专利名称：粉末状肺表面活性剂-制剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及粉末状肺表面活性剂-制剂的制备方法。
技术现状所有脊椎动物的肺都含有一种物质混合物，它被称为“肺表面活性剂”“pulmonary surfactant”并显示表面活性的特性，它将肺的肺泡范围表面张力下降至这样程度，以避免呼出时在最终呼吸道范围萎陷。这种物质混合物动态地调节表面张力，从而使得根据拉普斯定律(Laplaceschen Gesetz)预计的小肺气泡的萎陷通过相应的表面张力的适应性改变而避免，这有利于大肺泡的存在。结果形成平衡的组织学和生理学稳定的肺结构。
肺表面活性剂被Ⅱ型肺泡的肺细胞以层状的粒子形式(层状体)的形式包围。这些是具有高份额的二-棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)和磷脂酰甘油(PG)的磷脂-双层(bilagern)组成的密实单元。肺表面活性剂中其它重要组分是蛋白质，它用SP-A、SP-B和SP-C表示。SP-A是高分子糖蛋白质，它在调节分泌中起决定性作用。
疏水蛋白质SP-C和少量的SP-B在单分子表面膜(在狭义上是表面活性剂)的形成中承担“热力学的催化剂”作用。由于这些蛋白质的存在使扩展动力学大大加速。正基于此，表面活性剂组合物对表面张力要求非延迟的配合成为可能。这些性能反映在蛋白质特别是SP-C的极大的疏水特性。
对于早产婴儿，它的肺还不能产生足够量的表面活性剂，这会导致威协生命的缺氧(婴儿呼吸窘迫综合症，IRDS)，IRDS是早产婴儿主要的死因。
多年来证明，将肺表面活性剂-制剂引入患儿的肺中治疗IRDS。从前沿研究中可知，对ARDS(成人呼吸窘迫综合症)包括ALI(急性肺损伤)肺表面活性剂-制剂临床是有效的。
肺表面活性剂可从动物肺中用昂贵的萃取和离心方法(肺灌洗)获得或由各个组分调配的。
WO92/06703描述通过旋转蒸发器将含有磷脂的氯仿溶液，如二棕榈磷脂酰胆碱(DPPC)和油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)，和胆固醇蒸发成薄膜，如需要的话将其与适当的蛋白质在缓冲液中重新制成悬浮体。
从WO91/00871中可知，将肺表面活性剂-制剂的有机溶液-它含有基因工程制备的肺表面活性剂-蛋白质-进行浓缩，用缓冲液进行再水合和随后进行亲水化。得到的亲水物有缺点，即它必须在加工前在37℃再水化15分钟，这对用户非常麻烦和认为是一缺点。
在EP0119056中说明制备肺表面活性剂-制剂的制备方法，在其中将所有组分溶解在有机溶剂中，所得到的溶液在减压下浓缩至干，将得到的残渣在水介质中在升高的温度经较长时间进行再悬浮和将得到的悬浮体进行冷冻干燥。此方法在技术也是很昂贵的。
DE-3229179公开了无蛋白质的肺表面活性剂-制剂的制备方法，在其中将组分溶于冰醋酸中和将得到的溶液进行冷冻干燥。该方法的缺点是采用冰醋酸，因这会造成需要大范围的安全措施。
在EP0655237中建议，以悬浮体的气溶胶形式吸入给药的药物制剂可通在乙醇/水-混合物中进行喷雾干燥制备。此方法适用于含亲水蛋白质，例如Ecatibantacetat，人胰岛素和Buserelinacetat的组份。
发明详述本发明的任务是提供含有蛋白质的粉末状的肺表面活性剂-制剂的制造方法，该制剂含有疏水的肺表面活性剂-蛋白质，它在技术上尽可能低费用且使用方便、存放稳定。
令人惊讶地确认，此任务可这样解决，即可将含有疏水的肺表面活性剂-蛋白质和需要时还有其它组分的有机溶液或悬浮体进行喷雾干燥。
按此方法得到一种产品，它是长时间存放稳定的且无需特别努力在使用之前可进行再悬浮。这样得到的粉末的特殊优点是具有极小的粒度(1至5μm)，它可以允许吸入给药。当肺表面活性剂-制剂用于作为经肺给药的载体时，这方面就显得特别重要了。
令人惊奇和至今无法解释的是，部分对温度非常敏感的肺表面活性剂的组成部分对喷雾干燥的工艺条件仍可耐受。例如，已知肺表面活性剂-蛋白质SP-C在-20℃以上非常快凝聚和因此失活。然而，这种蛋白质可耐受按本发明的喷雾干燥工艺而无明显的分解并以松散的粉末存在，它在室温可存放。
因此本发明的主题是一种方法，其特征是，将含有疏水的肺表面活性剂-蛋白质和需要时还有其它组分的有机溶液或悬浮体进行喷雾干燥。
其它主题由权利要求书中产生。
作为疏水的肺表面活性剂-蛋白质既可考虑那些来源于天然的也可考虑合成的，包括基因工程制造的蛋白质，特别是SP-B和SP-C，以及它们的混合物。对合成的蛋白质可理解为这样一些蛋白质，它们的氨基酸序列与天然来源的肺表面活性剂-蛋白质的氨基酸序列有或多或少强的偏离，包括那些合成的蛋白质，它鉴于它的肺表面活性剂-性能具有完全独立设计的氨基酸序列，如它在EP0593094和EP92/22315中描述的那样。这些蛋白质可通过已知的方法分离，合成和提纯。
按本发明醇适用于制备有机溶液或悬浮体的溶剂，如甲醇，乙醇，1-丙醇，2-丙醇，丁醇，氯代烃，如二氯甲烷，氯仿等，丙酮，醚，烃，苯，甲苯和它们的混合物，其中也可包括水，加入的量多至可混溶为止。水含量最多为25％(重量)。优选水含量为5至15％(重量)。对专业人员而言，在他对喷雾干燥领域的专业知识基础上和必要时通过一般试验很容易为要干燥的表面活性剂混合物选择最使用的溶剂或溶剂混合物。
肺表面活性剂含有其它的组分是常用物质，如特别是磷脂类，羧酸和缓冲物质。
在喷雾干燥之前溶液可用无菌的滤器进行过滤。喷雾干燥以原本已知的方法进行。此技术详细叙述见K.Masters,Spray DryingHandbook,5th,Ed,1991和J.Broadhead,S.K.Edmond Ronan,C.T.Rhodes,The Spray Drying of Pharmaceuticals,Drug Dev.Ind.Pharm.18,1169(1992)。喷雾干燥的原理，将要干燥的产品的溶液或悬浮体分裂成细液滴和用热的气流进行干燥。在溶剂蒸发后剩下固体部分从气流中借助于旋风分离器和/或通过过滤单元分离和收集。
按本发明证明适合用作溶剂的是，醇和氯代烃，特别是甲醇、乙醇、2-丙醇和氯仿和它们的混合物，必要时用添加极少量的水(最多至25％(重量))，干燥气体可考虑特别是空气和氮气。
气体入口温度是60至200℃，优选90至150℃合适。气体出口温度通过相应的控制喷雾速度和/或在40至80℃优选50至70℃的气体量来维持。
制备实例实例17.0g 1,2-二棕榈酰-3-sn-磷脂酰胆碱，2.5g 1-棕榈酰-2-油酰基-2-sn-磷脂酰甘油钠，205mg氯化钙二水合物和250mg棕榈酸在60℃加热溶解于300ml乙醇/水(85∶15)，冷却至室温和与350mlSP-C在氯仿/甲醇9∶1(c=429mg/l)的溶液混合。将此得到的溶液在一实验室喷雾干燥器Büchi B 191中进行干燥。喷雾条件干燥气体空气，进口温度90℃，出口温度52-54℃。得到疏松的粉末。实例2由牛肺得到的表面活性剂溶液(通过萃取和提纯得到的，如在EP406732中所描述的)在氯仿/甲醇中用以下条件进行喷雾干燥实验室喷雾干燥器Büchi B 191，干燥气体氮气，进口温度80℃，出口温度50-52℃，得到细的淡黄色的粉末。实例3将10.95g 1,2-二棕榈酰-3-sn-磷脂酰胆碱，4.6g 1-棕榈酰-2-油酰-3-sn-磷脂酰甘油铵，418mg氯化钙二水合物和750mg棕榈酸在330ml 2-丙醇/水(85∶15)中在50℃溶解，并冷却至30℃后与620ml SP-C在异丙醇/水(95∶5,c=484mg/l)的溶液进行混合。得到的溶液在一实验室喷雾干燥器Buchi B 191中进行喷雾干燥。喷雾条件干燥气体氮气，进口温度100℃，出口温度58-60℃。得到无色粉末。实例4将3.74g(5.1mmol)1,2-二棕榈酰-3-sn-磷脂酰胆碱，2.81g(3.7毫摩尔)1-棕榈酰-2-油酰-3-sn-磷脂酰胆碱，2.90g(3.9毫摩尔)1,2-二棕榈酰磷脂酰-3-sn-磷脂酰甘油钠，234mg棕榈酸和279mg(1.9毫摩尔)氯化钙二水合物在160ml 2-丙醇/水(85∶15)中在50℃进行溶解，并冷却至30℃后与566ml SP-C在异丙醇/水(92∶8,c=330mg/l)的溶液在30℃进行混合。得到的溶液在一实验室喷雾干燥器Buchi B 191中进行干燥。喷雾条件干燥气体氮气，进口温度90℃，出口温度58-60℃。得到无色粉末。实例50.5g RLLLLRLLLLRLLLLRLLLLR(R=精氨酸，L=亮氨酸)，7.125g 1,2-二棕榈酰-3-sn-磷脂酰胆碱和2.43g 1-棕榈酰-2-油酰-3-sn-磷脂酰甘油铵在500ml氯仿/甲醇1∶1中在45℃加热溶解和随后在一实验室喷雾干燥器Büchi B 191中进行干燥。喷雾条件干燥气体氮气，进口温度85℃，出口温度55℃。得到无色粉末。
权利要求
1．含疏水的肺表面活性剂-蛋白质的粉末状肺表面活性剂-制剂的制备方法，其特征是，将含有疏水的肺表面活性剂-蛋白质的有机溶液或悬浮体和需要时还有其它组分进行喷雾干燥。
2．按权利要求1的方法，其特征是，疏水的肺表面活性剂-蛋白质SP-C和/或SP-B是以有机溶液或悬浮体存在。
3．按权利要求2的方法，其特征是，SP-C是在有机溶液或悬浮体中存在。
4．按权利要求1的方法，其特征是，有机溶液或悬浮体含5-15％(重量)的水。
5．按权利要求1的方法，其特征是，含有磷脂作为其它组分。
6．按权利要求1的方法，其特征是，喷雾干燥是在加热的气体中进行。
7．按权利要求6的方法，其特征是，气体采用空气或氮气。
8．按权利要求6的方法，其特征是，气体的进口温度为60至200℃和出口温度为40至80℃。
9．按权利要求7的方法，其特征是，气体的进口温度为90至150℃和出口温度为50至70℃。
10．按权利要求1至9的方法得到粉末状肺表面活性剂-制剂。
全文摘要
本发明描述制备含有疏水的肺表面活性剂－蛋白质的粉末状肺表面活性剂－制剂,其特征是,将含疏水的肺表面活性剂－蛋白质或需要时含其它组分的有机溶液或悬浮体进行喷雾干燥。可得到非常好的存放稳定性,和简单地用于重组粉末制剂,它也适用于吸入给药法。
文档编号A61K9/00GK1217654SQ97193304
公开日1999年5月26日 申请日期1997年1月18日 优先权日1996年1月24日
发明者K·埃斯特特尔 申请人:比克·古尔顿·劳姆贝尔格化学公司