富含脯氨酸小蛋白基因SPRR2A的表达促进剂的制作方法

本发明涉及化妆品原料功效研究领域，具体涉及一种来源于中药卷柏的具有上调皮肤表皮角质形成细胞富含脯氨酸小蛋白基因sprr2a表达的水提物，可以作为皮肤表皮角质形成细胞富含脯氨酸小蛋白基因sprr2a表达的促进剂。

背景技术：

1、表皮具有对物理、化学和微生物等外部环境防御保护功能，同时也可以防止皮肤内营养物质和水分的丢失。角质层是由角化细胞和细胞间脂质组成，类似“砖墙结构”，起到保护作用。角化细胞中的角化包膜形的成是在角质形成细胞分化过程中的一个重要过程，是表皮角质层的机械保护结构的重要组成部分。表皮分化是一个高度形态学变化的过程，是角质形成细胞从基底层分化到角质层的过程。在分化过程中有特异性的蛋白质共同参与完成。

2、在角质形成细胞分化过程中，上百个基因可以编码产生结构蛋白、酶类等不同功能的蛋白，参与和调控板层小体形成、角化包膜的形成、脂质合成等分化的过程。其中，富含脯氨酸小蛋白(sprps)是一类角质细胞结构蛋白，首先出现在细胞胞质溶胶中，并通过转谷氨酰胺酶与膜蛋白交联，在质膜下形成不溶性的角化包膜。sprr2a基因是角化细胞包膜前体蛋白中富含脯氨酸小蛋白家族基因的重要组成成员，其表达与角质形成细胞在体内和体外的末端分化密切相关。

3、紧密连接(tight junction，tj)包括多种跨膜蛋白和胞内蛋白，主要有zo家族、claudin家族、occludin家族等。这些蛋白在细胞产生极性及分化的过程中相互交联，最终形成致密网状结构，封锁细胞间隙。其中，闭锁小带蛋白-1(zonaoccludens-1，zo-1)是闭锁小带(zo)家族成员之一，其为一种支架蛋白，为细胞间连接的细胞质表面组装多蛋白复合物提供了结构基础，可以将完整的膜蛋白与细胞骨架连接起来，使细胞间紧密连接形成网状结构，可以作为观察角质形成细胞分化和皮肤表皮功能的指标。

4、上述与分化相关的结构蛋白在皮肤表皮结构和功能中具有重要作用，因此研究和开发能够调控表皮细胞分化相关基因表达的活性物/成分，提升分化相关蛋白在皮肤表皮内的表达，对于促进损伤皮肤表皮功能的重建和恢复皮肤表皮正常生理功能具有积极的意义和重要的应用价值。

5、卷柏，拳拳如鸡足，但生命力极强，遇水而荣，故又名九死还魂草、还魂草、复活草、长生草、回阳草、见水还阳草。卷柏属(selaginella)植物隶属蕨类植物门石松纲(lycopsida)卷柏科(selaginellaceae)，在我国发现约有70余种，广泛分布于全国各地。2020年版中国药典收载了卷柏(selaginella tamariscina)和垫状卷柏(selaginellapulvinata)。关于卷柏功效的研究表明卷柏属植物具有抗肿瘤、抗菌抗病毒、抗炎、抗衰老、降血糖等多种药理活性，但关于卷柏在皮肤表皮功能重建及恢复皮肤表皮正常生理功能方面的研究和专利还较少。

6、在研究卷柏功效过程中，意外地发现，卷柏水提物有上调角质形成细胞中富含脯氨酸小蛋白基因sprr2a表达的作用，具有促进表皮角质形成细胞分化和提升皮肤表皮功能的功效。

技术实现思路

1、一方面，本发明提供了一种角质形成细胞富含脯氨酸小蛋白基因sprr2a的表达促进剂，其中，所述表达促进剂是卷柏水提物，总糖含量≥32wt％，总多酚含量≥2.34wt％，和/或总黄酮含量≥1.76wt％。

2、在优选的实施方式中，所述卷柏水提物采用水作为提取溶剂，通过回流法萃取，减压浓缩后获得卷柏水提物。优选地，所述卷柏水提物采用干燥全草提取。

3、在优选的实施方式中，所述卷柏水提物中穗花杉双黄酮的含量至少为0.4wt％。在一个具体的实施方式中，所述卷柏水提物中穗花杉双黄酮的含量为0.4482wt％。

4、在优选的实施方式中，所述卷柏水提物的促进角质形成细胞富含脯氨酸小蛋白基因sprr2a的相对表达量≥118％，优选地118-159％。

5、在优选的实施方式中，所述表达促进剂的使用浓度至少为0.125mg/ml，优选地0.125-1.0mg/ml。

6、在优选的实施方式中，所述卷柏水提物的hplc分析图谱的主要峰的保留时间(峰面积％)为：uv＝250nm：峰1：1.294(0.3166)；峰2：1.781(0.9466)；峰3：2.272(7.8658)；峰4：2.513(0.4031)；峰5：2.666(3.4483)；峰6：3.136(1.8813)；峰7：3.539(3.2933)；峰8：4.637(1.9662)；峰9：4.927(3.3443)；峰10：8.832(1.7380)；峰11：9.985(5.1095)；峰12：10.227(1.0910)；峰13：10.462(0.4211)；峰14：10.817(4.2998)；峰15：11.265(2.5141)；峰16：11.688(0.3587)；峰17：11.908(0.6187)；峰18：12.193(0.3443)；峰19：12.451(0.2847)；峰20：12.758(0.5144)；峰21：12.928(0.9179)；峰22：13.105(1.6252)；峰23：13.272(0.2161)；峰24：13.451(0.7592)；峰25：13.630(1.0120)；峰26：13.856(0.3543)；峰27：14.018(0.2768)；峰28：14.599(0.5120)；峰29：14.846(0.8212)；峰30：15.797(1.0628)；峰31：19.133(2.4363)；峰32：22.017(27.7223)；峰33：25.234(1.4764)；峰34：38.200(2.8180)；峰35：49.971(1.9913)；峰36：53.693(3.2685)；峰37：54.129(3.0708)；峰38：54.800(3.7379)；峰39：55.776(0.8058)；峰40：56.045(4.3554)。

7、在优选的实施方式中，所述卷柏水提物的分散浓度为0.1％时的电导率为96.2μs/cm，优选地分散浓度为1％时的电导率为813.0μs/cm。

8、另一方面，本发明涉及所述表达促进剂的制备方法，包括以下步骤：

9、(a)提供卷柏，粉碎，过筛，烘干；

10、(b)用水浸泡；

11、(c)回流法萃取；

12、(d)过滤至浓缩罐，减压浓缩，得到卷柏水提物。

13、在优选的实施方式中，所述步骤(a)采用100目筛实现过筛。

14、在优选的实施方式中，所述步骤(b)采用的料液比为1kg卷柏:10l水。

15、又一方面，本发明还涉及所述表达促进剂在皮肤外用剂中的应用，用于促进角质形成细胞中富含脯氨酸小蛋白基因sprr2a的表达。

16、在优选的实施方式中，所述皮肤外用剂选自：面霜、乳液、啫喱、化妆水、精华液、面膜、眼霜、气雾清洁泡、喷雾、沐浴露、或洗面奶。