强直性肌肉营养不良1型治疗药的制作方法

本发明有关强直性肌肉营养不良1型的治疗用医药组合物或治疗方法。

背景技术：

1、强直性肌肉营养不良1型(myotonic dystrophy type i，以下也简称为“dm1”)于成人为最多的肌肉疾病。dm1为于骨格肌、平滑肌以及眼球、心脏、内分泌系统、中枢神经系统影响的体染色体显性多脏器障碍，其症状为肌肉萎缩、肌力降低、肌强直(myotonia)、白内障、胰岛素抗性、性腺功能降低、心脏传导系统障碍、前秃、智能障碍等多元化。dm1的原因为肌强直蛋白激酶(dmpk)基因3’utr(3’侧非翻译区)的ctg重复序列异常伸长。特定的剪接调节因子结合于持有异常伸长的cug重复序列的转录产物(mrna)，结果导致正常剪接必要的剪接调节因子不足而引起剪接异常。

2、目前，虽以低分子化合物或核酸医药等各种方法进行dm1治疗药的开发(例如非专利文献1、2)，但现段阶尚无根本的治疗药，dm1的治疗主要停留在对症治疗。

3、[现有技术文献]

4、[专利文献]

5、[非专利文献1]nakamori et al.ann clin transl neurol.(2015)

6、[非专利文献2]overby et al.drug discov.today(2018)。

技术实现思路

1、[发明欲解决的课题]

2、本发明的课题为提供于治疗强直性肌肉营养不良1型(dm1)有效的医药组合物或方法。

3、[解决课题的手段]

4、已知五肽重复(ppr，pentatricopeptide repeat)蛋白质为包含重复由约35个胺基酸长所构成的ppr基序的蛋白质，1个ppr基序与1个碱基特异性或选择性结合。近年来，ppr基序鉴定为于发挥rna结合特性时作用的胺基酸，ppr基序的结构与标的碱基的关系明确时，继续开发利用ppr蛋白质的rna编集/改变技术(例如，wo2013/058404)。

5、本发明人等于探索可治疗dm1的新颖化合物/物质的结果发现通过利用经改变的ppr蛋白质，可治疗dm1。

6、本发明为以上述见解为基础，可具有以下特征。

7、[1]：一种医药组合物，为强直性肌肉营养不良1型治疗用的医药组合物，

8、前述医药组合物包含将与cug重复序列特异性结合的蛋白质编码的核酸，

9、与前述cug重复序列特异性结合的蛋白质至少含有6个由式1表示的30至38个胺基酸长的多肽构成的五肽重复(ppr)基序，

10、(helix a)-x-(helix b)-l   (式1)

11、(式1中：

12、helix a为12个胺基酸长的可形成α螺旋结构的部分，以式2表示，

13、a1-a2-a3-a4-a5-a6-a7-a8-a9-a10-a11-a12   (式2)

14、式2中，a1至a12各自独立地表示胺基酸；

15、x为不存在或为由1至9个胺基酸长构成的部分；

16、helix b为由11至13个胺基酸长所构成的可形成d螺旋结构的部分；

17、l为2至7个胺基酸长的以式3表示的部分；

18、lvii-lvi-lv-liv-liii-lii-li   (式3)

19、式3中，各胺基酸从c末端侧编码为“i”(-1)、“ii”(-2)，但，liii至lvii有不存在的情况)

20、前述各ppr基序中的a1、a4及lii的3个胺基酸的组合或a4、lii的2个胺基酸的组合由前述的各ppr基序选择使结合于c、u或g，据此而构成为前述蛋白质与前述cug重复序列特异性结合。

21、[2]：如[1]所述的医药组合物，其中，与前述cug重复序列特异性结合的蛋白质含有9至30个前述ppr基序。

22、[3]：如[2]所述的医药组合物，其中，与前述cug重复序列特异性结合的蛋白质包含12至24个前述ppr基序。

23、[4]：如[1]至[3]中任一项所述的医药组合物，其中，前述各ppr基序中的a1、a4及lii的3个胺基酸的组合为

24、作为ppr基序的标的的碱基为a(腺嘌呤)时，a1、a4及lii的3个胺基酸的组合依(a1、a4、lii)的顺序为(缬胺酸、苏胺酸、天冬酰胺酸)、(苯丙胺酸、丝胺酸、天冬酰胺酸)、(苯丙胺酸、苏胺酸、天冬酰胺酸)、(异白胺酸、天冬酰胺酸、天冬胺酸)或(苏胺酸、苏胺酸、天冬酰胺酸)；

25、作为ppr基序的标的的碱基为g(鸟嘌呤)时，a1、a4及lii的3个胺基酸的组合依(a1、a4、lii)的顺序为(麸胺酸、甘胺酸、天冬胺酸)、(缬胺酸、苏胺酸、天冬胺酸)、(离胺酸、苏胺酸、天冬胺酸)或(白胺酸、苏胺酸、天冬胺酸)；

26、作为ppr基序的标的的碱基为u(尿嘧啶)时，a1、a4及lii的3个胺基酸的组合依(a1、a4、lii)的顺序为(缬胺酸、天冬酰胺酸、天冬胺酸)、(异白胺酸、天冬酰胺酸、天冬酰胺酸)、(异白胺酸、天冬酰胺酸、天冬胺酸)、(异白胺酸、甲硫胺酸、天冬胺酸)、(苯丙胺酸、脯胺酸、天冬胺酸)或(酪胺酸、脯胺酸、天冬胺酸)；或

27、作为ppr基序的标的的碱基为c(胞嘧啶)时，a1、a4及lii的3个胺基酸的组合依(a1、a4、lii)的顺序为(缬胺酸、天冬酰胺酸、天冬酰胺酸)、(异白胺酸、天冬酰胺酸、天冬酰胺酸)、(缬胺酸、天冬酰胺酸、丝胺酸)或(异白胺酸、甲硫胺酸、天冬胺酸)。

28、[5]：如[1]至[3]中任一项所述的医药组合物，其中，前述各ppr基序中a4及lii的2个胺基酸的组合为

29、作为ppr基序的标的的碱基为a(腺嘌呤)时，a4及lii的2个胺基酸的组合依(a4、lii)的顺序为(苏胺酸、天冬酰胺酸)、(丝胺酸、天冬酰胺酸)或(甘胺酸、天冬酰胺酸)；

30、作为ppr基序的标的的碱基为g(鸟嘌呤)时，a4及lii的2个胺基酸的组合依(a4、lii)的顺序为(苏胺酸、天冬胺酸)或(甘胺酸、天冬胺酸)；

31、作为ppr基序的标的的碱基为u(尿嘧啶)时，a4及lii的2个胺基酸的组合依(a4、lii)的顺序为(天冬酰胺酸、天冬胺酸)、(脯胺酸、天冬胺酸)、(甲硫胺酸、天冬胺酸)或(缬胺酸、苏胺酸)；

32、作为ppr基序的标的的碱基为c(胞嘧啶)时，a4及lii的2个胺基酸的组合依(a4、lii)的顺序为(天冬酰胺酸、天冬酰胺酸)、(天冬酰胺酸、丝胺酸)或(白胺酸、天冬胺酸)。

33、[6]：如[1]至[5]中任一项所述的医药组合物，其中，

34、将与前述cug重复序列特异性结合的蛋白质编码的核酸整合到表现载体中。

35、[7]：如[1]至[5]中任一项所述的医药组合物，其中，

36、将与前述cug重复序列特异性结合的蛋白质编码的核酸整合到病毒载体中。

37、[8]：如[7]所述的医药组合物，其中，

38、前述病毒载体为对肌肉组织具有指向性的病毒载体。

39、[9]：如[8]所述的医药组合物，其中，

40、前述病毒载体为腺相关病毒(aav)载体、腺病毒载体、反转录病毒载体、慢病毒载体或单纯疱疹病毒载体。

41、[10]：如[9]所述的医药组合物，其中，

42、前述病毒载体为aav载体。

43、[11]：如[10]所述的医药组合物，其中，

44、前述aav载体为aav1载体、aav2载体、aav6载体、aav7载体、aav8载体、aav9载体、aav10载体、aav11载体或aav12载体。

45、[12]：一种表现载体，其包含将与[1]定义的cug重复序列特异性结合的蛋白质编码的核酸。

46、[13]：一种细胞，其包含[12]所述的表现载体。

47、[14]：一种蛋白质，为由[13]所述的细胞产生的与cug重复序列特异性结合的蛋白质。

48、[15]：一种病毒表现载体，其包含将与[1]定义的cug重复序列特异性结合的蛋白质编码的核酸。

49、[16]：一种细胞，其包含[15]所述的病毒表现载体。

50、[17]：一种病毒载体，为由[16]所述的细胞产生。

51、[18]：一种核酸的用途，为在制造强直性肌肉营养不良1型治疗用的医药中使用将[1]定义的与cug重复序列特异性结合的蛋白质编码的核酸。

52、[19]：一种强直性肌肉营养不良1型的治疗方法，

53、其包含于对象应用治疗上有效量的[1]所述的医药组合物的步骤。

54、另外，上述的一种或多种特征任意组合的发明也包含于本发明的范围。

55、[发明效果]

56、通过本发明可治疗或减轻强直性肌肉营养不良1型(dm1)的症状。