一种放射性核素标记的特异性前哨淋巴结显像剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物制药领域，具体地，涉及一种放射性核素标记的特异性前哨淋巴结显像剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002]手术是治疗乳腺癌的主要手段，由于腋窝淋巴结状态是影响乳腺癌病人生存的重要的独立性预后因子，临床上常用腋窝淋巴结清扫作为腋窝淋巴结状态诊断和治疗的一种手段，而单纯乳腺切除加腋窝淋巴结清扫(axillary lymph node dissect1n, ALND)是最常用的手术方式。随着乳腺癌的筛查和早期诊断，新发现的乳腺癌患者中50%?70%术后病理腋淋巴结阴性，对该部分患者施行ALND属于过度治疗；因此对所有乳腺癌患者均进行ALND的合理性受到质疑，迫切期待能够替代ALND的准确、微创的腋窝分期技术一乳腺癌前哨淋巴结活检(sentinel lymph node b1psy，SLNB)。SLN是乳腺癌淋巴转移的第一个淋巴结，可获得95%的诊断意义，并发症少。
[0003]SLNB由于能够提供较为准确的分期、减少传统手术并发症而成为研宄的热点之一，也是有望成为乳腺癌治疗的规范化手术式之一。在众多研宄中，选取的放射性示踪剂几乎都是依靠淋巴结吞噬作用进行探测的放射性胶体("mTc-硫胶体或99mTc-人血清白蛋白等)，其颗粒大小不均，次级淋巴系统有显影，每次注入示踪剂颗粒总数不易控制，且显像及活检时间要求高，否则均可导致非SLN显影，导致SLNB失败。2013年3月美国药监局首次批准用于淋巴结定位的新药Lymphoseek。它能够与淋巴网状内皮细胞表面甘露糖受体(mannose receptor, CD206)特异性结合，精确检测原发肿瘤(乳腺癌、黑色素瘤)向淋巴转移情况。面对国外公司专利、技术保护的前提下，亟需发展新型特异性的淋巴结定位显像剂，以应对国内临床需求。
[0004]申请人前期通过2-氨基噻吩的方法，制备出99mTc-1T-Ri tuximab，并进行了该单抗在乳腺癌前哨淋巴结显像中的临床应用研宄，研宄内容见参考文献(李囡，林保和，欧阳涛，等.99mTc-美罗华进行原发性乳腺癌前哨淋巴结活检。中华医学影像技术，2009，25 (4): 681-684.李囡，林保和，欧阳涛，等.467例乳腺癌患者99mTc-美罗华前哨淋巴结显像及活检结果分析。中华核医学杂志，2009，29 (I):3-7)，该探针只能现制现用，不适合保存。申请人通过进一步研宄，制备出相应的药盒(李艳，李囡，杨志等.特异性前哨淋巴结显像剂99mTc-rituximab药盒的制备及生物评价。同位素，2011，SI (24):85-89)。但这种药盒的稳定性相对较差，且在药盒中没有惰性气体的保护。在常温条件下保存时间不超过3天，在-20度条件下的保留时间一般不能超过三个月。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种使用方便、性能稳定、可操作性强的放射性核素标记的特异性前哨淋巴结显像剂。
[0006]本发明的再一个目的在于提供一种稳定性好的特异性前哨淋巴结显像药物的制备及药盒化的方法。
[0007]本发明首先提供一种特异性前哨淋巴结显像剂前体，是以双功能螯合剂HYNIC或2-1T或巯基乙醇为偶联基团对美罗华单抗进行化学修饰，获得可用于放射性标记的SLN-F单抗前体。
[0008]优选地，本发明提供的特异性前哨淋巴结显像剂前体是以双功能螯合剂HYNIC为偶联基团对美罗华单抗进行化学修饰获得的。
[0009]具体地，本发明提供的特异性前哨淋巴结显像剂前体通过以下方法制备得到:按照美罗华单抗与HYNIC双功能螯合剂或2-1T或巯基乙醇物质的量比1:2?50混合，在4?25°C条件下，避光反应15?40min ;反应完成后以Η)_10柱分离、纯化、收集。
[0010]优选地，美罗华单抗与HYNIC双功能螯合剂摩尔比1:3混合，在4°C条件下，避光反应30min。
[0011]本发明提供了含有上述特异性前哨淋巴结显像剂前体的药盒。
[0012]具体地，该药盒通过以下方法制备得到:
[0013](I)在无菌条件下，按照显像剂前体与赋形剂的质量比1:10?40向其中加入赋形剂，于l-100Pa，-100?-50°C条件下冷冻干燥10?30h ；
[0014](2)充入惰性气体至标准大气压；
[0015](3)无菌条件下，(-20°C包装即得SLN-F药盒。
[0016]所述赋形剂为尿素、蔗糖、果糖、甘露糖、葡萄糖中的一种或者多种；所述惰性气体为氦气、氩气、氪气或氮气。还可以加入稳定剂，所述稳定剂为人血白蛋白、维生素C、IgG。
[0017]进一步，本发明提供了一种放射性核素标记的特异性前哨淋巴结显像剂，含有对上述特异性前哨淋巴结显像剂前体进行放射性核素标记的分子探针。
[0018]所述分子探针通过如下方法制备得到:取出SLN-F药盒一支，向其中加入0.2-2.0ml的PBS缓冲液，而后向其中加入500_5000eq摩尔当量的trieine溶液，及500-5000eq摩尔当量的EDDA溶液，而后向其中直接加入0.5-1.5mL (185_740MBq)的99mTcCV溶液，最后向其中加入10-20 μ L lmg/mL的氯化亚锡0.1M高纯盐酸溶液。于室温条件下反应10-45min。以Rad1-HPLC/Rad1_TLC分析。但标记率小于95%时，需要PD-10柱分离，即得到可用于前哨淋巴结显像99mTc-SLN-F分子探针。
[0019]本发明还提供了上述特异性前哨淋巴结显像剂在制备乳腺癌检测试剂盒中的应用。
[0020]本发明提供的特异性前哨淋巴结显像剂具有以下优点:选择性使用HYNIC，EDDA体系作为美罗华标记Tc-99m的螯合剂，由于HYNIC偶联的蛋白在进行冷冻干燥后，能够在室温下有较长的稳定性。且药盒中以惰性气体保护，进一步隔绝了空气中含有的氧气与水对蛋白的氧化作用。药盒在室温条件下可以保存3个月，而在-20度条件下保存期可达12个月，对该显像剂前体进行99mTc放射性核素标记，得到特异性前哨淋巴结显像剂药物99mTc-SLN-F,标记率达到95%以上。本发明制得的显像剂可以精确定位特异性前哨淋巴结，显像及活检时间不受限，从注射后30min-24h都能很好显影，另外在次级淋巴结摄取低、注射点滞留低，本发明的显像剂在乳腺癌的治疗和诊断方面具有良好的应用前景。特异性前哨淋巴结显像剂99mTc-SLN-F放化纯度大于95%，使用方便、性能稳定，具有更好的安全性，同时成本低，具有较好的临床应用前景。
【附图说明】
[0021]图1为SLN-F药盒的Rad1-HPLC分析。图1A放射性检测器ADCl中没有任何放射化学物质存在。图1B相应的VWD 280nm处的保留时间Rt = 6.19min.
[0022]图2为99niTc-SLN-F前哨淋巴结特异性分子探针的Rad1-HPLC分析，其中图2A中放射性检测器ADCl的保留时间为6.69min，且仅有一个放射性峰，代表其放化产率大于99%，图2B为相应的VWD 280nm处的保留时间Rt = 6.39min。
[0023]图3为99niTc-SLN-F显像剂在裸鼠的前哨淋巴结不同时间的SPECT显像图。
【具体实施方式】
[0024]以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
[0025]若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领