用于预防或治疗肝癌的药物组合物的制作方法

本发明涉及用于预防或治疗肝癌的药物组合物。

背景技术：

1、肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,hcc)是世界范围内与癌症相关的死亡的第二大主要原因。hcc是最近发病率增加的少数癌症之一。

2、hcc的主要治疗方法是手术切除，并且大多数患者在最初的治疗阶段不符合治愈(curative treatment)的条件。切除和经皮消融术(percutaneous ablation)后5年复发率达70％，因此与生存率密切相关。

3、与其他癌症一样，hcc的特征还在于多发性肿瘤的进展。早期受损的肝组织发展为小的结节性高细胞病变(small nodular hypercellular lesions)，称为增生性结节(dysplastic nodule,dn)。这种癌前病变发展成小的、分化良好的肝细胞，具有不规则的结节状，然后发展为早期肝细胞癌(ehcc)，其被定义为以癫痫外观和频繁的微血管侵袭为特征的进行性hcc。基于当前对多级hcc发病的了解，对高危患者进行了密切随访，诊断图像显示，具有小且未知病因的特定病变数量有所增加。对此类病变进行超声引导的穿刺活检。如果病变通过组织学诊断确定为癌症，则将对其进行治疗。但是，ehcc通常表现出最小的非典型增生，并且缺乏明显的侵袭性或破坏性生长。因此，即使对于肝病理学家，也常常难以区分复发性结节、癌前病变和早期病变。由于这些原因，迫切需要发现使ehcc的组织学诊断标准化并诱导适当治疗的目标分子标志物。此外，与准确的hcc诊断相关的生物标志物的发现可有助于鉴定可能进展为hcc的癌前病变，并确定可手术切除的病变，从而支持外科医生设计hcc患者的手术范围。鉴定预测癌前病变中可能发生hcc的其他分子标志物可有助于鉴定手术切除后有复发风险的患者。

4、本研究旨在通过结合肝病理学家定义的分期肝癌组织的临床病理和基因表达数据，建立一种基因选择策略，以鉴定潜在的致病基因。作为结果，可以选择有望成为早期hcc病因的10个基因。

5、临床和实验研究已经表明，在10个推定驱动基因中，对前胶原赖氨酸(procollagen-lysine)、2-氧戊二酸5-双加氧酶3和剪接因子3b亚基4的屏障可表明癌前病变中存在hcc，并且与目前作为三大hcc诊断标志物的glyphican3、谷氨酰胺合成酶和热激蛋白70相比，还可以在大范围的患者中诊断ehcc。

6、体内实验和体外肿瘤形成分析表明，靶向破坏banf1、plod3和sf3b4基因抑制hcc细胞的肿瘤和转移特性。sfb4的过度应答会增加p27和hcc细胞中的slug，从而抑制上皮-间质转化(emt)，这有助于恶性细胞的转化和增殖，从而干扰细胞周期检查点，从而导致剪接体过度活化。此外，可以看出加速了抑制klf4肿瘤生长的选择性剪接变体的产生。

7、上述结果表明，新型hcc诊断标志物，即banf1、plod3和sf3b有助于肝肿瘤形成过程中肝细胞的早期恶性转化，并且也是肝恶性肿瘤分子治疗靶标。

技术实现思路

1、发明要解决的问题

2、本发明的一个目的是提供用于预防或治疗肝癌的药物组合物，其可敲低在早期肝癌细胞中高度表达的特定基因。

3、用于解决问题的方案

4、1.一种用于预防或治疗肝癌的药物组合物，其包括：sirna，其包括正义rna和具有与其互补的序列的反义rna，所述正义rna具有选自由seq id no：5至157的序列组成的组的至少一个序列；或

5、dsrna，其具有选自由seq id no：158至310的序列组成的组的至少一个序列。

6、2.根据上述1所述的组合物，其中所述组合物包括：

7、sirna，其包括正义rna和具有与其互补的序列的反义rna，所述正义rna具有选自由seq id no：5至12、14至19、21、23、24、26、28至34、35至37、39至41、43、45至47、49至53、55至60、62至73、75至81、84至87、89至98、100至102、105至116、118至128、130至154、156至157的序列组成的组的至少一个序列；或

8、dsrna，其具有选自由seq id no：158至165、167至172、174、176、177、179、181至187、188至190、192至194、196、198至200、202至206、208至213、215至226、228至234、237至240、242至251、253至255、258至269、271至281、283至307、309和310的序列组成的组的至少一个序列。

9、3.根据上述1所述的组合物，其中所述组合物包括：

10、sirna，其包括正义rna和具有与其互补的序列的反义rna，所述正义rna具有选自由seq id no：5至28的序列组成的组的至少一个序列；或

11、dsrna，其具有选自由seq id no：158至181的序列组成的组的至少一个序列。

12、4.根据上述1所述的组合物，其中所述组合物包括：

13、sirna，其包括正义rna和具有与其互补的序列的反义rna，所述正义rna具有选自由seq id no：29至55的序列组成的组的至少一个序列；或

14、dsrna，其具有选自由seq id no：182至208的序列组成的组的至少一个序列。

15、5.根据上述1所述的组合物，其中所述组合物包括：

16、sirna，其包括正义rna和具有与其互补的序列的反义rna，所述正义rna具有选自由seq id no：56至120的序列组成的组的至少一个序列；或

17、dsrna，其具有选自由seq id no：209至273的序列组成的组的至少一个序列。

18、6.根据上述1所述的组合物，其中所述组合物包括：

19、sirna，其包括正义rna和具有与其互补的序列的反义rna，所述正义rna具有选自由seq id no：121至157的序列组成的组的至少一个序列；或

20、dsrna，其具有选自由seq id no：274至310的序列组成的组的至少一个序列。

21、7.根据上述1至6中任一项所述的组合物，

22、其中将所述sirna或dsrna负载在选自由以下组成的组的至少一种载体上：脂质体、脂质转染胺、树状聚合物、胶束、多孔二氧化硅颗粒、氨基粘土、金纳米颗粒、磁性纳米颗粒、石墨烯、氧化石墨烯、壳聚糖、葡聚糖、果胶、二氧化锰二维片材、pva、明胶、二氧化硅、玻璃颗粒、鱼精蛋白、外泌体、聚乙烯亚胺、氰基丙烯酸正丁酯、凝胶泡沫、乙醇、纳米晶体、纳米管、碳纳米颗粒、透明质酸、铁氧化物、聚乳酸、聚氰基丙烯酸丁酯、白蛋白、脂质颗粒、聚乙二醇、聚l-葡糖醛酸藻酸酯、聚乙醇酸-聚乳酸、聚二噁烷酮、聚乙醇酸-共-己内酯、聚丙烯和水凝胶。

23、8.根据上述7所述的组合物，

24、其中所述载体为多孔二氧化硅颗粒，其特征在于，当下式1中的吸光度比达到1/2时，t为20以上：

25、[式1]

26、at/a0

27、(其中a0为通过将5ml的包括1mg/ml所述多孔二氧化硅颗粒的悬浮液置于具有50kda直径的孔的圆筒状渗透膜中来测定的所述多孔二氧化硅颗粒的吸光度，

28、其中15ml的与所述悬浮液相同的溶剂存在于所述渗透膜的外部并与所述渗透膜接触，所述渗透膜的内部和外部在37℃和60rpm下水平搅拌，和

29、at为在测定a0后t小时测定的所述多孔二氧化硅颗粒的吸光度)。

30、9.根据上述8所述的组合物，其中所述t为40以上。

31、10.根据上述8所述的组合物，

32、其中所述sirna包括正义rna和具有与其互补的序列的反义rna，所述正义rna具有选自由seq id no：28、119和136的序列组成的组的至少一个序列，和

33、所述dsrna具有选自由seq id no：181、272和289的序列组成的组的至少一个序列。

34、11.根据上述8所述的组合物，

35、其中所述多孔二氧化硅颗粒具有亲水性取代基或疏水性取代基。

36、12.根据上述8所述的组合物，

37、其中所述多孔二氧化硅颗粒具有选自由以下组成的组的至少一个亲水性取代基：醛、酮、氨基甲酸酯、硫酸酯、磺酸酯、氨基、胺、氨基烷基、甲硅烷基、羧基、磺酸、硫醇、铵、巯基、磷酸酯、酯、酰亚胺、硫代酰亚胺、醚、茚、磺酰基、甲基膦酸酯、聚乙二醇、取代或未取代的c1至c30烷基、取代或未取代的c3至c30环烷基、取代或未取代的c6至c30芳基和c1至c30酯基基团。

38、13.根据要求8所述的组合物，

39、其中所述多孔二氧化硅颗粒在中性ph下在所述颗粒的外表面或其孔的内部带正电荷或负电荷。

40、14.根据要求8所述的组合物，

41、其中所述多孔二氧化硅颗粒在中性ph下在所述颗粒的外表面或其孔的内部带正电荷。

42、15.根据要求8所述的组合物，

43、其中所述多孔二氧化硅颗粒的平均粒径为100至400nm，孔径为4至30nm。

44、发明的效果

45、本发明的药物组合物通过特异性敲低早期肝癌细胞中表达的基因来提供肝癌的预防和治疗作用，从而防止肝癌的发展并抑制肝癌细胞的转移和增殖。