专利名称：参桂胶囊的制作方法
技术领域：
本发明是一种中药复方制剂，即治疗胸痹(冠心病心绞痛)的纯中药制剂。
冠心病是严重威胁人类健康的常见病、多发病，据世界卫生组织报道，心血管病的死亡率占第一位，其余才是脑血管、肿瘤疾病，因此研究防治心血管疾病(冠心病)的高效、低毒药物，是历史赋予我们的任务。目前治疗冠心病的西药主要有硝酸酯类化合物，受体阻滞剂和钙拮抗剂等，这些药物只能消除症状(治标)，不能根治病因(治本)，而且有一定毒副作用，中药治疗冠心病的药物一般起效比较慢，疗效欠佳，对心电图的改善一般在40-65％之间。
因此，寻找新的治疗胸痹(冠心病心绞痛)的药物一直是人们大力研究的课题。
本发明的目的是研制一种起效迅速，药效持久，无毒副作用的新药。
本发明是通过下列途径实现的。参桂胶囊的组成和制造方法。
1、组成红参∶川芎∶桂枝＝4∶4.5∶32、制造方法取1/2量红参，粉碎成细粉，备用；取另1/2量粉碎成粗粉，用65％乙醇湿润过夜，按(中国药典90年版一部附录制剂通则流浸膏剂与浸膏剂项下渗漉法)1-3m/分钟/Kg流速收集药材10倍量的渗漉液，放置备用。另取川芎、桂枝二味药，加4倍量水，按蒸留法提取挥发油至量不再增加为止，收集挥发油另器存放；馏后物滤过，药渣加8倍量水煎煮二次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度1.05(60℃测)，放冷，加乙醇使含醇量达65％，放置24小时以上，滤过，滤液与红参渗漉液合并，回收乙醇到稠膏，加入红参细粉，拌匀，80℃干燥，粉碎成细粉。挥发油用少量红参细粉吸收均匀后，加入上述细粉中混匀，制粒，装入胶囊中，包装。本药方解本方选用人参为君药。人参味甘微苦，性温，入脾肺二经，补脾肺之气，脾气旺则能运化水谷，化生水谷之精微，而上注于肺；肺朝百脉，肺气旺，则输布水谷之精微于五脏六腑全身。故《灵枢·营卫生会篇》说“人受气于谷，谷入于胃，以传于肺，五脏六腑皆受气”。补益脾肺，肺气旺，心气充，则能鼓动血气运行不息。本方证虽本在心气不足，但其标则为血脉瘀阻，故在治疗上尚宜臣以活血化瘀之剂。川芎味辛性温，入肝经，辛香走窜，其性善散，为气中之血药，故有活血散瘀之功。《本草正》说它“性最疏通，味薄气雄，功用专在气分，上升头顶，旁达肌肤，一往直前，走而不守”。这也正是在诸多活血化瘀药中选用川芎的原因。此外，川芎尚有行气开郁、祛风燥湿及止痛之功，这也有益于活血通痹。因为血气的运行虽然主要由赖心气的推动，但也需借助于阳气的温运鼓动，方中桂枝味辛甘、性温。辛甘则能化阳，而加其性温，与人参相伍，则能助人参以温阳化气、鼓动心阳，以助人参鼓动血气运行之功；在此方中也为臣药。诸药组合成方，既能益气通阳，以助源头血行鼓动之力而治本；又能活血化瘀、通经活血，以疏通血气运行之道而治标，君臣相互配合，标本兼治，则痹自消。本方简而不繁，严谨合理，是一首治疗胸痹(冠心病)，特别是心阳不振，气虚血瘀较理想的处方。
结合本发明药物的稳定性，药理毒理研究和临床研究进一步阐述本发明的可靠性和安全性。一、稳定性试验本试验在室温下留样观察三个月按参桂胶囊质量标准草案的方法与标准检验，分别于制成后，一个月、二个月、三个月后，对三批包装于白色塑料瓶中的样品(0.35g×50粒)的性状、鉴别、检查(水分、崩解时限)含量测定，卫生学等项目进行了初步稳定性考察，其考察结果见下表。
从考察结果看，三批样品在考察期内质量稳定。
参桂胶囊稳定性考察结果报告表
二、毒理学研究和临床安全性试验1.急性毒性(最大耐受量)实验本试验目的是对参桂胶囊安全性做出评价，为临床试验用药提供科学依据。
1.实验药品参桂胶囊浓缩液3.0g/ml，由河南中医学院制剂研究室提供，批号900505，溶剂水。
2.动物来源昆明种小鼠，体重20±2g，雌雄各半，由河南省动物中心提供。实验室温度20±1℃。
3.实验方法小鼠20只，实验前禁食12小时，自由饮水。实验按150g(50ml)/kg给小鼠灌胃。给药量已达最大浓度、最大容积，在24小时内给药2次(相当于临床用量1565倍)，两次灌胃间隔12小时。观察7天(严密观察小鼠的饮食、活动、皮毛、粪便、口鼻眼分泌物等反应)，实验结束后用颈椎脱臼方法处死小鼠，肉眼观察其心、肝、脾、肺、肾、胃、肠等内脏器官。
4.实验结果观察7天，无一例死亡，其饮食、活动、皮毛、粪便、口鼻眼分泌物等均无不良反应，肉眼观察其内脏器官亦未发现异常变化。
5.结论参桂胶囊最大耐受量实验表明150g(50ml)/kg/Bid，相当于临床用量1565倍，没有发现毒副作用，说明该药是一种安全无毒药物。
2.长期毒性实验参桂胶囊(简称参桂)15g、7.5g、3.75g/kg/d(按公斤体重计算，相当于临床用量80倍、40倍、20倍)，给Wistar大鼠灌胃90天后，对其饮食、活动、体重、睡眠、尿液、血象、肝、肾功能均无不良影响，病理组织学检查亦未发现内脏蓄积中毒的不良反应，说明长期服用参桂产生毒、副作用的可能性很小。3.临床安全性试验五家医院对454例患者进行了治疗前、后的安全性观察，在血、尿常规检查和肝、肾功能等安全性指标观察中，两组患者治疗前后均无变化。结果见表1、2。
表1二组血、尿常规变化情况比较治疗前(血常规) 治疗后(血常规) 治疗前(尿常规) 治疗后(尿常规组别例数正常异常正常异常正常异常正常异常治疗组 303303 0 303 0 303 0 303 0对照组 151151 0 151 0 151 0 151 0表2二组肝、肾功能变化情况比较治疗前(肝功能) 治疗后(肝功能) 治疗前(肾功能) 治疗后(肾功能)组别 例数正常异常正常异常正常异常正常异常治疗组 303303 0 303 0 303 0 303 0对照组 151151 0 151 0 151 0 151 0由上表可知两组对血、尿、肝、肾功能均无影响。三、药理学研究实验材料一、药品参桂混悬液0.5g/ml生药用0.5g/dl羟甲基纤维素钠、生理盐水溶液配制，口服给药；参桂注射液，注射给药，由河南中医学院制剂研究室提供，；批号900505。
参桂注射液制备按处方量称取川芎、桂枝，加水浸泡过夜，蒸馏，收集蒸馏液一定量，蒸馏液再重蒸馏一次，收集重蒸馏液，放置备用。馏后物滤过，药渣加水煎煮二次，滤过，滤液放置备用，另取红参粗粉，65％乙醇渗漉，收集渗滤液10倍量，与川芎、桂枝的乙醇滤液合并，回收乙醇至无醇味，放冷，滤过，滤液加川芎、桂枝重蒸馏液，加水调整到1ml药液相当于2g生药，分装于10ml安瓶中，100℃灭菌30’，备用。
活心丸由广州白云山制药总厂生产，批号890517，生理盐水配成40mg/ml提取物，口服给药。活心丸注射液取成品活心丸，加水浸泡过夜，充分搅拌使溶解，离心后再用微孔滤膜滤过，调整浓度使1ml相当于2粒活心丸(40mg提取物)，分装于安瓿内，100℃灭菌30’，备用。
生理盐水由郑州市化学制药厂生产，批号8904116；异丙肾上腺素北京制药厂生产，批号89102314；硫氮卓酮30mg/片，生理盐水配制成3mg/ml，上海延安制药厂生产，批号9005031；脑垂体后叶素10单位/1ml上海天丰药厂生产，批号890704。
二、动物昆明种小鼠，体重20±2g，雌雄各半，灌胃给药；豚鼠体重260-300g，雌雄均有，由河南省动物中心提供；狗体重14-18kg，大鼠由北京医科大学实验动物部提供。
方法与结果1.对大鼠急性心肌梗塞的保护作用[1]Sprague-Dawley大鼠32只，雄性，体重285±27g，随机分为4组，甲、乙组分别灌胃参桂混悬液1.0g(2ml)/kg/d，2.0g(4ml)/kg/d，丙组灌胃硫氮卓酮3mg(1ml)/kg/d，丁组灌胃同体积生理盐水(给药均为同体积，下同)。连续给药5天，末次给药后一小时，用3％戊巴比妥钠30mg(1ml)/kg腹腔注射麻醉，于左侧的第4-5肋间开胸，暴露心脏，剪开心包膜，在左心耳根部与肺动脉园锥交界处，相当于左冠状动脉起始处下2mm穿一细线结扎，迅速送还心脏，挤出进入胸腔的气体，缝合胸壁。结扎冠状动脉后6小时，开胸剪取心脏，蒸馏水冲洗，剔除心房及大血管根部，用纸吸干，将全心室从心底到心尖切成4-5片，放入37℃恒温水浴的NBT染色液中，不断振摇，15分钟后取出。正常心肌染为暗兰色，梗塞区心肌则不染色，剪下缺血坏死组织称重，计算其占心室肌重量的百分率，结果见表1。
0.5g/dl氯化硝基四氮唑蓝(NBT)磷酸缓冲液配制，PH7.4磷酸缓冲液无水磷酸二氢钠1.6g，无水磷酸氢二钠7.55g，氯化钠4.32g，蒸馏水加至1000ml。
表1 参桂胶囊对大鼠急性心肌梗塞范围的影响(X±SD)组别剂量动物数 心室肌 梗塞心肌梗塞心肌占(g/kg) (只)重量(mg) 重量(mg)心室百分率N.S — 8 79.3±4.726.0±2.032.8±1.7参桂1.0 8 79.0±3.219.5±2.324.7±3.1***参桂2.0 8 78.8±4.117.3±1.622.1±2.8***硫氮卓酮0.003 8 81.9±4.816.3±0.919.9±1.6***与生理盐水组比较，***P＜0.001结果表明参桂能够缩小结扎大鼠冠状动脉引起的急性心肌梗塞范围，与生理盐水对照组比较，经T检验，P＜0.001，有极显著性差异。
2.对脑垂体后叶素诱发心肌缺血影响[2]Wistar大鼠40名，雌雄各半，体重150-180g，随机分为4组，每组10只，分组与给药如表2所示，连续灌胃给药5天，各组大鼠均于给药前测定其心电图II导联正常心电图(心电图异常者弃去不用)；于末次给药后1小时，再分别测定其II导联心电图(XQ-IA型心电图机)，然后舌静脉注射脑垂体后叶素0.5u/kg(0.5ml)，速度10S推完，iv后即刻，15、30S、1、2、3、5min，分别记录其II导联心电图，测定T波及S-T段的变化，作为判断心肌缺血的标准，结果见表2表2 参桂胶囊对脑垂体后叶素引起大鼠心肌缺血保护作用(X±SD，MV)组别 剂量动物数 iv垂体后叶素前iv垂体后叶素后(g/kg) (只)T波 ST段 T波 ST段N、S — 10 0.15±0.03 0.27±0.070.17±0.05 0.57±0.06参桂 1.0 10 0.13±0.02 0.26±0.040.14±0.04 0.28±0.07***参桂 2.0 10 0.15±0.04 0.29±0.050.14±0.03 0.30±0.07***括心丸0.0810 0.14±0.03 0.27±0.030.15±0.04 0.29±0.06***与生理盐水组比较，***P＜0.001结果表明参桂能够明显减轻iv脑垂体后叶素诱发的大鼠心电图ST段及T波的改变。其作用与活心丸相似，与生理盐水组比较，经T检验有极显著性差异(P＜0.001)，说明参桂对脑垂体后叶素引起的心肌缺血有明显保护作用。
3.对小鼠耐缺氧的影响小鼠40只，雌雄各半，随机分为4组，分组与给药如表4所示，连续灌胃给药5天，于末次给药后1小时，分别皮下注射0.05％异丙肾上腺素15mg(30ml)/kg。注射15分钟后，分别放入250ml底部置有新鲜钠石灰20g的广口瓶中。加盖密闭，密切观察瓶内小鼠的活动，以秒表记录各鼠的呼吸仃止时间，结果见表3。
表3参桂胶囊对小鼠耐缺氧能力影响 (X±SD)组别 剂量(g/kg)动物数(只)存活时间(min)N、S - 1019.8±0.39参桂 1.0 1025.9±0.86**参桂 2.0 1026.1±0.67**活心丸0.08 1025.2±0.79**与生理盐水组对照组比较，**P＜0.01结果表明参桂可提高小鼠耐缺氧的能力，与生理盐水组比较经，经T检验，有极显著性差异(P＜0.01)。
4.对离体豚鼠心脏冠脉流量的影响[3]豚鼠40只，雌雄均有，随机分为4组。用木棒击后脑致昏，迅速开胸，暴露心脏，剪开心包，剪断与心脏连接的血管，将心脏迅速取出，移至洛氏液中，并轻轻挤压，排出余血。在升主动脉与肺动脉间穿过一根丝线，在升主动脉上部剪一小口，插入主动脉套管结扎固定。打开弹簧夹开始灌流，使洛氏液由冠脉经心肌而入右心房，从腔V和肺A的断端流出。心脏下置一漏斗，和量筒收集冠脉流量。用蛙心夹夹往心尖，经过滑轮连接于杠棒上，描记心脏搏动曲线，用秒表记录心率。
心脏适应10min，冠脉流量、心率及心搏幅度稳定后，在主动脉套管上方的橡皮管内注入参桂注射液0.05ml(0.1g)/次、0.10ml(0.2g)/次、活心丸注射液0.1ml(0.004g)/次，测定给药1-10min内每分钟的流量，心率及心搏幅度(找出极值)，算出给药后流量的增减值。分组、给药剂量、结果见表4(见下页)。
洛氏液配制Nacl9.0，Kcl0.42，Cacl20.24，NaHCD3，0.3 Glucose 2.0，蒸馏水加至1000ml。
结果表明参桂可增加冠脉血流量，减慢心率，与生理盐水对照组比较有显著性差异(P＜0.05)，对心搏幅度无明显影响。
5.对大鼠血清肌酸磷酸激酶(CPK)影响[4]Wistar大鼠40只，雌雄均有，体重160-187g，随机分4组，每组10只，分组与给药如表5所示，连续给药5天，于给药第四天及第五天分别腹腔注射异丙肾上腺素1.25mg/kg，然后取血测定其血清肌酸磷酸激酶含量，结果见表5。
表5参桂胶囊对大鼠血清CPK影响组别 剂量动物数CPK(X±SD)(g/kg) (只) (IU/L)N、S - 102613.4±350.4参桂 1.0 101411.6±247.4***参桂 2.0 101334.0±165.6***活心丸0.08101375.1±202.9***与生理盐水对照组比较，***P＜0.001结果表明参桂能显著降低血清中CPK值，其作用与活心丸相表4参桂胶囊对离体豚鼠心脏冠脉流量、心率及心搏幅度的影响(X±SD)冠脉流量(ml/min) 心率(次/min) 心搏幅度(mm)组别 剂量(g) 药前 药后 增减率(％) 药前 药后 增减率(％) 药前 药后 增减率(％)N S -13.4±2.113.9±1.8+3.7138±13137±15-0.720.5±2.120.6±3.5+0.5参桂 0.10 13.1±2.521.2±2.5+61.8*143±11116±14-18.9*20.1±3.221.4±2.3+8.5参桂 0.20 12.9±1.923.0±2.9+78.3*140±10104±13-25.7*20.3±2.721.7±3.1+6.9活心丸0.00413.2±2.320.4±2.1+54.5*141±12118±14-16.3*20.4±2.921.5±2.8+5.4与生理盐水对照组比较，*P＜0.05
似，与生理盐水组比较，经T检验，P＜0.001，有极显著性差异；提示参桂对心肌细胞有保护作用。
6.对心肌86Rb摄取率的影响[5]小鼠40只，随机分为4组，每组10只，分组与给药如表6所示，连续给药5天，于末次给药1h后，每只小鼠尾静脉注射86Rb生理盐水溶液0.1ml(20,000-30,000cpm/ml)，30秒钟内断头处死，立即取出心脏放入盛有0.8ml 1.2N NaoH生理盐水的试管中，沸水浴中消化20分钟，然后用FJ--2008型r计数器测定其脉冲数，结果见表6表6参桂胶囊对小鼠心肌摄取86Rb影响(X±SD)组别 剂量 动物数心肌摄取86Rb(g/kg)(只) 脉冲数N、S - 101307.9±46.4参桂 1.0 101453.0±78.3***参桂 2.0 101472.3±50.9***活心丸0.08 101468.5±59.8***与生理盐水对照组比较，***P＜0.001结果表明参桂能增加小鼠心肌对86Rb的摄取，其作用与活心丸相似，与生理盐水组比较，经T检验，P＜0.001，有极显著性差异，说明参桂能够增加心肌营养血流量。
7.对犬心脏血流动力学的影响[6]成年杂种犬24只(♂、♀兼用)，随机分为4组，用3％戊巴比妥钠30mg(1ml)/kg iv麻醉，气管插管行人工呼吸，分离一侧颈总动脉，放置电磁流量计卡式探头，记录颈内动脉血流量；分离主动脉根部及左旋支冠状动脉以及股动脉，测量主动脉血流量(代表心输出量CD)、冠脉血流量(CBF)和股动脉血流量(FBF)，从心尖部插入心导管连接压力换能器，测左心室压力(LVP)，经微分后得左心室压力上升最大速率(LVdp/dtmax)，血压(Bp)则经股动脉测得，记录II导联心电图和心率(HR)。实验分为4组，(1)对照组，(2)参桂2.0g/kg(相当于临床用量10倍)，(3)参桂1.0g/kg(相当于临床用量5倍)，(4)活心丸组0.04g/kg。术后，待观察指标稳定后记录给药前值，静脉给药后1，3，5，10，15，20，30分钟分别记录，上述指标记录在RM86多道生理仪上，结果见表7(见下页)。
结果表明参桂胶囊可扩张冠脉和增加冠脉血流量，减慢心率，降低血压，增加心输出量，降低左室内压，降低心肌耗氧指数及心肌耗氧量，由于心肌张力下降，使心内膜下血流供应得到改善，使缺血心肌的缺血缺氧得到改善，降低外周阻力，使缺血心肌氧的供一需平衡得到调整。与生理盐水对照组比较，经T检验，P＜0.05-0.01。
上述实验结果表明参桂能够缩小急性心肌梗塞范围。扩张冠脉、增加冠脉血流量，减慢心率，降低血压，增加心输出量，降低左室内压，降低心肌耗氧指数及心肌耗氧量，降低外周阻力，对抗脑垂体后叶素诱发的心肌缺血，提高耐缺氧能力。降低血清CPK值，保护心肌细胞，增加心肌营养血流量，是目前治疗心肌缺血的一种比较理想药物。
表7参桂胶囊对犬心脏血流动力学影响 (X±SD)生理盐水 参桂2.0g/kg参桂1.0g/kg活心丸0.04g/kg指标药前 药后 药前 药后 药前 药后 药前 药后心率(次/分) 185±28 185±23 184±25 151±27*187±31*155±29*183±28 152±25*血压(KPa) 14.7±2.014.8±2.114.3±2.410.7±2.2*14.0±2.310.9±2.5*14.5±2.411.2±2.1*冠脉血流量 1.1±0.5 1.1±0.4 1.2±0.6 1.8±0.5**1.1±0.3 1.5±0.4**1.1±0.5 1.4±0.4*(ml/g/min)心输出量2.5±0.2 2.5±0.2 2.6±0.3 2.8±0.2*2.5±0.2 2.6±0.3 2.6±0.2 2.7±0.3(L/min)左室内压5.7±0.8 5.8±0.8 5.7±0.8 4.9±0.9*5.8±0.9 5.1±1.0*5.8±0.9 5.5±0.9*(KPa)左室内压最 114.3±18.3 113.7±19.1 115.7±19.7 78.8±8.3**115.2±19.8 82.7±11.6**115.2±19.4 90.8±8.4*大上升速率(KPa/S)心脏指数1.5±0.5 1.6±0.5 1.5±0.5 0.7±0.2**1.5±0.6 1.1±0.5*1.6±0.5 1.2±0.4*(L/min.m2)心搏指数6.2±1.3 6.3±1.5 6.3±1.6 4.5±1.0**8.2±1.6 5.4±1.4*6.2±1.4 5.5±1.4*(ml/次.m2)左室作功指数14.2±2.415.0±3.713.8±2.47.8±1.3**13.8±2.910.8±4.1**14.3±3.212.3±3.9*(kg.N/min.m2)总外周血管 352.8±31.4 355.2±32.6 330.0±30.4 229.3±31.6*336.0±31.7 251.5±25.3*334.6±30.4 248.9±22.8*阻力(KPa.s/L)心肌耗氧指数209±13.1210±14.3208.8±15.7 119.7±12.8*209±16.2127±16.4*212.7±13.8 130.8±16.0*(mmHg.s/min)n＝6 与生理盐水对照组比较，*P＜0.05**P＜0.01四、临床研究经5家指定医院303例临床观察，对冠心病心绞痛总有效率为93.07％，显效率为56.45％；对心电图总有效率为68.65％；显效率为34.98％；中医证侯综合疗效总有效率为96.37％；显效率为61.06％；硝酸甘油停用率为73.54％；心绞痛起效时间为7.72±3.68；与对照组比较，有着非常显著性差异(P＜0.01)，且对各类型心绞痛和不同程度心绞痛均有较好疗效(P＞0.05)。此外，无肝、肾功能损害等毒副作用，确为一种安全、有效、服用方便的中药新药。
参桂胶囊属于新药品，采用名贵中药精制而成，具有益气通阳，活血化瘀的作用，用于胸阳不振，气虚血瘀引起的胸痹。经河南省医学情报研究所查新报告，未检出红参、桂枝、川芎提取物胶囊的制剂、药理和临床研究的文献报道，属国内首创(见查新报告)。
临床使用和药理毒理研究表明，参桂胶囊治疗冠心病，是中西医结合的成果，对目前治疗冠心病有突破性进展，是治疗胸阳不振，气虚血瘀引起胸痹的(冠心病)理想药物。
权利要求
申请专利保护参桂胶囊的组成(方)，制造方法及用途。1、组成红参∶川芎∶桂枝＝4∶4.5∶3
2.制造方法取1/2量红参，粉碎成细粉，备用；取另1/2量粉碎成粗粉，用65％乙醇湿润过夜，按(中国药典90年版一部附录制剂通则流浸膏剂与浸膏剂项下渗漉法)1-3m/分钟/Kg流速收集药材10倍量的渗漉液，放置备用。另取川芎、桂枝二味药，加4倍量水，按蒸留法提取挥发油至量不再增加为止，收集挥发油另器存放；馏后物滤过，药渣加8倍量水煎煮二次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度1.05(60℃测)，放冷，加乙醇使含醇量达65％，放置24小时以上，滤过，滤液与红参渗漉液合并，回收乙醇到稠膏，加入红参细粉，拌匀，80℃干燥，粉碎成细粉。挥发油用少量红参细粉吸收均匀后，加入上述细粉中混匀，制粒，装入胶囊中，包装。
3.用途用于胸阳不振，气虚血瘀所引起的胸痹(冠心病)。
全文摘要
参桂胶囊属于新药品,经河南省医学情报研究所查新报告,未检出该药品的制剂,药理和临床研究的文献报道,属国内首创。经临床使用和药理毒理学研究表明:参桂胶囊治疗冠心病是中西医结合的成果,是治疗胸阳不振,气虚血瘀引起胸痹(冠心病)的理想药物。
文档编号A61P9/10GK1176808SQ97100028
公开日1998年3月25日 申请日期1997年3月3日 优先权日1997年3月3日
发明者李宗铎 申请人:李宗铎