专利名称：用于预防和治疗凝血噁烷a的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于预防和治疗凝血噁烷A2介导的疾病的药物，其含有作为活性成分的哒嗪酮化合物或其可药用的盐，尤其涉及凝血噁烷A2合成酶抑制剂。
背景技术：
凝血噁烷A2(TXA2)主要由血小板产生和释出，并显示强的血小板凝集和血管加压作用。有关于它们的药理学作用已有许多报导。在如下疾病，例如动脉硬化、糖尿病、局部缺血性心脏病、肺病、高血压、休克、Kawasaki疾病和乙醇肝疾病中发现TXA2的加速产生，因此，这说明TXA2与这些疾病发作和加重有关的可能性很高。为治愈这些疾病，已开发了TXA2合成酶抑制剂和TXA2拮抗剂，例如咪唑衍生物、吡啶衍生物和咪唑并吡啶衍生物。然而，人们仍需要具有更好效果的用于预防和治疗TXA2介导的疾病的药物。
人们已知哒嗪酮化合物具有血小板凝集抑制作用、强心作用、血管舒张作用和抗-SRS-A(过敏反应的缓慢反应物质)作用(WO91/16314，US No.5202323，EP-A-482208)。
发明描述现在我们发现，上述哒嗪酮化合物和其可药用的盐有迄今未知的作用，也就是说，预防和治疗TXA2介导的疾病的活性，尤其是TXA2合成酶抑制作用。
因此，本发明的目的是提供一种通过使用哒嗪酮化合物的用于预防和治疗TXA2介导的疾病的药物，尤其是TXA2合成酶抑制。
根据本发明，其提供了一种预防或治疗TXA2介导的疾病的药物，尤其是TXA2合成酶抑制剂，其含有作为活性成分的式(I)的哒嗪酮化合物或其可药用的盐
其中R1、R2和R3彼此独立地是氢原子或低级烷基，X是卤素元素、氰基或氢原子，Y是卤素原子、三氟甲基或氢原子，A是任意地被羟基取代的C1-C8亚烷基。
以下解释本说明书中使用的符号。
用于R1、R2和R3的低级烷基可以是直链或支链的，并具有1-6个碳原子，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和己基。
优选R1和R2均是氢原子，优选R3是氢原子或C1-C4烷基。
用于R3的C1-C4烷基的实例是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。
用于X和Y的卤素原子是，例如，氟原子、氯原子、溴原子或碘原子，优选X是卤素原子，优选Y是卤素原子或氢原子。
用于A的任意地被羟基取代的C1-C8亚烷基可以是直链或支链的，其实例为亚甲基、1，2-亚乙基、1，2-亚丙基、亚丁基、亚戊基、亚己基、亚庚基、亚辛基、2，2-二甲基-1，2-亚乙基、2，2-二乙基-1，2-亚乙基、2，2-二正丙基-1，2-亚乙基、羟基亚甲基、1-羟基-1，2亚乙基、2-羟基-1，2-亚乙基和3-羟基-1，2-亚丙基。优选任意地被羟基取代的C1-C5亚烷基。
在式(I)中，亚甲基和吡啶环的结合位置没有特别限制。优选的位置是吡啶环上相对于氮原子的3位上。
Y可以在苯环的任何位置上取代，优选在4-位。
尤其优选哒嗪酮化合物，其中，在式(I)中，R1和R2是氢原子，R3是氢原子或C1-C4烷基，X是卤素原子，Y是卤素原子或氢原子，A是任意地被羟基取代的C1-C5亚烷基。
更优选的哒嗪酮化合物(I)的实例包括4-溴-6-(3-苯基丙氧基)-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮，4-氯-6-(3-苯基丙氧基)-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮，4-氯-6-(3-(4-氯苯基)丙氧基)-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮，4-溴-6-(3-(4-氯苯基)丙氧基)-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮，4-溴-6-(2，2-二甲基-3-苯基丙氧基)-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮，
4-氯-6-(2，2-二甲基-3-苯基丙氧基)-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮，4-溴-6-[3-(4-氯苯基)-2，2-二甲基丙氧基]-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮，4-氯-6-[3-(4-氯苯基)-2，2-二甲基丙氧基]-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮，4-溴-6-[3-(4-氯苯基)-3-羟基丙氧基]-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮，4-氯-6-[3-(4-氯苯基)-3-羟基丙氧基]-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮，4-溴-6-[3-(4-氯苯基)-2-羟基丙氧基]-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮，和4-氯-6-[3-(4-氯苯基)-2-羟基丙氧基]-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮。
在本发明中使用的哒嗪酮化合物(I)包括立体和旋光异构体。
哒嗪酮化合物(I)是已知化合物，可通过例如Wo91/16314，US5202323和国际专利申请PCT/JP95/69中描述的方法制备。
哒嗪酮化合物(I)的可药用的盐是，例如与无机酸(例如盐酸、氢溴酸、磷酸和硫酸)形成的盐和与有机酸(乙酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、苯果酸和酒石酸)形成的盐。
哒嗪酮化合物(I)可通过已知方法转化成上述的盐。
用于证实本发明中使用的化合物(I)的作用的方法并没有特别的限定，该作用可通过已知方法证实。
在本发明中为活性成分的哒嗪酮化合物(I)和其可药用的盐是非常低毒性的，对哺乳动物，如人、狗、牛、马、兔、小鼠和大鼠有预防和治疗TXA2介导的疾病和活性，尤其是TXA2合成酶抑制作用。即，它们具有预防和治疗TXA2介导的疾病作用。例如，脑梗塞、脑血栓形成、支气管哮喘、脑中风、心肌梗塞、急性心力衰竭、心绞痛、高血压、闭塞性动脉硬化、闭塞性血栓性脉管炎、糖尿病性肾病变、糖尿病性神经病变和由于糖尿病引起的血甘油三酯过多。
哒嗪酮化合物(I)和其可药用的盐的剂量形式的实例为用于非口腔给药的，例如，针剂(皮下、静脉内、肌内、腹膜内注射)、软膏、栓剂或气雾剂，和用于口腔给药的，例如片剂、胶囊剂、粒剂、丸剂、糖浆剂、液剂、乳剂或悬浮液剂。
哒嗪酮化合物(I)和其可药用的盐通过常用于制药的方法配制成制剂。
用于口腔给药的片剂、胶囊剂、粒剂和丸剂通过使用例如赋形剂(例如蔗糖、乳糖、葡萄糖、淀粉和甘露糖醇)、粘合剂(例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨糖醇、黄蓍胶、甲基纤维素和聚丙烯吡咯烷酮)、崩解剂(例如淀粉、羧甲基纤维素或其钙盐、微晶纤维素和聚乙二醇)和润滑剂(例如滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙、氧化硅、乳酸钠和甘油)制备。
针剂、气雾剂、糖浆剂、液剂、乳剂和悬浮液剂使用适用于活性成分的溶剂(例如，水、乙醇、异丙醇、丙二醇、1，3-丁二醇和聚乙二醇)、表面活性剂(例如脱水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯、氢化蓖麻油的聚氧乙烯醚和卵磷脂)、悬浮剂(例如纤维素衍生物，如甲基纤维素和羧甲基纤维素的钠盐，和天然橡胶，如黄蓍胶和阿拉伯胶)、防腐剂(例如对羟基苯甲酸盐、氯化苯甲烃铵和山梨酸盐)等制备。栓剂使用例如聚乙二醇、羊毛脂和椰子油制备。
哒嗪酮化合物(I)和其可药用的盐的剂量根据患者的年龄、体重、症状的严重性等因素适当地确定，对于成人通常以单一至若干次分配的剂量给药0.001～500mg/天，优选0.005～100mg/天。
本发明通过实施例和实验以实施例更详细地说明。人们应理解，它们并不是以任何方式限定本发明。
使用如下药物等进行如下实验。
化合物A，4-溴-6-[3-(4-氯苯基)丙氧基]-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮盐酸盐；化合物B，4-溴-6-[(3S)-(4-氯苯基)-3-羟基丙氧基]-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮盐酸盐；和化合物C，4-溴-6-[(3R)-(4-氯苯基)-3-羟基丙氧基]-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮盐酸盐，它们以常规方法制备溶解于100％二甲基亚砜(DMSO)中，在使用时在用DMSO稀释的状态下用作试剂。
将消炎痛(由Sigma Chemical Co.制备)悬浮于生理盐水中，向其中滴加2.5％碳酸钠溶液(pH约8.0)将其溶解。在使用中将单一用途的稀释剂稀释胶原(Collagen Reagent Horm；由Niko Bioscience制备)，对于前列腺素H2(PGH2，由Funakoshi制备)在氮气氛下除去丙酮后，在使用时重新溶解于乙醇中。
实验实施例1兔血小板的TXA2释放使用乙二胺四乙酸(EDTA；77mM EDTA，1/10体积)从正常兔子的颈动脉采用。血液以1800rpm离心8分钟，回收上清液中的富血小板血浆，将其随后以3200rpm离心8分钟。沉积物(血小板)用Tyrode-HEPES-EDTA缓冲液洗涤，以3200rpm离心8分钟。将沉积物悬浮在Tyrode-HEPES缓冲液中以制备洗涤的血小板(5×108血小板/ml)。
将100％DMSO或试剂(化合物A，1.5μl)加入洗涤的血小板(270μl)中，混合物在37℃加热2分钟。随后，加入胶原(10μg/ml)和1mMCa2+(或者在研究未刺激的血小板释放时仅加入1mM Ca2+，开始实验。在37℃加热8分钟后，加入10-3M消炎痛，将小杯放在冰中以终止反应。在以10000rpm离心10分钟后，收集上清液，贮存于-20℃直到用于TXA2测定。
实验实施例2使用兔血小板微粒体的TXA2合成酶的抑制使用EDTA(77mM EDTA，1/10体积)从正常兔的颈动脉采血。将血液1300rpm离心10分钟，回收上清液中的富血小板血浆，将其以3400rpm离心15分钟。沉积物用生理盐水(最初体积)洗涤，以3400rpm离心15分钟。随后在沉积物中加入0.05M Tris-HCl缓冲液(1mM EDTA，pH7.5，血小板湿重量的3倍重量)，使用polytron匀化混合物(2分钟，全速)。匀浆以8300rpm离心15分钟(Tomg RD-20 III，No.3N)，将上清液以1000000rpm离心1小时(Beckman TL-100，TLA 100.3)。将沉积物悬浮于0.05M Tris-HCl缓冲液(1mM EDTA，pH7.5，血小板湿重量的1/3重量)以制备微粒体级分。将该级分贮存在-80℃下直到用于实验。
加入0.05M Tris-HCl缓冲液(pH7.5，890μl)、100μl上述微粒体(85μg蛋白质)和100％DMSO或试剂(化合物A，5μl)，混合物在22℃预培养3分钟。随后加入PGH2(5nmol，5μl)以开始反应。在22℃培养3分钟后，加入1N盐酸以中止反应。加入1M Tris碱(55μl)以中和反应混合物，混合物以10000rpm离心5分钟。回收上清液，贮存于-20℃直到用于TXA2测量。
在上述实验实施例中TXA2量通过使用TXB2(其稳定化合物)实验试剂盒(由Amersham制造)采用EIA方法作为TXB2的量进行测定。
实验实施例1和2的结果示于表1中表1
注*1抑制50％TXA2释放所需的量(μM)*2抑制50％TXA2合成所需的量(μM)实验实施例3使用人血小板微粒体抑制TXA2合成酶以实验实施例2中的相同方式进行实验，只是用人血小板微粒体代替兔血小板微粒体。化合物A、化合物B和化合物C用作试剂结果，当使用人血小板微粒体时，TXA2合成酶抑制作用的IC50(抑制50％TXA2合成所需的量)分别为，对于化合物A为0.010μM，对于作为光学异构体的化合物B和化合物C为0.020μM和0.030μM。
实验实施例4；急性毒性给鼠和狗口服化合物A，经测定LD50不小于2g/kg，从而说明本发明使用的化合物(I)的毒性极其低。
从上述实验结果，证实哒嗪酮化合物(I)和其盐具有杰出的TXA2释放抑制作用和TXA2合成酶抑制作用，并且明显是低毒性。
实施例1片剂采用常规方法混合如下成分，并制成每片含50mg活性成分的糖衣片剂。
化合物A 10g乳糖 20g淀粉 5g硬脂酸镁 0.1g羧甲基纤维素钙 7g总共42.1g实施例2 胶囊剂用常规方法混合如下成分，充入明胶胶囊以制备每粒胶囊含有50mg活性成分的胶囊。
化合物A 10g乳糖 20g结晶纤维素10g硬脂酸镁 1g总共 41g实施例3 软膏用常规方法混合如下成分制备1％软膏化合物A1g橄榄油 20g白凡士林 79g总共 100g实施例4 气雾悬浮剂混合如下成分(A)，将得到的混合物装入装有阀的容器。在其中在20℃由阀喷咀使推进剂(B)加压至约2.46-2.81mg/cm2(表压)制备气雾悬浮剂。
(A)化合物A 0.25wt％肉豆蔻酸异丙酯 0.10wt％乙醇26.40wt％(B)1，2-二氯四氟乙烷和1-氯五氟乙烷的60wt％-40wt％ 73.25wt％混合物哒嗪酮化合物(I)和其可药用的盐具有预防和治疗TXA2介导的疾病的活性，尤其是TXA2合成酶抑制作用，用作预防和治疗TXA2介导疾病的药物。尤其用作TXA2合成酶抑制剂。它们具有预防和治疗TXA2介导的疾病，如脑梗塞、脑血栓形成、支气管哮喘、脑中风、心肌梗塞、急性心力衰竭、心绞痛、高血压、闭塞性动脉硬化、闭塞性血栓性脉管炎、糖尿疾性肾病变、糖尿病性神经病变和由于糖尿病引起的血甘油三酯过多的效果。
权利要求
1.一种用于预防或治疗凝血噁烷A2介导的疾病的药物，其含有作为活性成分的式(I)的哒嗪酮化合物或其可药用的盐 其中R1、R2和R3彼此独立地是氢原子或低级烷基，X是卤素原子、氰基或氢原子，Y是卤素原子、三氟甲基或氢原子，A是任意地被羟基取代的C1-C8亚烷基。
2.权利要求1的药物，它是凝血噁烷A2合成酶抑制剂。
3.权利要求1的药物，其中R1和R2均是氢原子，R3是氢原子或C1-C4烷基，X是卤素原子，Y是卤素原子或氢原子，和A是任意地被羟基取代的C1-C5亚烷基。
4.权利要求1的药物，其中式(I)的哒嗪酮化合物是选自如下的化合物4-溴-6-(3-苯基丙氧基)-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮，4-氯-6-(3-苯基丙氧基)-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮，4-氯-6-(3-(4-氯苯基)丙氧基)-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮，4-溴-6-(3-(4-氯苯基)丙氧基)-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮，4-溴-6-(2，2-二甲基-3-苯基丙氧基)-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮，4-氯-6-(2，2-二甲基-3-苯基丙氧基)-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮，4-溴-6-(3-(4-氯苯基)-2，2-二甲基丙氧基)-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮，4-氯-6-(3-(4-氯苯基)-2，2-二甲基丙氧基)-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮，4-溴-6-(3-(4-氯苯基)-3-羟基丙氧基)-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮，4-氯-6-(3-(4-氯苯基)-3-羟基丙氧基)-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮，4-溴-6-(3-(4-氯苯基)-2-羟基丙氧基)-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮，4-氯-6-(3-(4-氯苯基)-3-羟基丙氧基)-5-(3-吡啶基甲氨基)-3(2H)-哒嗪酮。
5.一种预防或治疗凝血噁烷A2介导的疾病的方法，其包括施用式(I)的哒嗪酮化合物或其可药用的盐 其中R1、R2和R3彼此独立地是氢原子或低级烷基，X是卤素原子、氰基或氢原子，Y是卤素原子、三氟甲基或氢原子，A是任意地被羟基取代的C1-C8亚烷基。
6.权利要求1的式(I)哒嗪酮化合物或其可药用的盐在制备用于预防或治疗凝血噁烷A2介导的疾病的药物中的应用。
全文摘要
一种用于预防或治疗TXA
文档编号A61K31/50GK1141590SQ9519174
公开日1997年1月29日 申请日期1995年2月20日 优先权日1994年2月22日
发明者R·池川, 今田光昭, 中村宪史, 谷川启造, 水流添畅智 申请人:株式会社绿十字, 日产化学工业株式会社