一种可调节肥胖型哮喘的罗伊氏粘液乳杆菌GloryLR15组合物及应用的制作方法

本发明属于微生物菌剂，具体涉及一种可调节肥胖型哮喘的罗伊氏粘液乳杆菌glory lr15组合物及应用。

背景技术：

1、支气管哮喘（简称哮喘）是危害公共健康的慢性炎症性疾病，影响着不同国家1-18%的人口，近二十年流行病学和临床资料表明，肥胖是哮喘发生、发展的重要危险因素，成人肥胖使哮喘发生风险提高3倍，儿童提高1-2倍。研究表明，体质量的过度增长和减低均与哮喘的患病率、发作频率、严重程度呈正相关。肥胖不仅增加了哮喘的严重程度，还降低了机体对糖皮质激素等常规药物的治疗效果，加之合并症以及与代谢相关的免疫失衡，使得肥胖型哮喘患者的控制问题备受关注。

2、与单纯性哮喘相比，肥胖型哮喘的呼吸道症状更严重、更频繁。肥胖可导致一系列代谢改变，如胰岛素抵抗导致炎症、氧化应激、内质网应激、脂毒性和线粒体障碍等系统性和组织特异性代谢缺陷。同时，肥胖的代谢改变(如糖尿病及胰岛素抵抗)与哮喘的发病机制相关。肥胖型哮喘的发病机制十分复杂。生理学研究表明，在无气道炎症情况下，肥胖可影响呼吸动力学，改变正常的肺功能，导致患者出现呼吸困难等症状。正常情况下，空气随胸膜腔内的负压梯度进入肺部，但由于肥胖患者脂肪在胸腹腔内堆积，腹内和胸膜压力增加，导致呼吸时膈肌向下运动和胸壁向外运动受限，呼吸模式的改变进一步引起补呼气量、功能残气量的显著减少。肥胖型哮喘患者往往存在糖脂代谢异常、胰岛素抵抗，具有代谢综合征的特征，但目前肥胖与哮喘之间的具体机制仍不明确。越来越多的证据表明，线粒体数量及功能的改变在肥胖型哮喘发病机制中起重要作用，而线粒体靶向抗氧化剂对于瘦素引起的人支气管上皮细胞活性氧类(reactive oxygen species，ｒos)增多具有保护作用。

3、目前，治疗哮喘的药物主要包括肾上腺皮质激素、β２受体激动剂、胆碱受体阻滞剂。肾上腺皮质激素是目前临床上治疗哮喘的首选药物，具有极强的抗炎作用，但越来越多的研究报告指出长期服用雌激素容易使人产生耐药性，还会使人发胖。患高血压、骨质疏松的哮喘患者不能服用此类药物，目前对如何合理使用糖皮质激素药物的认识还存在不足。随着科研技术水平的提高，人们在对微生物的研究中发现了很多有利于人体健康的菌种。由于益生菌具有重要的免疫调节作用，因此通过益生菌治疗哮喘等过敏性疾病成为近年来研究的热点。目前用于治疗哮喘研究的益生菌主要包括加氏乳杆菌a5、嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌、副干酪乳杆菌以及丁酸梭菌。

4、然而，单独的益生菌对哮喘的作用仅仅体现在对哮喘患者的辅助防治上，对患者的生活质量有一定的改善，由于哮喘临床试验周期长，不可控因素太多，这种防治作用仍具有局限性，并且临床治疗发现正常哮喘的治疗方式或药物对于肥胖型哮喘人群不完全有效。

5、虎杖中的化学成分主要有二苯乙烯类、蒽醌类、酚类、黄酮类等，二苯乙烯类成分主要有白藜芦醇、虎杖苷等; 蒽醌类成分主要有大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等，其中白藜芦醇和大黄素含量较高，并且具有药理作用。虎杖中的白藜芦醇具有多方面生理活性，主要包括: 可对脂蛋白代谢进行有效调节、抑制血小板聚集、极强的抗氧化活性、预防治疗动脉硬化与心血管疾病、神经保护以及抗癌等作用。大黄素则是虎杖中蒽醌类化合物的代表成分，同样具有较强的活性和多样的药理作用，具有抗菌消炎、增强免疫力、抗癌、护肝、抑制胰酶、抗氧化、改善循环系统、肾保护、调节胃肠道等作用。

6、玉米须中含有多糖、黄酮、甾醇、有机酸、皂苷等多种活性成分，具有抗癌、降血糖血脂、干预糖尿病、保护肝肾、抗氧化、抗菌消炎等保健功效。玉米须中还含有维生素、生物碱、肌醇、隐黄质、尿囊素等多种功能因子，是一种作用广泛、来源丰富、价格低廉、易于采集的中药材。

7、因此，对于本领域而言，探寻一种可调节肥胖型哮喘的组合物，以达到预防或缓解肥胖型哮喘症状迫在眉睫。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种可调节肥胖型哮喘的罗伊氏粘液乳杆菌glory lr15组合物及应用。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、一种可调节肥胖型哮喘的罗伊氏粘液乳杆菌glory lr15组合物，所述罗伊氏粘液乳杆菌glory lr15组合物由复合益生菌和功能性物质组成，所述复合益生菌由罗伊氏粘液乳杆菌glory lr15、副干酪乳杆菌glory lp16、动物双歧杆菌乳亚种xltg11和嗜酸乳杆菌la-06组成，所述功能性物质由抗性淀粉、虎杖提取物和玉米须提取物组成。

4、优选的，罗伊氏粘液乳杆菌glory lr15、副干酪乳杆菌glory lp16、动物双歧杆菌乳亚种xltg11和嗜酸乳杆菌la-06的质量比为10-13:4-7:3-5:3-5。

5、优选的，所述抗性淀粉、虎杖提取物和玉米须提取物的质量比为50:15-20:5-10。

6、优选的，所述虎杖提取物的制备方法如下：

7、将虎杖粉碎过60目筛，加入去离子水中，调节ph至4.5-5.5，接着加入纤维素酶和β-葡萄糖苷酶，进行酶解，酶解完成后过滤，将滤渣干燥后，得到预处理虎杖粉；将预处理虎杖粉加入体积分数为70%的乙醇溶液中，随后加入卵磷脂，进行醇提，醇提完成后过滤，得到滤液；将滤液进行减压浓缩去除溶剂，减压浓缩的压力为40kpa-50kpa，温度为75-80℃，即得虎杖提取物。

8、优选的，所述虎杖、去离子水的质量比为10:40-70，所述纤维素酶的用量为虎杖质量的0.2-0.5%，所述β-葡萄糖苷酶的用量为虎杖质量的0.3-0.5%，所述酶解温度为30-35℃，时间为2-3h；所述预处理虎杖粉与乙醇溶液的料液比为1:14-20，所述卵磷脂的用量为预处理虎杖粉的0.8-1.2%，所述醇提温度为50-60℃，时间为3-4h。

9、优选的，所述玉米须提取物的制备方法如下：

10、将玉米须干燥后粉碎过60目筛，随后加入体积分数为70%的乙醇溶液中，调节ph至5，进行超声提取，提取三次，提取完成后将滤液合并，调节ph至7，加入磷酸甘油脂，搅拌均匀后得到玉米须提取液；将玉米须滤渣加入去离子水中，接着加入纤维素酶和木瓜蛋白酶，室温下酶解0.5-1h，酶解完成后进行水提，提取完成后过滤，得水提液；将玉米须提取液与水提液混合后，减压蒸馏去除溶剂，减压浓缩的压力为40kpa-50kpa，温度为75-80℃，真空冷冻干燥，即得。

11、优选的，所述玉米须与去离子水的料液比为1:20-30，所述超声提取的温度为65-75℃，时间为2-3h，超声功率为400-500w，磷酸甘油脂的用量为玉米须质量的0.1-0.2%。

12、优选的，所述玉米须滤渣与去离子水的料液比为1:14-18，纤维素酶的用量为玉米须滤渣质量的0.2-0.3%，木瓜蛋白酶的用量为玉米须滤渣质量的0.2-0.3%，所述水提的温度为80-85℃，时间为1-2h；所述玉米须提取液与水提液的质量比为40:10-15。

13、优选的，所述罗伊氏粘液乳杆菌glory lr15组合物中复合益生菌的含量为20-30%。

14、本发明还保护一种所述可调节肥胖型哮喘的罗伊氏粘液乳杆菌glory lr15组合物在预防和缓解肥胖型哮喘中的应用。

15、与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：

16、（1）本发明提供的可调节肥胖型哮喘的罗伊氏粘液乳杆菌glory lr15组合物，加入的复合益生菌由罗伊氏粘液乳杆菌glory lr15、副干酪乳杆菌glory lp16、动物双歧杆菌乳亚种xltg11和嗜酸乳杆菌la-06组成，四种菌株共同作用，相比于单株益生菌，具有更强的缓解肥胖型哮喘功效，同时加入的功能性物质，不仅可促进益生菌的增殖，还可提高益生菌在肠道内的定植，延长益生菌在肠道内的停留时间，提高益生菌的利用率。

17、（2）本发明提供的可调节肥胖型哮喘的罗伊氏粘液乳杆菌glory lr15组合物，加入的抗性淀粉，具有调节肠道菌群作用并能促进肠道有益菌生长、促进肠道短链脂肪酸的生成，具有改善肠道健康的功效，同时益生菌可利用抗性淀粉，粘附到抗性淀粉颗粒上，提高自身对低ph值的抵抗力，增强益生菌的活性；加入的虎杖提取物，先将虎杖进行酶解处理，可有效提高虎杖中白藜芦醇和大黄素等活性物质的含量和提取率，同时提取过程中加入卵磷脂作为表面活性剂，可起到增溶作用，进一步提高活性物质的提取率；加入的玉米须提取物，通过超声醇提，将玉米须中黄酮、甾醇、有机酸、皂苷等多种活性成分提取出来，并且在超声提取完成后，在提取液中加入磷酸甘油脂，通过磷酸甘油脂与活性成分之间的非共价键相互作用，自组装形成的类脂质体囊泡，增加活性物质的稳定性，延长活性物质的作用时间；再通过酶解法，将玉米须渣中的多糖提取出来，通过该提取方法使玉米须提取物中的多种活性成分共同发挥其功效，提高玉米须的利用率。

18、（3）本发明提供的可调节肥胖型哮喘的罗伊氏粘液乳杆菌glory lr15组合物，通过将虎杖中的白藜芦醇与玉米须中的木犀草素协同作用，白藜芦醇能抑制哮喘小鼠的血浆和肺泡灌洗液中总ige、ova特异性ige、igg2α、il-4、il-5的水平，木犀草素通过抑制哮喘小鼠体内 il-13ra2 的表达，从而抑制气道壁的增厚和平滑肌增殖，减轻气道重塑，两者可协同复合益生菌，从而显著降低小鼠中央气道阻力，显著减少血清中的总ige、ova特异性ige、特异性igg1及特异性igg2a水平，还能降低肺泡灌洗液中中性粒细胞含量以及显著降低脾脏中的th2细胞，达到缓解肥胖型哮喘的功效。

19、说明书附图

20、图1为本发明罗伊氏粘液乳杆菌glory lr15组合物对肥胖哮喘小鼠中央气道阻力的影响；

21、图2为本发明罗伊氏粘液乳杆菌glory lr15组合物对肥胖哮喘小鼠肺泡灌洗液中中性粒细胞含量的影响；

22、图3为本发明罗伊氏粘液乳杆菌glory lr15组合物对肥胖哮喘小鼠血清中细胞因子的影响，其中a为血清中总ige水平、b为血清中ova特异性ige水平、c为血清中ova特异性igg1、d为血清中ova特异性igg2a水平；

23、图4为本发明罗伊氏粘液乳杆菌glory lr15组合物对肥胖哮喘小鼠脾脏中免疫细胞的影响，其中a为各组小鼠脾脏中th1细胞占cd4+ t细胞的比例、b为各组小鼠脾脏中th2细胞占cd4+ t细胞的比例以及c为各组小鼠脾脏中treg细胞占cd4+ t细胞的比例。