专利名称：猪囊虫灭活油乳剂苗的制作方法
技术领域：
本发明涉及动物疫苗的制造及其检验方法。IPCA61K。
猪囊尾蚴病是一种人畜共患的传染病，它与人体猪带绦虫病相互传播，交叉感染，形成人畜间的恶性循环，威胁着人民健康，并影响养猪业的发展。
予防猪囊虫病的方法虽已有研究，如内蒙古哲里木盟兽研所张高迪等以浓缩的六钩蚴培养液制成虫苗，八五年张家口市农业专科学校应用活囊虫腹腔接种，但制成工艺流程简单的虫苗国内外尚未见报道。
本发明的目的就是提供一种工艺流程简单、抗原易获得、可就地制苗的予防猪囊虫病虫苗的制造方法及其检验方法。该虫苗安全有效，保护率达88.7-95.3%，免疫期可达八个月。
本发明是用新鲜囊虫病猪的成熟囊尾蚴经匀浆，按比例加入福氏完全佐剂制成予防猪囊虫病的虫苗，制造方法如下一、抗原材料的选择和制备本苗的主要抗原为经兽医卫生检验鉴定无其它传染病病变的囊虫病猪的猪囊尾蚴。将经选择后的猪囊虫肉表面用75%酒精燃烧消毒后，在紫外线或甲醛熏蒸消毒后的无菌间内无菌操作摘取。
制备抗原应采无破损的完整的虫体。摘取的囊虫先称重计数，再用PH6.8-7.2灭菌生理盐水漂洗3-4次，滤干。加1/万叠氮钠溶液，置-15℃下反复冻融三次备用。制苗前先将虫体化冻以5000-10000转/分钟匀浆器进行捣碎(约10-15分钟)。待虫体完全呈胶糊状，按原浆含虫数加PH6.8-7.2灭菌生理盐水稀释成每毫升含4个囊虫的浆液，再在每毫升浆液中加入青霉素1000单位和链霉素1000微克作为配制乳剂苗的水相。
免疫增强剂的准备将每支含60毫克的卡介苗，在用前60℃灭活1小时备用。
二、油相的制备本发明包括Ⅰ、Ⅱ两种类型苗、其油相制备方法如下Ⅰ型苗油相的制备分别取医用羊毛脂20份、医用液体石蜡80份，以120℃高压灭菌30分钟。在50℃水浴边加热边振摇的条件下，使羊毛脂和液体石蜡混合，然后倾注入经消毒过的搅拌器中搅拌均匀。
Ⅱ型苗油相的制备按10号白油94份、6份司本80配成油相。配法为先取少量白油，加入油相全量的1%的硬脂酸铝，调匀后加温至121℃使其完全溶解，再与10号白油和司本80混合，加热温度为45℃-50℃。然后分装，以121℃灭菌40分钟。
三、乳化制苗。
Ⅰ型苗的乳化制苗制成的油相在搅拌器不停地搅拌下，按油相与抗原水相1∶1的比例，将水相缓慢加入油相，水相加完后，加速到8000-10000转/分，再搅拌3-5分钟，使其充分乳化，即成淡黄色油乳剂苗。
Ⅱ型苗的乳化制苗按油相与抗原水相1∶1的比例，先取油相倒入容器内开动搅拌器，以缓慢速度加入抗原水相。加完后再加速到8000-10000转/分，搅拌3-5分钟，即制成油包水乳剂。再将油包水乳剂1份加到0.5份抗原水相中，继续在8000-10000转/分速度下搅拌直至呈均匀乳剂为止，即制成双相油乳剂苗。
在Ⅰ型、Ⅱ型苗乳化时，均应加入总量1-5/万的稀释成1%的麝香草酚溶液，按每毫升总量加入0.5-1毫克的量加入卡介苗。
虫苗经检验合格后，加压分装于灭菌小瓶中，盖塞后以蜡封口，粘贴标签，送库冷藏。
用量和用法40-60日龄仔猪耳根肌肉注射3毫升，饲养期超过一年以上者，在第一次注射后八个月时可用2毫升加强免疫一次。
一般注射虫苗20天即可产生良好的免疫力，免疫期为八个月以上。
有效期从配苗乳化之日算起，保存于2-15℃冷暗处，有效期为十个月。虫苗在保存期内如有油水分层不应超过十分之一。
虫苗的检验1、无菌检验按照《成品检验的有关规定》进行，应无菌生长。如有杂菌生长，每毫升虫苗的非病原菌不应超过500个。
2、安全检验选用未注射猪瘟疫苗及猪囊虫抗体阴性的两月龄左右的健康敏感猪5头，各于耳根肌肉注射乳剂虫苗3毫升。注苗后每天上、下午各测体温一次，观察21天，体温、精神、食欲与注苗前相比没有明显变化;或体温升高不超过1℃，稽留不超过两天或减食不超过一天，注射局部无严重反应，疫苗可判为合格。另用18-22克小白鼠5只，各肌肉注射虫苗0.2毫升，观察21天，注射局部无严重反应，全部健活为合格。
3、物理性状检查除按《成品检验有关规定》进行检查外，应根据虫苗特性检查粘度及稳定性。
粘度Ⅰ型苗用1毫升吸管，吸取虫苗0.4毫升，在20℃室温下平均30秒一滴;Ⅱ型苗用1毫升吸管吸取0.4毫升，在20℃室温下平均17秒一滴。
稳定性Ⅰ型苗经2000转/分10分钟离心油水不分层，滴在平面呈正园形不扩散;Ⅱ型苗用冷水跌落法试验第2滴中心部不扩散呈正园形，外面有一层扩散圈，2000转/分10分钟离心油水不分层。
4、效力检验5头用于安全检验的猪，在免疫后30天采血检验抗体滴度，至少4头抗体滴度不小于1∶320为合格。如有两头猪以上达不到1∶320者，则该批苗可重检一次，若重检不合格，该批苗废弃。
抗体滴度用间接血凝法测定，按常规准备绵羊血球，洗涤血球。将血球戍二醛化，醛化的血球经单宁酸处理，最后进行致敏。
醛化的鞣化血球的致敏取囊液抗原，用PH6.8-7.2生理盐水稀释成25%稀释液待用。将25%醛化的鞣化血球两者等量分别同时放入37℃水浴中作用使液体温度达30℃左右，然后两者混合继续放37℃水浴中致敏30分钟。取出用PH6.8-7.2盐水离心洗涤三次，用PH6.8-7.2的1%兔血清生理盐水或PH6.8-7.2的0.03%牛血清白蛋白将致敏血球稀释成25%血球悬液，加1/万叠氮钠放入-4℃冰箱中待用。
本发明致敏时用囊液抗原，而已知技术为提取囊液抗原，简化了操作。稀释致敏血球一般用1%兔血清生理盐水，本发明可用0.03%牛血清白蛋白代替。
为了鉴定原料匀浆的抗原性，以保证其注射后抗体的效价，对匀浆液用反向间接血凝法测抗原效价。其中绵羊血球的准备、血球的洗涤、血球的戍二醛化、醛化血球的单宁酸处理均按已知常规操作，最后致敏时方法也同常规操作，仅改变了两种材料(1)可用猪r球蛋白，也可用阳性猪血清代替，简化了操作。(2)用1%兔血清生理盐水，也可用0.03%牛血清白蛋白将致敏血球稀释成25%血球悬液。
测效价的方法均与已知技术相同。
受检血清和虫苗结果的判定如下
本发明的优点为工艺流程简单，操作方便，抗原容易获得，可就地制苗，且检验方法较简便。免疫保护作用较强，无不良反应，免疫期长，对猪的平均保护率达95.05%。
权利要求
1.猪囊虫灭活油乳剂苗的制造方法，其特征在于以猪囊尾
的匀浆液为抗原水相，与油相1∶1混合搅拌后制成灭活油乳剂苗。
2.根据权利要求1所述的虫苗，其特征在于油相是由20份医用羊毛脂、30份医用石蜡在50℃水浴振摇搅拌制成。
3.根据权利要求1所述的虫苗，其特征在于油相是由94份10号白油、6份司本80组成，配制时先取少量白油加入油相全量的1%的硬脂酸铝调匀后加温到120℃使其完全溶解。
4.根据权利要求2或3所述的虫苗，其特征在于虫苗中应加入免疫增强剂和防腐剂，其含量为1%的麝香草酚溶液为总量的1-5/万，每毫升匀浆液中加入青霉素1000单位、链霉素1000微克。
5.虫苗抗体效价的测定方法，其特征在于致敏时可用囊液抗原代替提纯的囊液抗原、用0.03%牛血清白蛋白代替1%兔血清生理盐水。
6.虫苗抗原效价的测定方法，其特征在于致敏时可用阳性猪血清代替猪r球蛋白，可用0.03%牛血清蛋白代替1%兔血清生理盐水。
全文摘要
本发明给出了一种由猪囊尾蚴匀浆液为抗原水相制造猪囊虫灭活乳剂苗的方法及其抗体效价、抗原效价的测定方法。该虫苗具有免疫力强、免疫时间长、无不良反应、保护率高等特点。本方法工艺简单、抗原易获得、可就地制苗。
文档编号A61K39/00GK1033569SQ8810810
公开日1989年7月5日 申请日期1988年11月21日 优先权日1988年11月21日
发明者曹济, 施秀民, 徐正在, 梁资富 申请人:张掖市食品公司