吗啉醚的制作方法

专利名称：吗啉醚的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的具有抗真菌活性的吗啉醚。本发明更特别地涉及新的粪壳菌醇(sordaricin)衍生物，涉及它们的制备方法，涉及含有它们的药物组合物以及它们在医药领域的用途，特别是在预防或治疗由真菌感染引起的包括人类在内的动物的疾病中的用途。
英国专利1,162,027描述了通过培养真菌Sordaria araneosa的NRRL3196菌株制备抗菌素SL2266。据报道SL2266，后称粪壳菌素(Sordarin)，具有抗真菌活性。该研究组还在Helvetica ChimicaActa(1971),51,119-120上公开了由粪壳菌素到粪壳菌醇的降解。日本公开专利申请J6 2040292A具有抗真菌活性的抗菌素佐非吗啉(zofimarin)的制备。
粪壳菌素(Sordarin)，粪壳菌醇(sordaricin)和佐非吗啉(zofimarin)可由下式(A)表示。
其中OR为 时是 sordarin；OR为OH时是 sordaricin；和OR为 虽然粪壳菌素和佐非吗啉具有抗真菌活性，但抗真菌有机体的组合试验证明这两种化合物仅具有中等活性，并且抗菌谱有限。
WO96/14326和WO96/14327公开了具有有用的抗真菌活性的新的粪壳菌素衍生物。WO99/09974和WO99/09975公开了具有抗真菌活性的4-氰基-4-去甲酰基粪壳菌素和粪壳菌醇衍生物。
我们现已发现一组具有有用的抗真菌活性谱并可由容易得到的原料方便地制备的新的粪壳菌醇衍生物。
因此，根据本发明的第一方面，我们提供式(Ⅰ)化合物及其生理学上可接受的盐或代谢不稳定衍生物， 其中R1表示C1-6的直链或支链烷基，C1-6的直链或支链烷氧基，可被取代的苯氧基，C3-6的直链或支链链烯氧基(可被1或2个卤原子取代)或由可被取代的苯基取代的C1-4的直链或支链烷氧基，C3-8的直链或支链炔基，C3-6的直链或支链链烯基(可由C1-4烷氧基或1或2个卤原子取代)，可被取代的苯基，可被取代的C3-7环烷基，可被取代的C5-7环烯基，由(C1-4烷氧基，C1-4烷硫基或卤素)取代的C2-4的直链或支链烷基，由(C1-4烷氧羰基，芳基烷氧羰基，芳氧羰基，丙二烯基，氰基，可被取代的C3-7环烷基，可被取代的5或6元杂环基，或1或2个可被取代的苯基)取代的C1-4的直链或支链烷基，或由C1-6烷酰基或可被取代的苯甲酰基取代的甲基；R2选自氢，C1-6的直链或支链烷基，C3-6的直链或支链链烯基，可被取代的苯基或由选自C1-4烷氧基，羟基，酰氧基，烷氧羰基或芳氧羰基的取代基取代的C1-4烷基，以及R3选自甲酰基或氰基。
根据本发明的第二方面，我们提供式(Ⅰ)化合物及其生理学上可接受的盐或代谢不稳定衍生物，其中R1表示C1-6的直链或支链烷基，C1-6的直链或支链烷氧基，可被取代的苯氧基，C3-6的直链或支链链烯氧基或由可被取代的苯基取代的C1-4的直链或支链烷氧基，C3-8的直链或支链炔基，C3-6的直链或支链链烯基(可由C1-4烷氧基或1或2个卤原子取代)，可被取代的苯基，可被取代的C3-7环烷基，可被取代的C5-7环烯基，由(C1-4烷氧基，C1-4烷硫基或卤素)取代的C2-4的直链或支链烷基，由(C1-4烷氧羰基，芳基烷氧羰基，芳氧羰基，氰基，可被取代的C3-7环烷基，可被取代的5或6元杂芳基，或1或2个可被取代的苯基)取代的C1-4的直链或支链烷基，或由C1-6烷酰基或可被取代的苯甲酰基取代的甲基；R2为甲基以及R3为CHO。
式(Ⅰ)化合物的生理学上可接受的盐包括与生理上可接受的酸或碱形成的盐和内盐。
合适的式(Ⅰ)化合物与碱形成的生理学上可接受的盐包括无机碱盐如碱金属盐(例如钠盐和钾盐)和铵盐以及有机碱盐。合适的有机碱盐包括胺盐如三烷基盐(例如三乙胺)，二烷基胺(例如二环己基胺)可被取代的苄基胺(例如苯基苄基胺或对溴苄基胺)，普鲁卡因，乙醇胺，二乙醇胺，N-甲基葡糖胺和三(羟甲基)甲基胺盐以及氨基酸盐(例如赖氨酸和精胺酸盐)。
合适的药学上可接受的酸加成盐包括它们与无机酸如盐酸，氢溴酸，磷酸或硫酸以及有机酸如乙酸，丙酸，琥珀酸，乳酸，酒石酸，柠檬酸，马来酸，苯甲酸或水杨酸形成的酸。
下文中提到的式(Ⅰ)化合物包括该化合物及其生理学上可接受的盐。
生理学上不可接受的盐可用于式(Ⅰ)化合物的制备，它们为本发明的另一个方面。
式(Ⅰ)化合物的代谢不稳定衍生物为在体内转化为式(Ⅰ)化合物的化合物。该衍生物的例子包括由分子中的游离羧酸形成的常规代谢不稳定酯。显然，药物化学领域存在大量结构不同的羧酸酯，它们在体内很容易水解得到母体羧酸或其盐，显然，本发明包括所有这样的酯。
显然，本发明包括所有的上述式(Ⅰ)表示的化合物的单独的异构体，包括光学异构体，及其混合物，包括其全部或部分外消旋混合物。
当R1为C1-6直链或支链烷基时，该基团的例子包括甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，仲丁基或叔丁基，戊基，异戊基，1-乙基丙基，己基或异己基。
当R1为被可被取代的苯基取代的C1-4直链或支链烷氧基时，该基团的例子包括苯基甲氧基，苯基乙氧基或苯基丙氧基。
当R1为C1-6直链或支链烷氧基时，该基团的例子包括甲氧基，乙氧基，丙氧基，异丙氧基，丁氧基，异丁氧基，戊氧基或己氧基。
当R1为C3-6链烯基时，该基团的例子包括烯丙基，2-甲基烯丙基，3-甲基烯丙基或3,3-二甲基烯丙基。
当R1为由C1-4烷氧基取代的C3-6链烯基时，该基团一般为甲氧基取代的的C3-6链烯基，例如2-甲氧基烯丙基或2-甲氧基甲基烯丙基。
当R1为由一或二个卤原子取代的C3-6链烯基时，该基团一般为由1或2个选自氟，氯或溴取代的的C3-6链烯基，例如2-氟甲基烯丙基，2-氯烯丙基，2-溴烯丙基，2-氟烯丙基，3-氟烯丙基或3,3-二氟烯丙基。
当R1为可被一或二个卤原子取代的C3-6链烯氧基时，该基团一般为由溴或氯或氟取代的的C3-6链烯氧基，例如烯丙氧基，2-氯烯丙氧基，2-溴烯丙氧基，2-氟烯丙氧基。
作为基团或基团部分的术语芳基表示可被取代的苯基。
作为基团或如苯氧基或苯基烷基的基团部分的术语可被取代的苯基包括苯基或由1或2个相同或不同的选自C1-4烷基，卤素(氟，氯，溴或碘)，羟基，C1-4烷氧基，亚甲二氧基或三氟甲基的基团取代的苯基。
作为基团或基团部分的术语可被取代的C3-7环烷基为环丙基，环丁基，环戊基，环己基或环庚基，这些基团可被1或2个甲基，甲氧基，羟基或苯基取代，或者可与苯环稠合形成经环烷基上的碳原子与分子中其他部分连接的双环系统，例如2,3-二氢化茚基或四氢萘基。
当R1为被卤素取代的C2-4烷基时，该基团的例子包括2-氯乙基，2-氟乙基，三氟乙基。
术语直链或支链C3-8炔基包括2-丙炔基，1-甲基-2-丙炔基和3-甲基-2-丙炔基或1,1-二甲基-2-丙炔基。
当R1为C5-7环烯基时，该基团的例子包括环己烯-3-基或环戊烯基。
当R1为被杂芳基取代的C1-4烷基时，术语杂芳基指5或6元杂芳基，其中5元环基含有一个选自氧，硫或氮的杂原子并可含有1或2个另外的氮原子，6元环基含有1到3个氮原子。这样的杂芳基的例子包括呋喃基，噻吩基，吡咯基，噁唑基，异噁唑基，咪唑基，吡唑基，噻唑基，异噻唑基，噁二唑基，噻二唑基，三唑基，吡啶基，嘧啶基，哒嗪基，吡嗪基或三嗪基。上述杂芳基可被一或两个选自C1-4烷基如甲基，羟基烷基如羟基甲基，酰氧基烷基如乙酰氧基甲基或卤素的基团所取代。
当R2为C1-6烷基时，该基团的例子包括甲基，乙基，丙基，丁基，叔丁基。
合适的R1基团的例子包括C1-6烷基(如甲基，乙基，丙基，异丙基，正丁基，1-甲基丙基，叔丁基，1-乙基丙基，戊基，3-甲基丁基，3,3-二甲基丁基)，C1-4烷氧基如甲氧基，由苯基取代的C1-4烷氧基(如苯基甲氧基)，苯氧基，由C1-4烷氧基取代的C2-4烷基(如甲氧基乙基，乙氧基乙基，乙氧基丙基，异丙氧基丙基)，由C1-2烷硫基取代的C2-4烷基(如乙硫基乙基)，由卤素取代的C2-4烷基(如2-氯乙基，2,2,2-三氟乙基)，由氰基取代的C1-4烷基(如氰基甲基或氰基乙基)，由丙二烯基取代的C1-4烷基(如2,3-丁二烯基)，可被取代的C3-6环烷基如[(可被苯基取代的环丙基)，环丁基环戊基，环己基(可被羟基或烷基如甲基取代)，2,3-二氢化茚基或四氢萘基]，苯基，由可被取代的呋喃基取代的C1-4烷基(如呋喃甲基，羟基甲基呋喃基甲基，乙酰氧基甲基呋喃基甲基)，吡啶基(如吡啶甲基或吡啶乙基)，由可被取代的吡咯(如1-甲基吡咯基甲基)，由可被取代的噻唑基(如噻唑基甲基)，由可被取代的咪唑基如N-羟基甲基咪唑基甲基，由C1-2烷氧羰基取代的C1-4烷基(如甲氧羰基乙基，1-甲氧羰基-2-甲基丙基)，芳烷氧羰基(如苄氧羰基甲基)或由芳氧羰基取代的C1-4烷基(如苯氧羰基甲基)，可被取代的C3-6环烷基(如环丙基甲基，环己基甲基，环己基乙基，1-环己基乙基)，由C3-6链烯基取代的C1-4烷基(如烯丙基，2-甲基烯丙基，3-甲基烯丙基，3,3-二甲基烯丙基)，由可被烷氧基取代的C3-6链烯基如2-甲氧基烯丙基，2-甲氧基甲基烯丙基，由可被选自氯，溴或氟的卤素原子取代的C3-6链烯基取代(如2-氟甲基烯丙基，2-氯烯丙基，2-溴烯丙基，2-氟烯丙基，3-氟烯丙基，3,3-二氟烯丙基)，可被卤素取代的C3-6链烯氧基(如烯丙氧基，2-氯烯丙氧基)，由1或2个可被取代的苯基取代的C1-4烷基[其中可在苯环上取代的取代基选自1或2个卤原子，如氯或氟，三氟甲基，羟基，甲氧基或亚甲基二氧基；(这样的基团的例子包括可被取代的苄基如苄基，4-甲氧基苄基，4-三氟甲基苄基，三氟苄基如2,6-二氟苄基，3,4-二氟苄基，2,5-二氟苄基，或2,4-二氟苄基，亚甲基二氧基苄基，1-苯基乙基，苯乙基(可被1或2个羟基，甲氧基，卤素如氟或氯)，苯丙基或二苯基甲基)]，C3-8炔基如2-丙炔基，1-甲基-2-丙炔基，3-甲基-2-丙炔基，C5-7环烯基如1-环己烯-3-基，或由乙酰基和苯甲酰基取代的甲基。
合适的R2基团的例子包括甲基，乙基，叔丁基和苯基。
适宜的R1基团选自C1-6烷基如甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，1-甲基丙基，叔丁基，正戊基，3-甲基丁基，C1-4烷氧基如甲氧基，C3-6链烯氧基(可被卤素取代如烯丙氧基，2-氯烯丙氧基)，可被取代的苯基如苯基，C3-6环烷基如环丙基，环丁基，环戊基，2,3-二氢茚基，四氢萘基，由C1-2烷氧基取代的C2-4烷基如甲氧基乙基或乙氧基丙基，由C1-2烷硫基取代的C2-4烷基如乙硫基乙基，由氰基取代的C1-4烷基如氰基乙基或氰基甲基，由丙二烯基取代的C1-4烷基如2,3-丁二烯基，由烷氧羰基取代的C1-4烷基(如甲氧羰基甲基)，由C3-7环烷基取代的C1-4烷基如环丙基甲基，由杂芳基取代的C1-4烷基如呋喃基甲基，吡啶基甲基，N-甲基吡咯基甲基或噻唑基甲基，由1或2个可被取代的苯基取代的C1-4烷基如苯基甲基，二苯基甲基，二氟苯基甲基(其中两个氟原子在2,6,2,4,3,4或3,5位)，三氟甲基苯基甲基，亚甲基二氧基苯基甲基，甲氧基苯基甲基，1-苯基乙基或苯基乙基，C3-6链烯基如烯丙基，2-甲基烯丙基，3-甲基烯丙基，3,3-二甲基烯丙基，C3-6炔基如2-丙炔基，由C1-4烷氧基取代的C3-6链烯基如2-甲氧基烯丙基，2-甲氧基甲基烯丙基，由1或2个选自氯，溴或氟的卤原子取代的C3-6链烯基如2-氯烯丙基，2-溴烯丙基，2-氟乙基烯丙基，2-氟烯丙基，3-氟烯丙基，3,3-二氟烯丙基，C5-7环链烯基如环己烯-3-基或由乙酰基或苯甲酰基取代的甲基。
优选的R1基团包括甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，1-甲基丙基，3-甲基丁基，甲氧基，环丙基，烯丙基，2-甲基烯丙基，由卤素取代的烯丙基如2-氯烯丙基，2-氟甲基烯丙基，2-溴烯丙基，3,3-二氟烯丙基，苯基，乙硫基乙基，甲氧基乙基，苄基，呋喃基甲基，2,6-二氟苯基甲基，3,4-二氟苯基甲基，3,5-二氟苯基甲基，3,4-亚甲基二氧基苯基甲基，4-甲氧基苯基甲基，1-苯基乙基或丙炔基，2,3-丁二烯基，烯丙氧基，2-氯烯丙氧基。
优选的R2基团包括甲基，乙基，叔丁基或苯基，更优选甲基。
优选的R3为CHO。
优选的式(Ⅰ)化合物中的R2为甲基，更优选的式(Ⅰ)化合物中R3同时为CHO。
优选的本发明化合物中R1表示烯丙基，2-甲基烯丙基，2-氯烯丙基，2-氟甲基烯丙基，2-溴烯丙基，3,3-二氟烯丙基，2-丙炔基，环丙基，2,3-丁二烯基或对甲氧基苯基甲基。
特别优选的式(Ⅰ)化合物中R1表示烯丙基，2-甲基烯丙基，2-氯烯丙基，2-氟甲基烯丙基，2-溴烯丙基，3,3-二氟烯丙基，2-丙炔基，环丙基，对甲氧基苯基甲基或2,3-丁二烯基，R2为甲基以及R3为CHO。
特别优选的本发明化合物为[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-(2-氯烯丙基)-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚(indacene)-3a(1H)-羧酸，及其生理学上可接受的盐如碱金属盐如钠盐或钾盐。
其他特别优选的化合物包括[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-(2-甲基烯丙基)-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸，[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-(对甲氧基苄基)-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸，[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-(2,3-丁二烯基)-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸，及其生理学上可接受的盐。
其他特别优选的化合物还包括[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-环丙基-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸，[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-丙炔基-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸，[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-(2-溴烯丙基)-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸，[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-烯丙基-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸，[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-(3,3-二氟烯丙基)-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸，[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-(2-氟甲基烯丙基)-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸，及其生理学上可接受的盐。
优选的本发明化合物的生理学上可接受的盐包括碱金属盐如钠盐，特别是钾盐。
式(Ⅰ)化合物可用于治疗包括人类的动物的真菌和/或原生动物的感染。例如，它们可用于治疗由下述一种或多种真菌引起的感染，如念珠菌属微生物(例如白色念珠菌，无毛念珠菌，(球拟酵母属)，海洋热带生物念珠菌，类秃发念珠菌和假海洋热带生物念珠菌)，新型隐球酵母菌，曲霉属(例如黄曲霉菌和烟曲霉菌)，球孢子菌属(例如粗球孢子菌)，副球孢子菌属(例如巴西副球孢子菌)，组织胞浆菌属(例如英膜组织胞浆菌)或芽生菌属(例如皮炎芽生菌)。它们还可用于治疗下述其他真菌引起的感染发癣菌属，小孢子菌属或表皮癣菌属(例如须发癣菌，红发癣菌，犬小孢子菌或絮状表皮癣，或由白色念珠菌引起的粘膜感染。
式(Ⅰ)化合物也可用于治疗下述其他真菌引起的感染地丝菌属(例如棒曲霉素地丝菌)，毛孢子菌属(例如热带毛孢子菌)，芽生殖裂菌属(例如具头芽生殖裂菌)，孢子丝菌属(例如孢子丝菌)，足放线菌属(例如Scedosporium apiosperum)，分子孢子霉菌属(例如卡里翁氏分子孢子霉菌)和卵状糠疹癣菌。
式(Ⅰ)化合物也可用于治疗弓形体属，似隐孢菌属，利什曼虫属，Tripanosoma，查螨属和毛滴虫属原生动物引起的感染。
式(Ⅰ)化合物也可用于治疗由卡氏肺囊虫引起的感染。
可使用常规的体外和体内方式测定式(Ⅰ)化合物的抗真菌活性。通过使用抗真菌两倍系列稀释技术，在37℃下测定抗真菌剂抑制培养24到48小时后的真菌的最小抑制浓度(MIC)，可在体外测定本发明化合物的抗真菌活性。具体地，将含有两倍稀释的被试验的抗真菌剂的系列琼脂板或培养液微量稀释盘与临床相关的病原体，例如，白色念珠菌，的标准培养物培养。然后检查琼脂板或培养液微量稀释盘，看真菌是否生长，并记录适当的MIC值。
通过由琼脂板上的无药对照孔，含生长物的第一孔和各个清洁的孔传代培养0.01到0.1μl培养液，也可测定MFC值(定义为杀死液体介质中至少99.9％的原始接种物的最低浓度)。
通过常规动物，例如大鼠和小鼠，试验也可测定式(Ⅰ)化合物的抗真菌活性。例如用小鼠作的致死系统念珠菌病试验。
式(Ⅰ)化合物也可用于控制和/或杀灭植物致病真菌。
本发明化合物下述一种或多种有机体显示特别有用的活性白色念珠菌，无毛念珠菌，海洋热带生物念珠菌，类秃发念珠菌，卡氏肺囊虫，粗球孢子菌，巴西副球孢子菌，英膜组织胞浆菌和皮炎芽生菌。
就其抗真菌和/或原生动物的活性而言，式(Ⅰ)化合物本身可用于治疗人类和动物的各种真菌和/或原生动物的感染。这样的感染包括表皮，皮肤，皮下和系统的真菌感染如呼吸道感染，胃肠道感染，心血管感染，尿道感染，CNS感染，念珠菌病和慢性粘液念珠菌病(例如鹅口疮和阴道念珠菌病)以及由真菌引起的皮肤感染，皮肤和粘液皮肤念珠菌病，表皮真菌病，包括癣菌病和癣感染，运动员足，甲沟炎，糠疹花斑，红癣，擦烂，真菌性尿布疹，念珠菌外阴炎，念珠菌龟头炎，和外耳炎。它们还可作为预防剂防止系统和表皮的真菌感染。例如，用作预防剂时适用于选择性内脏去污染制度的部分，预防免疫缺损病人(例如爱滋病患者，接受癌症治疗的患者和器官移殖患者)的感染。它们也适用于在某些疾病综合症或医源性病症中防止抗生素治疗时的真菌过度生长。它们也适用于预防和/或治疗由卡氏肺囊虫引起的感染。
本发明另一方面提供了一种预防或治疗人类或人以外的动物机体的真菌和/或原生动物感染的方法，该方法包括对该机体使用有效量的式(Ⅰ)化合物。
本发明也提供了式(Ⅰ)化合物在制备治疗或防止真菌和/或原生动物感染的药物中的用途。
尽管在治疗中本发明化合物可以化学粗产品的形式被使用，但其优选作为药剂中的活性组分。因此本发明还提供了一种药物制剂，其中包括式(Ⅰ)化合物及其生理学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体和可任意存在的其他治疗和/或预防活性组分。上述载体必须在与制剂中的其他组分的相容性上是可接受的，并且不对其受体有危害。
本发明组合物包括特别为口服，颊服，胃肠外用药，植入，直肠给药，局部用药，眼部用药，或生殖泌尿道用药配制的剂型或适于吸入或吹入给药的剂型。
用于口服给药的片剂和胶囊可含有常规的赋形剂如粘合剂，例如，糖浆，阿拉伯胶，明胶，山梨醇，西黄耆胶，淀粉胶或聚乙烯吡咯烷酮；填充剂，例如，乳糖，蔗糖，微晶纤维素，玉米淀粉，磷酸钙或山梨醇；润滑剂，例如，硬脂酸镁，硬脂酸，滑石，聚乙烯乙二醇或硅胶；崩解剂，例如，马铃薯淀粉，淀粉乙醇酸钠或交联羧甲醚纤维素钠；润湿剂，例如月桂基硫酸钠以及pH调节剂，例如，柠檬酸，苹果酸，酒石酸，碳酸钠，碳酸氢钠，三乙醇胺或氨基丁三醇。胶囊可含有粉末，片剂，丸剂，颗粒，液体，蜡，表面活性剂或其任意的组合，可按本领域技术人员已知的方法将其涂膜。胶囊的内容物可为上述的粘合剂，填充剂，润滑剂，崩解剂，润湿剂和pH调节剂。包括口嚼片，分散片或泡腾片的片剂可按本领域技术人员已知的方法涂膜。
口服液体制型的例子为含水或含油悬浮液，溶液，乳剂，糖浆或酏剂，或可将其制备成适于使用前与水或其他载体结合的干产物。这样的液体制剂可含有常规添加剂如悬浮剂，例如，山梨醇糖浆，甲基纤维素，葡萄糖/蔗糖糖浆，明胶，羟乙基纤维素，羧甲基纤维素，硬脂酸铝胶，或氢化可食用脂肪；乳化剂，例如，卵磷脂，山梨醇单油酸酯或阿拉伯胶；非水载体(可包括可食用油)，例如，杏仁油，分馏椰子油，油酯，丙二醇或乙醇；以及防腐剂，例如，对羟基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸和芳香剂。
颊服给药制剂可为按常规方法制备的片剂或锭剂。
本发明组合物可被配制成适于注射或连续输液的非胃肠道给药的剂型。用于制剂的剂型可为安瓿中的单剂量形式，或加入防腐剂的多剂量形式。该组合物可为含油或含水载体中的悬浮液，溶液，或乳剂，并可含配制剂如悬浮剂，稳定剂和/或分散剂。选择性地，活性组分可为适于使用前与合适的载体，例如灭菌水，无热源的水配制的粉末。
用于吸入给药的本发明组合物可以气雾剂的形式，由使用合适的挥发剂，例如二氯二氟甲烷，三氯一氟甲烷，二氯四氟乙烷，二氧化碳或其他合适的气体的压力罐或喷雾器，方便地给药。使用压力气雾剂时，剂量单位可通过提供可释放计算剂量的阀门测定。
选择性地，用于吸入给药的本发明组合物也可为干粉组合物，例如该化合物与合适的粉末基质如乳糖或淀粉的粉末混合物，或者单一药用物质的改良物理形式。粉末组合物可为单剂量形式，例如，诸如明胶的胶囊或药筒，或发泡药包，借助吸入器或吹入器可将其中的粉末给药。
该组合物可为栓剂，例如含有常规栓剂基质的栓剂，或阴道栓剂，例如含有常规阴道栓剂基质的阴道栓剂。
该组合物还可制备成局部给药制剂，如油膏，乳膏，胶体，乳液，香波，粉末(包括喷雾粉末)，阴道栓剂，塞子，喷雾剂，浸液，气雾剂，滴剂，(例如眼，耳或鼻用滴剂)或灌注剂。油膏和乳膏可，例如，用含水或含油基质加入合适的增稠剂和/或凝胶剂配制。眼用油膏可使用灭菌组分在灭菌条件下制备。兽医用灌注剂可，例如，含有机溶剂的有油，任意存在的配制剂，例如稳定剂和增溶剂配制。插入阴道的阴道栓剂和塞子可兽医常规技术制备，如果合适，可含有泡腾载体。如果合适，这样的组合物也可含有其他活性组分如皮质类固醇，抗生素或抗寄生虫药。
鼻内给药的液体制剂可为溶液或悬浮液，可含有常规赋形剂如表面张力调节剂，例如，氯化钠，葡萄糖或甘露醇；防腐剂，例如，洁尔灭，硫柳汞，苯乙醇；及其他配制剂如悬浮剂，缓冲剂，稳定剂，分散剂和/或芳香剂。
通过设计合适的，促进活性化合物经皮吸收的，并典型地由包括含衬垫薄膜，药膜和释放层的黏着膏药的基质制剂组成的，系统可影响经皮给药。这样的系统中可包括吸收增强剂如醇，该系统可通过离子电渗促进吸收。
本发明组合物也可被制备成长效制剂。这样的长效制剂可通过植入(例如皮下或肌肉内)或肌肉内注射给药。因此，例如，本发明化合物可与合适的聚合物或疏水材料(例如可接受的油中的乳剂)或离子交换树脂制剂，或被制备成微溶衍生物，例如，微溶盐。
当该组合物被制备成供口服的单剂量形式时，各单剂量形式优选地含0.001毫克到1000毫克，更优选0.01毫克到400毫克作为活性组分的本发明化合物。成人治疗剂量优选每天0.001毫克到5000毫克，更优选每天0.01毫克到2000毫克活性组分，例如，根据给药途径，患者的状况和被治疗的疾病的不同，它们可以1到4个日剂量给药。
该化合物可以，例如，50毫克/千克/天活性组分的剂量，通过静脉输注给药。治疗周期取决于反应率而不是任意的天数。
本发明化合物也可与其他治疗剂结合使用，本发明另一方面提供本发明化合物与其他治疗活性剂的结合。
因此，例如，本发明化合物可与一种或多种其他抗真菌剂，如多烯衍生物(例如两性霉素B，制霉菌素，两性霉素B的液体制剂)，吡咯衍生物(例如氟康唑，intraconazle，酮康唑，咪康唑，克霉唑，ZD-08070,UK-109496),5-氟代野靛碱，Pneumocandin或Echinocandin衍生物(如西洛芬净，LY-303366,L-733560)，烯丙基胺衍生物(例如Terbinafine,Butenafine或Naftifine)，和/或一种或多种免疫调节剂如干扰素(例如IFN-γ),interleukine(例如IL-1,IL-2,IL-3和IL-8)和菌丛刺激因子，[(G)-CSF,(M)-CSF,和(GM)-CSF]和防御素。特别优选的与本发明化合物结合使用的化合物包括intraconazle，氟胞嘧啶，氟康唑，Terbinafine或两性霉素B。
当本发明化合物与其他抗真菌剂结合给药时，本发明化合物与其他抗真菌剂既可以被推荐的最大临床剂量给药，也可以较低的剂量给药。
上述结合可方便地应用于药物制剂中，因此，本发明另一方面提供了含有上述结合与药学上可接受的的载体的药物制剂。该结合中的单一组分可以分别或结合的药物制剂的形式，先后或同时给药。
当本发明化合物与第二种治疗同一疾病的治疗剂结合使用时，各化合物的剂量可与该化合物单独使用时的剂量不同。本领域技术人员可任意地找出合适的剂量。
根据本发明的另一方面，我们提供了式(Ⅰ)化合物或其生理学上可接受的盐，或上述含式(Ⅰ)化合物或其生理学上可接受的盐药物组合物在治疗中的用途，特别是在治疗动物(特别是人)真菌感染中的用途。
根据本发明的另一方面，我们提供了式(Ⅰ)化合物或其生理学上可接受的盐在制备治疗人类或非人类动物真菌感染的药物中的用途。
根据本发明的另一方面，我们提供了一种治疗人类或非人类动物患者真菌感染的方法，该方法包括对上述患者使用有效量的式(Ⅰ)化合物或其生理学上可接受的盐。
显然，本领域技术人员参考本申请，可将治疗延伸到预防及治疗确诊的疾病或感染。
用于抗植物真菌病菌的化合物可按常规方式制剂。
本发明也提供了制备式(Ⅰ)化合物的方法。
因此，本发明提供制备其中R2为甲基，R3为CHO的式(Ⅰ)化合物或其生理学上可接受的盐的方法A，其中包括使其中R4为氢，羧基保护基或阳离子，R3为CHO的式(Ⅱ)化合物或其被保护的衍生物， 与胺(Ⅲ，其中R1定义如上或其被保护的衍生基团)，或其酸加成盐，R1NH2(Ⅲ)在还原氨化条件下反应，随后除去R4和/或R3的所有保护基，分离得到该化合物的游离酸或其盐。在该方法的优选方案中，R4或R3中至少有一个为保护基。
该反应中所使用的合适的羧基保护基R4包括芳基甲基如可被取代的苄基或二苯基甲基衍生基团。可用作羧基保护基团的选择性取代的甲基酯基团包括三烷基甲硅烷基烷氧基甲基例如三甲基甲硅烷基乙氧基甲基或烯丙基。当R4为阳离子时，它优选地为碱金属或碱土金属如钠的阳离子。当R3为被保护的醛基时，它优选地为缩醛，例如C1-4链烷醇如甲醇或乙醇或1,2或1,3二醇如1,2-丙二醇或1,3-丙二醇的缩醛。
在该方法的一个优选方案中，还原氨化反应优选地在合适的溶剂溶液如乙腈中，在合适的还原剂如硼氢化物如硼氢化钠，氰基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠的存在下进行。当胺(Ⅲ)以其游离碱的形式被使用时，该还原氨化反应优选地在酸如有机酸如乙酸的存在下进行。如果所使用的胺(Ⅲ)为其酸加成盐，该还原氨化反应优选地在叔碳亚甲基如三烷基胺如三乙胺的存在下进行。
在该方法的另一个优选方案中，还原氨化反应优选地在溶剂如乙腈中，在苯并三唑和还原剂如硼氢化钠的存在下进行。
羧基保护基R4可通过常规方法除去。当R4为芳基甲基时，它可通过使用氢气和合适的催化剂如钯炭，在合适的溶剂如乙酸乙酯中氢化除去。选择性地，当R2为二苯基甲基时，它可通过用酸如三氟乙酸处理除去。
通过与氟离子如四丁基氟化铵在合适的非质子传递溶剂如醚如四氢呋喃中反应可解离三甲基甲硅烷基乙氧基甲基酯。
当R3为被保护的醛基时，它可通过常规转化方式转化成相应的醛。如果R3为缩醛，它可通过用酸如有机酸如三氟乙酸或含水矿酸如含水盐酸处理转化成醛基。
式(Ⅰ)化合物在除去任何保护基后，可作为以内盐形式存在的游离酸，被方便地分离。
通过在任意存在的溶剂如水中，将式(Ⅰ)化合物在溶剂如甲醇或四氢呋喃或乙腈与四氢呋喃的混合物中的溶液或悬浮液用等量碱(如氢氧化钾或氢氧化钠)处理，可制备式(Ⅰ)化合物的无机碱或有机碱盐。
通过常规方式如全部或部分除去有机溶剂，随后冷冻干燥或结晶，可分离这些盐。
通过用合适的无机或有机酸处理式(Ⅰ)化合物可制备该化合物的酸加成盐。通过在二噁烷中用合适的酸处理该化合物的悬浮液，随后除去溶剂，可方便地形成上述盐。
式(Ⅱ)化合物可通过氧化其中R4和R3定义如上的式(Ⅳ)化合物而制备 在碱如碳酸氢钠的存在下，在溶剂如水或含水醇如含水甲醇中，使用合适的氧化剂如碱金属高碘酸盐如高碘酸钠，可方便地进行该氧化反应。选择性地，该氧化反应可使用四乙酸铅进行。
显然，上述得到的化合物(Ⅱ)处于与环化合物(Ⅱa)的平衡状态 通过常规方法，可由其中R4为氢，R3为CHO的相应的式(Ⅱ)化合物方便地制备其中R3为被保护的醛基，R4为氢的相应的式(Ⅱ)化合物。例如，通过在溶剂如乙腈中，在酸催化剂如对甲苯磺酸和原甲酸酯如三甲基原甲酸酯的存在下，与合适的二醇反应，可得到缩醛。
使用常规羧基酯化方法，可由其中R4为氢的化合物制备其中R4为羧基保护基，R2为CHO的式(Ⅳ)化合物。
在合适的溶剂如二氯甲烷中，用二苯基-重氮-甲烷处理相应的羧酸可制备其中R4为二苯基甲基的式(Ⅳ)化合物。
按常规方式，由其中R3为CHO的相应的式(Ⅳ)化合物制备其中R3为被保护的醛基的式(Ⅳ)化合物。在合适的溶剂如醇如甲醇中，在酸催化剂如对甲苯磺酸和三甲基原甲酸酯的存在下，用二醇处理相应的醛，可制备其中R3为环缩醛基的式(Ⅳ)化合物。
其中R4为氢，R3为CHO的式(Ⅳ)化合物为已知化合物，或可使用WO97/42195和WO96/14327所述的方法制备。
在另一方法B中，通过烷基化式(Ⅴ)化合物可制备其中R3为CHO,R2为甲基的本发明式(Ⅰ)化合物，随后除去任何保护基， 其中R3为定义如上的醛基或被保护的醛基，R4为羧基保护基或氢或阳离子。
在该方法的一个优选方案中，烷基化可通过反应化合物(Ⅴ)与烷基化试剂(Ⅵ,R1aY，其中R1a定义如上述R1,Y为离去基团如卤素原子如溴或碘，或甲磺酰基或对苯甲磺酰基，或者烷基化试剂R1aY为可与化合物(Ⅴ)反应引入R1基团的反应剂)反应进行。
该反应可在溶剂如醇如乙醇中，在无机碱如碱金属碳酸盐或碳酸氢盐如碳酸钠或碳酸氢钠的存在下，优选地在加热下，方便地进行。
在方法B的另一个优选方案中，通过在还原烷基化条件下使式(Ⅴ)化合物与合适的醛或酮(Ⅶ,RaRbCO)反应，可将其烷基化。上述与所需醛或酮的反应可在还原剂如硼氢化物如硼氢化钠及乙酸或氢和金属催化剂如钯炭的存在下进行。
当用化合物(Ⅶ)进行上述反应时，Rb表示氢，Ra表示可使基团RaCH2具有所需的R1的基团。
当用式(Ⅶ)酮进行该反应时，Ra和Rb与和它们连在一起的碳原子形成所需的R1。
在该方法的另一优选方案中，通过在溶剂如乙腈，在酸如樟脑磺酸的存在下，以及在加热下，使式(Ⅴ)化合物与多聚甲醛和炔丙基三甲基-甲硅烷反应，可得到其中R1为2,3-丁二烯基的式(Ⅰ)化合物。
通过在合适的溶剂如醇如甲醇或乙醇或乙腈中，在还原氨化条件下，或使其中R4和R3定义如上的相应的式(Ⅱ)化合物与氨源(例如氨或氢氧化铵)反应，可得到式(Ⅴ)化合物。例如在氢气和合适的催化剂如钯化合物如钯炭的存在下使二者反应，或与硼氢化物如硼氢化钠反应，或在苯并三唑的存在下与硼氢化钠反应。
在本发明另一方法C中，通过使其中R4为定义如上的羧基保护基，Z为离去基团的粪壳菌醇衍生物(Ⅷ)， 与其中R1和R2定义如式(Ⅰ)或为可转化为那些基团的吗啉醇(Ⅸ)反应，可得到其中R3为CHO的式(Ⅰ)化合物。
式(Ⅷ)中的离去基团Z优选地为多氟-C1-4烷基磺酰氧基如三氟甲基-磺酰氧基。该反应在碱如碱金属碱如碱金属氢化物如氢化钠，碱金属醇化物如叔丁醇钾或碱金属碳酸盐如碳酸铯的存在下，以及在三氟甲磺酸四烷基铵盐如三氟甲磺酸四丁基铵盐的任意存在下进行。该反应优选地在选自醚如1,4-二噁烷，C1-4链烷醇如异丙醇或卤代烃如二氯甲烷中，在0-100℃，优选10-40℃的温度下进行。该反应还优选地在可吸收水的试剂如分子筛的存在下进行。
通过常规方法可由其中R4为羧基保护基的被保护的粪壳菌醇化合物(Ⅹ)制备化合物(Ⅷ)。 例如，通过在溶剂如烃类如二氯甲烷中，在碱如芳香叔胺如可被取代的吡啶如吡啶或二甲基吡啶的存在下，使化合物(Ⅹ)与相应的多氟烷基磺酰卤或多氟烷基磺酸酐反应，可得到其中Z为多氟烷基磺酰氧基的式(Ⅸ)化合物。该反应优选地在无机碱如碳酸铯的存在下进行。
式(Ⅹ)化合物为已知化合物，或可通过与制备已知化合物相似的方法，例如使用常规方法酯化其中R4为氢的式(Ⅹ)化合物(粪壳菌醇)，引入所需的羧基保护基R4，制备。
通过在溶剂如链烷醇如乙醇中，使其中R1定义如式(Ⅰ)所限定的胺衍生物 与环氧乙烷衍生物(Ⅻ)反应，随后用矿酸如盐酸处理，可得到吗啉醇(Ⅸ)。
式(Ⅺ)和式(Ⅻ)化合物为已知化合物，或可通过与制备已知化合物相似的方法制备。
在上述方法B和C中，使用上述方法A所述的方法可使羧基保护基R4或醛基保护基R3转化成所需的酸或醛。
式(Ⅰ)化合物或其被保护的衍生物可被转化成式(Ⅰ)化合物。
通过在溶剂如甲苯中与羟胺反应，任何将所得肟用乙酸酐处理并加热，可由其中R3为CHO的式(Ⅰ)化合物制备其中R3为CN的式(Ⅰ)化合物。
通过与合适的氧化剂如过苯甲酸如3-氯过苯甲酸反应，可由相应的烯丙基衍生物制备其中R1为可被取代的烯丙氧基的式(Ⅰ)化合物。该反应优选地按下述步骤进行在溶剂如二氯甲烷中用过苯甲酸处理烯丙基化合物，除去溶剂，然后在溶剂如乙腈或四氢呋喃或其混合物中加热所得混合物。
式(Ⅱ),(Ⅱa),(Ⅴ),(Ⅷ)和(Ⅸ)化合物为新化合物，为本发明的另外的方面。
下面的实施例不是限制本发明的，而是说明本发明的。
中间体实施例和实施例中的NMR谱是由Varian Unity 300Mhzappartus测定的。中间体实施例1[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(6-脱氧-β-D-阿卓吡喃糖基氧基)甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸，二苯基甲基酯在[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(6-脱氧-β-D-阿卓吡喃糖基氧基)甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸(14克)与215毫升二氯甲烷∶甲醇v∶v 20∶1的混合物所形成的溶液中滴入250毫升0.35N二苯基重氮甲烷在二氯甲烷中的溶液。搅拌30分钟后，仔细加入1N盐酸(180毫升)，充分搅拌该混合物，直到紫色消失。分成两相，将有机层用碳酸氢钠饱和水溶液(500毫升)洗涤，用硫酸钠干燥。除去溶剂，得到棕色泡沫状粗产物，将其通过闪式层析(硅胶)纯化，首先用二氯甲烷洗脱，然后用10％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱。将所得物质溶于甲醇(100毫升)，加热到40℃。在该温热的溶液中加入乙二醇(50毫升)，三甲基原甲酸酯(6.5毫升)和对甲苯磺酸(209毫克)。反应结束后，将该混合物冷却至室温并在其中加入乙酸乙酯(500毫升)(TLC控制，己烷∶丙酮v∶v 1∶1)。
加入碳酸氢钠饱和水溶液，分成两相。将有机层用水(500毫升)和盐水(500毫升)洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩至干。将泡沫状残留物溶于微量乙醚，滴入己烷，直到得到浑浊悬浮液，然后在冰箱中冷却过夜。过滤沉淀出的所得白色固体，得到白色固体状所需产物(相对于原料三醇总产率为85-90％)。1H-NMR(CDCl3,ppm):7.5-7.2(m,10H,Ph2),6.94(s,1H,CHPh2),5.83(dd,1H,H2,J=1.5 and 3.6Hz),5.07(s,1H,OCHO),4.64(d,1H,H1＇,J=1.8Hz),4.05(m,2H,8aCH2+H2＇), 3.90-3.65(m,8H,H3＇,+H4＇+H5＇+8aCH2+OCH2CH2O),2.64(m,1H,CH(CH3)2),2.52(t,1H,H1,J=3.9Hz),2.35,2.27,2.02(3d,3OH,J=2.4,3.6 and 5.7Hz).中间体实施例2[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(6-脱氧-β-D-吡喃甘露糖基氧基)甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸，二苯基甲基酯使用中间体1的方法，由[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(6-脱氧-β-D-吡喃甘露糖基氧基)甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸制备[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(6-脱氧-β-D-吡喃甘露糖基氧基)甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸二苯基甲基酯。1H-NMR(CDCl3,ppm):7.5-7.2(m,10H,Ph2),6.94(s,1H,CHPh2),5.82(dd,1H,H2,J=1.2和3.6Hz),5.08(s,1H,OCHO),4.31(d,1H,H1＇,J=1.2Hz),4.07(d,1H,8aCH2,J=9.3Hz),3.94(m,1H,H3＇),3.9-3.75(m,4H,OCH2CH2O),3.42(m,2H H2＇+4＇),3.24(m,1H,H5＇),2.64(m,1H,CH(CH3)2),2.54(m,2H,H1+OH),2.36(bs,1H,OH),2.33(d,1H,OH,J=2.4Hz).中间体实施例3[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)4-(1,3-二氧戊环-2-基)-8a-[(2R,4R)-4-甲基-3-氧杂-环戊二醇-2-基)-氧甲基]-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸二苯基甲基酯在中间体1(23克)的甲醇(625毫升)溶液中加入固体碳酸氢钠(5.62克)。在35℃及充分搅拌下，在2小时内，在该悬浮液中滴加过碘酸钠(35.7克)的水(300毫升)溶液。加完后，将该悬浮液在35℃避光搅拌48小时。滤出白色固体，将滤饼用甲醇(200毫升)洗涤，合并滤液和洗液，真空浓缩除去甲醇。加入乙酸乙酯(600毫升)，分成两相。将有机层用盐水(2×100毫升)两次，用硫酸钠干燥，减压除去溶剂。真空干燥后，得到白色泡沫状标题化合物(22.3克)。该产物无需进一步纯化便可用于还原氨化反应。
按上述方法，使用中间体2作为原料也可制备中间体3。中间体实施例4-通用方法在中间体3(200毫克)的无水乙腈(5毫升)溶液中加入氰基硼氢化钠(39毫克)，相应的伯胺(2当量)和乙酸(18微升)。将该混合物在室温下搅拌直到反应完全(2-3小时)。所得悬浮液用水(3体积)稀释，将该乳状悬浮液用乙酸乙酯(1体积)萃取。将有机层用盐水(2×10毫升)洗涤，再将水层用乙酸乙酯(10毫升)萃取。将有机层用硫酸钠干燥，浓缩至干。将所得油状产物溶于微量二氯甲烷，并通过硅胶短柱过滤，用己烷∶丙酮v∶v 15∶1洗脱。除去合适的流份的溶剂，得到所需的白色泡沫状粗品胺，该产物无需进一步纯化便可使用。
使用上述方法制备下列化合物。中间体实施例4a[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-环丙基-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸二苯基甲基酯中间体实施例4b[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-乙基-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸二苯基甲基酯中间体实施例4c[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-烯丙基-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸二苯基甲基酯中间体实施例4d[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-(2-甲氧基乙基)-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸二苯基甲基酯中间体实施例4e[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-(1,1-二甲基乙基)-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸二苯基甲基酯中间体实施例4f[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-丙基-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸中间体实施例4g[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4,6-二甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸二苯基甲基酯在包括甲胺的该中间体的制备中,使用了略有不同的实验步骤。甲胺是由其盐酸盐(3当量)和三乙胺(4当量)“就地”释放的。同时在该部分反应也未使用乙酸。中间体实施例4h[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(6-甲基-4-苯基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸二苯基甲基酯中间体实施例4i[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-苄基-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸二苯基甲基酯中间体实施例4j[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-(2-乙硫基乙基)-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸二苯基甲基酯中间体实施例5[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]4-甲酰基-8a-[((2R,6R)-4-甲基-3-氧杂-环戊二醇-2-基)-氧甲基]-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸在一个4升的容器中放置水(1100毫升),1N氢氧化钠(125.5毫升)和[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]-4-甲酰基-8a-[(6-脱氧-β-D-吡喃甘露糖基氧基)甲基]-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸(60克)。上述物质溶解后，立即加入固体碳酸氢钠(31.6克)，搅拌该混合物，直到成为透明溶液。在25℃下，在3小时内，在该溶液中加入过碘酸钠(67.2克)的水(600毫升)溶液。在25℃下搅拌2小时后，过滤该浑浊悬浮液，将得到的透明溶液倒入容器，滴加2N盐酸(250毫升)，直到pH=1.61。
滤出固体沉淀，用水(1000毫升)洗涤，真空干燥过夜(40℃)。得到52克白色粉末状标题化合物。用乙酸乙酯(500毫升)萃取滤液，将有机层用盐水(100毫升)洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩至干。除去溶解，得到另外5克黄色泡沫状标题化合物。
按上述方法，使用[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]-4-甲酰基-8a[(6-脱氧-β-D-阿卓吡喃糖基氧基)甲基]-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸作为原料，也可制备标题化合物。中间体实施例6[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-8a-[((2R,6R)-6-甲基吗啉-2-基)-氧甲基]-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸铵盐氮气氛下，在中间体3(200毫克)与20毫升氨的甲醇溶液(0.1M)形成的溶液中加入钯炭(10％)(10毫克)。将该混合物在Parr apparatus(50p.s.i.)中摇动24小时。过滤反应混合物，将溶剂蒸发至干。将残留物通过硅胶闪式柱层析纯化，用二氯甲烷∶甲醇20∶1洗脱，得到白色固体状标题化合物(131毫克)。1H-NMR(CDCl3,ppm):5.95(dd,1H,H-2,J=1.2和3.3Hz),4.62(s,1H,OCH2O),4.33(dd,1H,H-2＇,J=2.4和8.7Hz),4.09(d,1H,8aCHa,J=9.6Hz),4.13-4.05,4.03-3.94和3.85-3.81(3m,4H,OCH2CH2O),3.69(d,1H,8aCHb,J=9.6Hz),3.62(m,1H,H-6＇),2.91(dd,1H,Ha-3＇,J=2.1和12.0Hz),2.74(dd,1H,Ha-5＇,J=2.1和12.3Hz),2.65(t,1H,H-1,J=3.9Hz),2.46(dd,1H,Hb-3＇,J=9.0和12.0Hz),2.40(dd,1H,Hb-5＇,J=10.2和12.3Hz),2.32(m,1H,CH(CH3)2).中间体实施例7[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-8a-[((2R,6R)-(4-(2-溴烯丙基)-6-甲基吗啉-2-基)-氧甲基]-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸将中间体6(500毫克)，2-溴烯丙基溴化物(203毫克)和固体碳酸氢钠(170毫克)在无水乙醇(15毫升)中的混合物在60℃搅拌5小时。冷却及除去溶剂后，将残留物通过柱层析纯化，用1％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到标题化合物(481毫克)。1H-NMR(CDCl3,ppm):11.30(br s,1H,CO2H),5.97(dd,1H,H-2,J=1.5和3.6Hz),5.84(m,1H,CH2=),5.92(m,1H,CH2=),4.59(s,1H,OCHO),4.44(dd,1H,H-2＇,J=2.4和8.7Hz),4.14(d,1H,8a-CH2,J=9.6Hz),4.12 to 3.80(m,4H,OCH2CH2O),3.70(m,2H,H-6＇和8a-CH2),3.16(s,2H,allyl-CH2-N),2.82(m,1H,CH-N),2.66(m,1H,H-1),2.64(m,1H,CH-N)中间体实施例8[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-8a-[((2R,6R)-(4-(2-氯烯丙基)-6-甲基吗啉-2-基)-氧甲基]-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸将中间体6(1.6克)，2-氯烯丙基氯化物(0.300毫升)和固体碳酸氢钠(0.550克)在无水乙醇(100毫升)中的混合物加热搅拌回流2小时。冷却后，加入碘化钠(0.040克；0.5毫摩尔)，并将该混合物再回流20小时。冷却及蒸发后，将残留物通过柱层析纯化，用2％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到标题化合物(0.880克)。1H-NMR(CDCl3,ppm):11.60(br s,1H,CO2H),5.97(dd,1H,H-2,J=1.5和J=3.4Hz),5.38(m,1H,CH2=),5.35(m,1H,CH2=),4.59(s,1H,OCHO),4.44(dd,1H,H-2＇,J=2.4和J=8.6Hz),4.14(d,1H,8a-CH2,J=9.6Hz),4.12 to 3.80(m,4H,OCH2CH2O),3.70(m,2H,H-6＇和8a-CH2),3.12(s,2H,allyl-CH2-N,2.83(m,1H,CH-N),2.66(m,1H,H-1),2.66(m,1H,CH-N),2.30(m,1H,CH(CH3)2).中间体实施例9[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-8a-[((2R,6R)-(4-(3,3-二氟烯丙基)-6-甲基吗啉-2-基)-氧甲基]-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸将中间体6(500毫克)，3-溴-3,3-二氟丙烯(157毫克)和固体碳酸氢钠(170毫克)在无水乙醇(20毫升)中的混合物在70℃搅拌24小时。冷却及除去溶剂后，将残留物通过柱层析纯化，用5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到标题化合物(304毫克)。1H-NMR(CDCl3,ppm):11.50(br s,1H,CO2H),5.96(dd,1H,H-2,J=1.2和3.3Hz),4.60(s,1H,OCHO),4.38(dd,1H,H-2＇,J=2.4和8.4Hz),4.25(dddd,1H,CH=,J=25,10.5,8.1和2.4Hz),4.15 to 3.80(m,5H,8a-CH2和OCH2CH2O),3.70(d,1H,8a-CH2,J=9.6Hz),3.64(m,1H,H-6＇),3.02(m,2H,allyl-CH2-N),2.80(m,1H,CH-N),2.70(m,1H,H-1),2.61(m,1H,CH-N)中间体实施例10N-甲基-N-[(2R)-羟基-丙基]-2-氨基-乙醛二甲基缩醛将N-甲氨基乙醛二甲基缩醛(1.41毫升)和R-(-)-丙烯氧化物(1毫升)溶于无水乙醇(10毫升)；将该混合物在室温下搅拌72小时。将该混合物浓缩至干，将残留物通过柱层析(二氯甲烷/甲醇v/v 7∶1)纯化，得到标题化合物(1.706克)。1H-NMR(CDCl3,ppm):4.46(dd,1H,CH-(OMe)2,J=4.8和6.0Hz)；3.82-3.70(m,1H,CH-OH)；3.5(bs,1H,OH)；3.36(s,6H,2(CH3-O))；2.66(dd,1H,CH2-CH-(OMe)2,J=6.0和13.5Hz)；2.53(dd,1H,CH2-CH-(OMe)2,J=6.3和13.5Hz)；2.39 (dd,1H,CH2-CH-OH,J=3和12.6Hz)；2.36(s,3H,CH3-N)；2.27(dd,1H,CH2-CH-OH,J=10.2和12.6Hz)；1.11(d,3H,CH3-CH,J=6.0Hz).中间体实施例116R-4,6-二甲基-2-羟基-吗啉将中间体10(1.7克，10.6毫摩尔)和6N盐酸(20毫升)置于没在90℃的油浴中的烧瓶中搅拌2小时。将该混合物冷却至室温并用固体氢氧化钠(4.8克)中和。加入乙醇(600毫升)，形成氯化钠沉淀。真空过滤上述沉淀，加入甲苯真空浓缩滤液至干。将所得糖浆状物通过柱层析(二氯甲烷/甲醇v/v 10∶1到1∶1)纯化，得到标题化合物(760毫克)。1H-NMR(CDCl3,ppm):(α∶β≈1∶2混合)5.11(bs,1Hα,H2)；4.87(dd,1Hβ,H2,J=2.4和8.7Hz)；4.23-4.16(m,1Hα,H6)；3.82-3.66(m,1Hβ,H6)；2.91(dt,1Hβ,H3eq,J=1.8和10.8 Hz)；2.79-2.73(m,2Hα,H3eq+H5eq)；2.63(dt,1Hβ,H5eq,J=1.8和11.1Hz)；2.28(s,3Hβ,CH3-N)；2.24(s,3Hα,CH3-N)；2.18(dd,1Hα,H3ax,J=2.4 and 11.1Hz)；1.83-1.68(m,2Hβ+1Hα,H3ax+H5ax+H5ax)；1.19(d,3Hβ,CH3CH,J=6.3Hz)；1.13(d,3Hα,CH3CH,J=6.3Hz).中间体实施例12[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-三氟甲磺酰氧基甲基-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸苄基酯氩气氛下，将苄基粪壳菌醇(423.5毫克)，吡啶(118毫升)，碳酸铯(催化量)和3分子筛在二氯甲烷(10毫升)中的混合物冷却至-20℃,慢慢加入三氟甲磺酸酐(231毫克)。将该混合物在-20℃甲苯30分钟。加入己烷(30毫升)，将该混合物搅拌15分钟，用Celite过滤，1％硫酸，水洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩至干。得到糖浆状标题化合物，该化合物非常不稳定，但在反应周期内可将其保存在己烷中(在冰箱内可保存数小时，甚至数天)。它可不经纯化而用于下一步。1H-NMR(CDCl3,ppm):9.71(s,1H,CHO)；7.4-7.3(m,5H,Ph)；6.11(dd,1H,H2,J=1.5和3.6Hz)；5.3-5.1(m,2H,CH2Ph)；4.78(d,1H,8aCHa,J=9.6Hz)；4.62(d,1H,8aCHb,J=9.6Hz)；2.76(t,1H,H1,J=4.5Hz)；2.22(m,1H,CH-(CH3)2).中间体实施例13[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4,6-二甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸苄基酯将中间体12(1毫摩尔粗品)溶于二氯甲烷(8毫升)，在其中加入中间体11(132毫克)，碳酸铯(400毫克)，三氟甲磺酸四丁基铵盐(40毫克)和3分子筛在二氯甲烷(7毫升)中的混合物。将所得混合物在室温下搅拌20小时，通过t.l.c.(己烷/丙酮v/v4∶1)监测反应；然后用Celite过滤，通过柱层析(己烷/丙酮v/v7∶1)直接纯化。得到无色糖浆状标题化合物(174毫克)。1H-NMR(CDCl3,ppm):9.71(s,1H,CHO)；7.42-7.25(m,5H,Ph)；6.35(dd,1H,H2,J=1.5和3.6Hz)；5.3-5.1(m,2H,CH2Ph)；4.35(dd,1H,H2＇,J=2.1和9.0Hz)；3.93(d,1H,8aCHa,J=9.6Hz)；3.7-3.6(m,1H,H6＇)；3.67(d,1H,8aCHb,J=9.6Hz)；2.80-2.71(m,1H,H3＇)；2.73(t,1H,H1,J=4.2Hz)；2.6(dt,1H,H5＇,J=1.5和11.1Hz)；2.26(s,3H,CH3-N)；2.23(m,1H,CH-(CH3)2).中间体实施例14[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸在一个充分干燥(90℃,N2,60分钟)的10L有套层的容器中，加入无水乙腈(1.4L)。分批加入中间体5(90克)，然后加入乙二醇(108毫升)，三甲基原甲酸酯(52.2毫升)和对甲苯磺酸单水合物(1.8克)。温度保持在25℃，搅拌30分钟后，在5分钟内同时加入固体苯并三唑(48.42克)和25％氢氧化铵水溶液(1400ml)。将该混合物在25℃搅拌2小时，然后冷却至5℃。加入硼氢化钠(18克)，将该混合物在5℃搅拌1小时，然后温热至25℃，保持这种状态过夜。在50℃及氮气氛下除去溶剂，直到体积为1800毫升，然后冷却至25℃。小心地加入2N盐酸，直到pH=8，减压过滤所得沉淀，用水/乙腈v/v 2∶1混合物洗涤，在真空炉(40℃)内干燥24小时，得到白色粉末状标题化合物(70克)。1H-NMR(δ,ppm,CDCl3):5.95(dd,1H,H2,J=1.5和3.6Hz),4.61(s,1H,OCHO),4.32(dd,1H,H2＇,J=2.4和9Hz),4.15-3.92和3.86-3.80(2m,5H,8aCH2+OCH2CH2O),3.69(d,1H,8aCH2,J=9.3Hz),3.60(m,1H,H6＇),2.90(bd,1H,H3＇,J=2.1和12Hz),2.73(bd,1H,H5＇,J=2.4和12.3Hz),2.52-2.26(m,3H,2H5＇+CH(CH3)2).中间体实施例15[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸在一个4L有套层的反应器中，在25℃，加入四氢呋喃(600毫升)。分批加入中间体14(48.5克)，然后在10分钟内将其滴入含1N盐酸(300毫升)的悬浮液中。将该溶液在25℃搅拌直到反应完全(TLC控制/二氯甲烷/甲醇v/v 10∶1)，然后加入1N NOH直到所有物质溶解(约500毫升)。使温度保持在55℃，在氮气氛下除去四氢呋喃。最后得到的体积为900毫升，将该混合物冷却，慢慢加入盐酸，直到pH=7.7。过滤收集白色沉淀，用水洗涤，在真空炉(40℃)内干燥，得到白色粉末状标题化合物(35克)。1H-NMR(δ,ppm,CDCl3):9.59(s,1H,CHO),5.96(bd,1H,H2,J=2.4Hz),4.63(bd,1H,H2＇,J=9.3Hz),4.08(bm,1H,H6＇),3.88和3.79(2bd,2H,8aCH2,J=8.1Hz),2.94和2.83(2bd,2H,H3＇+H5＇,J=10.5Hz),2.61(bt,1H,H1,J=3.6Hz).中间体实施例16[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-6-甲基-4-(2-甲基-2-丙烯基)-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸在一个2L有套层的反应器中，加入市售乙腈(232毫升)。分批加入中间体14(20克)。使套层温度保持在25℃，在5分钟内滴加氢氧化钠(4.2克，225毫升水中)。所有物质溶解后，在5分钟内加入3-溴-2-甲基丙烯(5.44毫升)的市售乙腈(20毫升)溶液。搅拌2小时后，加入己烷(200毫升)，分成两层。将乙腈/水层用己烷(2×200毫升)洗涤两次，并用0.25N氢氧化钠(200毫升)再萃取己烷层。在60℃氮气氛下浓缩合并的含水层，直到体积为约450毫升，然后冷却至25℃。慢慢加入盐酸，直到pH=7.8，产生白色沉淀，并将其过滤收集，用水(1L)洗涤，减压干燥过夜，得到白色粉末状标题化合物(18.1克)。1H-NMR(δ,ppm,CDCl3):7.26(s,1H,CHO),5.95(dd,1H,H2＇,J=1.2和3.6Hz),4.86(bs,2H,=CH2),4.61(s,1H,OCHO),4.40(dd,1H,H2,J=2.4和9Hz),4.15-3.9和3.83(m,5H,8aCH2+OCH2CH2O),3.70-3.60(m,2H,8aCH2+H6＇),2.84(bs,2H,NCH2),2.77(bd,1H,H3＇,J=10.8Hz),2.65(bt,1H,H1,J=3.6Hz),2.58(bd,1H,H5＇,J=11.1Hz),2.33(m,1H,CH(CH3)2),1.73(bs,3H,=C-CH3).中间体实施例17[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-4-(4-甲氧基苄基)-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸在25℃下，在一个充分干燥的1L圆底烧瓶中，加入无水乙腈(300毫升)。分批加入中间体5(20克)，然后加入乙二醇(24毫升)，三甲基原甲酸酯(11.76毫升)和对甲苯磺酸单水合物(400毫克)。在25℃搅拌30分钟后，加入固体苯并三唑(10.8克)。将该溶液倒入500毫升滴液漏斗中，将其慢慢滴入装有无水乙腈(200毫升)中的对甲氧基苄基胺(56毫升)和硼氢化钠(1克)的充分干燥的2L有套层的反应器中。三次加入的碳酸氢钠沉淀物(3×1g)小心地被加入到第一溶液中。加完后，将该混合物在室温下搅拌过夜，然后加热至60℃，在氮气氛下浓缩直到总体积为350毫升。加入1N盐酸，直到pH=8.00，过滤收集白色沉淀，用乙腈/水v/v2∶1混合物(1L)洗涤。在真空炉(40℃)内干燥过夜，得到白色粉末状标题化合物(18克)。1H-NMR(δ, ppm, CDCl3):7.20(m,2H,2ArH),6.85(m,2H,2ArH),5.93(dd,1H,H2,J=0.9和3.3Hz),4.59(s,1H,OCHO),4.41(dd,1H,H2＇,J=2.1和8.4Hz),4.13-3.93和3.86-3.81(2m,5H,OCH2CH2O+8aCH2),3.80(s,3H,OCH3),3.67(m,2H,8aCH2+H6＇),3.43(bs,2H,NCH2),2.80(bd,1H,H3＇,J=10.5Hz),2.62(m,2H,H1+H5＇),2.29(m,1H,CH(CH3)2).中间体实施例18N-甲基-N-[(2)-羟基-丁基]-2-氨基乙醛二甲基缩醛将N-甲氨基乙醛二甲基缩醛(6.42毫升)和1,2-环氧丁烷(8.7毫升)溶于无水乙醇(50毫升)，将该混合物在室温下搅拌30小时。将反应混合物浓缩至干，残留物通过柱层析(二氯甲烷/甲醇v/v 20∶1到10∶1)纯化，得到标题化合物(9克)。1H-NMR(CDCl3,ppm):4.50(dd,1H,CH-(OMe)2,J=5.1和6.0Hz)；3.60-3.40(m,1H,CH-OH)；3.36(s,3H,(CH3-O)；3.35(s,3H,(CH3-O))；2.65(dd,1H,CH2-CH-(OMe)2,J=5.7和13.5Hz)；2.50(dd,1H,CH2-CH-(OMe)2,J=4.8和13.5Hz)；2.40(dd,1H,CH2-CH-OH,J=3.0和12.3Hz)；2.35(s,3H,CH3-N)；2.28(dd,1H,CH2-CH-OH,J=10.5和12.6Hz)；1.54-1.30(m,2H,CH3-CH2-CH-OH)；0.96(t,3H,CH3-CH2,J=6.9Hz).中间体实施例194-甲基-6-乙基-2-羟基-吗啉将中间体18(4.78克)和6N盐酸(41.6毫升)在没在90℃的油浴中的烧瓶中搅拌6小时。将该混合物冷却至室温，使用固体氢氧化钠(10克)中和。加入乙醇(500ml)，产生氯化钠白色沉淀。真空过滤沉淀，加入甲苯将滤液真空浓缩至干。将所得糖浆状物通过柱层析(二氯甲烷/甲醇v/v 20∶1到5∶1)纯化，得到标题化合物(2.9克)。1H-NMR(CDCl3,ppm):(1:1混合)5.11(bs)和4.86(dd,J=2.4和8.4Hz),H2.中间体实施例20[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R)-(4-甲基-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸苄基酯将溶于二氯甲烷(15毫升)的中间体12(1毫摩尔粗品)加入含中间体19(145毫克)，碳酸铯(400毫克)，三氟甲磺酸四丁基铵(40毫克)和3分子筛及二氯甲烷(5毫升)的混合物。将所得混合物在室温下搅拌44小时，通过t.1.c.(己烷/乙酸乙酯v/v 5∶1)监测反应；然后用Celite过滤，通过柱层析(己烷/乙酸乙酯v/v 7∶1到1∶1)直接纯化。得到无色糖浆状标题化合物(165毫克)。1H-NMR(CDCl3,ppm):9.72和9.66(s,1H,CHO)；7.42-7.25(m,10H,Ph)；6.09和6.04(dd,1H,H2,J=1.3和3,3Hz)；5.3-5.1(m,4H,CH2Ph)；4.39和4.35(dd,1H,H2＇,J=2.1和8.7Hz)；4.16和3.89(d,1H,8aCHa,J=9.6Hz)；3.72和3.50(d,1H,8aCHb,J=9.6Hz)；3.46-3.34(m,2H,H6＇)；2.84-2.58(m,6H,H3＇+H1+H5＇)；2.27(s,6H,CH3-N).中间体实施例214-甲基-6-叔丁基-2-羟基-吗啉将N-甲氨基乙醛二甲基缩醛(3.4毫升)和3,3-二甲基-1,2-环氧丁烷(4.04毫升)溶于无水乙醇(30毫升)，将该混合物在室温下甲苯40小时，然后在80℃甲苯40小时。将反应混合物浓缩至干，并将残留物与6N盐酸(50毫升)混合，将所得混合物在80℃的油浴中的烧瓶中搅拌8小时。将该混合物冷却至室温，使用固体氢氧化钠(12克)中和。加入乙醇(500毫升)，产生氯化钠白色沉淀。真空过滤沉淀，加入甲苯将滤液真空浓缩至干。将所得糖浆状物通过柱层析(二氯甲烷/甲醇v/v25∶1到10∶1)纯化，得到标题化合物(3克)。1H-NMR(CDCl3,ppm):(1∶2混合)5.12(bs)和4.83(dd,J=2.4和8.4Hz),H2.中间体实施例22[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R)-(4-甲基-6-叔丁基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸苄基酯将溶于甲苯(10毫升)的中间体12(1毫摩尔粗品)加入含中间体21(173毫克)，碳酸铯(400毫克)，三氟甲磺酸四丁基铵(40毫克)和3分子筛及甲苯(5毫升)的混合物。将所得混合物在室温下搅拌20小时，通过t.l.c.(己烷/丙酮v/v 4∶1)监测反应；然后加入二氯甲烷(15毫升)，将该混合物在室温下搅拌96小时；用Celite过滤反应粗品，通过柱层析(己烷/乙酸乙酯v/v 5∶1到1∶1)直接纯化。得到无色糖浆状标题化合物(74毫克)。1H-NMR(CDCl3,ppm):9.72和9.67(s,1H,CHO)；7.42-7.25(m,10H,Ph)；6.09和6.04(dd,1H,H2,J=1.5 and 3.6Hz)；5.3-5.1(m,4H,CH2Ph)；4.37 and 4.34(dd,1H,H2＇,J=2.4和8.4Hz)；4.15和3.84(d,1H,8aCHa,J=9.6Hz)；3.77和3.48(d,1H,8aCHb,J=9.6Hz)；3.14和3.10(t,1H,H1,J=2.1Hz)；2.80-2.58(m,4H,H3＇+H5＇)；2.27(s,6H,CH3-N).中间体实施例23N-甲基-N-[(2)-羟基-2-苯基-乙基]-2-氨基乙醛二甲基缩醛将N-甲氨基乙醛二甲基缩醛(3.21毫升)和苯乙烯氧化物(3.57毫升)溶于无水乙醇(30毫升)，将该混合物在室温下搅拌72小时。将反应混合物浓缩至干，残留物通过柱层析(二氯甲烷/甲醇v/v 1∶0到10∶1)纯化，得到标题化合物(5.6克)。1H-NMR(CDCl3,ppm):7.40-7.15(m,5H,Ph)；4.68(dd,1H,CH-(OMe)2,J=3.6和10.5Hz)；4.51(t,1H,CH-OH,J=5.1Hz)；3.40(s,3H,(CH3-O)；3.38(s,3H,(CH3-O))；2.75(dd,1H,CH2-CH-(OMe)2,J=5.7和13.5Hz)；2.70-2.40(m,3H,CH2-CH-(OMe)2+CH2-CH-OH)；2.45(s,3H,CH3-N).中间体实施例244-甲基-6-苯基-2-羟基-吗啉将中间体23(5.40克)和6N盐酸(50毫升)在没在90℃的油浴中的烧瓶中搅拌20小时。将该混合物冷却至室温，使用固体氢氧化钠(12克)中和。加入乙醇(700毫升)，产生氯化钠白色沉淀。真空过滤沉淀，加入甲苯将滤液真空浓缩至干。将所得糖浆状物通过柱层析(二氯甲烷/甲醇v/v 30∶1到10∶1)纯化，得到标题化合物(1.9克)。1H-NMR(CDCl3,ppm):(1∶4混合)5.67(m)和5.17(dd,J=2.4和10.5Hz),H2.中间体实施例25[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R)-(4-甲基-6-苯基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸苄基酯将溶于甲苯(10毫升)的中间体12(1毫摩尔粗品)加入含中间体24(193毫克)，碳酸铯(400毫克)，三氟甲磺酸四丁基铵(40毫克)和3分子筛及甲苯(5毫升)的混合物。将所得混合物在室温下搅拌96小时，在80℃搅拌20小时，通过t.l.c.(己烷/丙酮v/v 4∶1)监测反应；然后用Celite过滤反应粗品，通过柱层析(己烷/乙酸乙酯v/v 2∶1到1∶1)直接纯化。得到无色糖浆状标题化合物(115毫克)。1H-NMR(CDCl3,ppm):9.72和9.68(s,1H,CHO)；7.40-7.20(m,20H,Ph)；6.09和6.06(dd,1H,H2,J=1.5和3.6Hz)；5.25-5.05(m,4H,CH2Ph)；4.80-4.50(m,4H,H6＇+H2＇)；4.20和3.97(d,1H,8aCHa,J=9.6Hz)；3.76和3.55(d,1H,8aCHb,J=9.6Hz)；3.00-2.70(m,6H,H3＇+H1+H5＇)；2.31(s,6H,CH3-N).中间体实施例261-O-(对甲苯磺酰)-2-亚甲基-1,3-丙二醇将2-亚甲基-1,3-丙二醇(480毫克)和二丁基氧化锡(1.7克)溶于甲苯(30毫升)使用Dean-Stark apparatus将所得悬浮液回流1小时除去水。将烧瓶冷却至室温，然后加入N-甲基咪唑(797毫升)和甲苯磺酰氯(1.56克)。搅拌15分钟后，通过柱层析(己烷/乙酸乙酯v/v 7∶1到1∶1)直接纯化。得到白色固体状标题化合物(428毫克)。1H-NMR(δ,CDCl3):7.80(d,2H,J=8.1Hz，芳族)；7.35(d,2H,J=8.1Hz，芳族)；5.30-5.19(m,2H,H-C=)；4.59(s,2H,CH2-OTs)；4.13(s,2H,CH2-OH)；2.45(s,3H,CH3).中间体实施例271-O-(对甲苯磺酰)-2-亚甲基-3-氟-丙醇将中间体26(429毫克)溶于二氯甲烷并将所得溶液冷却至0℃。加入DAST(343微升)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时，通过t.l.c.(己烷/乙酸乙酯v/v 3∶1)监测反应。加入甲醇，通过柱层析(己烷/乙酸乙酯v/v 10∶1到5∶1)直接纯化。得到白色固体状标题化合物(325毫克)。1H-NMR(δ,CDCl3):7.80(d,2H,J=8.1Hz，芳族)；7.36(d,2H,J=8.1Hz，芳族)；5.36-5.30(m,2H,H-C=)；4.81(d,2H,J=46.8Hz,CH2-F)；4.58(s,2H,CH2-OTs)；2.46(s,3H,CH3).中间体实施例28[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸二苯基甲基酯将中间体15(1.38克)溶于二氯甲烷(50毫升)，慢慢加入0.346M的二苯基重氮甲烷的二氯甲烷(50毫升)溶液。将反应混合物在室温下搅拌16小时。在反应粗品中加入1N盐酸(50毫升)，搅拌30分钟后，紫色溶液变成黄色溶液。分出有机层，用硫酸钠干燥，浓缩至干。通过柱层析(首先，己烷/乙酸乙酯v/v 1∶1；然后，二氯甲烷-甲醇v/v 10∶1)纯化残留物，得到标题化合物(1.48克)。1H-NMR(δ,CDCl3):9.71(s,1H,CHO)；7.45-7.25(m,10H，芳族)；6.06(dd,1H,J=1.5和3.6Hz,H2)；4.68(dd,1H,J=2.1和9.3Hz, H2＇)；4.08(d,1H,J=9.0Hz,8aCH2)；4.05-3.95(m,1H,H6＇)；3.73(d,1H,J=9.0Hz,8aCH2)；3.30-3.10(m,2H,H3＇+H5＇)；2.70(t,1H,J=3.9Hz,H1).中间体实施例29[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-6-甲基-4-(2-氟甲基-2-丙烯基)-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸二苯基甲基酯将2N氢氧化钠(1毫升)加入中间体28(299毫克)的四氢呋喃(10毫升)溶液，并将所得溶液在室温下搅拌30分钟。加入中间体27(244毫克)，将反应混合物在40℃搅拌16小时，通过t.l.c.(己烷/丙酮v/v3∶1)监测反应。将反应粗品用二氯甲烷稀释，并加入盐水。分出有机层，用硫酸钠干燥，浓缩至干。通过柱层析(己烷/乙酸乙酯v/v 10∶1)纯化，得到标题化合物(244毫克)。1H-NMR(δ,CDCl3):9.74(s,1H,CHO)；7.45-7.20(m,10H，芳族6.06(dd,1H,J=1.5和3.6Hz,H2)；5.25(s,1H,H-C=)；5.16(s,1H,H-C=)；4.86(d,2H,J=47.4Hz,CH2-F)；4.35(dd,1H,J=2.4和8.7Hz,H2＇)；4.07(d,1H,J=9.3Hz,8aCH2)；3.71(d,1H,J=9.0Hz,8aCH2)；3.68-3.60(m,1H,H6＇)；2.98(s,2H,CH2-N)；2.81-2.58(m,3H,H1+H3＇+H5＇).中间体实施例30[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-烯丙基-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸在三乙胺(0.25毫升)的存在下，将盐酸羟胺(103毫克)实施例2化合物(233毫克)的无水甲苯(5毫升)溶液中。将反应混合物搅拌回流1小时，直到出现白色沉淀。将其浓缩，然后在1N盐酸(15毫升)和二氯甲烷(15毫升)之间分配。将有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩。得到白色沉淀状标题化合物(240毫克)。1H-NMR(δ,ppm,CDCl3):13.25(bs,1H,COOH),7.77(s,1H,HC=N),6.14(m,1H,HC=C),6.04(dd,1H,H-2,J=1.2 and 3.3Hz),5.59 and 5.52(2d,2H,H2C=C,J=10.2和16.8Hz分别地),5.03(m,1H,H-2＇),4.33(m,1H,H-6＇),4.08和3.73(2d,2H,8a-CH2,J=9.0Hz),3.57(m,2H,CH2N),3.37(d,1H,3＇-Ha,J=11.4Hz),3.27(d,1H,5＇-Ha,J=11.4Hz),2.60(t,1H,CH(CH3)2,J=3.9Hz).中间体实施例31[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-6-甲基-4-(1-甲基吡咯-2-基甲基)吗啉-2-基)-氧甲基]-4-(1,3-三氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸将中间体14(100毫克；0.2毫摩尔)和N-甲基-2-吡咯甲醛(39毫克；0.36毫摩尔)在无水乙腈(5毫升)中的混合物在室温下搅拌45分钟。然后，加入gl.乙酸(50微升)，将所得溶液用硼氢化钠(11毫克；0.29毫摩尔)，并在室温下搅拌1.5小时。然后，将反应混合物在乙酸乙酯(10毫升)和水(10毫升)之间分配。分出有机层，用盐水(2×10毫升)洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发。将残留物通过制备薄层层析纯化，用1∶2乙酸乙酯/己烷展开，得到标题化合物(24毫克)。1H-NMR(δ,ppm,CDCl3):6.59(m,1H，吡咯H-5),6.02(m,2H，吡咯H-3和4),5.95(dd,1H,H-2,J=1.5和3.6Hz),4.59(s,1H,OCHO).中间体实施例32[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-6-甲基-4-[(E)-2-丁烯-1-基]-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸将中间体14(200毫克；0.4毫摩尔)，(E)-1-溴-2-丁烯(54毫克；0.4毫摩尔)和固体碳酸氢钠(67毫克；0.8毫摩尔)在无水乙醇(7毫升)中的混合物在70℃搅拌4小时。冷却后除去溶剂，通过制备薄层层析纯化残留物，用5％甲醇二氯甲烷溶液作为洗脱剂，得到标题化合物(137毫克)。1H-NMR(δ,ppm,CDCl3):5.96(dd,1H,H-2,J=1.2 and 3.3Hz),5.61(m,1H，丁烯基),5.47(m,1H，丁烯基),4.62(s,1H,OCH2O),4.41(dd,1H,H-2＇,J=2.4 and 8.4Hz),4.15 to 3.80(m,5H,8a-CH2和OCH2CH2O),3.70(AB体系，1H,8a-CH2),3.64(m,1H,H-6＇),3.02 to 2.60(m,5H,allyl-CH2-N+2×CH-N+H-1).中间体实施例33[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-6-甲基-4-(4-溴苄基)吗啉-2-基)-氧甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸二苯基甲基酯将中间体3(250毫克；0.37毫摩尔)，氰基硼氢化钠(73毫克；1.1毫摩尔)，4-溴苄基胺盐酸盐(206毫克；0.92毫摩尔)和三乙胺(100毫克；0.99毫摩尔)在无水乙腈(12.5毫升)中的混合物在室温下搅拌10分钟。加入冰乙酸(21微升)，将所得溶液在室温下搅拌1.5小时。然后，将反应混合物在乙酸乙酯(10毫升)和水(10毫升)之间分配。分出有机层，用盐水(2×10毫升)洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发。将残留物通过柱层析纯化，用1∶2乙酸乙酯/己烷洗脱，得到标题化合物(165毫克)。1H-NMR(δ,ppm,CDCl3):7.43(m,5H,Ph),7.33(m,7H,Ph+AB体系4-BrBn),7.17(AB体系，2H,4-BrBn),6.93(s,1H,Ph2CH),5.80(dd,1H,H-2,J=1.2 and 3.3Hz),5.06(s,1H,OCHO),4.38(dd,1H,H-2＇,J=2.4和8.7Hz),4.04(AB体系1H,8a-CH2),3.81(m,4H,OCH2CH2O),3.72(AB体系，1H,8a-CH2),3.65(m,1H,H-6＇),3.41(AB体系2H,BnCH2N),2.80(m,1H,CH-N).中间体实施例34[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-6-甲基-4-(2,2,2-三氟乙基)吗啉-2-基)-氧甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸二苯基甲基酯将中间体3(200毫克；0.30毫摩尔)，三氟乙胺(89毫克；0.9毫摩尔)在无水乙腈(5毫升)中的混合物在室温下搅拌10分钟。加入冰乙酸(100微升)和硼氢化钠(35毫克；0.9毫摩尔)，将所得溶液在室温下搅拌3小时。然后，将反应混合物在乙酸乙酯(10毫升)和水(10毫升)之间分配。分出有机层，用盐水(2×10毫升)洗涤，用硫酸镁干燥，蒸发。将残留物通过柱层析纯化，用1∶3乙酸乙酯/己烷洗脱，得到标题化合物(114毫克)。1H-NMR(δ,ppm,CDCl3):7.44(m,4H,Ph),7.33(m,6H,Ph),6.93(s,1H,Ph2CH),5.83(dd,1H,H-2,J=1.2和3.3Hz),5.07(s,1H,OCHO),4.38(dd,1H,H-2＇,J=2.4和8.7Hz),4.05(AB体系，1H,8a-CH2),3.81(m,4H,OCH2CH2O),3.75(AB，体系，1H,8a-CH2),3.65(m,1H,H-6＇),2.95(q,2H,CF3CH2N,J=9.6Hz),2.87(m,1H,CH-N),2.71(m,1H,CH-N).中间体实施例35[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-6-甲基-4-(环丙基甲基)吗啉-2-基)-氧甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸二苯基甲基酯将中间体3(200毫克；0.30毫摩尔)，环丙基甲基胺(64毫克；0.9毫摩尔)在无水乙腈(6毫升)中的混合物在室温下搅拌10分钟。加入冰乙酸(103微升)和硼氢化钠(35毫克；0.9毫摩尔)，将所得溶液在室温下搅拌2小时。然后，将反应混合物在乙酸乙酯(10毫升)和水(10毫升)之间分配。分出有机层，用盐水(2×10毫升)洗涤，用硫酸镁干燥，蒸发。将残留物通过柱层析纯化，用1∶3乙酸乙酯/己烷洗脱，得到标题化合物(46毫克)。1H-NMR(δ,ppm,CDCl3):7.42(m,4H,Ph),7.33(m,6H,Ph),6.94(s,1H,Ph2CH),5.85(dd,1H,H-2,J=1.2和3.3Hz),5.07(s,1H,OCHO),4.43(dd,1H,H-2＇,J=2.4和8.7Hz),4.07(AB体系,1H,8a-CH2),3.81(m,6H,OCH2CH2O+8a-CH2+H-6＇),2.95(m,1H,CHN),2.81(m,1H,CH-N),2.56(m,2H,(CH3)2CH+H-1).中间体实施例36[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-6-甲基-4-(4-氟苄基)吗啉-2-基)-氧甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸二苯基甲基酯将中间体3(40毫克；0.06毫摩尔)，4-氟苄基胺(24毫克；0.15毫摩尔)在无水乙腈(1毫升)中的混合物在室温下搅拌10分钟。加入冰乙酸(5微升)和氰基硼氢化钠(12毫克；0.18毫摩尔)，将所得溶液在室温下搅拌2小时。然后，将反应混合物在乙酸乙酯(10毫升)和水(10毫升)之间分配。分出有机层，用盐水(2×10毫升)洗涤，用硫酸镁干燥，蒸发。将残留物通过柱层析纯化，用1∶2乙酸乙酯/己烷洗脱，得到标题化合物(10毫克)。1H-NMR(δ,ppm,CDCl3):7.44(m,6H,Ph+ABs体系4F-Bn),7.33(m,6H,Ph),7.00(AB体系，2H,4F-Bn),6.93(s,1H,Ph2CH),5.83(dd,1H,H-2,J=1.2和3.3Hz),5.06(s,1H,OCHO),4.38(dd,1H,H-2＇,J=2.4和8.7Hz),4.05(AB体系，1H,8a-CH2),3.81(m,4H,OCH2CH2O),3.73(AB体系，1H,8a-CH2),3.65(m,1H,H-6＇),3.45(br s,2H,BnCH2N),2.80(m,1H,CH-N).中间体实施例37[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-6-甲基-4-(环己烯-3-基)吗啉-2-基)-氧甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸将中间体14(200毫克；0.4毫摩尔)，3-溴环己烯(64毫克；0.8毫摩尔)和固体碳酸氢钠(67毫克；0.8毫摩尔)在无水乙腈(6毫升)中的混合物搅拌回流6小时冷却及除去溶剂后，将残留物通过柱层析纯化，用5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到标题化合物(48毫克)。1H-NMR(δ,ppm,CDCl3):5.95(dd,1H,H-2,J=1.2和3.3Hz),5.81(m,1H,CH=CH),5.60(m,1H,CH=CH),4.61(s,1H,OCHO),4.41(m,1H,H-2＇),4.15 to 3.5(m,7H,OCH2CH2O+2×AB体系，8aCH2+H-6＇),3.2(br s,1H,CH=CH-CH-N),2.75(m,1H,CHN),2.65(m,1H,H-1),2.56(m,1H,CHN).中间体实施例38[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-6-甲基-4-烯丙基吗啉-2-基)-氧甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸二苯基甲基酯将中间体3(250毫克；0.37毫摩尔)，氰基硼氢化钠(73毫克；1.1毫摩尔)，烯丙基胺(52毫克；0.92毫摩尔)和三乙胺(0.14毫升；0.99毫摩尔)在无水乙腈(12.5毫升)中的混合物在室温下搅拌10分钟。加入冰乙酸(21微升)，将所得溶液在室温下搅拌1.5小时。然后，将反应混合物在乙酸乙酯(10毫升)和水(10毫升)之间分配。分出有机层，用盐水(2×10毫升)洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发。将残留物通过柱层析纯化，用1∶2乙酸乙酯/己烷洗脱，得到标题化合物(165毫克)。1H-NMR(δ,ppm,CDCl3):7.26 to 7.46(m,10H,2×Ph),6.94(s,1H,Ph2CH),5.84(m,2H,H-2和1×allyl),5.17(m,2H,allyl),5.06(s,1H,OCHO),4.39(dd,1H,H-2＇,J=2.1和8.7Hz),4.05(AB体系，1H,8a-CH2),3.85 to 3.60(m,6H,OCH2CH2O+AB体系+H-6＇),2.98(m,2H,allylic CH2),2.84(m,1H,CHN),2.67(m,1H,CHN).中间体实施例39[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸二苯基甲基酯在氩气氛下，在30分钟内，将中间体38(1.5克；2.2毫摩尔)在v/v10/1的乙醇/水(20毫升)中的溶液用Wilkinson’s催化剂(0.140克；0.15毫摩尔)和二氮杂双环[2.2.2]辛烷(126毫克；1.1毫摩尔)处理。将该混合物加热回流4小时。然后，将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水(1×20毫升)洗涤，用硫酸钠干燥，将得到的残留物通过柱层析纯化(5％v/v二氯甲烷中的甲醇)，得到标题化合物(1.1克)。1H-NMR(δ,ppm,CDCl3):7.26 to 7.44(m,10H,2×Ph),6.94(s,1H,Ph2CH),5.84(dd,1H,H-2,J=0-9和3.3Hz),5.07(s,1H,OCHO),4.38(dd,1H,H-2＇,J=2.1和8.7Hz),4.05(AB体系，1H,8a-CH2),3.85 to 3.60(m,6H,OCH2CH2O+AB体系+H-6＇),2.97(m,1H,CHN),2.82(m,1H,CHN).中间体实施例40[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-6-甲基-4-(苯甲酰甲基吗啉-2-基)-氧甲基]-4-(1,3-二氧戊环-2-基)-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸二苯基甲基酯在中间体39(105毫克；0.17毫摩尔)的二氯甲烷(5毫升)溶液中加入苯甲酰甲基溴(40毫克；0.20毫摩尔)和三乙胺(61毫克；0.60毫摩尔)。将该反应混合物在室温下搅拌12小时。除去溶剂后，将残留物通过制备薄层层析纯化，用二氯甲烷展开，得到标题化合物。1H-NMR(δ,ppm,CDCl3):7.97(m,2H,PhCO),7.58(m,1H,PhCO),7.48(m,2H,PhCO),7.42(m,4H,Ph),7.33(m,6H,Ph),6.93(s,1H,Ph2CH),5.83(dd,1H,H-2,J=1.2和3.3Hz),5.07(s,1H,OCHO),4.51(dd,1H,H-2＇,J=2.4和8.7Hz),4.07(AB体系，1H,8a-CH2),3.81(m,8H,OCH2CH2O+8a-CH2+COCH2N+H-6＇),2.95(m,1H,CHN),2.81(m,1H,CH-N),2.61(m,1H,(CH3)2CH),2.52(m,1H,H-1).
将中间体4溶于二氯甲烷(5毫升)，并在室温下用三氟乙酸(10％vol)处理。反应结束后(约1小时)，加入10％硫酸钠水溶液(5毫升)，分成两相。将有机层用10％硫酸钠水溶液(5毫升)洗涤，用硫酸钠干燥。除去溶剂，将得到的粗品通过制备薄层层析(硅胶)纯化，用二氯甲烷∶甲醇v∶v 15∶1洗脱。方法B将中间体4(0.25毫摩尔)的乙酸乙酯(7毫升)溶液用氮气清洁5分钟，加入10％钯炭(50-60％w∶w)。在室温及氢气氛(40psi)下，将该悬浮液摇动5小时。过滤催化剂，除去溶剂，将得到的粗品溶于四氢呋喃(10毫升)。在该溶液中加入甲醇(5毫升)和1N乙酸水溶液(5毫升)。搅拌3小时后，加入1N氢氧化钠水溶液中和该溶液，并用乙酸乙酯(10毫升)萃取。将有机层用盐水(1×10毫升)洗涤两次，将水层再用乙酸乙酯(5毫升)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，除去溶剂至干，得到总的粗产物。
按上述方法A由中间体4e(120毫克)制备[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-(2R,6R)-(4-(1,1-二甲基乙基)-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸(57毫克)。1H-NMR(CDCl3,ppm):9.92(s,1H,CHO),6.00(dd,1H,H2,J=1.2和3.3Hz),4.73(dd,1H,H2＇,J=2.1和9Hz),4.0(m,1H,H6＇),3.88(bs,2H,8aCH2),3.03(2bd,2H,H3＇+H5＇,J=12.3Hz),2.63(m,1H,H1),2.33(m,1H,CH(CH3)2).
将所得悬浮液在室温下搅拌3小时，然后在30分钟内加入1N氯化铵(1600毫升)。搅拌1小时后，过滤收集白色沉淀，用水(约1L)洗涤数次。得到21.6克白色粉末状所需被保护的中间体。将滤液在室温下放置24小时，得到另外1.1克所需化合物。将所得白色粉末溶于四氢呋喃(250毫升)，在30分钟内加入1N盐酸(125毫升)。将该溶液在室温搅拌(约3h)，然后在15分钟内加入1N氢氧化钠(150毫升)。将该溶液真空浓缩至原体积的一半(约)，以除去THF，将所得悬浮液用等体积的水稀释。用1N氢氧化钠将pH值调节至pH=11(约)，得到透明溶液，仔细加入1N盐酸直到pH=6.5。过滤收集沉淀出的白色固体，用水洗涤，干燥，得到20.7克白色粉末状标题化合物。
2．常规胶囊药用物质100毫克乳糖200毫克硬脂酸镁2毫克将药用物质与乳糖和硬脂酸镁混合，然后装入合适的胶囊。
3．可嚼口服片剂药用物质100毫克木糖醇 865毫克薄荷香味剂 5毫克天冬甜素10毫克聚乙烯吡咯烷15毫克硬脂酸镁5毫克将药用物质，木糖醇，天冬甜素和聚乙烯吡咯烷酮混合，用水制粒，然后干燥。将该颗粒与薄荷香味剂和硬脂酸镁混合，然后压成片剂。
4．含水口服液药用物质100毫克羟丙基甲基纤维素150毫克丙基羟基苯甲酸钠1毫克甲基羟基苯甲酸钠2毫克柑橘香味剂 10毫克糖精钠 5毫克蔗糖800毫克合适的缓冲剂qs纯净水加至 5毫升将药用物质和所有赋形剂溶于大部分纯净水中，混合。加水至规定体积，混合。可加入合适的缓冲剂使pH值控制在稳定性最好的范围。
5．无水口服悬浮液药用物质100毫克天冬甜素50毫克柚子香味剂 25毫克甘露醇 800毫克胶体二氧化硅 10毫克分馏椰子油加至 5毫升将药用物质和甘露醇通过高强度剪切混合分散于大部分分馏椰子油中。加入其他组分，混合。加入分馏椰子油至规定体积，混合。
6．软膏药用物质 200毫克白色软石蜡9800毫克熔化白色软石蜡，加入药用物质，混合。继续混合直到软膏开始凝固。
7．注射剂药用物质40毫克合适的缓冲剂qs合适的抗氧剂qs合适的螯合剂qs注射用水2毫升将药用物质溶于大部分注射用水。加入合适的缓冲剂使pH值控制在稳定性最好的范围。加入抗氧剂和螯合剂提高注射剂的稳定性。加入注射用水至所需体积。装入安瓿或小瓶，高压灭菌。选择性地，可过滤灭菌及无菌填装。抗真菌活性按标准体外筛选法及测定各化合物控制各种临床相关的病原体的最低抑制浓度(MIC；μg/ml)试验式(Ⅰ)化合物的抗真菌活性。典型的本发明化合物的试验结果列于下表。
本发明化合物在治疗剂量内基本上无毒。例如，对小鼠进行口服系统念珠菌病试验(C.albicans 4711E)时，实施例2化合物的ED50值为9.0毫克/公斤。实施例2化合物对雌性小鼠的LD50值大于300毫克/公斤iv。
实施号MIC’s μg/ml
权利要求
1．式(Ⅰ)化合物及其生理学上可接受的盐或代谢不稳定衍生物， 其中R1表示C1-6的直链或支链烷基，C1-6的直链或支链烷氧基，可被取代的苯氧基，C3-6的直链或支链链烯氧基(可被1或2个卤原子取代)或由可被取代的苯基取代的C1-4的直链或支链烷氧基，C3-8的直链或支链炔基，C3-8的直链或支链链烯基(可由C1-4烷氧基或1或2个卤原子取代)，可被取代的苯基，可被取代的C3-7环烷基，可被取代的C5-7环烯基，由(C1-4烷氧基，C1-4烷硫基或卤素)取代的C2-4的直链或支链烷基，由(C1-4烷氧羰基，芳基烷氧羰基，芳氧羰基，丙二烯基，氰基，可被取代的C3-7环烷基，可被取代的5或6元杂芳基，或1或2个可被取代的苯基)取代的C1-4的直链或支链烷基，或由C1-6烷酰基或可被取代的苯甲酰基取代的甲基；R2选自氢，C1-6的直链或支链烷基，C3-6的直链或支链链烯基，可被取代的苯基或由选自C1-4烷氧基，羟基，酰氧基，烷氧羰基或芳氧羰基的取代基取代的C1-4烷基，以及R3选自甲酰基或氰基。
2．权利要求1的化合物，其中R3为甲酰基。
3．权利要求1或2的化合物，其中R2为甲基。
4．权利要求3的化合物，其中R3为甲酰基以及R1表示C1-6的直链或支链烷基，C1-6的直链或支链烷氧基，可被取代的苯氧基，C3-6的直链或支链链烯氧基或由可被取代的苯基取代的C1-4的直链或支链烷氧基，C3-8的直链或支链炔基，C3-6的直链或支链链烯基(可由C1-4烷氧基或1或2个卤原子取代)，可被取代的苯基，可被取代的C3-7环烷基，可被取代的C5-7环烯基，由(C1-4烷氧基，C1-4烷硫基或卤素)取代的C2-4的直链或支链烷基，由(C1-4烷氧羰基，芳基烷氧羰基，芳氧羰基，氰基，可被取代的C3-7环烷基，可被取代的5或6元杂芳基，或1或2个可被取代的苯基)，或由C1-6烷酰基或可被取代的苯甲酰基取代的C1-4直链或支链烷基。
5．权利要求1到4任何一项的化合物，其中R1选自C1-6烷基，C1-4烷氧基，C3-6链烯氧基(可被卤素取代)，苯基，C3-6环烷基，2,3-二氢茚基，四氢萘基，由C1-2烷氧基取代的C2-4烷基，由C1-2烷硫基取代的C2-4烷基，(由丙二烯基，氰基或烷氧羰基取代的)C1-4烷基，环丙基甲基，呋喃基甲基，吡啶基甲基，N-甲基吡咯基甲基，噻唑基甲基，苯基甲基，二苯基甲基，二氟苯基甲基(其中两个氟原子在2,6,2,4,3,4或3,5位)，三氟甲基苯基甲基，亚甲基二氧基苯基甲基，甲氧基苯基甲基，1-苯基乙基或苯基乙基，C3-6链烯基，C3-6炔基，由C1-4烷氧基取代的C3-6链烯基，由1或2个选自氯，溴或氟的卤原子取代的C3-6链烯基，环己烯-3-基或由乙酰基或苯甲酰基取代的甲基。
6．权利要求1或5任何一项的化合物，其中R1选自甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，1-甲基丙基，3-甲基丁基，烯丙氧基，2-氯烯丙氧基，甲氧基，环丙基，烯丙基，2-氯烯丙基，2-溴烯丙基，2-甲基烯丙基，3,3-二氟烯丙基，2,3-丁二烯基，苯基，乙硫基乙基，甲氧基乙基，苄基，呋喃甲基，2,6-二氟苯基甲基，3,4-二氟苯基甲基，3,5-二氟苯基甲基，3,5-二氟苯基甲基，3,4-亚甲基二氧基苯基甲基，4-甲氧基苯基甲基，1-苯基乙基或2-丙炔基。
7．权利要求1到6任何一项的化合物，其中R1表示2,3-丁二烯基，烯丙基，2-甲基烯丙基，2-氯烯丙基，2-氟烯丙基，2-溴烯丙基，3,3-二氟烯丙基，2-丙炔基，环丙基或对甲氧基苯基甲基。
8．[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-(2-氯烯丙基)-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸，及其生理学上可接受的盐。
9．选自下列的化合物[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-(2-甲基烯丙基)-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸，[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-(对甲氧基苄基)-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸，[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-(2,3-丁二烯基)-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸，及其生理学上可接受的盐。
10．选自下列的化合物[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-环丙基-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸，[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-(2-丙炔基)-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸，[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-(2-溴烯丙基)-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸，[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-2-烯丙基-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸，[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-(3,3-二氟烯丙基)-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸，[1R-(1α,3aβ,4β,4aβ,7β,7aα,8aβ)]8a-[(2R,6R)-(4-(2-氟甲基烯丙基)-6-甲基-吗啉-2-基)-氧甲基]-4-甲酰基-4,4a,5,6,7,7a,8,8a-八氢-7-甲基-3-(1-甲基乙基)-1,4-亚甲基-s-苯并二茚-3a(1H)-羧酸，及其生理学上可接受的盐。
11．式(Ⅰ)化合物的制备方法，其中包括(a)制备其中R1定义如权利要求1,R2为甲基，R3为甲酰基的式1化合物的方法，其中包括使其中R4为氢，羧基保护基或阳离子，R3为CHO的式(Ⅱ)化合物或其被保护的衍生物， 与胺(Ⅲ，其中R1定义如上或其被保护的衍生基团)，或其酸加成盐，R1NH2(Ⅲ)在还原氨化条件下反应；(b)制备其中R2为甲基，R3为CHO的式(Ⅰ)化合物的方法，其中包括式(Ⅴ)化合物烷基化， 其中R3为CHO或定义如上的被保护的醛基，R4为羧基保护基或氢或阳离子；(c)制备其中R1和R2定义如权利要求1,R3为CHO的式(Ⅰ)化合物的方法，其中包括使其中R4为定义如上的羧基保护基，Z为离去基团的粪壳菌醇衍生物(Ⅷ)， 与其中R1和R2定义如上的吗啉醇(Ⅸ)反应；如果需要可将所得化合物进行下列一步或多步处理①除去一个或多个保护基；②将该化合物分离为游离酸或其盐；③将式(Ⅰ)化合物转化为其盐；④将一种式(Ⅰ)化合物转化为另一种式(Ⅰ)化合物。
12．权利要求1到10中任何一项的化合物在治疗中的用途。
13．权利要求1到7中任何一项的化合物在制备治疗或预防真菌或原生动物感染的药物中的应用。
14．含有与一种或多种生理学上可接受的载体或赋形剂混合的权利要求1到10中任何一项的化合物的药物组合物。
15．一种治疗或预防人类或非人类动物体的真菌或原生动物感染疾病的方法，其中包括对上述机体施用有效量的权利要求1到10中任何一项的化合物。
16．式(Ⅴ)化合物，其中R3为醛基或被保护的其衍生物，R4为氢，羧基保护基或阳离子，
全文摘要
吗啉醚(Ⅰ),及其生理学上可接受的盐或代谢不稳定衍生物,其中R
文档编号A61P31/10GK1309651SQ99808514
公开日2001年8月22日 申请日期1999年5月7日 优先权日1998年5月11日
发明者J·M·比诺, J·赤查罗贡扎洛, J·M·科特容, J·C·赛瓦斯, J·M·费安多尔, A·马洛 申请人:葛兰素惠尔康有限公司