价烃基，其包含一个或多个双键并且具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子，更优选“c
2-8
烯基”。“c
2-12
烯基”例如，具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子(即，c
2-10
烯基)，具有2、3、4、5、6、7或8个碳原子(即，c
2-8
烯基)。应理解，在所述烯基包含多于一个双键的情况下，所述双键可相互分离或者共轭。所述烯基是例如乙烯基、烯丙基、(e)-2-甲基乙烯基、(z)-2-甲基乙烯基、(e)-丁-2-烯基、(z)-丁-2-烯基、(e)-丁-1-烯基、(z)-丁-1-烯基、戊-4-烯基、(e)-戊-3-烯基、(z)-戊-3-烯基、(e)-戊-2-烯基、(z)-戊-2-烯基、(e)-戊-1-烯基、(z)-戊-1-烯基、己-5-烯基、(e)-己-4-烯基、(z)-己-4-烯基、(e)-己-3-烯基、(z)-己-3-烯基、(e)-己-2-烯基、(z)-己-2-烯基、(e)-己-1-烯基、(z)-己-1-烯基、异丙烯基、2-甲基丙-2-烯基、1-甲基丙-2-烯基、2-甲基丙-1-烯基、(e)-1-甲基丙-1-烯基、(z)-1-甲基丙-1-烯基、3-甲基丁-3-烯
基、2-甲基丁-3-烯基、1-甲基丁-3-烯基、3-甲基丁-2-烯基、(e)-2-甲基丁-2-烯基、(z)-2-甲基丁-2-烯基、(e)-1-甲基丁-2-烯基、(z)-1-甲基丁-2-烯基、(e)-3-甲基丁-1-烯基、(z)-3-甲基丁-1-烯基、(e)-2-甲基丁-1-烯基、(z)-2-甲基丁-1-烯基、(e)-1-甲基丁-1-烯基、(z)-1-甲基丁-1-烯基、1,1-二甲基丙-2-烯基、1-乙基丙-1-烯基、1-丙基乙烯基、1-异丙基乙烯基。
[0061]
术语“c
3-12
环烷基”应理解为表示饱和的一价单环、二环(如稠环、桥环、螺环)烃环或三环烷烃，其具有3～12个碳原子，优选“c
3-10
环烷基”，更优选“c
3-8
环烷基”。术语“c
3-10
环烷基”应理解为表示饱和的一价单环、双环(如桥环、螺环)烃环或三环烷烃，其具有3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子。所述c
3-10
环烷基可以是单环烃基，如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基或环癸基，或者是双环烃基如龙脑基、吲哚基、六氢吲哚基、四氢萘基、十氢萘基、二环[2.1.1]己基、二环[2.2.1]庚基、二环[2.2.1]庚烯基、6,6-二甲基二环[3.1.1]庚基、2,6,6-三甲基二环[3.1.1]庚基、二环[2.2.2]辛基、2,7-二氮杂螺[3,5]壬烷基、2,6-二氮杂螺[3,4]辛烷基，或者是三环烃基如金刚烷基。
[0062]
术语“3-14元杂环基”是指饱和的或不饱和的非芳族的环或环系，例如，其是4-、5-、6-或7-元的单环、7-、8-、9-、10-、11-或12-元的二环(如稠环、桥环、螺环)或者10-、11-、12-、13-、14-或15-元的三环环系，并且含有至少一个，例如1、2、3、4、5个或更多个选自o、s和n的杂原子，其中n和s还可以任选被氧化成各种氧化状态，以形成氮氧化物、-s(o)-或-s(o)
2-的状态。优选地，所述杂环基可以选自“3-10元杂环基”。术语“3-10元杂环基”意指饱和的或不饱和的非芳族的环或环系，并且含有至少一个选自o、s和n的杂原子。所述杂环基可以通过所述碳原子中的任一个或氮原子(如果存在的话)与分子的其余部分连接。所述杂环基可以包括稠合的或桥连的环以及螺环的环。特别地，所述杂环基可以包括但不限于：4元环，如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基；5元环，如四氢呋喃基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基；或6元环，如四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、二噻烷基、硫代吗啉基、哌嗪基或三噻烷基；或7元环，如二氮杂环庚烷基。任选地，所述杂环基可以是苯并稠合的。所述杂环基可以是双环的，例如但不限于5,5元环，如六氢环戊并[c]吡咯-2(1h)-基环，或者5,6元双环，如六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1h)-基环。杂环基可以是部分不饱和的，即它可以包含一个或多个双键，例如但不限于二氢呋喃基、二氢吡喃基、2,5-二氢-1h-吡咯基、4h-[1,3,4]噻二嗪基、1,2,3,5-四氢噁唑基或4h-[1,4]噻嗪基，或者，它可以是苯并稠合的，例如但不限于二氢异喹啉基。
[0063]
术语“c
6-14
芳基”应理解为优选表示具有6～14个碳原子的一价芳香性或部分芳香性的单环、二环(如稠环、桥环、螺环)或三环烃环，其可以是单芳族环或稠合在一起的多芳族环，优选“c
6-10
芳基”。术语“c
6-14
芳基”应理解为优选表示具有6、7、8、9、10、11、12、13或14个碳原子的一价芳香性或部分芳香性的单环、双环或三环烃环(“c
6-14
芳基”)，特别是具有6个碳原子的环(“c6芳基”)，例如苯基；或联苯基，或者是具有9个碳原子的环(“c9芳基”)，例如茚满基或茚基，或者是具有10个碳原子的环(“c
10
芳基”)，例如四氢化萘基、二氢萘基或萘基，或者是具有13个碳原子的环(“c
13
芳基”)，例如芴基，或者是具有14个碳原子的环(“c
14
芳基”)，例如蒽基。当所述c
6-20
芳基被取代时，其可以为单取代或者多取代。并且，对其取代位点没有限制，例如可以为邻位、对位或间位取代。
[0064]
术语“5-14元杂芳基”应理解为包括这样的一价单环、二环(如稠环、桥环、螺环)或
三环芳族环系：其具有5～14个环原子且包含1-5个独立选自n、o和s的杂原子，例如“5-10元杂芳基”。术语“5-14元杂芳基”应理解为包括这样的一价单环、双环或三环芳族环系：其具有5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个环原子，特别是5或6或9或10个碳原子，且其包含1-5个，优选1-3各独立选自n、o和s的杂原子并且，另外在每一种情况下可为苯并稠合的。“杂芳基”还指其中杂芳族环与一个或多个芳基、脂环族或杂环基环稠合的基团，其中所述连接的根基或点在杂芳族环上。
[0065]
术语“卤素”表示氟、氯、溴和碘。
[0066]
本领域技术人员可以理解，式(i)所示化合物可以以各种药学上可接受的盐的形式存在。如果这些化合物具有碱性中心，则其可以形成酸加成盐；如果这些化合物具有酸性中心，则其可以形成碱加成盐；如果这些化合物既包含酸性中心(例如羧基)又包含碱性中心(例如氨基)，则其还可以形成内盐。
[0067]
术语“患者”是指包括哺乳动物在内的任何动物，优选小鼠、大鼠、其它啮齿类动物、兔、狗、猫、猪、牛、羊、马或灵长类动物，最优选人。
[0068]
术语“治疗有效量”是指研究人员、兽医、医师或其它临床医师正在组织、系统、动物、个体或人中寻找的引起生物学或医学反应的活性化合物或药物的量，它包括以下一项或多项：(1)预防疾病：例如在易感染疾病、紊乱或病症但尚未经历或出现疾病病理或症状的个体中预防疾病、紊乱或病症。(2)抑制疾病：例如在正经历或出现疾病、紊乱或病症的病理或症状的个体中抑制疾病、紊乱或病症(即阻止病理和/或症状的进一步发展)。(3)缓解疾病：例如在正经历或出现疾病、紊乱或病症的病理或症状的个体中缓解疾病、紊乱或病症(即逆转病理和/或症状)。
具体实施方式
[0069]
下文将结合具体实施例对本发明的技术方案做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。
[0070]
除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。
[0071]
本发明式(i)所示的已公开化合物的制备参考申请人的在先申请wo2020186812a1和cn109553581a。其余化合物的制备过程如方案1所述。
[0072]
化合物14(lenvatinib)和阳性参考化合物ccf642购于mce(medchemexpress)，ccf642结构如下所示。
[0073][0074]
方案1本发明化合物1、3、4、5、6、7、8的制备
[0075]
本发明化合物的合成总路线如下所示：
[0076][0077]
制备例1化合物1(1-环丙基-3-(3-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)苯基)脲)的制备
[0078][0079]
(1)中间体3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基]苯胺的制备
[0080]
向1000ml反应瓶中加入4-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉22.4g(100mmol)、naoh4.8g(120mmol)和200ml二甲基亚砜混合搅拌，取间氨基苯酚10.9g(100mmol)溶于150ml二甲基亚砜，滴加到上述反应液中，滴加完毕后，将温度升至60℃，搅拌反应3小时，反应停止后冷却至室温，将反应液倒入2000ml水中，充分搅拌后析出固体，抽滤，滤饼用无水乙醇打浆，抽滤，干燥，得到近白色固体12.8g，即为中间体3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基]苯胺，收率43.3％。
[0081]
esi-ms(m/z)：298[m+h]
+
。
[0082]
(2)中间体环丙基氨基甲酸苯酯的制备：
[0083]
向100ml反应瓶中加入环丙胺0.85g(15mmol)，吡啶1.42g(18mmol)和20ml四氢呋喃混合搅拌，将氯甲酸苯酯2.81g(18mmol)缓慢地滴加到上述反应液中，滴加完毕，将反应液在室温下搅拌反应1小时。反应停止后将反应液倒入100ml水中，充分搅拌后析出固体，抽滤，干燥，得到白色固体2.38g，即为中间体环丙基氨基甲酸苯酯，收率90.2％。
[0084]
esi-ms(m/z)：178[m+h]
+
。
[0085]
(3)1-环丙基-3-(3-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)苯基)脲(化合物1)的制
备：
[0086]
将制备得到的中间体3-[(6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基]苯胺1.03g(3.5mmol)溶于15ml乙腈，另取制备得到的中间体环丙基氨基甲酸苯酯0.92g(5.25mmol)溶于5ml乙腈，加到上述反应液中，加热至70℃搅拌反应，再缓慢加入三乙胺0.39g(3.85mmol)，滴加完毕，反应2小时。反应停止后将反应液倒入100ml水中，充分搅拌后析出固体，抽滤，滤饼用乙醇洗涤2次，干燥，得到固体1.06g，即为1-环丙基-3-(3-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)苯基)脲(化合物1)，收率80％。
[0087]1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ8.55(s,1h),8.46(s,1h),7.53(d,j＝7.5hz,2h),7.37(s,1h),7.31(t,j＝8.1hz,1h),7.23
–
7.17(m,1h),6.83(ddd,j＝8.1,2.4,1.0hz,1h),6.43(d,j＝2.8hz,1h),3.98(d,j＝7.0hz,6h),2.55
–
2.51(m,1h),0.62(td,j＝6.9,4.7hz,2h),0.44
–
0.35(m,2h).
[0088]
esi-ms(m/z)：381[m+h]
+
。
[0089]
制备例2化合物3(1-环丙基-3-(5-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-基)脲)的制备
[0090][0091]
(1)中间体5-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-胺的制备
[0092]
向1000ml反应瓶中加入4-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉20.0g(89.3mmol)、naoh4.3g(107mmol)和二甲基亚砜200ml混合搅拌，取1-氨基-5萘酚14.2g(89.3mmol)溶于150ml二甲基亚砜，滴加到上述反应液中，滴加完毕后，将温度升至60℃，搅拌反应6小时。反应停止后冷却至室温，将反应液倒入1000ml水中，充分搅拌后析出固体，抽滤，滤饼用无水乙醇打浆，抽滤，干燥，得到近白色固体19.3g，即为中间体5-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-胺，收率62.4％。
[0093]
esi-ms(m/z)：348[m+h]
+
。
[0094]
(2)中间体环丙基氨基甲酸苯酯的制备：
[0095]
向100ml反应瓶中加入环丙胺0.85g(15mmol)，吡啶1.42g(18mmol)和20ml四氢呋喃混合搅拌，将氯甲酸苯酯2.81g(18mmol)缓慢地滴加到上述反应液中，滴加完毕，将反应液在室温下搅拌反应1小时。反应停止后将反应液倒入100ml水中，充分搅拌后析出固体，抽滤，干燥，得到白色固体2.38g，即为中间体环丙基氨基甲酸苯酯，收率90.2％。
[0096]
esi-ms(m/z)：178[m+h]
+
。
[0097]
(3)1-环丙基-3-(5-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-基)脲(化合物3)的制备：
[0098]
将制备得到的中间体5-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-胺1.21g
(3.5mmol)溶于15ml乙腈，另取制备得到的中间体环丙基氨基甲酸苯酯0.92g(5.25mmol)溶于5ml乙腈，加到上述反应液中，加热至70℃搅拌反应，再缓慢加入三乙胺0.39g(3.86mmol)，滴加完毕，反应2小时。反应停止后将反应液倒入100ml水中，充分搅拌后析出固体，抽滤，滤饼用乙醇洗涤2次，干燥，得到固体1.43g，即为1-环丙基-3-(5-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-基)脲(化合物3)，收率95.0％。
[0099]1h nmr(500mhz,dmso)δ＝8.48(s,1h),8.43(s,1h),8.01(dd,j＝16.8,8.0,2h),7.74(s,1h),7.66
–
7.59(m,1h),7.48(d,j＝7.4,1h),7.45
–
7.37(m,3h),6.80(d,j＝2.7,1h),4.01(d,j＝2.6,6h),2.66
–
2.60(m,1h),0.69(d,j＝6.9,2h),0.57
–
0.39(m,2h).
[0100]
esi-ms(m/z)：431[m+h]
+
。
[0101]
制备例3化合物4(1-(5-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-基)-3-(5-甲基异恶唑-3-基)脲)的制备
[0102][0103]
(1)中间体(3-甲基异恶唑-5-基)氨基甲酸苯酯的制备
[0104]
向100ml反应瓶中加入3-甲基异恶唑-5-胺5g(51.3mmol)，吡啶5.08g(61.5mmol)和80ml四氢呋喃混合搅拌，将氯甲酸苯酯8g(51.3mmol)缓慢地滴加到上述反应液中，滴加完毕，将反应液在室温下搅拌反应3小时。反应停止后减压浓缩除去四氢呋喃，加入100ml水，转移至分液漏斗中，乙酸乙酯萃取(100ml
×
3)，收集有机层，干燥，旋干，得到白色粉末6.25g，即为中间体(3-甲基异恶唑-5-基)氨基甲酸苯酯，收率55.90％。
[0105]
esi-ms(m/z)：219[m+h]
+
。
[0106]
(2)1-(5-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-基)-3-(5-甲基异恶唑-3-基)脲(化合物4)的制备
[0107]
将制备得到的中间体5-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-胺2.0g(5.76mmol)溶于15ml乙腈，另取制备得到的中间体(3-甲基异恶唑-5-基)氨基甲酸苯酯1.26g(5.76mmol)溶于10ml乙腈，加到上述反应液中，加热至50℃搅拌反应，再缓慢加入三乙胺1.16g(8.06mmol)，滴加完毕，反应2小时。反应停止后将反应液倒入100ml水中，充分搅拌后析出固体，抽滤，滤饼用乙醇洗涤2次，干燥，得到固体2.14g，即为1-(5-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-基)-3-(5-甲基异恶唑-3-基)脲(化合物4)，收率78.8％。
[0108]1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ9.86(s,1h),9.13(s,1h),8.44(s,1h),8.06(dd,j＝17.7,8.1hz,2h),7.75(s,1h),7.70(t,j＝8.0hz,1h),7.54(t,j＝8.2hz,2h),7.49
–
7.40(m,2h),6.55(s,1h),4.02(d,j＝3.9hz,6h),2.39(s,3h).
[0109]
esi-ms(m/z)：472[m+h]
+
。
[0110]
制备例4化合物5(1-(5-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-基)-3-(5-叔丁
基异恶唑-3-基)脲)的制备
[0111][0112]
(1)中间体(3-叔丁基异恶唑-5-基)氨基甲酸苯酯的制备
[0113]
向100ml反应瓶中加入5-(叔丁基)异恶唑-3-胺2.10g(15mmol)，吡啶1.42g(18mmol)和20ml四氢呋喃混合搅拌，将氯甲酸苯酯2.81g(18mmol)缓慢地滴加到上述反应液中，滴加完毕，将反应液在室温下搅拌反应1小时。反应停止后减压浓缩除去四氢呋喃，加入100ml水，转移至分液漏斗中，乙酸乙酯萃取(100ml
×
3)，收集有机层，干燥，旋干，得到白色粉末3.50g，即为中间体(3-叔丁基异恶唑-5-基)氨基甲酸苯酯，收率89.8％。
[0114]
esi-ms(m/z)：261[m+h]
+
。
[0115]
(2)1-(5-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-基)-3-(5-叔丁基异恶唑-3-基)脲(化合物5)的制备
[0116]
将制备得到的中间体5-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-胺2.0g(5.76mmol)溶于15ml乙腈，另取制备得到的中间体(3-叔丁基异恶唑-5-基)氨基甲酸苯酯1.50g(5.76mmol)溶于15ml乙腈，加到上述反应液中，加热至70℃搅拌反应，再缓慢加入三乙胺1.16g(8.06mmol)，滴加完毕，反应3小时。反应停止后将反应液倒入100ml水中，充分搅拌后析出固体，抽滤，滤饼用乙醇洗涤2次，干燥，得到固体1.72g，即为1-(5-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-基)-3-(5-甲基异恶唑-3-基)脲(化合物4)，收率58.2％。
[0117]1h nmr(500mhz,dmso)δ9.91(s,1h),9.10(s,1h),8.44(s,1h),8.10
–
8.02(m,2h),7.75(s,1h),7.71(dd,j＝8.6,7.5hz,1h),7.54(t,j＝8.0hz,2h),7.48
–
7.43(m,1h),7.42(s,1h),6.52(s,1h),4.02(d,j＝4.0hz,6h),1.31(s,9h).
[0118]
esi-ms(m/z)：514[m+h]
+
。
[0119]
制备例5化合物6(1-环丙基-3-(7-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-基)脲)的制备
[0120][0121]
(1)中间体7-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-胺的制备
[0122]
向1000ml反应瓶中加入4-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉14.0g(62.3mmol)、naoh3.0g(75mmol)和二甲基亚砜200ml混合搅拌，取1-氨基-7-萘酚9.92g(62.3mmol)溶于100ml二甲基亚砜，滴加到上述反应液中，滴加完毕后，将温度升至60℃，搅拌反应5小时。反应停止后冷却至室温，将反应液倒入1000ml水中，充分搅拌后析出固体，抽滤，滤饼用无水乙醇打浆，抽滤，干燥，得到近白色固体15.5g，即为中间体7-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-胺，收率71.6％。
[0123]
esi-ms(m/z)：348[m+h]
+
。
[0124]
(2)1-环丙基-3-(7-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-基)脲(化合物6)的制备：
[0125]
将制备得到的中间体7-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-胺1.22g(3.5mmol)溶于15ml乙腈，另取制备得到的中间体环丙基氨基甲酸苯酯0.62g(3.5mmol)溶于5ml乙腈，加到上述反应液中，加热至70℃搅拌反应，再缓慢加入三乙胺0.39g(3.85mmol)，滴加完毕，反应2小时。反应停止后将反应液倒入100ml水中，充分搅拌后析出固体，抽滤，滤饼用乙醇洗涤2次，干燥，得到固体1.19g，即为1-环丙基-3-(7-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-基)脲(化合物6)，收率78.7％。
[0126]1h nmr(500mhz,dmso)δ＝8.54(s,1h),8.32(s,1h),8.03(dd,j＝11.8,8.3,2h),7.93(d,j＝2.0,1h),7.65(d,j＝6.2,2h),7.52
–
7.43(m,2h),7.41(s,1h),6.64(s,1h),4.00(d,j＝4.6,6h),2.58(tq,j＝6.9,3.6,1h),0.73
–
0.50(m,2h),0.50
–
0.28(m,2h).
[0127]
esi-ms(m/z)：431[m+h]
+
[0128]
制备例6化合物7(1-(7-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-基)-3-(5-甲基异恶唑-3-基)脲)的制备
[0129][0130]
将制备得到的中间体7-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-胺1.0g(2.88mmol)溶于15ml乙腈，另取制备得到的中间体(3-甲基异恶唑-5-基)氨基甲酸苯酯0.63g(2.88mmol)溶于5ml乙腈，加到上述反应液中，加热至50℃搅拌反应，再缓慢加入三乙胺0.58g(5.80mmol)，滴加完毕，反应12小时。反应停止后将反应液倒入100ml水中，充分搅拌后析出固体，抽滤，滤饼用乙醇洗涤2次，干燥，得到固体0.96g，即为1-(7-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-基)-3-(5-甲基异恶唑-3-基)脲(化合物7)，收率73.8％。
[0131]1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ9.65(s,1h),8.90(s,1h),8.55(s,1h),8.07(dd,j＝8.4,4.3hz,2h),7.98(d,j＝2.4hz,1h),7.77(d,j＝8.2hz,1h),7.65(s,1h),7.58
–
7.51(m,2h),7.42(s,1h),6.55(s,1h),4.00(d,j＝3.2hz,6h),2.35(s,3h).
[0132]
esi-ms(m/z)：472[m+h]
+
。
[0133]
制备例7化合物8(1-(7-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-基)-3-(5-叔丁基异恶唑-3-基)脲)的制备
[0134][0135]
将制备得到的中间体7-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-胺1.21g(3.5mmol)溶于15ml乙腈，另取制备得到的中间体(3-叔丁基异恶唑-5-基)氨基甲酸苯酯0.91g(3.5mmol)溶于5ml乙腈，加到上述反应液中，加热至50℃搅拌反应，再缓慢加入三乙胺0.6g(5.76mmol)，滴加完毕，反应4小时。反应停止后将反应液倒入100ml水中，充分搅拌后析出固体，抽滤，滤饼用乙醇洗涤2次，干燥，得到固体1.27g，即为1-(7-((6,7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)萘-1-基)-3-(5-叔丁基异恶唑-3-基)脲(化合物8)，收率71.0％。
[0136]1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ9.70(s,1h),8.89(s,1h),8.55(s,1h),8.10
–
8.05(m,2h),7.99(d,j＝2.2hz,1h),7.77(d,j＝8.3hz,1h),7.65(s,1h),7.58
–
7.49(m,2h),7.42(s,1h),6.52(s,1h),4.00(d,j＝3.2hz,6h),1.28(s,9h).
[0137]
esi-ms(m/z)：514[m+h]
+
[0138]
实施例1 western blot法检测本发明化合物对kyse410肿瘤细胞内p4hb蛋白的表达水平的影响
[0139]
1.试验过程
[0140]
(1)人食管癌细胞kyse410总蛋白的提取
[0141]
①
种板：将生长至70-80％处于对数期的kyse410细胞消化成单个细胞悬液，接种到6孔板中，每孔2ml，置于37℃恒温培养箱中继续培养；
②
给药：培养24h后，kyse410细胞生长至70-80％后，分别加入浓度为1000nm的本发明化合物1、3、4、5、6、7、8及阳性对照物ccf642的培养液，继续培养24h；
③
蛋白提取：用移液枪将各孔的培养液弃去干净，用预冷的pbs润洗各孔细胞3遍，以吸取残留的培养液，在各孔加入50μl的裂解液(蛋白裂解液：pmsf：磷酸酶抑制剂＝100：1：2)。冰上用细胞刮充分刮去底壁细胞，将细胞刮液用移液枪移至1.5ml的离心管内，放入提前预冷至4℃的低温离心机，12000rpm、10min，小心将上清转移至干净的ep管中，所有操作均在冰上完成且速度尽量要快，以减少蛋白的降解。
[0142]
(2)蛋白质定量
[0143]
①
配制工作液：根据样品数量，将bca试剂与cu试剂按50:1的比例配制成适量的bca工作液，振荡混匀bca工作液，室温24h内稳定；
②
稀释标准蛋白：抽取bsa标准蛋白10μl，加入90μl pbs溶液中，振荡混匀使蛋白终浓度为0.5mg/ml。将稀释过的标准蛋白按0、2、4、6、8、12、16、20μl加入96孔板，然后每孔用pbs补足至20μl；
③
待测蛋白：将待测kyse410细胞蛋白按一定比例用pbs稀释后，每孔20μl分别加入96孔板内；
④
显色：每孔加200μl的bca工作液，37℃孵育30min。用全波段酶标仪测定样品在562nm处吸光度值，绘制标准曲线，根据
公式计算出蛋白浓度。将各组蛋白总浓度调整为一致，分装至离心管中，-80℃保存，以备后用。
[0144]
(3)sds-聚丙烯凝胶电泳
[0145]
①
蛋白变性：将提前分装好的蛋白从-80℃冰箱取出，按5
×
上样缓冲液与细胞总蛋白1:4的比例加入上样缓冲液，震荡混匀，放入沸水中煮5min，使蛋白充分变性，放冷使用；
②
制胶：首先根据所测蛋白的分子量制备不同浓度的分离胶，在板中加入4ml，加水封闭液面，待分离胶凝固，制备5％的浓缩胶，将水弃去，并尽量用滤纸吸干，加入浓缩胶直至液面与玻璃板上端相平，插梳子静置待胶凝固；
③
上样：待浓缩胶凝固后，拔去梳子，拔梳子时用力方向应与玻璃板垂直，调整上样体积，按每孔总蛋白70μg蛋白总量上样；
④
电泳：倒入1
×
电泳液，调整电压为80v，待溴酚蓝跑至分离胶时调节电压为120v，继续电泳至溴酚蓝下沿跑到分离胶下边缘，停止电泳；
⑤
转膜：电泳结束前30min，用转膜液浸泡海绵、滤纸。在电泳结束后选择目的条带，切胶，放入1
×
转膜液，剪与胶大小相应的膜放入转膜液中平衡15min左右，按红色板、2层海绵、3层滤纸、nc膜、胶、3层滤纸、2层海绵、黑色负极的顺序做成三明治(在此过程中应赶尽气泡，膜不能干)，放入转膜槽加入1
×
转膜液，200ma恒流转膜100min。转膜结束后用pbst洗膜，3
×
10min/次；
⑥
封闭：取1.0g的脱脂奶粉加入20ml pbst配置成5％的脱脂奶粉，杂交袋封闭nc膜，加入适量5％脱脂奶粉，37℃恒温孵育1h；
⑦
一抗孵育：小心取出pvdf膜，pbst溶液洗一次，分别加入配好的一抗p4hb(1:1000)，4℃冰箱孵育过夜；
⑧
二抗孵育：室温复温60min，用pbst洗三次，每次10min，加与一抗相应的二抗(1:20000)溶液，37℃孵育1h；
⑨
ecl显色：取出pvdf膜，pbst洗三次，每次10min，吸尽nc膜上多余的液体并放入孵育盒内，加入ecl显色液37℃避光显色，孵育15～30s后，取出pvdf膜并吸尽多余发光液，置于凝胶成像系统内，拍照并保存数据。
[0146]
2.试验结果
[0147]
由图1可以看出，与对照组(即空白对照，图1中显示为对照)相比，本发明化合物与ccf642均能下调人食管癌细胞kyse410中p4hb蛋白的表达，其中化合物4抑制能力较强。
[0148]
实施例2 western blot法检测不同浓度的本发明化合物2对kyse410食管癌细胞中p4hb蛋白表达的影响
[0149]
1.试验过程
[0150]
(1)人食管癌细胞kyse410总蛋白的提取
[0151]
①
种板：将生长至70-80％处于对数期的kyse410细胞消化成单个细胞悬液，接种到6孔板中，每孔2ml，置于37℃恒温培养箱中继续培养；
②
给药：培养24h后，kyse410细胞生长至70-80％后，分别加入浓度为1nm、10nm、100nm、1000nm的化合物2及10nm的lenvatinib的培养液，继续培养24h；
③
蛋白提取：用移液枪将各孔的培养液弃去干净，用预冷的pbs润洗各孔细胞3遍，以吸取残留的培养液，在各孔加入50μl的裂解液(蛋白裂解液：pmsf：磷酸酶抑制剂＝100：1：2)。冰上用细胞刮充分刮去底壁细胞，将细胞刮液用移液枪移至1.5ml的离心管内，放入提前预冷至4℃的低温离心机，12000rpm、10min，小心将上清转移至干净的ep管中，所有操作均在冰上完成且速度尽量要快，以减少蛋白的降解。
[0152]
(2)蛋白质定量
[0153]
具体操作同实施例1。
[0154]
(3)sds-聚丙烯凝胶电泳
[0155]
具体操作同实施例1。
[0156]
2.试验结果
[0157]
从图2和图3可以看出，与对照组(即空白对照，图2中显示为对照)相比，不同浓度的化合物2(1、10、100、1000nm)剂量组与lenvatinib(化合物14，10nm)组的p4hb蛋白表达程度均有不同程度的降低，且化合物2对p4hb蛋白的抑制作用具有一定的剂量依赖性，差异有统计学意义(p＜0.05或p＜0.01)。
[0158]
实施例3本发明化合物对小鼠异位接种lewis肺癌细胞系llc造成肿瘤恶病质的药效学试验
[0159]
1.方法：
[0160]
给药制剂配制：根据动物最近体重、给药剂量计算所需供试品量；称取所需重量的供试品，依次加适量溶媒(10％dmso+20％hs15+70％水)溶解，加相应体积溶媒稀释得所需浓度的供试品溶液。
[0161]
选择51只雌性6-8周龄的c57bl/6小鼠，适应饲养5天后，依照体重选取12只分为两组：[a]空白对照组(24d)、[b]空白对照组(36d)。其余动物皮下异位接种鼠源lewis肺癌细胞系llc细胞，接种肿瘤细胞12天后，待肿瘤长至100mm3～300mm3时，根据体重和肿瘤大小挑选24只动物进行随机分成4组，分别为[c]模型对照组(24d)、[d]模型对照组(36d)、[e]化合物2-20(24d)、[f]化合物2-20(36d)。所有剂量组均采用等体积不等浓度经口每日单次灌胃给药，给药体积为10ml/kg。a/b/c/d给予相同体积的空白溶媒(dmso：hs15：水＝1：2：7)。给药频率为每天一次，a、c、e组连续给药12天，b、d、f组连续给药24天；检测指标包括：(1)一般状态观察：观察内容包括小鼠外观体征、一般行为活动、精神状态、呼吸状态、粪便性状、生殖器、死亡等情况；(2)体重；(3)肿瘤体积；(4)肿瘤重量。
[0162]
试验将模拟肿瘤恶病质分为早期(24d)和晚期(36d)，分别于接种肿瘤细胞24天和36天对相应组别的动物进行取材。主要指标为：
[0163]
1.荷瘤小鼠体重(m1)：a/c/e组于d24当天、b/d/f组于d36当天(以下均同此)，将小鼠体重称重记录m1[0164]
2.除瘤小鼠体重(m2)：取血后小鼠，剥离瘤块后(a、b组无需剥离)称取肿瘤重量m0，m2＝m
1-m0[0165]
3.按照顺序依次收取并称重双侧附睾白色脂肪、棕色脂肪(36d)、双侧股四头肌、双侧胫骨前肌、双侧比目鱼肌、双侧腓肠肌、脾脏和心脏。将胫骨前肌于4％多聚甲醛中固定保存，其余组织均被置于-80℃冰箱中冻存。
[0166]
试验利用western blot方法对动物肿瘤中恶病质相关蛋白脯氨酰-4羟化酶β亚基(p4hb)进行检测。
[0167]
具体分组信息见下表：
[0168][0169]
2.试验结果：
[0170]
(1)一般状态观察
[0171]
在给药期间，各组体重在给药期间上下波动保持平稳。
[0172]
(2)肿瘤体积
[0173]
模型对照组小鼠肿瘤体积在试验期间呈明显增大的趋势，化合物2-20(24d)组、化合物2-20(36d)组中肿瘤体积保持稳步增长。
[0174]
(3)体重和各组织及指标
[0175]
去瘤体重和各组织质量见下表和图4-7
[0176]
llc模型中各组小鼠去瘤体重和各组织质量
[0177][0178]
由上表可见：
[0179]
持续24天的造模(早期模型)可使动物的附睾白色脂肪、股四头肌、腓肠肌、比目鱼肌质量显著降低，而20mg/kg的化合物2可显著逆转附睾白色脂肪和比目鱼肌的萎缩。
[0180]
持续36天的造模(晚期模型)可使动物的去瘤体重、棕色脂肪、附睾白色脂肪、股四头肌、胫骨前肌、腓肠肌、比目鱼肌质量显著降低，而20mg/kg的化合物2可显著逆转这些指标。
[0181]
从图5可以看出，在晚期模型中与模型对照组(未给药)相比，给予20mg/kg的化合物2可显著改善这些指标。试验表明20mg/kg的化合物2可显著改善llc致肿瘤恶病质的相关体征。
[0182]
(4)p4hb蛋白的表达
[0183]
图8、9为化合物2对异位接种了鼠源lewis肺癌细胞系llc肿瘤细胞的小鼠肿瘤中p4hb蛋白的表达水平的影响。从中可以看出，早期模型中，与模型组相比，给予动物20mg/kg的化合物2可显著降低动物肿瘤中恶病质相关蛋白p4hb的表达。
[0184]
结论：
[0185]
早期模型中，造模可使恶病质相关指标如脂肪质量、主要肌肉质量显著降低，给予20mg/kg的化合物2可显著改善这些指标，特别是对恶病质相关蛋白的过表达有降低作用；晚期模型中，造模可使动物恶病质相关指标如去瘤体重、脂肪质量、肌肉质量显著降低，而给予20mg/kg的化合物2可显著改善这些指标。试验表明20mg/kg的化合物2可显著改善llc致肿瘤恶病质的相关体征。
[0186]
以上对本发明技术方案的实施方式进行了示例性的说明。应当理解，本发明的保护范围不拘囿于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，本领域技术人员所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本技术权利要求书的保护范围之内。