乳香提取物在制备维持血管内皮稳态药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及乳香提取物在制备预防和治疗血管内皮稳态失调药物中的应用，属于 医药技术领域。
【背景技术】
[0002] 血管内皮细胞是介于血流和血管壁组织之间的一层单核细胞，可通过分泌、内分 泌、旁分泌三种途径分泌一系列NO，PGI2，ET-I等血管活性物质发挥调节血管紧张性、抗 血栓形成、抑制平滑肌细胞增殖及血管壁炎症反应等功能。血管内皮稳态的破坏与生活环 境及生活方式密切相关。肥胖、吸烟、不良生活习惯及慢性应激均可导致血管内皮受损。内 皮细胞结构和功能的改变是多种心血管疾病的共同病理基础，高血压、冠心病等患者内皮 结构和功能严重受损。目前，修复内皮损伤的主要药物包括钙离子拮抗剂、血管紧张素转换 酶抑制剂和血管紧张素受体阻断剂。遗憾的是，频发的毒副作用限制了他们的应用。在血 管内皮损伤和血管内皮稳态破坏的初期，尚未发生高血压或冠心病等严重器质性病变的情 况下，尚缺乏有效且毒副作用小的治疗药物，因此研发维护血管内皮稳态的新药物是当前 研宄的前沿课题和热点领域。
[0003] 乳香是橄榄科植物乳香树及同属植物的树干切口中渗出的坚硬胶状树脂。在我 国，乳香之名始载于《名医别录》，后《本草拾遗》、《本草纲目》均有记载并沿用至今，认为其 辛散温通，具有活血行气、通经止痛、消肿生肌、追毒之功效。现代药理学研宄显示，乳香的 主要成分有树脂(约含60?70%)，树胶(约含27?35%)，挥发油（约含3?8%)等，主治气血 凝滞、心腹疼痛、痈疮肿毒、跌打损伤、痛经、产后瘀血刺痛，及具有镇痛、抗炎、抗菌、抗肿瘤 等作用。乳香提取物由于其有效成分为水不溶性，目前乳香及其复方临床常用剂型为丸剂、 胶囊剂、片剂、散剂、膏剂等口服或外用制剂，无静脉给药剂型，这使得药物吸收和生物利用 度等大大降低，极大的限制了该药的临床应用。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供乳香提取物在制备维持血管内皮稳态药物中的应用。
[0005] 血管内皮稳态失调为肥胖、长期抽烟、喝酒等不了生活习惯及慢性应激所致的血 管内皮细胞结构破坏和功能失调，包括高血压、高脂血症、动脉粥样硬化、高血糖、缺血再灌 注损伤、血管成形术后再狭窄，以及菌血症、败血症、脓血症和毒血症引起的血管内皮损伤。
[0006] 所述提取物为乳香乙醇提取物，其提取方法参照文献（P. R. SakuntalaDevi，K. Adilaxmammaj G. SrinivisaRaoj ect. Safety Evaluation of AlcoholicExtract of Boswelliaovalifoliolata Stem-bark in Rats, 2012，Toxicol Int. ,19 (2) : 115 -120.)。使用时，将其制备成注射用乳剂、注射水针剂、注射油针剂、注射用粉针剂、注射用微 乳或注射用脂质体。
[0007] 注射剂按重量计，乳香提取物5-40%，表面活性剂10-45%，水介质添至100%，注射 剂中还含有甘油三酯或甘油，助乳化剂脂肪酸、脂肪醇及其钠盐，胆酸、脱氧胆酸及其钠盐， 抗氧化剂生育酚或L-抗坏血酸棕榈酸酯，其中甘油三酯包括植物油或中链甘油三酯，必要 时可添加乙醇增溶。所述表面活性剂选自泊洛沙姆系列、植物磷脂、动物磷脂、合成磷脂、丙 二醇、脂肪酸甘油酯、s〇lut 〇lHS15、labrosol、吐温类、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚乙二醇衍生物 系列、羟丙基β-环糊精、羟丙基γ-环糊精。
[0008] -种较优的配方是，按重量计，乳香提取物10-30%、乙醇1-5%、卵磷脂10-30%、精 制大豆油5-25%、油酸0. 5-6. 5%、生育酚0. 01-1. 0%、注射用生理盐水添至100%。
[0009] 本发明的优点在于：1)本发明属于中药制剂，成分纯天然，毒副作用低；2)本发 明能有效预防和治疗血管内皮损伤；3)本发明能有效延缓进行性心脑血管病变的发展；4) 本发明注射剂生物利用度高。5)本品制备工艺简单，易于规范化生产。
【附图说明】
[0010] 图1为乳香乳剂对大鼠血管内皮的作用。数据显示，模型组可见明显的血管内皮 损伤，乳香乳剂可有效预防和对抗血管内皮损伤； 图2为乳香乳剂对血管内皮释放NO和cGMP的调节作用。数据显示，模型组血浆中NO含 量明显降低，乳香乳剂可有效升高血浆中NO和cGMP含量，数据均表示为mean土SD (n=6), #P〈0. 05 vs 模型组； 图3为乳香乳剂对内皮细胞一氧化氮合酶（eNOS)的作用。数据显示，模型组血管内 皮细胞中磷酸化的eNOS表达显著降低，乳香乳剂可有效增加 eNOS在血管内皮细胞中的表 达； 图4为乳香乳剂对脐静脉内皮细胞（HUVEC)的作用。数据显示，乳香乳剂有效抑制氧 糖剥夺（OGD)诱导的HUVEC死亡，#P〈0. 05 vs氧糖剥夺组。
【具体实施方式】
[0011] 乳香醇提取物乳剂的制备：乳香提取物10-30%、乙醇1-5%、卵磷脂10-30%、精致大 豆油5-25%、油酸0. 5-6. 5%、生育酚0. 01-1. 0%、注射用生理盐水添至100%。
[0012] 上述注射用乳香提取物制备方法为：在10-30%乳香提取物中加入1-5%乙醇、 5-25%精制大豆油、0. 01-1. 0%生育酚和0. 5-6. 5%油酸，并快速搅拌制成油相；将10-30%卵 磷脂与注射用生理盐水配制成水相，油水两相混合，高速搅拌制成初乳；加之注射用生理盐 水至100%，调节pH至5. 0-7. 0,至高压乳匀机中，反复乳化至乳滴平均粒径彡0. 5 μ m ;取上 述乳剂过滤后，充氮气灌装，灭菌即得。
[0013] 本发明乳香提取物可用于防治血液高凝状态，并采用以下方法进行验证乳香乳 剂改善血瘀证大鼠高凝状态，保护血管内皮，调节血管活性的作用：雄性SD大鼠，体重 220-280g，，乳香乳剂静脉注射（3各剂量水平200,100,50 mg/kg)，给药3天后，皮下注射 盐酸肾上腺素〇.8mgl/kg，间隔4 h再注射一次。首次注射盐酸肾上腺索后2h后，进行1次 寒冷刺激，将大鼠在冰水浴中（〇-2°C)浸泡5 min，从而造成大鼠急性血瘀证模型。最后一 次给药30分钟内，用3. 5%水合氯醛麻醉，经腹主动脉取血2ml，以3. 8%的枸橼酸钠抗凝， 2500r/min离心15min，取血衆测定凝血酶原时间（PT)、活化部分凝血酶时间（APTT)、凝血 酶时间（TT)、纤维蛋白原（FIB)、NO和cGMP的含量。取颈动脉，置于10%福尔马林液中固 定，石蜡包埋，切片，行苏木素-伊红（HE)染色。
[0014] 本发明乳香提取物可用于防治血管内皮损伤，并采用以下方法进行验证乳香乳剂 保护血管内皮的作用：脐静脉内皮细胞HUVEC培养至70-80%，弃去细胞培养液，用PBS清洗 3次，更换培养液为PBS，然后放入含95 %N2+5 % 〇)2的37°0孵箱中120 min，氧糖剥夺后， 更换PBS为DMEM (10%FBS)培养液，放入37°C，5%C02孵箱，24 h后检测HUVEC的存活率。
[0015] 实施例1 取乳香提取物200mg，加入无水乙醇100 μ 1，精致大豆油200mg，油酸80mg，生育酷lmg， 于50°C下高速搅拌使其溶解均匀，制成油相；卵磷脂200mg溶于适量注射用生理盐水中， 于50°C下高速搅拌使其溶解均匀制成水相；油水两相混合于60°C高速搅拌制成初乳；加 之注射用生理盐水至2mL，调节pH至5. 0-7. 0,至高压乳匀机中，反复乳化至乳滴平均粒径 < 0. 5 μm。取上述乳剂过滤后，充氮气灌装，灭菌即得。
[0016] 实施例2 将上述乳香乳剂置于室温、高温和光照，分别考察〇天，5天和10天的性状、pH值、不溶 性微粒和可见异物。结果见表1 :制剂稳定