H自由基清除作用的测试
[0041]实验原理:DPPH甲醇溶液为紫罗兰色，在517nm下有强的吸光值，若与样品结合，会降低吸光值，由此借以判断样品清除自由基的能力。
[0042]实验方法
[0043]实验组:分别取0.1mL, 0.2mL，0.5mL，ImL实施例2所得松露有效组分溶液样品于试管中，用蒸馏水补足到lmL，加入4mLDPPH甲醇溶液，混匀，暗处放置30min，不断震荡，测定517nm处的吸光值。
[0044]空白组:在各个试管中分别取同实验组同等体积的样品溶液，用蒸馏水补足到lmL，加入4mL的甲醇溶液。混匀后暗处放置30min，测定517nm处吸光值。
[0045]对照组:lmL蒸馏水加入4mLDPPH甲醇溶液。混匀后暗处放置30min，测定517nm处的吸光值。
[0046]实验结果:DPPH抑制率(％ ) = (Α0-ΑI+A2)/A0*100%
[0047]其中AO为对照组的吸光值，Al为实验组的吸光值，A2为对应空白组的吸光值。
[0048]结果见图2 ;实施例2所得松露有效组分可以有效清除DPPH自由基，且随着浓度的升高，对于DPPH自由基的清除率也明显升高，表现出很好的浓度依赖关系。
[0049]3、松露有效组分对超氧阴离子的清除作用测试
[0050]实验原理:邻苯三酚在弱碱性环境中自身氧化分解产生超氧阴离子，随着反应的进行，超氧阴离子在体系中不断积累，导致反应液在420nm处的吸光度在反应开始一段时间内会随着时间的变化而线性增大，因此测定在该段时间内被测物反应液的吸光度随时间的变化率，并与空白液比较便可得出被测物抑制超氧阴离子的能力。
[0051]实验方法
[0052]实验组:取5.6mLTris HCl 缓冲液，分别加入 0.1mL,0.2mL、0.3mL、0.4mL 的待测样品，用蒸馏水补足到0.4mL，放入25°C水浴锅中水浴lOmin，然后加入25°C预温的邻苯三酚(如果室温高于25°C可以在室温下操作)，充分混匀，从加入邻苯三酚后开始准确计时3min，而后加入5%抗坏血酸(Vc) 0.05mL终止反应。1min钟后在420nm处测定其吸光度值。
[0053]对照组:取5.6mL的Tris HCl缓冲液，分别加入同实验组相同体积的待测样品，用蒸馏水补足到0.4mL，加入12mmol/LHCl，充分混匀，从加入HCl开始准确计时3min，加入5%抗坏血酸终止反应。1min钟后在420nm处测定其吸光度值。
[0054]空白组:取5.6mL 50mmol/L Tris-HCl缓冲液，加入0.4mL蒸馏水，此后操作同实验组。
[0055]实验结果:E= [(A0-A1+A2)/A0]*100%
[0056]AO为空白吸光度值，Al为实验组吸光度值，A2为对照组吸光度值。
[0057]结果见图3 ;待测样品实施例3所得松露有效组分表现出一定的清除超氧阴离子的作用。
[0058]二、美白测试
[0059]1、松露有效组分对酪氨酸酶的抑制作用
[0060]实验原理:酪氨酸酶的二酚酶活性可以直接催化底物多巴生成多巴醌，然后经过一系列的反应最终生成黑色素。黑色素物质的生成量多少与酶的活力成正比。所以，通过测定体系中的黑色素的生成量多少来反映酶活力的大小。
[0061]分别取待测液0.1mL,0.2mL、0.5mL及lmL，用蒸馏水补足到lmL，加入3mL L-酪氨酸溶液37°C保温15min，加入酪氨酸酶溶液0.1mL,于37°C反应25min，470nm下测定其吸光度值。
[0062]实验结果:酪氨酸酶抑制率) = (Α0-ΑI+A2)/A0*100%
[0063]其中，AO为用蒸馏水替代样品和酪氨酸酶的吸光度之;A1为实验组吸光度值;A2为蒸馏水替代样品的吸光度值。
[0064]实验结果表明，实施例1所得松露有效组分表现出优于熊果苷(0.1% )的酪氨酸酶抑制活性，熊果苷为公认具有美白活性的化学物质，而酪氨酸酶是黑色素生成过程中的关键酶；也明显优于对比例所得松露有效组分的美白活性。
[0065]最后应说明的是，以上实施例仅用以说明而非限制本发明的技术方案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域技术人员应当理解，依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。
【主权项】
1.一种松露有效组分，其特征在于，其制备方法包括以下步骤: a、取松露，用质量浓度为50%?95%乙醇水溶液进行提取，得提取液； b、将所述提取液过滤，浓缩，即得松露有效组分。
2.根据权利要求1所述的松露有效组分，其特征在于，所述步骤a中松露选自白松露或黑松露中的一种。
3.根据权利要求1所述的松露有效组分，其特征在于，所述步骤a中在提取时先用超声提取，再回流提取。
4.根据权利要求3所述的松露有效组分，其特征在于，所述回流提取的时间为I?5小时，回流提取的次数为I?5次。
5.一种基于权利要求1-4任一项所述的松露有效组分的在制备抗氧化剂中的用途。
6.一种基于权利要求1-4任一项所述的松露有效组分的在抑制酪氨酸酶活性的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述松露有效组分在制备抑制黑色素物质生成的美白祛斑化妆品的应用。
8.—种组合物，其特征在于，该组合物含有权利要求1-4任一项所述的松露有效组分。
【专利摘要】本发明涉及一种松露有效组分的制备方法与用途，属于中药有效组分提取领域。它的制备过程包括以下步骤：a、取松露，用质量浓度为50％～95％乙醇水溶液进行提取，得提取液；b、将所述提取液过滤，浓缩，即得松露有效组分。本发明的优点是：利用合理的提取、富集的方法，得到具有抗氧化和美白作用，可用于制备抗氧化产品和美白产品的松露有效组分。
【IPC分类】A61K36-062, A61K8-99, A23L1-28, A61Q19-02, A61P39-06, A23L1-29, A61Q19-08
【公开号】CN104666237
【申请号】CN201510076303
【发明人】黄晓东, 黄灿, 陶宇
【申请人】广州悦目生物科技有限公司
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2015年2月12日