咖啡酰亚精胺化合物的组合物、其用途及其亚精胺补充剂的制作方法

本技术涉及化合物的富集方法，以及该化合物的抗衰老特性和抑制作用以及包含该化合物的组合物。

背景技术：

1、亚精胺是大多数不同人体组织中最丰富的多胺。亚精胺由氨基酸代谢产生，包括基本的细胞功能，包括细胞生长、增殖的调控、组织再生、dna和rna稳定、酶促调节(enzymatic modulation)、翻译调控和自噬。此外，亚精胺表现出抗炎和抗氧化特性，增强线粒体代谢功能和呼吸作用，促进分子伴侣(chaperone)活性，并改善蛋白质稳态。在正常的衰老过程中，细胞内亚精胺浓度会下降。相反，亚精胺的给药与酵母、蠕虫、果蝇和人类免疫细胞的存活率增加有关，并与小鼠年龄相关死亡率的降低有关。精液中非常高的亚精胺浓度可以防止细胞衰老并赋予生殖细胞系长期存活。亚精胺内稳态受营养摄取、肠道来源、内源性生物合成、降解和隔室间主动转运系统的影响。

2、亚精胺的许多抗衰老特性与亚精胺通过刺激细胞保护性巨自噬确保蛋白质内稳态的能力有因果关系。亚精胺通过抑制几种乙酰转移酶诱导自噬。在人体中维持对于健康老龄化最佳自噬水平的最佳亚精胺浓度是正在进行的研究课题。年龄引起的亚精胺下降可能涉及一个或几个决定亚精胺全身可用性的不同因素的改变。亚精胺的生物利用度由这种多胺的不同来源决定：(i)细胞生物合成，(ii)肠道微生物的生产，和(iii)营养供应，以及(iv)分解代谢和(v)尿液排泄。

3、黑果枸杞(lycium ruthenicum)是一种开花植物，俗称“俄罗斯枸杞”。黑果枸杞是茄科植物的一员，分布于中亚、俄罗斯南部、中国西北部、印度北部和巴基斯坦。黑果枸杞生长于印度努布拉河谷，以及中亚和中国西北部海拔400-3000米的盐碱沙漠、沙地和路边。

4、秀丽隐杆线虫(caenorhabditis elegans，“c.elegans”)是一种长约1mm的独立生存的线虫，生活在温和土壤环境中。秀丽隐杆线虫一直是研究衰老的模式生物。例如，抑制胰岛素样生长因子信号传导通路可能会使成年寿命延长三倍，而葡萄糖喂养可能会促进氧化应激并使成年寿命缩短一半。同样，在生命后期诱导胰岛素/igf-1受体降解可能会显著延长蠕虫的预期寿命。此外，暴露于5mm氯化锂(licl)的秀丽隐杆线虫显示出更长的寿命。当暴露于10μm licl时，观察到死亡率降低。然而，暴露于1μm的秀丽隐杆线虫并未观察到死亡率降低。

5、kaplan-meier估计量是一种非参数统计量，用于根据生命周期数据估计生存函数。在研究中，kaplan-meier估计量通常用于衡量治疗后存活一定时间的患者比例。

6、组蛋白脱乙酰酶(“hdac”)是一类酶，可从组蛋白上的ε-n-乙酰赖氨酸氨基酸中去除乙酰基(o＝c-ch3)，从而使组蛋白更紧密地包裹dna。dna包裹在组蛋白周围，dna表达受乙酰化和去乙酰化调节。由于组蛋白尾部的赖氨酸和精氨酸上存在胺基，组蛋白尾部通常带正电荷，正电荷有助于组蛋白尾部与dna主链上带负电荷的磷酸基团相互作用并结合。乙酰化通常发生在细胞中，通过将胺变成酰胺来中和组蛋白上的正电荷，并降低组蛋白与dna结合的能力。这种降低的结合允许染色质扩展，从而允许发生基因转录。然而，组蛋白去乙酰化酶去除这些乙酰基，增加组蛋白尾部的正电荷并促进组蛋白和dna主链之间的高亲和力结合。增加的dna结合会浓缩dna结构，从而阻止转录。

7、组蛋白脱乙酰酶抑制剂(“hdaci”)作为情绪稳定剂和抗癫痫药(例如丙戊酸)在精神病学和神经病学中的使用历史悠久。最近，hdaci已被研究作为神经退行性疾病的缓解剂或治疗剂。此外，最近一直在努力开发用于癌症疗法的hdaci。伏立诺他(vorinostat)于2006年被fda批准用于治疗先前治疗失败的皮肤t细胞淋巴瘤(ctcl)患者的皮肤临床表现。第二种hdaci，istodax，于2009年被批准用于ctcl患者。hdaci对与乙酰化相关的非组蛋白也有影响，可以改变这些分子的乙酰化程度，增加或抑制它们的活性。

8、hdac有四种亚型(i、ii、iii和iv)。i类介导大部分细胞去乙酰化活性，并且由hdac1、hdac2、hdac3和hdac8组成。

9、hdac1和hdac2往往在结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、甲状腺癌、宫颈癌、胃癌、肝细胞癌、胰腺癌、子宫内膜癌和肺癌中过度表达。据报道，在结直肠癌、肝细胞癌、胰腺癌、子宫内膜癌和肺癌中与总生存率呈负相关。此外，已在肝细胞癌、结直肠癌、前列腺癌、nsclc和乳腺癌中发现与晚期疾病、转移和侵袭性疾病的关联。hdac1和hdac2在癌症发展途径的转录和促进中发挥作用。hdac1和hdac2过表达导致细胞增殖、迁移、血管生成、侵袭增加和细胞凋亡减少。已知hdac1通过抑制er转录促进乳腺癌的增殖。hdac1和hdac2的缺失会导致g1期或g2/m期停滞并减少乳腺癌的增殖。

10、hdac3在调节位点特异性转录中发挥作用。hdac3是ncor/smrt抑制复合物的组成部分，它被核激素受体和其他位点特异性dna结合因子募集以抑制单个基因的表达。

11、hdac8与许多疾病状态有关，包括急性髓性白血病，并且与平滑肌细胞中的肌动蛋白细胞骨架有关。靶向hdac8的sirna显示出抗癌作用。已在t细胞淋巴瘤中观察到抑制hdac8诱导的细胞凋亡。此外，hdac8酶与神经母细胞瘤的发病机制有关。

12、富集二咖啡酰亚精胺衍生物的有效方法将代表对本领域的有益贡献。此外，显示出抗老化特性的衍生物将代表对本领域的有益贡献。此外，证明抑制组蛋白脱乙酰酶的衍生物将代表对本领域的有用贡献。

技术实现思路

1、在一个实例中，本公开提供了组合物，其包含黑果枸杞果实的提取物和添加剂。提取物可以包括选自以下的化合物：n1-二氢咖啡酰基-n10-咖啡酰亚精胺、n1-二氢咖啡酰基-n10-(4-β-d-吡喃葡萄糖基)-咖啡酰亚精胺、n1-咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰亚精胺、n1-(4-β-d-吡喃葡萄糖基)-二氢咖啡酰基-n10-咖啡酰亚精胺、n1,n10-双-(二氢咖啡酰)亚精胺、n1,n10-双-(咖啡酰基)亚精胺，及其组合。该组合物可以增加秀丽隐杆线虫的存活率。该组合物可以使秀丽隐杆线虫的存活率增加至少10％。提取物可包含至少15重量％的n1-二氢咖啡酰基-n10-咖啡酰亚精胺。提取物可包含至少20重量％的n1-二氢咖啡酰基-n10-咖啡酰亚精胺。提取物可包含至少25重量％的n1-二氢咖啡酰基-n10-咖啡酰亚精胺。该组合物可以抑制组蛋白脱乙酰酶的活性。组蛋白脱乙酰酶可选自hdac1、hdac2、hdac3、hdac8，及其组合。组蛋白脱乙酰酶可以是hdac1，其中活性被抑制至少50％。提取物可包含至少一种hdac8特异性抑制剂。至少一种特异性抑制剂可包括n1-二氢咖啡酰基-n10-咖啡酰亚精胺。n1-二氢咖啡酰基-n10-咖啡酰亚精胺可具有约41.75μmol/l的ic50值。至少一种特异性抑制剂可包括n1-咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰亚精胺。n1-咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰亚精胺可具有约62.52μmol/l的ic50值。提取物可以是从干的黑果枸杞果实中富集的方法的产物，该方法包括：将果实在75％的乙醇水溶液中保持回流至少两小时，以便提供溶解在乙醇和水中的提取化合物的混合物；将混合物提交至离子交换树脂色谱以提供溶解在洗脱溶剂中的提取物溶液，其中用于色谱的树脂是弱阳离子交换树脂；并减压浓缩提取物溶液以提供提取物。该方法还可以包括：在提交之后和浓缩之前：用饱和碳酸氢钠溶液洗涤洗脱溶剂；将洗脱溶剂负载到非极性微孔吸附树脂上；用95％乙醇洗脱提取物，得到提取物的乙醇溶液。提取物的产率可为干的黑果枸杞果实质量的约1.10％至约1.45％。所述保持可包括：将果实在一定体积的75％的乙醇水溶液中保持回流两小时，以提供溶解在乙醇和水中的提取化合物的混合物；从果实中倒出混合物；加入第二体积的75％乙醇水溶液；将果实在第二体积中保持回流两小时，以提供溶解在乙醇和水中的提取化合物的第二混合物；从果实中倒出第二混合物；将第一混合物与第二混合物合并。该方法还可以包括在浓缩之后冷冻干燥提取物。该组合物可用于神经保护。该组合物可用于治疗和/或预防阿尔茨海默病。该组合物可用于抗衰老治疗。该组合物可用于局部给药。该组合物可用作化妆品。该组合物可用作营养补充剂。

2、在另一实例中，本公开提供了生产咖啡酰亚精胺粉末的方法，包括：回流下在75％乙醇水溶液中加热干的黑果枸杞果实至少两个小时，以便提供溶解在乙醇和水中的提取化合物的混合物；将混合物提交至离子交换树脂色谱，以提供溶解在洗脱溶剂中的咖啡酰亚精胺化合物粉末的溶液，其中色谱中使用的树脂是弱阳离子交换树脂；并在减压下浓缩溶液，以得到咖啡酰亚精胺化合物粉末。所述咖啡酰亚精胺化合物粉末可以包括选自以下的化合物：n1-二氢咖啡酰基-n10-咖啡酰亚精胺、n1-二氢咖啡酰基-n10-(4-β-d-吡喃葡萄糖基)-咖啡酰亚精胺、n1-咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰亚精胺，及其组合。该方法还可以包括：在提交之后和浓缩之前：用饱和碳酸氢钠溶液洗涤洗脱溶剂；将洗脱溶剂负载到非极性微孔吸附树脂上；用95％乙醇洗脱咖啡酰亚精胺化合物粉末，得到咖啡酰亚精胺化合物粉末的乙醇溶液。加热可包括：将果实在一定体积的75％的乙醇水溶液中保持回流两小时，以提供溶解在乙醇和水中的提取化合物的第一混合物；从果实中倒出第一混合物；加入第二体积的75％乙醇水溶液；将果实在第二体积中保持回流两小时，以提供溶解在乙醇和水中的提取化合物的第二混合物；从果实中倒出第二混合物；将第一混合物与第二混合物合并。该方法还可以包括在浓缩之后冷冻干燥咖啡酰亚精胺化合物粉末。

3、在又一实例中，本公开提供了富集从干的黑果枸杞果实中提取的咖啡酰亚精胺化合物的方法，包括将咖啡酰亚精胺化合物的混合物提交至离子交换树脂色谱中以提供化合物在洗脱溶剂中的溶液，其中色谱中使用的树脂是弱阳离子交换树脂。

4、在又一实例中，本公开提供了抑制组蛋白脱乙酰酶的方法，包括施用包含干的黑果枸杞提取物和添加剂的组合物。组蛋白脱乙酰酶可以是hdac1、hdac2、hdac3、hdac8或其组合。组蛋白脱乙酰酶可以被特异性抑制。

5、在又一实例中，本公开提供了组合物，其包含i)选自以下的化合物：n1-二氢咖啡酰基-n10-咖啡酰亚精胺、n1-二氢咖啡酰基-n10-(4-β-d-吡喃葡萄糖基)-咖啡酰亚精胺、n1-咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰亚精胺、n1-(4-β-d-吡喃葡萄糖基)-二氢咖啡酰基-n10-咖啡酰亚精胺、n1,n10-双-(二氢咖啡酰)-亚精胺、n1,n10-双-(咖啡酰基)-亚精胺，及其组合；以及ii)添加剂。该组合物可用于神经保护。该组合物可用于治疗和/或预防阿尔茨海默病。该组合物可用于抗衰老治疗。该组合物可用于局部给药。该组合物可用作化妆品。该组合物可用作营养补充剂。

6、在又一实例中，本公开提供了亚精胺的补充剂，包括：i)选自以下的化合物：n1-二氢咖啡酰基-n10-咖啡酰亚精胺、n1-二氢咖啡酰基-n10-(4-β-d-吡喃葡萄糖基)-咖啡酰亚精胺、n1-咖啡酰基-n10-二氢咖啡酰亚精胺、n1-(4-β-d-吡喃葡萄糖基)-二氢咖啡酰基-n10-咖啡酰亚精胺、n1,n10-双-(二氢咖啡酰)-亚精胺、n1,n10-双-(咖啡酰基)-亚精胺，及其组合；以及ii)添加剂。该化合物可至少部分在体内水解以提供亚精胺。

7、进一步的适用领域将从本文提供的描述中变得明显。应当理解，所述描述和具体示例仅用于说明目的，并不旨在限制本公开的范围。