核酸的脂肪酸缀合物的制作方法

背景技术：

1、基于核酸的治疗剂代表了一种新类别的药物，该药物靶向通过传统小分子方法无法靶向的疾病和基因用于开发基于核酸的药物的一个关键问题是增强其体内稳定性、半衰期、清除率和组织分布，因此提高药物疗效。

2、经化学修饰的核苷通常用于并入到核酸分子中以增强一种或多种性质，例如核酸酶抗性、药代动力学或对靶标的亲和力。在一些情况下，另外的修饰(例如化学部分)与核酸治疗剂缀合以改善核酸化合物的效力和功效。

3、人血清白蛋白的长血液循环性质提供了有吸引力的药物半衰期延长，使得技术能够实现。增加白蛋白结合的一种策略是用脂肪酸缀合物修饰靶药物，所述脂肪酸缀合物可以结合至白蛋白。一个成功的实例是索玛鲁肽(semaglutide)，一种胰高血糖素样肽-1受体激动剂(glp-1ra)。人glp-1被二肽基肽酶-4(dpp-4)酶快速降解，导致短的半衰期。具有94％同源性的人glp-1类似物索马鲁肽包括两种结构修饰：在位置2处用非蛋白原性氨基酸2-氨基异丁酸(aib)替换gly，以及通过短聚乙二醇(peg)间隔子和γ-谷氨酸接头将十八碳二酸连接到lys-26的侧链。18-碳脂肪酸部分的存在导致对血清白蛋白的高结合亲和力，这转化为人中约7天的半衰期(witteloostuijn等人，使用化学方法延长生物制药的半衰期：聚乙二醇化的替代方案(half-life extension ofbiopharmaceuticals using chemicalmethods:alternatives to pegylation.chem med chem.，2016,11(22):2474-2495)。

4、类似地，包括脂肪酸缀合的脂质缀合已经显示影响治疗性核酸如sinra(例如，biscans等人，脂肪酸缀合物的化合价影响sirna在体内的药代动力学、分布和功效(thevalency of fatty acid conjugates impact sirna pharmacokinetics,distribution,and efficacy in vivo《控制释放杂志(j.control release)》，2019,302:116-125)。

5、本公开涉及与治疗性核酸，例如适体和小rna分子的新型脂肪酸缀合。此类脂肪酸部分影响体内功效，例如经修饰的适体在血液中的半衰期延长。

技术实现思路

1、本发明提供了可以用于产生核酸-脂肪酸缀合物以用于增加核酸治疗剂的性能，例如延长体内半衰期的新型脂肪酸。

2、本发明提供了包含核酸部分和至少一个脂肪酸部分的缀合物，其中脂肪酸部分与核酸部分共价缀合；以及其组合物和使用方法。脂肪酸部分调节缀合物的核酸部分的特征，例如半衰期。

3、在一些实施方案中，脂肪酸部分包含-(ch2)a-cooh，其中a是12至26之间的整数。缀合物可以包含至少一个另外的羧基基团。在一些实例中，缀合物可以包含一个或两个另外的羧基基团。在一个实施方案中，缀合物包含一个另外的羧基基团。在另一个实施方案中，缀合物包含两个另外的羧基基团。

4、在一些实施方案中，脂肪酸部分包含至少一个乙二醇基团(-(och2ch2)-)。在一些实例中，脂肪酸部分包含1至10个乙二醇基团，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个乙二醇基团。

5、在一些实施方案中，脂肪酸部分包含至少一个聚乙二醇(peg)基团。脂肪酸部分可以进一步包含至少一个酰胺基团(-nh-co-)。

6、在一个实施方案中，脂肪酸部分包含至少一个-(och2ch2-och2ch2-nh-co)-基团。

7、在另一个实施方案中，脂肪酸部分包含至少一个-(co-ch2-och2ch2-och2ch2-nh)-基团。

8、在又一个实施方案中，脂肪酸部分包含至少一个谷氨酸基团。在一些实例中，谷氨酸基团是γ-谷氨酸基团。

9、在一个实施方案中，脂肪酸部分包含在另一个实施方案中，脂肪酸部分包含

10、在一些实施方案中，脂肪酸部分包含哌嗪基团，如哌嗪-2-羧酸基团基团和基团。

11、在一个实施方案中，缀合物包含脂肪酸部分，所述脂肪酸部分包含以下结构：

12、其中n是12至26的整数，

13、嵌段a是

14、na是0或1，

15、嵌段b是-(och2ch2)-或-(co-ch2-och2ch2-och2ch2-nh)-，

16、nb是1至10的整数，

17、嵌段c是并且

18、nc为0或1。

19、作为非限制性实例，缀合物包含选自由gtfa-1、gtfa-1'、gtfa-2、gtfa-2'、gtfa-3和gtfa-3'组成的组的脂肪酸部分。

20、本发明的缀合物的核酸部分是治疗性核酸，包括但不限于适体或其变体、寡核苷酸、反义寡核苷酸、cpg寡核苷酸、sirna、微小rna、lncrna、mrna、反义rna、sarna、环状rna等。

21、在一些实施方案中，核酸部分是适体或其变体。适体包含约15-100个核苷酸、约15-75个核苷酸、或约15-50个核苷酸、或约15-30个核苷酸、或约20-50个核苷酸、或约20-30个核苷酸。

22、在一些实施方案中，适体包含至少一种化学修饰，如核苷修饰和主链修饰。

23、在另一方面，本发明提供了包含核酸-脂肪酸缀合物的组合物和使用所述组合物用于治疗的方法。

24、在一些实施方案中，本发明提供一种延长核酸分子的半衰期的方法，所述方法包括用脂肪酸部分修饰核酸分子。

25、在另一方面，本发明提供了一种脂肪酸部分，所述脂肪酸部分包含以下通式：

26、

27、其中n是12至26的整数，

28、嵌段a是

29、na是0或1，

30、嵌段b是-(och2ch2)-或-(co-ch2-och2ch2-och2ch2-nh)-，

31、nb是1至10的整数，

32、嵌段c是

33、nc为0或1，

34、嵌段d包含可以共价地结合到核酸部分的官能团，并且

35、nd为0或1。

36、在一些实施方案中，脂肪酸部分的嵌段d包含叠氮化物基团、炔烃基团、羟基基团、巯基基团或氨基基团。在一些实施方案中，脂肪酸部分的嵌段d是rd-n3，其中rd包含烷基基团、氨基烷基基团、胺基团和/或烷氧基基团。在一些实例中，嵌段d是作为非限制性实例，脂肪酸部分是gtfa-1、gtfa-1'、gtfa-2、gtfa-2'、gtfa-3或gtfa-3'。

37、在另一方面，本发明提供了一种缀合物，其包含多核苷酸，所述多核苷酸包含由seq id no.:1呈现的核酸序列；和与seq id no.:1的一个末端缀合的脂肪酸部分。作为非限制性实例，缀合物是bt500(seq id no.:3)、bt600(seq id no.:4)和bt700(seq id no.:5)。在一些实施方案中，提供了一种包含缀合物的组合物，其中所述缀合物包含bt500(seqid no.:3)、bt600(seq id no.:4)或bt700(seq id no.:5)。