囊泡在治疗卵巢疾病中的用途

本发明属于生物医药领域，涉及一种囊泡在治疗卵巢疾病中的用途。

背景技术：

1、细胞凋亡是程序性细胞死亡(pcd)的模式之一，有助于生物体中细胞更新，并且在发育、生理发病机理和衰老中起重要作用[1，2]。随着细胞凋亡的进行，细胞产生大量的双层膜包被的细胞结构，以前称为细胞凋亡小体(apobd)；此外，最近有大量证据表明，在凋亡细胞分解过程中也产生了称为凋亡小泡(apov)的囊泡产物[3，4]。根据其独特的产生机制，apov能够包裹其亲本细胞的各种功能成分，包括核酸、蛋白质和脂质，有助于细胞间通讯和维持全身的稳态[5，6]。随着对apov独特有益性质的不断确认，一系列临床前研究已经显示了apov，特别是那些来自间充质干细胞(msc)的apov，在伤口修复、组织再生和免疫调节中具有很大的治疗潜力[7-11]。然而，还不知道细胞凋亡及其代谢物apov是否调节卵巢卵泡生成。

2、卵巢被公认为是雌性配子发生和性激素产生的重要器官。它已经发展了独特的和严格控制的环状结构和响应卵泡生长、类固醇生成、卵母细胞成熟、排卵和黄体形成的调节机制[12]。从胎儿发育到成年期，细胞凋亡长期被认为是女性生殖系统的必要生理过程，在包括生殖细胞耗竭、卵泡闭锁和黄体退化的卵巢功能执行的内源性机制中发挥重要作用[13，14]。在病理学背景下，大量研究已经证明，卵巢局部凋亡，特别是在颗粒细胞(gc)和卵母细胞中发生的凋亡，广泛地参与了卵巢疾病的进展，例如多囊卵巢综合征(pcos)、卵巢早衰(pof)、卵巢衰老和卵巢癌[15-17]。然而，系统性细胞凋亡和循环凋亡囊泡是否有助于卵巢稳态和病理发展仍然是未知的。

技术实现思路

1、一些实施方案中，本发明提供了诱导性囊泡在制备预防或治疗多囊卵巢综合征药物中的应用。

2、一些实施方案中，所述囊泡是在干细胞处于正常存活时通过外加因素诱导其凋亡而产生的囊泡。一些实施方案中，所述诱导的方法包括添加星形孢菌素、紫外线照射、饥饿法、或热应力法。

3、一些实施方案中，所述干细胞为间充质干细胞。

4、关于“多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,pcos)”，是人类女性最常见的内分泌疾病，其特征为雄性激素分泌过高以及伴随产生的胰岛素分泌异常，影响着5％-10％的育龄女性。pcos的主要病症表现为女性无排卵性不孕、月经失调、闭经、肥胖、多毛等。近年研究表明，pcos引起的相关激素代谢紊乱，将提高代谢性疾病如二型糖尿病(type 2diabetes,t2d)和心血管疾病的发生风险。针对pcos的病因，目前pcos的临床治疗手段主要包括通过类固醇药物如地塞米松调节激素水平、利用二甲双胍改善胰岛素抵抗、雌激素和孕激素等避孕药和抗雄激素药物如己烯雌酚片、炔雌醇环丙孕酮片、复方戊酸雌二醇片等[28]。

5、一些实施方案中，本发明采用诱导性囊泡治疗卵巢综合征属于一种新的药物治疗方式，并取得了非常好的效果，为多囊卵巢综合征的治疗找到一种较好的替代疗法。一些实施方案中，所述间充质干细胞来源包括骨髓、牙髓、尿液、口腔、脂肪、胎盘、脐带、骨膜、肌腱或外周血。

6、一些实施方案中，所述间充质干细胞来源于哺乳动物。一些实施方案中，所述哺乳动物选自灵长类动物或鼠。一些实施方案中，所述灵长类动物为人。

7、一些实施方案中，所述囊泡的直径为0.03-10μm。一些实施方案中，所述囊泡的直径为0.03-6μm。

8、一些实施方案中，所述囊泡的直径为0.03-4.5μm。一些实施方案中，所述囊泡的直径为0.03-1μm。

9、一些实施方案中，所述星形孢菌素的浓度为1-15000nm。一些实施方案中，所述星形孢菌素的浓度为200-10000nm。一些实施方案中，所述星形孢菌素的浓度为500-1000nm。一些实施方案中，所述星形孢菌素的浓度为500-900nm。一些实施方案中，所述星形孢菌素的浓度为500-800nm。

10、一些实施方案中，所述囊泡具有标志物syntaxin 4。一些实施方案中，所述囊泡高表达标志物syntaxin 4。一些实施方案中，所述囊泡对标志物syntaxin 4的表达高于同种来源的msc或外泌体。一些实施方案中，所述标志物还包括annexin v、flotillin-1、cadherin 11或integrin alpha 5中的一种或多种。一些实施方案中，所述囊泡高表达标志物annexin v、flotillin-1、cadherin 11或integrin alpha 5。一些实施方案中，所述诱导性囊泡对标志物annexin v、flotillin-1、cadherin 11、integrin alpha 5的表达量高于同种来源的msc或外泌体。

11、一些实施方案中，所述药物为局部注射制剂。一些实施方案中，所述局部注射为皮下、肌肉内、关节内和静脉内的注射。一些实施方案中，在用于所述局部注射时，添加有ph调节剂、缓冲剂、稳定剂、等渗剂和局部麻醉剂中的任意一种以上。一些实施方案中，所述囊泡的制备方法包括以下步骤：1)培养间充质干细胞；2)将步骤1)的间充质干细胞加入含有500-1000nm星形孢菌素的无血清培养基，收集细胞上清液；3)将步骤2)收集的细胞上清液进行超速离心分离获得所述囊泡。一些实施方案中，所述超速离心的方法分离所述囊泡的步骤包括：(a)将收集到的培养上清进行第一次离心，取上清；(b)将步骤(a)中收集到的上清进行第二次离心，取上清；(c)将步骤(b)中收到到的上清进行第三次离心，取沉淀；(d)将步骤(c)中收到到的沉淀进行第四次离心，取沉淀。

12、一些实施方案中，所述第一次离心为500-1500g离心5-30分钟。一些实施方案中，所述第一次离心为500-1000g离心5-20分钟。一些实施方案中，所述第一次离心为500-900g离心5-15分钟。一些实施方案中，所述第二次离心为1000-3000g离心5-30分钟。一些实施方案中，所述第二次离心为1500-2500g离心5-20分钟。一些实施方案中，所述第二次离心为1500-2200g离心5-15分钟。一些实施方案中，所述第三次离心为10000-30000g离心15-60分钟。一些实施方案中，所述第三次离心为12000-25000g离心20-60分钟。一些实施方案中，所述第三次离心为12000-20000g离心20-40分钟。一些实施方案中，所述第四次离心为10000-30000g离心15-60分钟。一些实施方案中，所述第四次离心为12000-25000g离心20-60分钟。一些实施方案中，所述第四次离心为12000-20000g离心20-40分钟。一些实施方案中，本发明提供了一种组合物，包括诱导性囊泡和治疗多囊卵巢综合征的药物。一些实施方案中，所述囊泡是在干细胞处于正常存活时通过外加因素诱导其凋亡而产生的囊泡。

13、一些实施方案中，所述诱导的方法包括添加星形孢菌素、紫外线照射、饥饿法、或热应力法。

14、一些实施方案中，所述干细胞为间充质干细胞。一些实施方案中，所述间充质干细胞来源包括骨髓、牙髓、尿液、口腔、脂肪、胎盘、脐带、骨膜、肌腱或外周血。

15、一些实施方案中，所述间充质干细胞来源于哺乳动物。一些实施方案中，所述哺乳动物选自灵长类动物或鼠。一些实施方案中，所述灵长类动物为人。

16、一些实施方案中，所述囊泡的直径为0.03-10μm。一些实施方案中，所述囊泡的直径为0.03-6μm。一些实施方案中，所述囊泡的直径为0.03-4.5μm。一些实施方案中，所述囊泡的直径为0.03-1μm。一些实施方案中，所述星形孢菌素的浓度为1-15000nm。一些实施方案中，所述星形孢菌素的浓度为200-10000nm。一些实施方案中，所述星形孢菌素的浓度为500-1000nm。一些实施方案中，所述星形孢菌素的浓度为500-900nm。一些实施方案中，所述星形孢菌素的浓度为500-800nm。

17、一些实施方案中，所述囊泡具有标志物syntaxin 4。一些实施方案中，所述囊泡高表达标志物syntaxin 4。一些实施方案中，所述囊泡对标志物syntaxin 4的表达高于同种来源的msc或外泌体。一些实施方案中，所述标志物还包括annexin v、flotillin-1、cadherin 11或integrin alpha 5中的一种或多种。一些实施方案中，所述囊泡高表达标志物annexin v、flotillin-1、cadherin 11或integrin alpha 5。一些实施方案中，所述诱导性囊泡对标志物annexin v、flotillin-1、cadherin 11、integrin alpha 5的表达量高于同种来源的msc或外泌体。

18、一些实施方案中，所述组合物为局部注射组合物。

19、一些实施方案中，本发明提供了所述的组合物在制备预防或治疗多囊卵巢综合征药物中的应用。

20、一些实施方案中，本发明提供了诱导性囊泡在制备促进、改善、恢复或复原受试者的生育力的产品中的应用。

21、一些实施方案中，所述产品包括食品、保健品或药品。

22、一些实施方案中，所述受试者为包括老年个体。一些实施方案中，所述老年个体指的是年龄大于50岁的个体。

23、一些实施方案中，本发明提供了一种卵巢疾病用药指导系统，包含以下构件：(1)rnf43水平分析构件；用于分析待测诱导性囊泡样本中的rnf43水平与正常诱导性囊泡样本中的rnf43水平的偏离；(2)结果判断构件；用于根据rnf43水平分析结果判断用于治疗卵巢疾病的用药方案，所述用药方案为：当待测诱导性囊泡样本中rnf43水平正常时，则直接给予所述待测诱导性囊泡进行用药；当rnf43水平偏低时，则不选择所述待测诱导性囊泡进行用药。

24、一些实施方案中，所述卵巢疾病包括多囊卵巢综合征。