专利名称：用kgf治疗糖尿病的方法
技术领域：
本发明领域本发明涉及应用角化细胞生长因子治疗或预防糖尿病发生。本发明背景角化细胞生长因子(KGF)是上皮细胞特异性的生长因子，是首先在人胚胎肺成纤维细胞细胞系的条件培养基中鉴定的。Rubin等人，美国科学院院报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)86802-806(1989)。已经在数种来源于不同发育阶段的上皮组织的基质成纤维细胞细胞系中检测了KGF信使RNA的表达，在从正常成年肾和胃肠道器官提取的RNA中，KGF的转录本也很明显。Finch等人，科学245752-755(1989)。KGF是从培养基中的成纤维细胞分泌而在体内则是在真皮而不是表皮体内表达，这一证据表明，KGF可能是角化细胞增殖的重要正常旁分泌效应子。研究已经表明在刺激组织培养基中初级或次级人角化细胞增殖方面，KGF的作用与EGF一样强 Marchese等人，细胞生理学杂志(J.Cell.Phys.144326-332(1990))。
在正常成年动物的体外和体内研究表明，在毛囊形态形成，肝细胞增殖，以及肺、乳腺、胰腺、胃、小肠和大肠上皮细胞增殖方面，KGF的作用有所不同。Panos等人，临床研究杂志(J.Clin.Invest.92969-977(19930)；Ulich等人，美国病理学杂志(Am.J.Path.144862-868(1994)；Yi等人美国病理学杂志(Am.J.Path.14580-85(1994))；以及Ulich等人，临床研究杂志(J.Clin.Invest.931298-1306(1993))。尚未详细研究KGF在胚胎或新生儿发育中的作用，已经有文献表明KGF是新生小鼠精囊发育中的重要介导物。Alarid等人，P.N.A.S.911074-1078(1994)。
公开的PCT专利申请WO 90/08771描述了从人胚胎成纤维细胞细胞系的条件培养基中纯化KGF，纯化KGF的部分氨基酸序列，基因的克隆，以及在菌细胞中表达所述基因以产生有生物活性的重组KGF。前述的文献公开了可以用KGF或KGF样多肽作为烧伤伤口的创伤愈合剂或刺激移植的角膜组织。事实上，已经证明，当将重组KGF局部应用于大鼠耳或猪皮肤上外科手术诱发的伤口时，KGF可促进上皮再生并使上皮厚度增加。Pierce等人，实验医学杂志(J.Exp.Med.179831-840(1994))；和Staiano-Coico等人，实验医学杂志(J.Exp.Med.178865-878(1993))。发明概述已经发现KGF可用于治疗称为糖尿病的内科病。
图1是柱形图，说明在7天内，每天以5mg/kg体重(mg/kg)的剂量皮下施用后，KGF在大鼠中的作用。在KGF治疗开始后2天，单次静脉内施用链脲菌素(55mg/kg)。在图的右半侧表示KGF治疗的糖尿病大鼠，标注为“Strep+KGF”。在其左右为三个对照组用氯化钠溶液治疗7天没有糖尿病诱发(“NaCl”)，在链脲菌素诱发糖尿病之前或之后用氯化钠溶液治疗7天(“Strep”)，用KGF治疗7天，没有糖尿病诱发(“KGF”)。在纵轴上表示每分升以mg表示的未禁食的血葡萄糖水平，是在诱发糖尿病的第5天(即开始KGF或氯化钠治疗后的第7天)测量的。每组有4只大鼠。
图2是柱形图，说明根据与糖尿病有关的其它生理学测量数据，在相同大鼠模型中KGF的作用。在纵轴上左、右分别表示在KGF或氯化钠治疗的第7天的24小时内排出的禁食尿葡萄糖水平(以mg/dl计)和禁食排出的尿ml数。标注(“NaCl”，“Strep”，“Strep+KGF”，“KGF”)与图1中的意思相同。每组有4只大鼠。
图3表示在诱发糖尿病后的8天期间，在相同糖尿病大鼠模型中，每天未禁食的血葡萄糖水平(以mg/dl计)。在诱发糖尿病后一天开始，一些动物每天用KGF皮下给药(3mg/kg)治疗(Strep+KGF)，其余的用氯化钠溶液进行预治疗和后治疗(pre-and Post-treated)，作为对照(“Strep+NaCl”，)。还用氯化钠治疗的非糖尿病组的动物(“NaCl”)作为另外的对照。每组有6只大鼠。
图4表示在诱发糖尿病后的6天内，在相同大鼠模型上，禁食条件下的尿葡萄糖水平(以mg/dl计)，在这种情况下，从诱发疾病后的第2天开始。KGF治疗从诱发糖尿病后的1天开始。图中的符号意思与图3中的相同。每组有6只大鼠。
图5表示每24小时的尿排出量，以ml数表示，试验组与图3和4中的试验组相同，在诱发糖尿病后的第2、5和8天测量。图中的符号意思与图3中的相同。每组有6只大鼠。
图6表示在该试验中每组大鼠的平均水摄取量。大鼠饮水不限，将饮水量以24小时内饮用的ml数表示。每组有6只大鼠。
图7说明KGF类似物对由链脲菌素诱发的Sprague-Dawley大鼠糖尿病的作用。
图8是天然KGF的核苷酸(SEQ ID NO1)和氨基酸序列(SEQID NO2)(给编码天然KGF的成熟形式的核苷酸用SEQ ID NO1的201-684位碱基表示，KGF的成熟形式则用SEQ ID NO2的32-194位氨基酸残基表示。本发明的详细描述用具有天然多肽的某些或所有生物学特性的任何形式的角化细胞生长因子均可实施本发明的方法。所述形式包括从生物体液、细胞和组织中分离并纯化的，或用化学合成或通过在已经用编码DNA或RNA转化的异源宿主细胞中表达的重组方法而得到的。在前文提到的WO90/08771中描述了用于生产角化细胞生长因子的重组方法。本领域专业人员熟知的其它方法也适用于相同的目的。
作为实例，可以将编码KGF蛋白质的核苷酸序列或其部分序列插入到适宜的表达载体，即含有插入蛋白质编码序列之转录和翻译所必需的元件的载体中。也可以由天然KGF基因和/或其连接区提供必需的转录和翻译信号。可以用各种宿主-载体系统以表达蛋白质编码序列。这些包括但不限于用病毒(痘病毒，腺病毒等)感染的哺乳动物细胞系统；用病毒(如棒状病毒)和诸如含酵母载体的酵母或用噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA转化的细菌这样一些微生物感染昆虫细胞系统。这些载体的表达元件其长度和特异性可以有所不同。根据所用的宿主-载体系统，可以采用多种适宜的转录和翻译元件中的任何一种。
可以使用任何以前描述的将核苷酸片段插入到载体中的方法，以构建含嵌合基因的表达载体，所述嵌合基因由适宜的转录/翻译控制信号和蛋白质编码序列组成。这些方法可包括体外重组DNA和合成技术以及体内重组(遗传重组)。用第二个核酸序列可以调节核酸序列编码的KGF蛋白质或肽片段的表达，以便在用重组DNA分子转化的宿主细胞中表达KGF蛋白质或肽。例如，用本领域已知的任何启动子/增强子元件可以控制KGF的表达。可用于控制KGF表达的启动子包括，但不限于，SV40早期启动子区，在劳氏肉瘤病毒3′长末端重复中所含的启动子，疱疹胸苷激酶启动子，金属硫蛋白基因的调节序列，原核表达载体，如β-内酰胺酶启动子，或tac启动子，含胭脂碱合成酶启动子区(Herrera-Estrella等人)的植物表达载体，或花椰菜花叶病毒35S RNA启动子，以及光合酶核酮糖二磷酸羧化酶的启动子，来自酵母或其他真菌的启动子元件，如Gal4启动子，ADC(醇脱氢酶)启动子，PGK(磷酸甘油激酶)启动子，碱性磷酸酶启动子，和下列具有组织特异性而且已应用于转基因动物的动物转录控制区在胰腺腺泡细胞中有活性的胰肽酶EI基因控制区，在胰β细胞中有活性的胰岛素基因控制区，在淋巴样细胞中有活性的免疫球蛋白基因控制区(Grosschedl等人)，在睾丸，乳腺，淋巴样和肥大细胞中有活性的小鼠乳腺肿瘤病毒控制区(Leder等人)，在肝中有活性的白蛋白基因控制区，在肝中有活性的α甲胎蛋白基因控制区，在肝中有活性的α1-抗胰蛋白酶基因控制区，在髓样细胞中有活性的β球蛋白基因控制区，在脑中的少突神经胶质细胞中有活性的髓磷脂碱性蛋白基因控制区，在骨骼肌中有活性的肌球蛋白轻链-2基因控制区，以及在下丘脑中有活性的促性腺释放激素基因控制区。
通过DNA-DNA杂交，“标记”基因功能是否存在以及插入序列的表达，正如对于本领域专业人员来说是熟悉的那些方法，可以鉴定含KGF基因插入片段的表达载体。
可以用本领域已知的数种方法增殖KGF基因。适宜的宿主系统和生长条件一经建立，就可以大量增殖并制备重组表达载体。
另外，调节插入序列的表达或以所需的特定方式修饰并加工基因产物的宿主细胞菌株可加以选择。在存在某种诱导剂的情况下，可以提高从某些启动子开始的表达。因此，可以控制基因工程KGF蛋白质的表达。此外，不同的宿主细胞对蛋白质翻译和翻译后的加工和修饰具有特征性的和特殊的机制(例如，糖基化，谷氨酸残基的γ羧化，蛋白水解裂解)。可以选择适宜的细胞系或宿主系统以确保所表达的外源蛋白质按需要修饰和加工。
应当理解，本文中所用的术语“角化细胞生长因子”和“KGF”包括并意指(除非另作说明，意思可互换)天然KGF和KGF类似物蛋白质(或“突变蛋白”)，所述类似物的特征在于与天然KGF的肽序列有基本上相同的肽序列，而且保持了天然KGF的某些或全部生物学活性，特别是非成纤维细胞上皮细胞增殖(例如，根据H-胸苷掺入法测定的结果)，BALB/MK角化细胞的刺激作用比NIH/3T3成纤维细胞的大至少约500倍，BALB/MK角化细胞的刺激作用比BS/589上皮细胞或CC1208上皮细胞的大至少约50倍。“特征在于与天然KGF肽序列有基本上相同的肽序列”指在严格的杂交条件下，优选由能够使SEQ IDNO1中201-684位核苷酸杂交的DNA序列编码的肽序列。
通过排列两个序列以最大程度地匹配残基，包括移动氨基和/或羧基末端，按需要导入缺口和/或删除候选插入片段中的残基，可以确定两个氨基酸序列之间相应氨基酸的位置。用熟知的和常规使用的序列同源性/相同性扫描系统程序中的一个即可以完成数据库检索，序列分析和操作(例如，Pearson and Lipman(1988)，美国科学院院报，852444-2448；Altschul等人(1990)分子生物学杂志，215403-410；Lipmanand Pearson(1985)，科学，2221435或Devereux等人(1984)，核酸研究，12387-395)。
在前面提到的严格的杂交条件是指将通常在杂交反应中加以控制的盐，温度，有机溶剂和其它参数等诸条件严格地综合起来。举证性的严格的杂交条件是在62-67℃，4X SSC中杂交，然后在62-67℃，用0.1X SSC洗涤约1小时。另外，举证性的严格的杂交条件是在40-45℃，45-55％甲酰胺，4X SSC中杂交(参见，T.Maniatis等人，分子克隆(实验室手册)(Molecular Cloning(A Laboratory Manual)；冷泉港实验室(Cold Spring Harbor Laboratory)(1982)，p387-389)。
因此，蛋白质包括氨基酸的等位基因变异或缺失，取代或插入，包括天然KGF的片段，嵌合或杂交分子。KGF的一个实例包括具有对应于SEQ ID NO2中的Cys1和Cys15被取代或缺失的氨基酸残基的蛋白质，与亲本分子相比，所得的分子的稳定性得到改善(如U.S.S.N 08/487825所教导的，1995年7月7日申请)。KGF的另一实例包括电荷改变的多肽，其中天然KGF的41-154位氨基酸残基(优选残基为Arg41，Gln43，Lys55，Lys95，Lys128，Asn137，Gln138，Lys139，Arg144，Lys147，Gln152，Lys153，或Thr154)中的一个或多个已缺失或用中性氨基酸残基或带负电荷的氨基酸残基-被选择来影响正电荷减少的蛋白质-取代(如在U.S.S.N 08/323337中所教导的，1994年10月13日申请)。KGF的另一实例包括通过用有较高成环能力的至少一个氨基酸取代天然KGF中Asn115-His116-Tyr117-Asn118-Thr119成环区内的至少一个氨基酸而产生的这样一些蛋白质(如在U.S.S.N 08/323473中教导的，1994年10月13日申请)。另一实例还包括在天然KGF的123-133区(SEQ ID NO2的氨基酸154-164序列)内有一个或多个氨基酸取代、缺失或加成物这样一些蛋白质；这些蛋白质可能有激动或拮抗活性。
特别公开的蛋白质包括下列KGF分子(表示为在SEQ ID NO2所列成熟蛋白质(负信号序列)中的那一位置所发现的残基，接着的括号中标明所述氨基酸的位置，然后为取代的残基或“-”表示为缺失)C(1，15)S，ΔN15-ΔN24，ΔN3/C(15)S，ΔN3/C(15)-，ΔN8/C(15)S，ΔN8/C(15)-，C(1，15)S/R(144)E，C(1，15)S/R(144)Q，ΔN23/R(144)Q，C(1，15，40)S，C(1，15，102)S，C(1，15，102，106)S，ΔN23/R(137)E，ΔN23/K(139)E，ΔN23/K(139)Q，ΔN23/R(144)A，ΔN23/R(144)E，ΔN23/R(144)L，ΔN23/K(147)E，ΔN23/K(147)Q，ΔN23/K(153)E，ΔN23/K(153)Q，ΔN23/Q(152)E/K(153)E；R(144)Q和H(116)G。
为了在治疗中实际应用，可以用任何常规方法将KGF配制成用适宜于施用的药物组合物，包括但不限于非肠道给予，如皮下，静脉内或肌内注射。这些标准制剂很可能包括适宜的用于液体制剂的缓冲盐，防腐剂和稳定剂，或通常用于冻干制剂的适宜的缓冲盐，稳定剂，防腐剂和填充剂。还可将KGF配制成缓慢释放的形式，通过真皮内，皮下，或腹腔内给药施用。用本领域专业人员熟知的标准方法，可以配制KGF的这些缓慢释放形式。大多数KGF的施用方案可以由患者在家中作皮下注射或真皮内给药，或由医生将长期缓慢释放制剂植入皮下或腹腔内来应用。
可以由医生根据经验来确定KGF的剂量方案。通常，认为KGF的有效量为每天每个患者每kg体重约0.001-约10mg，优选剂量为约0.05-约5mg/kg/天。治疗方案可以包括KGF的单次或重复注射，或KGF的缓慢连续释放的低剂量，这要取决于每个患者糖尿病的类型和严重程度。使用KGF的疗程必须产生足够的胰β细胞功能以便在代谢需求改变的过程中保持血液葡萄糖水平的正常，而且避免经常的或深度的低血糖。目的是使患I型糖尿病的患者恢复胰岛细胞的功能以避免其经常需要外源胰岛素。新诊断为I型糖尿病的患者，其某些胰岛功能尚有保留，可以作为KGF治疗的候选人。KGF可以用来保持该型糖尿病患者的胰岛功能从而消除，延缓或避免永久的糖尿病症状。一般认为I型糖尿病是自体免疫疾病，从而用免疫抑制剂对其进行治疗。根据本发明，可以用KGF与免疫抑制剂相结合来治疗该疾病，包括在胰岛细胞移植的固定中作为一种佐剂应用。就下列应用来进一步说明本发明。材料在下列体内研究中所用的试验材料是，特别表明的天然(天然产生的)序列的KGF，二种KGF类似物，其中一种类似物已经用定点诱变的标准技术，由丝氨酸取代天然氨基酸序列1和15位的半胱氨酸(即C(1，15)S)，另一种则用标准技术，切掉天然KGF N-末端的前23个氨基酸(即ΔN23)。通过在大肠杆菌中重组表达生产所有蛋白质，然后纯化至均一，它们在N-末端各含一甲硫氨酸残基(Met-1)。将各蛋白质作为皮下制剂使用。以前的试验表明，当在成年大鼠中全身施用时，这些蛋白质有可比较的活性。在下列研究所用的糖尿病和非糖尿病大鼠中，天然序列KGF和各类似物有可比活性。糖尿病的体内模型化学诱发的各种动物糖尿病模型通常用来研究所述疾病及其治疗。链脲菌素可诱发小鼠，大鼠，仓鼠，狗和猴中的糖尿病，尽管最常用的是在大鼠和小鼠中的研究。Junod等人，Proc.Soc.Exp.Pio.Med.126210-205(1967)；Rerup，药物学评论(Pharm.Rev.)22485-518(1970)；Rossini等人，P.N.A.S.742485-2489(1977)，和Ar′Rajab and Ahren，胰(Pancreas)850-57(1993)。在大鼠中，链脲菌素以45-70mg/kg的剂量单次静脉注射可以诱发稳定的糖尿病。45mg/kg以下的剂量诱发可恢复的短暂糖尿病状态。在链脲菌素注射的一天内，诱发了高血糖状态。与正常大鼠相比，血液中的胰岛素水平基本上保持不变；但在胰腺中的胰岛素和C-肽总含量严重降低。大鼠出现了人糖尿病的典型症候和症状血液葡萄糖水平升高(高血糖)，尿中有葡萄糖(糖尿)，易渴(烦渴)，排尿次数增多(尿频)，易饿(多食)。
在链脲菌素诱发的Sprague-Dawley大鼠糖尿病模型上完成本公开内容中所描述的研究。采用在研究开始体重为200-260克的雄性大鼠。通过每kg体重单次静脉内注射溶于柠檬酸钠缓冲液中的50mg链脲菌素来诱发糖尿病。非糖尿病对照大鼠接受单次静脉内注射柠檬酸钠缓冲液作为对照。每天皮下注射KGF。根据试验结果，KGF的剂量为3或5mg/kg/天。在第一个试验中，KGF治疗开始于诱发糖尿病的前2天，一直持续到糖尿病诱发后，共进行8次注射。在第二和第三个试验中，供皮下施用的KGF治疗开始于用链脲菌素诱发糖尿病的1天后。在第四个试验中，7天的KGF治疗开始于链脲菌素处理的7天后，然后再给动物治疗12个星期。在所有试验中，除第四个试验外，均用血液葡萄糖水平，尿葡萄糖水平和尿体积作为终点进行分析。另外，在某些试验中要测量水摄取量，尿C-肽水平或胰腺的总胰岛素和C-肽含量。在第四个试验中，评估的终点的只是液葡萄糖。
由于通过肝循环除去了大部分的胰岛素，所以测量外周胰岛素浓度反映了肝后代谢过程而不是从胰腺的胰岛素分泌。因此，经常测量C-肽，用作胰岛素分泌的外周指标。C-肽是从前胰岛素加工成胰岛素而产生的。胰岛素和C-肽是以等摩尔量从β细胞中分泌的，而只有少量的C-肽由肝排出。KGF的体内施用第一个研究用描述的糖尿病模型，首先用下列四组试验大鼠评估KGF治疗糖尿病的效力1皮下注射不含链脲菌素的氯化钠溶液预治疗和后治疗的对照(非糖尿病)大鼠；2静脉注射50mg/kg链脲菌素诱发大鼠的糖尿病，皮下注射氯化钠溶液作预治疗和后治疗的大鼠；3静脉注射50mg/kg链脲菌素诱发大鼠的糖尿病，皮下注射天然KGF作预治疗和后治疗的大鼠；和4用皮下注射天然KGF治疗的对照大鼠，不用链脲菌素。
在7天期间，给所有四组治疗大鼠施用5mg/kg/天的天然KGF或等体积的氯化钠溶液。在KGF或氯化钠施用开始后2天，给2组和3组中的大鼠静脉注射55mg/kg单剂量的链脲菌素，已知该剂量可以在大鼠中诱发中等程度糖尿病。监测所有大鼠非禁食的血液葡萄糖水平，体重，禁食后的尿葡萄糖水平和尿排出量。给2和3组施用链脲菌素7天后(即开始研究后9天)，将所有各组中的大鼠过夜禁食，杀死，然后进行尸检。在每种情况下，将胰腺保存在福尔马林锌中，包埋，然后进行常规组织学加工。
如图1所示，与非糖尿病对照大鼠(1组)相比，在链脲菌素施用后的第5天，糖尿病对照大鼠(2组)中的非禁食血液葡萄糖水平显著升高。在链脲菌素施用前已经用KGF预治疗并用KGF进行后治疗的糖尿病大鼠，其非禁食血液葡萄糖水平比非KGF治疗的糖尿病对照(2组)的显著低，但仍比非糖尿病对照(1组)的高，见图1。如图2所示，2组糖尿病对照大鼠的禁食尿葡萄糖水平和尿体积在该研究开始的第7天(即用链脲菌素注射后5天)显著升高。这种情况是由于在胰岛中生产胰岛素的β细胞受到破坏，而且葡萄糖代谢严重失调，从而导致尿中排出葡萄糖。与此相反，3组的糖尿病大鼠(用KGF进行了预治疗和后治疗)禁食尿中的葡萄糖升高的程度显著低于糖尿病对照(2组)大鼠。KGF治疗组的尿排出量也显著低于糖尿病对照组的，见图2。
这些结果与用链脲菌素作为诱发剂而诱发大鼠中度糖尿病的情况相一致。在糖尿病诱发前用KGF治疗，而且在诱发后，又用KGF连续治疗的糖尿病大鼠表现出轻度的糖尿病。因此，可以得出结论，KGF治疗可以部分预防糖尿病的诱发或者在链脲菌素诱导的β细胞破坏后，可以恢复生产胰岛素的胰岛细胞。为了区别这些可能性，接着研究疾病诱发后开始的KGF治疗。
第二个研究用前述的相同的糖尿病模型，用下列三组试验大鼠评估KGF治疗糖尿病的效力1皮下施用不含链脲菌素的氯化钠溶液治疗的对照大鼠；2静脉内施用链脲菌素诱发糖尿病，然后皮下施用氯化钠溶液后治疗的大鼠，和3静脉内施用链脲菌素诱发糖尿病，然后皮下施用C(1，15)S后治疗的大鼠。
在诱发糖尿病后1天开始，在13天的过程中以3mg/kg/天的剂量或氯化钠溶液给试验大鼠施用。在试验过程中一直监测血液葡萄糖水平，尿葡萄糖水平，尿排出量总计以及禁食和非禁食条件下摄取的水量。在静脉注射链脲菌素1天内，2组和3组的大鼠得了糖尿病(图3)。在注射链脲菌素后24小时，给3组大鼠开始KGF治疗并此后每天持续。在1，2，4，5和8天测量非禁食后血液葡萄糖水平。如图3所表明的，在3组中的KGF治疗能够使循环中的血液葡萄糖水平在第4天降低到接近对照大鼠的葡萄糖水平(1组)，这种情况持续到第8天。在第2，5和8天测量非禁食的尿葡萄糖排出量。图4表明，KGF治疗将尿葡萄糖水平降低了八分之七以上。相似的，当在第5和8天测量时，KGF治疗的糖尿病大鼠的尿排出量也正常了(图5)。每24小时的水摄取ml数在KGF治疗的糖尿病大鼠中没有增加，与作为对照的接受氯化钠溶液的糖尿病大鼠中的一样(图6)。在发病后第8天使大鼠禁食，在第9天时禁食后的血液葡萄糖水平在这三组之间没有差异。在第9天时，与糖尿病大鼠相比，KGF治疗的糖尿病大鼠禁食后的水摄取量和尿排出量明显减少，这进一步说明疾病的消除。
第三个研究第三个研究是第二个研究的重复，并证实图3-6中的数据。另外，在该试验中，当对大鼠进行尸检时，从各大鼠中取出整个胰腺，提取胰岛素和C-肽，然后进行定量分析。下面的表1显示三组中各自从胰腺所提取的胰岛素或C-肽的平均量。当与用氯化钠溶液治疗的糖尿病大鼠相比时，KGF能够增加糖尿病大鼠胰腺中的胰岛素和C-肽的总含量。
表1组1胰腺中的总含量胰岛素(μg) C-肽(μmol)对照 83.7±6.723.5±0.1糖尿病加氯化钠治疗6.4±3.30.4±0.1糖尿病加KGF治疗 18.9±7.41.0±0.31n＝每组3-4只大鼠2平均值±S.E.
第四个研究在于了解在Sprague-Dawley大鼠模型上，KGF对链脲菌素诱发的糖尿病的作用。在第0天，使各组大鼠接受45或50mg/kg链脲菌素(STZ)。在这些处理后，每天监测非禁食条件下的血液葡萄糖水平以评估胰岛损伤的严重程度。在第5天，将STZ处理的动物根据高血糖的程度分成2组(20只/组)。分组界限定为血液葡萄糖水平为300mg/dl。以STZ未处理的动物组作为对照。在第7天时，给高血糖组的10只动物皮下注射ΔN23(3/mg/kg/天)或PBS，连续7天。然后每天，每隔一天或每周监测血液葡萄糖水平。结果在图7中列出。注意到在KGF给药期间，接受KGF的两组STZ处理的动物的血液葡萄糖均有显著降低。重要的是，就STZ处理的动物体现的平均血液葡萄糖降低而言，开始血糖浓度为＜300mg/dl的血液葡萄糖组，稳定在约150mg/dl，而在开始血糖浓度为＞300mg/dl的血液葡萄糖组见到的血液葡萄糖降低只是暂时的。注意图7中横座标天数刻度是非线性的。
权利要求
1.治疗糖尿病的方法，包括给患有所述疾病的哺乳动物施用治疗有效量的角化细胞生长因子或其类似物。
2.根据权利要求1的方法，其中哺乳动物是人。
3.根据权利要求1的方法，其中角化细胞生长因子选自C(1，15)S和ΔN23。
4.根据权利要求1的方法，其中以含有药物学可接受的载体的药物组合物的形式施用角化细胞生长因子或其类似物。
5.根据权利要求4的方法，其中以非经胃肠给药的注射方式施用所述药物组合物。
6.根据权利要求1的方法，其中所述角化细胞生长因子或其类似物的施用量为约0.001-10mg/kg体重/天。
7.根据权利要求6的方法，其中所述施用量为约0.05-约5mg/kg/天。
全文摘要
本发明公开一种用角化细胞生长因子治疗哺乳动物糖尿病的方法和药物组合物。
文档编号A61P11/00GK1168678SQ95196410
公开日1997年12月24日 申请日期1995年10月12日 优先权日1994年10月13日
发明者S·L·奥克曼, G·F·皮尔斯 申请人:安姆根有限公司