基于黑水虻的多肽组合物及其制备方法与流程

本发明涉及生物，尤其涉及一种基于黑水虻的多肽组合物及其制备方法。

背景技术：

1、黑水虻的多肽组合物已经引起了广泛的研究兴趣，并且有一些现有的技术用于制备和利用黑水虻多肽。黑水虻养殖技术：黑水虻的养殖技术被广泛应用于大规模生产黑水虻干粉和提取多肽。通过控制黑水虻的饲养条件和环境，可以获得高质量的黑水虻幼虫和成虫，进而提取出具有生物活性的多肽。多肽提取和纯化技术：通过采用适当的提取方法，如超声波提取、酶解等，可以从黑水虻虫体或黑水虻干粉中提取多肽。随后，使用色谱技术(如逆向高效液相色谱、凝胶过滤等)和其他纯化方法可用于纯化多肽，以获取高纯度的黑水虻多肽组合物。生物活性评价技术：为了评估黑水虻多肽组合物的生物活性，可以使用多种方法，如抗菌活性测定、细胞毒性测定、抗氧化活性测定、免疫调节活性测定等。这些技术可以帮助确定黑水虻多肽组合物的生物活性和潜在应用领域。化学修饰技术：为了改善黑水虻多肽的稳定性、生物活性或药物输送性能，可以应用化学修饰技术对多肽进行修饰，如引入特定的化学基团或聚合物链。这些修饰技术可以扩展黑水虻多肽的应用范围，并提高其在药物开发和生物医学领域的可用性。

2、黑水虻多肽组合物的化学修饰技术可以通过以下几种方式改善其药物输送性能：改善稳定性：通过在多肽分子上引入特定的化学基团，可以增加多肽的稳定性，延长其在体内的半衰期。例如，引入酯化、醚化或磷酸化等修饰基团可以提高多肽的稳定性，减少其被酶降解的速度。增加溶解性：一些多肽由于其疏水性而在水中溶解度较低，限制了其药物输送性能。通过引入亲水性基团，如聚乙二醇(peg)链，可以增加多肽的溶解度，改善其在体内的溶解性和药物传输能力。

3、提高靶向性：化学修饰可以通过引入特定的配体或靶向基团，使多肽具有更好的靶向性。这些靶向基团可以与特定受体或细胞表面分子结合，实现药物的靶向输送，减少对非靶向组织的影响，提高药物的疗效和安全性。调控药物释放速率：通过化学修饰，可以调整多肽与药物的连接方式和稳定性，从而控制药物的释放速率。例如，可以引入可被特定酶或环境条件识别的连接基团，实现药物的逐渐释放，提高药物的疗效持续时间。提高穿透性：针对多肽在穿透生物屏障(如细胞膜、肠道黏膜等)过程中的困难，可以通过引入具有穿透性的修饰基团来改善其药物输送性能。这些基团可以增加多肽对生物屏障的渗透性，提高其在体内的吸收和分布。需要注意的是，化学修饰对多肽的药物输送性能具有显著的影响，但也可能对多肽的生物活性产生一定的影响。因此，在进行化学修饰时，需要进行仔细的设计和评估，确保修饰后的多肽既具有良好的药物输送性能，又保持其所需的生物活性。

4、中国授权发明专利cn111334547b公开了一种黑水虻抗菌肽的提取方法及其在制备抗烟草病害的肥料中的应用，为利用黑水虻抗菌肽制备一种抗烟草病害的肥料，该发明以由烟草青枯病菌菌液、烟草野火病菌菌液和烟草角斑病菌菌液组成的复合菌液作为诱导液，在针刺浸泡处理下诱导黑水虻产生大量抗菌肽，并且通过酶解法制备得到黑水虻抗菌肽，所得黑水虻抗菌肽不仅含量高，而且活性高，对烟草青枯病菌、烟草野火病菌和烟草角斑病菌具有较好的抑制作用；同时，该发明还通过上述黑水虻抗菌肽制备得到一种抗烟草病害叶面肥，该叶面肥对烟草细菌角斑病、烟草青枯病和烟草野火病均表现出很好的防治效果；并且可以改善烟草的农艺性状和品质，提高其经济价值。但是该发明制备的黑水虻抗菌肽稳定性和传递效率低，渗透性和吸收性较差，药效不足。

技术实现思路

1、有鉴于现有技术中黑水虻的多肽组合物稳定性和传递效率低，渗透性和吸收性较差，药效不足的缺点，本发明所要解决的技术问题是提供一种基于黑水虻的多肽组合物及其制备方法。

2、为了实现上述发明目的，本发明采用了如下的技术方案：

3、一种基于黑水虻的多肽组合物的制备方法如下，以重量份计：

4、步骤1、将4～6份精氨酸修饰壳聚糖加入40～60份的n,n-二甲基甲酰胺中，加入0.4～0.6份乙二胺四乙酸，在0～10℃下100～500rpm搅拌20～40min，然后，滴入40～60份0.5～2wt％的羟乙基纤维素水溶液，然后在20～30℃下100～500rpm搅拌10～30h，然后加入300～500份无水乙醇中，800～2000rpm离心3～15min，溶液中的沉淀物用纤维素膜对水透析24～96h纯化，截取分子量12～14kda，冷冻干燥1～5d后，得到改性壳聚糖；

5、步骤2、在40～60份0.5～1mol/l的醋酸水溶液中加入2～4份钠盐，1000～3000rpm搅拌1～5min，然后超声20～40min，超声频率为20～50khz，得到溶液a；在40～60份0.5～1mol/l的醋酸水溶液中加入0.5～2份步骤1制备的改性壳聚糖，1000～3000rpm搅拌1～5min，然后超声20～40min，超声频率为20～50khz，用0.5～1um过滤器过滤溶液以去除杂质，得到改性壳聚糖溶液；在改性壳聚糖溶液中加入0.7～0.9份黑水虻多肽，在20～25℃、500～1000rpm持续搅拌过夜，得到混合液，以1～3ml/min的速度滴入溶液a，在20～25℃、500～1000rpm持续搅拌过夜，得到多肽组合物。

6、优选的，所述钠盐为葡糖醛酸钠、海藻酸钠中的至少一种。

7、所述黑水虻多肽的制备方法如下：

8、s1、用复合菌剂和基础饲料对2～4d龄黑水虻幼虫进行饲养4～6d，得到黑水虻虫料；

9、s2、将步骤s1的黑水虻虫料经灭菌、烘干、除杂、粉碎和脱脂后溶于水中制成溶液，所述脱脂的方法为：按1g：15～20ml的料液比往粉粹后的黑水虻虫粉中加入石油醚，混匀后置于40～60℃下加热回流1～3次，每次1～2h，经干燥处理后得到脱脂黑水虻虫干粉；将脱脂黑水虻虫干粉按料液比为0.5～2g：10～20ml加入水中，然后加入胰蛋白酶进行酶解处理，其中胰蛋白酶与脱脂黑水虻虫干粉溶液的料液比为0.5～2g：30～40ml，所述胰蛋白酶的酶解温度为35～40℃、ph为7～8、时间为50～100min，混匀后置于超声条件下进行提取10～30min，其中超声的超声频率为20～40khz、超声功率为100～400w，提取结束后经过滤和干燥得到黑水虻多肽。

10、所述复合菌剂由肠沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌按照数量比为1×106～1×108cfu：1×103～1×105cfu：1×104～1×106cfu混合而成后在80～110℃下处理5～10min得到。

11、所述基础饲料包括米糠、干酒糟、豆腐渣、牛脂、鸡粉、油渣、椰子粉中的至少一种。

12、优选的，所述基础饲料为豆腐渣、米糠和水按照质量比2～4：0.5～2：4～6混合而成。

13、所述基础饲料、复合菌剂、黑水虻幼虫的质量比为1：0.005～0.02：0.03～0.05。

14、所述基于黑水虻的多肽组合物在制备治疗大肠埃希氏菌、肠沙门氏菌、金黄色葡萄球菌感染的产品中的应用。

15、所述应用为用于制备畜禽饲料添加剂中的应用。

16、本发明制备的多肽组合物具有较高的稳定性，能延长产品的有效期，改善处理和给药效果。多肽与精氨酸基团和葡糖醛酸钠之间的静电相互作用，以及生物颗粒中大分子链之间的进一步疏水相互作用，延迟了多肽的释放，提供了温和延长释放的特征。经过改性的壳聚糖具有瞬时可逆打开上皮细胞间的能力，增加了细胞的通透性，从而增强了生物颗粒穿透不同组织层的能力。葡糖醛酸钠也可能影响细胞屏障，增强渗透性。事实上，所有生物颗粒成分都具有细胞穿透特性，通过不同的或多或少特定的机制，可以改善整个生物颗粒在肠道组织中的吸收。本发明制备的多肽组合物具有高度组织渗透特性有利于促进生物活性物质的吸收，这可能增加有益的生物利用度。

17、本发明制备的多肽组合物易于口服给药，且具有较高的适口性，具有很高的组织渗透能力，可以降低多肽在胃酸中的降解，促进多肽在小肠中的吸收。

18、与现有技术相比，本发明的有益效果：

19、1)本发明制备的黑水虻多肽组合物具有抗菌性能，在制备过程中，通过采用复合菌剂进行诱导黑水虻幼虫，提取得到黑水虻多肽，具有多种生物活性，例如抗菌、抗炎、抗氧化等，对于促进伤口愈合和治疗感染性疾病治具有积极作用；而且，黑水虻多肽可能含有丰富的氨基酸和营养成分，对于增强机体免疫力、促进生长发育和维持健康可能具有积极作用。

20、2)本发明中进一步通过黑水虻的多肽组合物的制备将多肽组合物包裹在适当的载体材料中，提高了黑水虻多肽的稳定性和传递效率，保护多肽免受降解，并提高多肽的渗透性和吸收性。