涉及CAR工程化T细胞和细小病毒H-1的癌症疗法的制作方法

背景技术：

1、多年来，癌症治疗基于手术、化疗和放射，最近基于靶向疗法。尽管这些方法有助于改善效果，但是大多数恶性肿瘤仍然有不良预后。靶向抗癌方法提供个性化的疗法来降低大多数恶性肿瘤的复杂性并提高成功概率。当前，使用患者免疫系统的力量来对抗疾病的免疫疗法越来越受到关注。癌症免疫疗法的一种方法是对患者的t细胞进行基因工程化，以表达识别和攻击肿瘤细胞的嵌合抗原受体(car)。该car包含抗体或与铰链区融合的源于配体的靶向胞外域、跨膜结构域和胞内t细胞信号传导结构域。当由t细胞表达时，car为抗原授予由靶向结构域确定的特异性。与以主要组织相容性复合物(mhc)依赖性方式识别抗原的常规t细胞受体(tcr)相比，car可能能够将t细胞的效应子功能重新定向到在细胞表面上表达任何蛋白或非蛋白靶标。该策略由此避免靶细胞的抗原处理和呈现的需求，并且适用于非典型t细胞靶标。绕过人mhc限制使car-t细胞方法成为一种普遍的治疗方法，拓宽了过继t细胞疗法的潜在适用性。

2、四代car正在临床前研究和正在进行的临床研究中进行调研(mirzaei等人，frontiers in immunology 2017，第8卷，art.1850)。car“代”通常是指包含在受体分子中的胞内信号传导结构域。第一代car仅包括cd3ζ作为胞内信号传导结构域；第二代car包括除了cd3ζ之外的单个共刺激结构域，诸如cd28、4-1bb(cd137)、cd27或ox40；第三代car包含cd3ζ和两个共刺激结构域，诸如cd28、4-1bb或其他共刺激分子(参考图3)。car可以进一步通过引入额外的基因来操纵，包括编码强效抗肿瘤细胞因子的那些基因，(例如，il-12和ii-15)或共刺激配体(例如，4-1bbl)，因此产生“铠装”第四代car t细胞(maus等人，blood2014,123(1),2625-2635；pegram等人，cancer j.2014,20(2):127)。

3、被开发用于治疗b细胞白血病和淋巴瘤的靶向b细胞受体相关蛋白cd19的嵌合抗原受体是迄今为止临床测试最多的。cd19-car t细胞疗法在多个采用不同治疗设计的机构中取得了很大进展，导致了这种过继免疫疗法的成功商业化。两种cd19靶向car-t细胞产品，诺华(美国新泽西州东汉诺威)的(替沙来塞)和凯特制药(美国加利福尼亚州圣莫尼卡)的(阿基仑赛)，已于2017年被美国fda批准分别用于治疗b细胞急性淋巴细胞白血病(b-all)和弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)。car-t细胞疗法在患有复发且通常难治性疾病的儿童及青壮年中已经取得了非凡的效果，完全应答(cr)率为70-90％(cummins等人，leuk.lymphoma 2017,1-15)。在淋巴瘤和其他b细胞恶性肿瘤中，car t细胞疗法是有效的，同时显示出较低的cr率，约55％(cummins等人，leuk.lymphoma 2017,1-15)。fda批准的两种car都特异性结合cd19，cd19是一种抗原，其很好地作为血液恶性肿瘤的靶标工作，因为它在恶性细胞上几乎均匀表达并且出现在所有b细胞上，包括健康的和恶性的细胞。因此，cd19-car-t细胞治疗可引起b细胞发育不全，但是这种状况可以用静脉免疫球蛋白和密切感染监测来管理。

4、尽管用car-t细胞治疗血癌取得了进展，但是已经证实，实体瘤的治疗更加困难。car-t细胞疗法针对实体瘤的有限成功可能由于许多因素导致，包括：(i)大多数癌症中缺乏独特的肿瘤相关抗原(taa)；(ii)体外扩增的car-t细胞不能使随后的过继转移持久化和增殖；(iii)car-t细胞向肿瘤位点的低效转运；(iv)导致长出抗原阴性肿瘤变体的靶向抗原的异质表达；(v)缺乏存活因子和生长因子(例如，il-2)；(vi)存在免疫抑制分子和细胞；和(vii)代谢不良的肿瘤微环境(zhang等人，int.j.biol.sci.2016,12:718-729)。已经尝试了许多策略和方法来克服这些障碍，包括用敲除pd-1表达或分泌细胞因子/趋化因子武装car-t细胞，并将car-t细胞与检查点抑制剂联合使用(heczey等人，mol.ther.2017,25:2214-2224；rupp等人，sci.rep 2017,7:737；hedge等人，cancerimmunol.immunother.2017,66:1113-1121)。尽管做出了这些努力，但到目前为止，仍然没有car-t细胞被临床批准用于实体瘤治疗，但是一些临床研究正在进行中。

5、目的

6、因此，需要改进策略来提高car-t细胞治疗实体瘤的疗效。这些改进的策略可能涉及在施用给受试者时改善细胞的持久性、活性和/或增殖。

技术实现思路

技术特征：

1.一种药物组合，其包含(a)溶瘤病毒和(b)免疫细胞，特别是t细胞，所述免疫细胞被基因修饰以表达特异于癌细胞抗原的嵌合抗原受体(car)。

2.根据权利要求1所述的药物组合，其中所述溶瘤病毒为细小病毒h-1或选自以下项的相关啮齿动物细小病毒：luiii、小鼠微小病毒(mmv)、小鼠细小病毒(mpv)、大鼠微小病毒(rmv)、大鼠细小病毒(rpv)或大鼠病毒(rv)。

3.根据权利要求1所述的药物组合，其中所述癌细胞抗原选自以下项：间皮素、egfrviii、gd2、tn抗原、psma、psa、cd70、cd97、tag72、cd44v6、cea、ca125、epcam、kit、il-13ra2、leguman、gd3、cd171、il-l lra、psca、mad-ct-1、mad-ct-2、vegfr2、lewisy、cd24、pdgfr-β、ssea-4、叶酸受体α、erbb(例如，erbb2)、her2/neu、muc1、egfr、ncam、肝配蛋白b2、caix、lmp2、sle、hmwmaa、o-乙酰-gd2、叶酸受体β、tem1/cd248、tem7r、fap、豆荚蛋白、hpve6或e7、p16ink4a、ml-iap、cldn6、tshr、gprc5d、alk、多唾液酸、fos相关抗原、中性粒细胞弹性蛋白酶、trp-2、cyp1b1、精液蛋白17、β人绒毛膜促性腺激素、afp、甲状腺球蛋白、plac1、globoh、rage1、mn-ca ix、msi移码突变体、人端粒酶反转录酶、肠道羧酸酯酶、mut hsp 70-2、na-17、ny-br-1、upk2、havcr1、adrb3、panx3、ny-eso-1、gpr20、ly6k、or51e2、tarp或gfra4。

4.根据权利要求3所述的药物组合，其中所述癌细胞抗原为cea或ca125。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的药物组合，还包括选自以下项的一个或多个附加治疗剂：化疗剂、生物治疗剂、免疫原性剂、免疫刺激细胞因子和用基因编码免疫刺激细胞因子转染的细胞。

6.在用于治疗癌症的方法中使用的权利要求1至5中任一项中定义的药物组合。

7.根据权利要求6所述的用于所述用途的药物组合，其中所述溶瘤病毒和被基因修饰以表达特异于癌细胞抗原的嵌合抗原受体(car)的所述免疫细胞是按顺序施用的。

8.根据权利要求6或7所述的用于所述用途的药物组合，其中所述免疫细胞为t细胞。

9.根据权利要求6至8中任一项所述的用于所述用途的药物组合，其中所述用途为用于治疗实体瘤、血癌和/或致癌干细胞。

10.根据权利要求6至9中任一项所述的用于所述用途的药物组合，其中所述癌症为结肠癌、膀胱癌、肝癌、乳腺癌、肾癌、头颈鳞状细胞癌、肺癌、恶性黑素瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、脑癌、宫颈癌、肾细胞癌或胃癌。

11.根据权利要求6至10中任一项所述的用于所述用途的药物组合，其中所述溶瘤病毒和/或所述car免疫细胞通过瘤内给药或静脉给药来施用。

12.一种试剂盒，其包括第一容器、第二容器和药品说明书，其中所述第一容器包括至少一剂含有溶瘤病毒的药物组合，所述第二容器包括至少一剂免疫细胞，优选t细胞，所述免疫细胞被基因修饰以表达特异于癌细胞抗原的嵌合抗原受体(car)，并且所述药品说明书包括用于治疗患有癌症的个人的说明。

13.根据权利要求12所述的试剂盒，其中所述癌症为结肠癌、膀胱癌、肝癌、乳腺癌、肾癌、头颈鳞状细胞癌、肺癌、恶性黑素瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、脑癌、宫颈癌、肾细胞癌或胃癌。

14.一种抑制个人中的肿瘤抗原阳性细胞的增殖和/或活性的方法，其包括向所述个人提供治疗有效量的根据权利要求1至5中任一项所述的药物组合的步骤。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述药物组合的组分(a)和(b)通过瘤内给药或静脉给药来单独提供。

16.一种在用于在肿瘤微环境中增加th1型细胞因子、上调后迁移趋化因子和上调补性t细胞刺激白介素的方法中使用的溶瘤病毒。

17.根据权利要求16所述的用于所述用途的溶瘤病毒，其中所述溶瘤病毒为细小病毒h-1或选自以下项的相关啮齿动物细小病毒：luiii、小鼠微小病毒(mmv)、小鼠细小病毒(mpv)、大鼠微小病毒(rmv)、大鼠细小病毒(rpv)或大鼠病毒(rv)。

技术总结
本发明涉及用于涉及免疫疗法如适应性细胞疗法(例如，T细胞疗法)和溶瘤病毒(特别是细小病毒H‑1)的组合疗法的组合物、方法、用途和试剂盒，用于治疗患有癌症的受试者。该T细胞疗法包括表达重组受体如嵌合抗原受体(CAR)的细胞。在一些实施例中，癌症为实体瘤或血液恶性肿瘤。

技术研发人员：尼尔斯·哈拉马,德克·耶格尔,帕特里克·施密特
受保护的技术使用者：德国癌症研究中心
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15