抗EGFR抗体药物缀合物的制作方法

本技术涉及抑制bcl-xl的新型抗表皮生长因子受体(egfr)抗体药物缀合物(adc)，包括使用此类adc的组合物和方法，以及用于制备此类adc的方法。

背景技术：

1、人表皮生长因子受体(也称为her-1或erb-b1，并且在本文中称为“egfr”)是由c-erbb原癌基因编码的170kda的跨膜受体。(modjtahedi等人，br.j.cancer 73：228-235(1996)；herbst和shin，cancer 94：1593-1611(2002))。swissprot数据库条目p00533提供人egfr的序列。

2、通过egfr的配体结合触发关键细胞质残基和muc1的受体同型和/或异型二聚化和自身磷酸化。磷酸化的egfr激活复杂的下游信号级联。egfr的过表达已经在许多人恶性病状中被报道并且与患者的不良预后相关。(herbst和shin，cancer 94：1593-1611(2002)；以及modjtahedi等人，br.j.cancer 73：228-235(1996))。

3、抗体药物缀合物表示一类治疗剂，其包含经由化学接头与细胞毒性药物缀合的抗体。由于皮肤egfr表达和已知的egfr导向抗体的皮肤毒性，设计针对egfr的adc一直是具有挑战性的。抗egfr抗体和抗体-药物缀合物还描述于美国专利9,493,568号和美国专利申请公开2019/0343961号中，它们以引用的方式整体并入本文。第一代egfr adc是玛汀-迪妥昔珠单抗(depatuxizumab mafodotin)，其使用马来酰亚胺基己酰基接头和微管细胞毒素一甲基澳瑞他汀f(mmaf)。然而，接受玛汀-迪妥昔珠单抗(depatux-m)的患者已经经历了频繁的眼部副作用(例如，干眼、视力模糊、眼痛、畏光、角膜炎、角膜沉积和流泪)。

4、考虑到玛汀-迪妥昔珠单抗的眼部毒性，靶向egfr的第二代adc维汀-罗妥昔珠单抗(losatuxizumab vedotin)与不同的毒素缀合。此adc的抗体组分罗妥昔珠单抗是亲和成熟的，使得与玛汀-迪妥昔珠单抗相比，它对egfr(野生型和突变型两者)具有更高的亲和力。然而，相对高频率的输注反应需要早期关闭维汀-罗妥昔珠单抗1期试验。参见cleary等人，investigational new drugs 38，1483-1494(2020)。

5、因此，需要开发新的抗egfr adc，并且特别地，可选择性递送bcl-xl至靶癌细胞(例如，egfrviii表达细胞)的egfr adc表示重要的发现。

技术实现思路

1、一个方面涉及抗人表皮生长因子受体(hegfr)抗体药物缀合物，其包含缀合至抗体ab的式(i)的结构：

2、

3、其中ab是igg1抗hegfr抗体，其包含有包含如seq id no：1所阐述的氨基酸序列的重链和包含如seq id no：5所阐述的氨基酸序列的轻链；并且其中m是2。在实施方案中，该式(i)的结构通过该重链的c220(即，seq id no：1的c219)缀合至该抗体ab。在实施方案中，本公开提供了使用该抗egfr抗体药物缀合物治疗非小细胞肺癌的方法。在实施方案中，本公开提供了包含所述抗hegfr抗体药物缀合物的药物组合物。

4、另一个方面涉及抗人表皮生长因子受体抗体-药物缀合物，其包含缀合至抗体ab的式(ii)的结构：

5、

6、其中ab是igg1抗人表皮生长因子受体抗体，其包含有包含如seq id no：1所阐述的氨基酸序列的重链和包含如seq id no：5所阐述的氨基酸序列的轻链，并且其中m是2。在实施方案中，该式(ii)的结构通过该重链的c220(即，seq id no：1的c219)缀合至该抗体ab。在实施方案中，本公开提供了使用该抗egfr抗体药物缀合物治疗非小细胞肺癌的方法。在实施方案中，本公开提供了包含所述抗hegfr抗体药物缀合物的药物组合物。

7、另一个方面涉及抗人表皮生长因子受体抗体-药物缀合物，其包含缀合至抗体ab的式(iii)的结构：

8、

9、其中ab是igg1抗人表皮生长因子受体抗体，其包含有包含如seq id no：1所阐述的氨基酸序列的重链和包含如seq id no：5所阐述的氨基酸序列的轻链；并且其中m是2。在实施方案中，该式(iii)的结构通过该重链的c220(即，seq id no：1的c219)缀合至该抗体ab。在实施方案中，本公开提供了使用该抗egfr抗体药物缀合物治疗非小细胞肺癌的方法。在实施方案中，本公开提供了包含所述抗hegfr抗体药物缀合物的药物组合物。

10、另一个方面涉及一种产生抗体药物缀合物(adc)的方法，其包括将单克隆人igg1抗egfr抗体与包含以下结构(aaa)的合成子缀合的步骤：

11、

12、以形成抗体-药物缀合物，该抗体-药物缀合物包含缀合至该抗egfr抗体的药物-接头，其中该抗egfr抗体包含有包含如seq id no：1所阐述的氨基酸序列的重链和包含如seq id no：5所阐述的氨基酸序列的轻链。在实施方案中，药物-接头通过该重链的c220(即，seq id no：1的c219)缀合至该抗体。

13、另一个方面涉及一种用于制备根据式(i)的抗体药物缀合物(adc)的方法：

14、

15、其中ab是igg1抗人表皮生长因子受体抗体，其包含有包含如seq id no：1所阐述的氨基酸序列的重链和包含如seq id no：5所阐述的氨基酸序列的轻链；并且

16、m是2；

17、该方法包括：

18、用有效量的二硫化物还原剂处理缓冲水溶液中的抗体约16小时-24小时；

19、向该还原的抗体溶液中添加包含具有以下结构的合成子的二甲基乙酰胺的溶液：

20、

21、使反应进行以形成该adc；

22、其中如通过电子喷雾质谱所测量的，对于琥珀酰亚胺至琥珀酰胺的每次水解，质量偏移18±2amu；并且

23、其中该adc任选地通过疏水相互作用色谱法(hic)纯化。在实施方案中，缓冲水溶液是约ph 7.4的缓冲水溶液。在实施方案中，抗体用二硫化物还原剂在缓冲水溶液中在约4℃下处理约16小时-24小时。在实施方案中，将还原的抗体添加到包含合成子的二甲基乙酰胺溶液中，并且使反应进行约60分钟以形成adc。在实施方案中，在adc形成后，用约2当量的n-乙酰基-l-半胱氨酸淬灭反应。在实施方案中，该方法还包括用疏水相互作用色谱法(hic)纯化。在实施方案中，该方法还包括用ph缓冲液(诸如约8-9的ph缓冲液)水解琥珀酰亚胺。在实施方案中，该方法还包括用切向流过滤(tff)纯化。在实施方案中，接头-药物通过该重链的c220(即，seq id no：1的c219)缀合至该抗egfr抗体ab。

24、另一个方面涉及一种抗体-药物缀合物(adc)，其通过包括将单克隆人igg1抗egfr抗体与包含以下结构的合成子缀合的步骤的方法制备：

25、

26、其中该抗体包含有包含如seq id no：1所阐述的氨基酸序列的重链和包含如seqid no：5所阐述的氨基酸序列的轻链。在实施方案中，药物-接头通过该重链的c220(即，seqid no：1的c219)缀合至该抗egfr抗体。

27、另一个方面涉及一种用于制备根据式(i)的抗体药物缀合物(adc)的方法：

28、

29、其中ab是igg1抗人表皮生长因子受体抗体，其包含有包含如no：1所阐述的氨基酸序列的重链和包含如seq id no：5所阐述的氨基酸序列的轻链；并且

30、m是2；

31、该方法包括：

32、在约4℃下用有效量的二硫化物还原剂处理约ph 7.4的缓冲水溶液中的抗体约16小时-24小时；

33、使该还原的抗体溶液温热至环境温度；

34、向该还原的抗体溶液中添加包含具有以下结构的合成子的二甲基乙酰胺的溶液：

35、

36、使反应进行约60分钟以形成该adc；

37、用约2当量的n-乙酰基-l-半胱氨酸淬灭；

38、用疏水相互作用色谱法(hic)纯化；

39、用切向流过滤(tff)纯化；

40、用约8-9的ph缓冲液水解琥珀酰亚胺；以及

41、用切向流过滤(tff)纯化；

42、其中如通过电子喷雾质谱所测量的，对于琥珀酰亚胺至琥珀酰胺的每次水解，质量偏移18±2amu；并且

43、其中该adc任选地通过疏水相互作用色谱法纯化。在实施方案中，该接头-药物通过该重链的c220(即seq id no：1的c219)缀合至该抗egfr抗体。