一种用于湿疹药物组合物的发酵提取工艺的制作方法

本发明涉及医药领域，具体涉及一种用于湿疹药物组合物的发酵提取工艺。

背景技术：

1、湿疹是一种常见的炎症性皮肤病，一般认为与变态反应有一定关系，病因较复杂，有一定遗传倾向。其临床表现具有对称性、渗出性、瘙痒性、多形性和复发性等特点。可发生于任何年龄，常在冬季复发或加剧有渗出倾向，慢性病程，易反复发作，故越来越多的患者选择中药治疗。

2、中药的化学成份十分复杂，既有含有多种有效成份，又有无效成份，也包含有毒成份。中药提取就是利用一些技术最大限度提取其中有效成份，使得中药制剂的内在质量和临床治疗效果提高，使中药的效果得以最大限度的发挥。

3、中药提取方法分为传统提取法和现代提取法。传统提取法包括水煎煮法、浸渍法、渗漉法、回流法、水蒸气蒸馏法和升华法等，现代提取法包括超临界流体萃取法、膜分离技术、超微粉碎技术、中药絮凝分离技术、半仿生提取法、超声提取法、旋流提取法、加压逆流提取法、酶法、大孔树脂吸附法、超滤法、分子蒸馏法等。

4、中药发酵是指借助微生物的作用，在一定的环境条件下(如湿度、温度等)，中药经发酵过程改变其原有性能、增强或产生新的功效，从而扩大用药品种，适应临床用药的需要。

5、由于微生物在代谢过程中能产生多种酶，使由纤维素、半纤维素等构成的细胞壁发生裂解，从而促进中药有效成分的释放，甚至产生新的活性物质，引起中药药性、药效等发生改变。

6、随着中药发酵技术的不断开展，大量学者运用发酵技术以实现中药有效成分的释放，这不仅能提高中药有效成分的释放量，而且还可通过微生物对中药的纤维、糖类、蛋白质等成分的利用和转化，产生包含多种活性成分的制剂或新药。

7、贵州省黔南布依族苗族自治州中医医院的一种治疗湿疹的中药组合物，其组方由金银花6份、虎杖8份、苦参6份、黄柏6份、白鲜皮6份、马齿苋6份、土荆皮3份、百部3份、地肤子3份和冰片1份组成，临床上用于治疗湿疹20余年，效果显著，其制备工艺是采用水煎煮提取后制成洗液供临床使用。

8、申请号201910543870.6，发明名称为一种治疗湿疹的中药组合物及其应用，申请人为贵州省黔南布依族苗族自治州中医医院；公开了洗剂的制备方法：1)称取金银花，加入其重量8-10倍的水，加热回流提取2-4h，收集挥发油备用，煎煮液过滤后备用；2)称取虎杖、苦参、黄柏、白鲜皮、马齿苋、土荆皮、百部和地肤子，得中药混合物，加水浸提1-3.5h，过滤，滤液与1)所得煎煮液混合，在常压下浓缩至比重为1.06-1.10，得浓缩液；3)取冰片和1)所得挥发油，加入到2)所得浓缩液中，得混合液，再加入苯甲酸钠，混合均匀后，得治疗湿疹的外用洗剂。

9、申请号201910543870.6存在的缺点：组方中主药金银花的有效成分木犀草苷、虎杖的有效成分大黄素、苦参的有效成分苦参碱和氧化苦参碱总量的提取率均偏低，易造成药材资源浪费。

10、针对以上问题，发明团队经过了系列的试验探究，并在对洗液水煎煮提取工艺回顾性研究的过程中，发现组方中主药金银花的有效成分木犀草苷、虎杖的有效成分大黄素、苦参的有效成分苦参碱和氧化苦参碱总量的提取率均偏低，均未超过30％。发明团队结合中药发酵技术，改进了现有的水煎煮提取工艺，有效解决组方中药物有效成分提取率低的问题，达到药物提质增效和节约药材资源的目的。提取工艺试验研究结果表明，经发酵提取后，组方中金银花有效成分木犀草苷的提取率由常规水煎煮提取的28.4％提高到52.5％，虎杖有效成分大黄素的提取率由常规水煎煮提取的19.3％提高到58.6％，苦参有效成分苦参碱和氧化苦参碱总量的提取率由常规水煎煮提取的27.7％提高到61.2％，组方中有效成分提取率提高显著。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了一种用于湿疹药物组合物的发酵提取工艺。

2、本发明所述药物组合物的组方由金银花6份、虎杖8份、苦参6份、黄柏6份、白鲜皮6份、马齿苋6份、土荆皮3份、百部3份、地肤子3份和冰片1份组成。

3、本发明所述组合物的发酵提取工艺为：

4、(1)药材粗粉碎：按组方比例称取除冰片外的药材，混合后粉碎成粗粉；

5、(2)发酵：加入药材总量6～10倍的水，煮沸冷却后加入药材量总量10～20％的葡萄糖，再接种6.5×106cfu/ml以上的真菌，在30～40℃下发酵4～6天，离心过滤，滤液备用；

6、(3)水煎煮：离心过滤后的药渣加入药材总量6～10倍的水，煎煮15～30分钟后过滤，滤液与前述滤液合并；

7、(4)浓缩：合并后的滤液浓缩至密度为1.05～1.20的稠膏；

8、(5)制剂：取稠膏，加入组方比例的冰片，再加入药学上可以接受的辅料，制成药学上可接受的制剂。

9、优选的，

10、本发明步骤(2)所述发酵为：加入药材总量6～8倍的水，煮沸冷却后加入药材量总量10～15％的葡萄糖，再接种6.5×106cfu/ml以上的真菌，在35～40℃下发酵4～5天，离心过滤，滤液备用。

11、进一步优选的，

12、本发明步骤(2)所述发酵为：加入药材总量6倍的水，煮沸冷却后加入药材量总量10％的葡萄糖，再接种6.5×106cfu/ml以上的真菌，在40℃下发酵4天，离心过滤，滤液备用。

13、优选的，

14、本发明所述真菌为卡氏酵母。

15、优选的，

16、本发明步骤(3)所述水煎煮为：离心过滤后的药渣加入药材总量6～8倍的水，煎煮15～20分钟后过滤，滤液与前述滤液合并。

17、进一步优选的，

18、本发明步骤(3)所述水煎煮为：离心过滤后的药渣加入药材总量6倍的水，煎煮15分钟后过滤，滤液与前述滤液合并。

19、优选的，

20、本发明步骤(5)所述冰片为50ml乙醇溶解处理的冰片。

21、优选的，

22、本发明步骤(5)所述制剂可以为洗液、搽剂、涂抹剂、软膏剂、凝胶剂、贴膏剂、气雾剂或喷雾剂。

23、本发明所述洗液制备方法为：

24、(1)药材粗粉碎：按组方比例称取除冰片外的药材，混合后粉碎成粗粉；

25、(2)发酵：加入药材总量6倍的水，煮沸冷却后加入药材量总量10％的葡萄糖，再接种6.5×106cfu/ml以上的卡氏酵母，在40℃下发酵4天，离心过滤，滤液备用；

26、(3)水煎煮：离心过滤后的药渣加入药材总量6倍的水，煎煮15分钟后过滤，滤液与前述滤液合并；

27、(4)浓缩：合并后的滤液浓缩至密度为1.05～1.20的稠膏；

28、(5)制剂：取组方比例的冰片溶于50ml乙醇中溶解后，加入稠膏中充分搅拌混合均匀，再加水定容至1000ml,得洗液。

29、本发明所述提取工艺制备的洗液在湿疹方面的应用。

30、本发明所述的重量份可以是本领域的常规单位，可以是g、kg等。

31、有益效果：

32、1、提高了湿疹药物组合物主药有效成分提取率，达到药物提质增效目的

33、提取工艺试验研究结果表明，经发酵提取后，组方中金银花有效成分木犀草苷的提取率由常规水煎煮提取的28.4％提高到52.5％，虎杖有效成分大黄素的提取率由常规水煎煮提取的19.3％提高到58.6％，苦参有效成分苦参碱和氧化苦参碱总量的提取率由常规水煎煮提取的27.7％提高到61.2％，组方中有效成分提取率提高显著。

34、2、减少了药材用量，节约了药材资源

35、临床验证试验研究结果表明，经发酵提取工艺制得的洗液(每1ml相当于0.472g原药材)疗效优于常规水煎煮提取工艺制得的洗液(每1ml相当于0.944g原药材)，充分说明即使在药材用量减半的情况下，发酵提取工艺制得的洗液疗效仍优于常规水煎煮提取工艺制得的洗液。因此，按本发明发酵提取工艺制备洗液，可减少药材用量，有效避免了药材资源浪费。

36、3、本技术的提取工艺通过了发酵菌株优选试验，验结果表明，采用发酵提取后，主药金银花的有效成分木犀草苷、虎杖的有效成分大黄素、苦参的有效成分苦参碱和氧化苦参碱总量的提取率较常规水煎煮提取相比有大幅提升，其中卡氏酵母的发酵提取效果明显优于其它两种菌株，因此选择卡氏酵母为本工艺发酵菌株。

37、4、本技术的提取工艺通过了发酵提取工艺最佳参数优选和发酵后药渣的进一步处理方法优选试验，并通过正交试验得到本技术的最佳发酵提取工艺为：加入药材总量6倍的水，煮沸冷却后加入药材量总量10％的葡萄糖，接种卡氏酵母后，在40℃下发酵4天，离心过滤即得。

38、5、本发明还通过了临床疗效验证，结果显示本技术(发酵组)的治愈例数均高于对照组和常归组，且总有效率达90.0％以上。