包含鸢尾来源的外排体作为活性成分的新的组合物的制作方法

本发明涉及包含来源于鸢尾的外排体作为活性成分的新的组合物，并且更具体地，涉及用于皮肤弹性改善、皮肤皱纹减少、皮肤再生、肤色改善、皮肤亮度改善、皮肤美白、抗炎、伤口愈合和/或加速伤口愈合的组合物，其包含来源于鸢尾的外排体作为活性成分。此外，本发明涉及包含所述组合物的用于皮肤弹性改善、皮肤皱纹减少、皮肤再生、肤色改善或皮肤亮度改善和/或皮肤美白的化妆品组合物，并且涉及包含所述组合物的用于抗炎、伤口愈合和/或加速伤口愈合的药物组合物。

背景技术：

1、已知皮肤衰老导致皮肤弹性降低和皮肤皱纹增多，并且已知由于胶原蛋白的合成降低和胶原酶基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，mmp)的受刺激表达而发生皮肤弹性降低和皮肤皱纹的形成。

2、另外，已知在皮肤细胞中，由于衰老渐进或紫外(uv)线，产生炎性细胞因子的酶cox-2增多，导致前列腺素e2(prostaglandin e2)的合成提高和炎症诱导物的产生提高。由于炎性反应，mmp的生物合成提高，导致胶原蛋白降解，并导致皮肤弹性降低和皮肤皱纹的形成。特别地，当日光和紫外线直接辐照到皮肤上时，会产生大量自由基，并且这些自由基可损害皮肤的抗氧化防御系统，从而增加皱纹、使皮肤松弛并加速皮肤衰老。已知有效减少皮肤皱纹的物质包括腺苷和视黄酸。然而，腺苷在临床实践中几乎没有效力，并且视黄酸不能用于妊娠女性并且具有副作用，例如红斑。

3、人皮肤颜色是由皮肤中黑素的浓度和分布决定的。在酪氨酸酶将酪氨酸转化为dopa和多巴醌之后，通过非酶促氧化反应合成黑素。当黑素过度产生时，会出现色素沉着，并随后在脸、颈、臂等处出现黄褐斑、斑点和雀斑，其不利于外观。尽管正在开发皮肤美白剂以改善黄褐斑、雀斑和肤色暗沉，但是很难开发出具有优异美白效果并且没有副作用的皮肤美白剂。例如，选择性地攻击产生黑素的黑素细胞的皮肤美白剂具有优异的美白效果，但是具有皮肤毒性的副作用。

4、炎症是机体针对物理或化学损伤，细菌、真菌或病毒感染，或者由多种变应原引起的病理状况等的防御应答。炎性应答显示为固有免疫应答的一部分。多种物质以及生理和化学现象参与炎性应答，并且最近的研究已表明，多种炎性细胞因子在炎性应答中发挥重要作用。参与炎性应答的主要细胞因子包括il-1β、tnf-α、il-6、il-8、il-12、ifn-β等。这些细胞因子的表达和分泌提高以及其激活与一系列复杂的生理应答相关，包括炎性介质的分泌、免疫细胞浸润、细胞迁移和组织破坏，以及症状，例如红斑、水肿、发热和疼痛。

5、一般而言，如果将感染原从机体中去除并使受损组织再生，则炎性应答不会成为一个显著的问题，并且受影响的区域会恢复至其正常状态。然而，如果未将感染原从机体中去除或者由于机体的内部物质，炎性应答过度或持续，则发生急性或慢性炎性疾病。非甾体抗炎药、甾体抗炎药、神经肽拮抗剂、cox抑制剂、抗组胺药和免疫抑制药物例如环孢素a用于减轻或治疗炎性应答或由此引起的炎性疾病，但是具有这样的问题：他们引起不良作用，例如皮肤萎缩、血管舒张、色素脱失、超敏反应、耐受、中性粒细胞减少等。另外，存在这样的限制：上述药物仅有助于将与炎症有关的症状控制至一定水平，而不是对其进行根本治疗。

6、最近，有报道称细胞分泌组(secretome)包含调节细胞行为的多种生物活性分子。特别地，细胞分泌组包含具有胞间信号传导功能的“外排体(exosome)”，并且因此已积极地对其组分和功能进行了研究。

7、细胞将多种膜囊泡脱落至其胞外环境，并且这些释放的囊泡通常称为胞外囊泡(extracellular vesicle，ev)。ev也被称为细胞膜来源囊泡、核外颗粒体(ectosome)、脱落囊泡、微粒、外排体等，并且在一些情况下也与外排体区别使用。

8、外排体是尺寸为数十至数百纳米的囊泡，其包含与细胞膜具有相同结构的磷脂双层膜。这种外排体包含被称为外排体载物(cargo)的蛋白质、核酸(mrna、mirna等)等。已知外排体载物包括范围广泛的信号传导因子，并且这些信号传导因子对细胞类型具有特异性并且根据分泌细胞的环境而受到不同调节。已知外排体是由细胞分泌的细胞间信号传导介质，并且通过其传递的多种细胞信号调节细胞行为，包括靶细胞的活化、生长、迁移、分化、去分化、凋亡和坏死。根据外排体所来源于的细胞的性质和状态，外排体包含特定的遗传物质和生物活性因子。来源于增殖中干细胞的外排体调节细胞行为例如细胞迁移、增殖和分化，并且概括了参与组织再生的干细胞的特征(nature review immunology 2002(2)569-579)。

9、也就是说，称为细胞的“化身”的外排体类似于细胞包含生物活性因子例如生长因子，并且充当在细胞间传递生物活性因子的载体，即用于介导细胞间的通讯。已知外排体不仅从动物细胞例如干细胞、免疫细胞、成纤维细胞和癌细胞中释放，而且还从多种生物体(例如植物、细菌、真菌和藻类)的细胞中释放。例如，外排体可从植物细胞或植物干细胞的培养基，以及癌细胞、免疫细胞、间充质干细胞等的培养基中分离。

10、然而，对来源于植物细胞或植物干细胞的外排体的分离、纯化和表征的研究仍然不足，并且这些研究中的大多数仅仅用于市场目的，在市场目的情况下，混合在植物汁液滤液中的胞外囊泡被简单地称为外排体。因此，需要对来源于植物细胞的外排体进行更详细的表征和功能性研究。

11、鸢尾(鸢尾属(iris sp.))是多年生草本植物，属于百合目和单子叶植物纲中的鸢尾科。鸢尾根据其种类而分布在不同的地区。例如，溪荪(iris nertschinskia)分布于韩国、日本、中国东北部和俄罗斯西伯利亚东部，并且原产于山脚下的干旱地区。在鸢尾提取物中，已经报道了基于异黄酮的物质表现出抗癌或抗炎作用，但是尚未清楚地确定鸢尾提取物的组分和作用机制。因此，有必要对鸢尾进行精确的组分分析，并对其药理作用机制进行科学研究。目前的技术仍停留在这样的水平：使用通过热水提取或溶剂提取鸢尾的花、叶、茎、根等获得的提取物作为化妆品成分。然而，溶剂提取物由于残留的提取溶剂而具有对人体具有毒性的问题。

12、最近，已经使用称为植物干细胞的愈伤组织对化妆品物质进行了研究。在这方面，已经引入了使用通过培养使鸢尾的花、叶等受损而诱导的愈伤组织获得的愈伤组织的培养基的技术，但是该技术还仅仅处于这样的水平：愈伤组织本身的培养基或通过将愈伤组织干燥并随后对经干燥的愈伤组织进行热水提取或溶剂提取而获得的提取物用作化妆品成分。此外，愈伤组织的培养基包含生长调节剂或诱导愈伤组织的物质，并因此几乎不被认为是天然的化妆品成分，并且培养基中包含的生长调节剂可引起副作用，例如皮肤问题。

13、本发明人已经发现来源于鸢尾的外排体在皮肤弹性改善、皮肤皱纹减少、皮肤再生、肤色改善、皮肤亮度改善、皮肤美白、抗炎、伤口愈合和/或加速伤口愈合方面是有效的，并且已经开发了用于皮肤弹性改善、皮肤皱纹减少、皮肤再生、肤色改善、皮肤亮度改善和/或皮肤美白的化妆品组合物，以及用于抗炎、伤口愈合和/或加速伤口愈合的药物组合物，其包含来源于鸢尾的外排体作为活性成分。

14、同时，应理解的是，作为背景技术描述的内容仅旨在帮助理解本发明的背景，并不被认为是针对本发明的现有技术。

技术实现思路

1、技术挑战

2、本发明的一个目的是提供用于皮肤弹性改善、皮肤皱纹减少、皮肤再生、肤色改善、皮肤亮度改善、皮肤美白、抗炎、伤口愈合和/或加速伤口愈合的组合物，其包含来源于鸢尾的外排体作为活性成分。

3、本发明的另一个目的是提供包含所述组合物的用于皮肤弹性改善、皮肤皱纹减少、皮肤再生、肤色改善、皮肤亮度改善和/或皮肤美白的化妆品组合物，以及包含所述组合物的用于抗炎、伤口愈合和/或加速伤口愈合的药物组合物。

4、然而，如上所述的本发明的目的是举例说明性的，并且本发明的范围不受此限制。另外，从以下描述、所附权利要求书和附图，本发明的其他目的和优点将变得更加明显。

5、技术方案

6、本发明提供了用于皮肤弹性改善、皮肤皱纹减少、皮肤再生、肤色改善、皮肤亮度改善、皮肤美白、抗炎、伤口愈合和/或加速伤口愈合的组合物，其包含来源于鸢尾的外排体作为活性成分。

7、本文中使用的术语“鸢尾”是指属于鸢尾属的植物。例如鸢尾属植物可以是玉蝉花(iris ensata)、香根鸢尾(iris pallida)、变色鸢尾(iris versicolor)、法国鸢尾(irisflorentina)、溪荪、黄花鸢尾(iris pseudacorus)、山鸢尾(iris setosa)、白花马蔺(irislactea)、德国鸢尾(iris germanica)或朝鲜鸢尾(iris odaesanensis)。

8、本文中使用的术语“外排体”是指从植物细胞分泌或释放到胞外空间中且具有膜结构的纳米尺寸的囊泡，并且还被称为外排体样囊泡或外排体样颗粒。

9、本文中使用的术语“皮肤弹性”是指其中当去除外力时，由外力引起的变形的皮肤容易恢复其原始形状的特征。术语“皮肤皱纹”是指由皮肤衰老引起的细纹。皮肤皱纹可由遗传因素、皮肤真皮中存在的胶原蛋白和弹性蛋白的减少、外部环境因素等引起。因此，本文中使用的术语“皮肤皱纹减少或改善”是指抑制或防止皮肤上皱纹的形成，或减少已经形成的皱纹。

10、同时，本文中使用的术语“肤色”是指皮肤颜色的暗或亮。本文中使用的术语“皮肤美白”包括提高由于色素(例如黑素)过量而亮度下降的皮肤的亮度，或将皮肤亮度保持在一定水平。

11、本文中使用的术语“抗炎”意指炎症的预防、抑制、减轻、改善或治疗。作为实例而非限制本发明，炎性疾病的一些实例包括皮炎、特应性皮炎、湿疹、由细菌、病毒或真菌感染引起的炎症、烧伤、由烧伤引起的炎症、伤口、由伤口引起的炎症等。

12、本文中使用的术语“伤口”意指其中机体的一部分或全部受到损伤的状况，并且旨在涵盖其中构成机体之内部或外部表面的组织(例如皮肤、肌肉、神经组织、骨、软组织、内部器官或血管组织)被损伤或破坏的病理状况。作为实例而非限制本发明，伤口的一些实例包括擦伤、撕裂伤、刺伤、切伤、撕脱伤、褥疮、由辐射导致的组织破坏、穿透伤、枪伤、烧伤、冻伤、手术伤口、整形手术之后的缝合伤口、由化学物质导致的伤口等，并且可包括对个体的任何部位的任何损伤。

13、本文中使用的术语“离子透入(iontophoresis)”是指这样的方法：使微电流流过已施加活性成分的皮肤，从而产生势差并改变皮肤的电环境，并因此使离子化的活性成分通过电斥力穿透皮肤。在本发明的一个实施方案中使用的离子透入的一些实例包括：通过使微电流从外部电源流入到皮肤上的电极贴片而将微电流引入到皮肤中的方法，所述微电流由外部电源产生；将微电流引入到皮肤中的方法，所述微电流由皮肤上的电极贴片中设置的电池产生；以及通过皮肤上设置有逆向电渗析装置的贴片将微电流引入到皮肤中的方法，所述微电流由逆向电渗析装置中的高浓度电解质溶液与低浓度电解质溶液之间的浓度差产生。然而，本发明不限于此，并且当然可使用多种类型的离子透入。

14、本文中使用的术语“来源于鸢尾的外排体”意在包括从例如鸢尾植物细胞的培养基、鸢尾愈伤组织的培养基、鸢尾植物干细胞的培养基、鸢尾汁、或与其等同的鸢尾生物溶液中分离的所有外排体，或者来源于(例如分泌或释放自)鸢尾的植物细胞或植物干细胞的所有外排体。

15、在根据本发明的一个实施方案的组合物中，来源于鸢尾的外排体可通过从鸢尾根来源的愈伤组织的培养基中分离并进行纯化获得。

16、根据本发明的一个实施方案的包含来源于鸢尾的外排体作为活性成分的组合物可以表现出皮肤弹性改善、皮肤皱纹减少、皮肤再生、肤色改善、皮肤亮度改善、皮肤美白、抗炎、伤口愈合和/或加速伤口愈合中的至少一种作用。

17、根据本发明的包含来源于鸢尾的外排体作为活性成分的组合物可以是化妆品组合物或药物组合物。

18、本发明提供了用于皮肤弹性改善、皮肤皱纹减少、皮肤再生、肤色改善、皮肤亮度改善和/或皮肤美白的化妆品组合物，其包含来源于鸢尾的外排体作为活性成分。例如，所述化妆品组合物可以是香波皂清洗剂含表面活性剂的清洁剂霜乳液软膏活肤水修护剂调理剂混悬剂乳剂糊剂凝胶剂油剂蜡剂喷雾剂气雾剂雾剂或粉，并且优选是乳液或霜。

19、本发明还提供了用于抗炎、伤口愈合和/或加速伤口愈合的药物组合物，其包含来源于鸢尾的外排体作为活性成分。

20、作为实例而非限制本发明，根据本发明的一个实施方案的药物组合物可通过注射、微针法、离子透入、涂敷或其组合来施用或进行治疗。例如，药物组合物可以是可注射制剂、输注制剂、喷雾制剂、液体制剂或贴剂制剂。

21、在本发明的一个实施方案中，当组合物用作药物组合物时，其可包含可药用载体、赋形剂或稀释剂。载体、赋形剂和稀释剂包括但不限于：乳糖、右旋糖、海藻糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、金合欢胶、藻酸类、明胶、磷酸钙、碳酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油。另外，根据本发明的一个实施方案的药物组合物的有效量意指为了实现抗炎、伤口愈合和/或加速伤口愈合的作用而需要施用的量。

22、制剂中根据一个实施方案的药物组合物的含量可根据如上所述的另外组分的种类、量、形式等适当地选择。例如，本发明的药物组合物可以以基于可注射制剂的总重量的约0.1wt％至99wt％、优选约10wt％至90wt％的量包含在内。此外，根据本发明的一个实施方案的药物组合物的合适剂量可根据以下进行调整：疾病的严重程度，制剂的类型，配制方法，患者的年龄、性别、体重、健康状况、饮食、排泄率，施用时间和施用方案。例如，当将根据本发明的一个实施方案的药物组合物施用于成人时，其可以以每天0.001mg/kg至100mg/kg的剂量施用一次至数次。

23、同时，在将根据本发明的一个实施方案的组合物制备成化妆品组合物时，可在不损害本发明效果的范围内根据需要适当地包含化妆品产品中通常使用的组分，例如，保湿剂、抗氧化剂、油性组分、uv吸收剂、乳化剂、表面活性剂、增稠剂、醇、粉组分、着色剂、水性组分、水和多种皮肤营养素等。

24、此外，在不损害效果(例如，皮肤弹性改善、皮肤皱纹减少、皮肤再生、肤色改善、皮肤亮度改善、皮肤美白、皮肤美容等)的范围内，根据本发明的一个实施方案的化妆品组合物除了来源于鸢尾的外排体之外还可包含现有技术中已经使用的用于改善皮肤状况的试剂、抗氧化剂、抗衰老剂、美白剂和/或保湿剂。

25、根据本发明的一个实施方案的化妆品组合物可以以多种形式使用，例如，贴剂片装面膜面膜巾霜、活肤水、软膏、混悬剂、乳剂、糊剂、乳液、凝胶剂、油剂、剥撕式面膜喷雾剂、气雾剂、雾剂、粉底粉和油纸

26、根据本发明的一个实施方案的化妆品组合物可用于皮肤弹性改善、皮肤皱纹减少、皮肤再生、肤色改善、皮肤亮度改善和/或皮肤美白的目的，并且可以被制备成本领域中通常制备的任何制剂。例如，其可被配制为：贴剂、片装面膜、面膜巾、皮肤软化剂营养品收敛乳液滋养霜按摩霜眼霜清洁霜精华眼部精华清洁乳液清洁泡沫清洁水防晒霜唇膏皂、香波、含表面活性剂的清洁剂、浴用制剂身体洗剂身体霜身体油身体精华身体清洁剂染发剂生发剂等，而不限于此。

27、根据本发明的一个实施方案的化妆品组合物可包含化妆品产品中通常使用的组分。例如，化妆品组合物可包含常规的辅料和载体，例如抗氧化剂、稳定剂、增溶剂、维生素、色素和香料。另外，根据化妆品组合物的类型或预期用途，本领域技术人员可毫无困难地适当选择化妆品组合物的每种制剂中的其他组分。

28、本发明的另一个实施方案提供了用于使用所述化妆品组合物来调节哺乳动物皮肤状况的非治疗目的的美容方法。在本发明的美容方法中，表述“调节皮肤状况”意指改善皮肤状况和/或预防性地调节皮肤状况，并且表述“改善皮肤状况”意指皮肤组织的外观和感觉的视觉上和/或触觉上可感知的积极变化。例如，表述“改善皮肤状况”可包括皮肤弹性改善、皮肤皱纹减少、皮肤再生、肤色改善、皮肤亮度改善和/或皮肤美白。

29、根据本发明的一个实施方案的美容方法包括：(a)将化妆品组合物直接施加至哺乳动物皮肤；或者(b)使贴剂、片装面膜或面膜巾与哺乳动物皮肤接触或附着至哺乳动物皮肤，所述贴剂、片装面膜或面膜巾具有向其施加或浸在其中的化妆品组合物；或者顺序进行(a)和(b)。在步骤(a)中，化妆品组合物可以是乳液或霜。

30、或者，根据本发明的一个实施方案的美容方法还可包括(c)：在步骤(b)之后从哺乳动物皮肤去除所述贴剂、片装面膜或面膜巾，以及将化妆品组合物施加至哺乳动物皮肤。在步骤(c)中，化妆品组合物可以是乳液或霜。

31、在根据本发明的一个实施方案的美容方法中，所述哺乳动物可以是人、狗、猫、啮齿动物、马、牛、猴或猪。

32、另外，本发明提供了用于治疗炎症、使伤口愈合或加速伤口愈合的方法，所述方法包括将治疗有效量的药物组合物施用于哺乳动物，或将所述药物组合物施加至皮肤、炎性区域或受伤区域。所述哺乳动物可以是人、狗、猫、啮齿动物、马、牛、猴或猪。

33、有益效果

34、与鸢尾的常规热水提取物或溶剂提取物、这样的提取物的过滤物和鸢尾愈伤组织的培养基相比，根据本发明的组合物包含杂质例如残留的溶剂或生长调节剂的可能性较低，并且对皮肤弹性改善、皮肤皱纹减少、皮肤再生、肤色改善、皮肤亮度改善、皮肤美白、抗炎、伤口愈合或加速伤口愈合具有优异的作用。

35、应理解，本发明的范围不限于上述效果。