44] 对照组2 :蝮蛇胎蛇粉，乌梢胎蛇粉，赤链胎蛇粉混合，也就是只含3种蛇粉。
[0145] (I)D-半乳糖致衰模型测评：
[0146] D-半乳糖衰老小鼠模型是本领域常用的测评抗衰老药物的模型，已经多有公开， 其评价效果稳定。本发明在测评复方胎蛇粉胶囊的抗衰老益智效果时，充分借鉴了这一模 型的评判标准。
[0147] D-半乳糖致衰老模型是国内外众多学者研宄后提出的一种早衰老年动物模型， 其各项指标均已具备老年小鼠的特征，以往的实验也充分证明了它是稳定可靠的衰老模 型。目前，D-半乳糖已广泛用于复制脑老化，白内障等实验动物模型：长期大量注射D-半 乳糖状态下，体内产生大量超氧阴离子自由基，对组织产生过氧化损害，免疫功能低下， 基因表达与调控异常，细胞生长繁殖能力下降，细胞发生退行性病变，动物的学习记忆行 为受到明显损害，具有类似衰老的学习记忆障碍特征，这些生化和组织结构的改变与自然 衰老表现基本吻合。
[0148] 所以本发明选择D-半乳糖复制衰老小鼠模型，此模型制作方法简便，衰老特征明 显，实验费用较低，是目前国内外常用的衰老模型之一，它在研宄衰老机制和抗衰老药物 作用机理中应用非常广泛。
[0149] 越来越多的证据表明，衰老及由衰老引起的神经退行性疾病可导致学习认知能 力特别是空间-记忆能力的减退。目前，从整体水平研宄动物学习和记忆能力的实验模型 有很多，跳台实验是其中的一种常用的方法，该方法的优点是简便易行，一次可同时试验 5只动物，既可观察药物对记忆过程的影响，也可观察对学习的影响，有较高的敏感性， 可以测试小鼠学习记忆能力的获得和保持情况。训练期通电小鼠在不断的被电击的过程中 获得记忆，测试时根据小鼠第一次跳下平台的时间和5min内跳下平台的次数判断其记忆 保持能力.避暗实验是最为常用的动物学习记忆实验方法，是利用鼠类嗜暗习性而设计， 属于被动回避性条件反射。小鼠受到电击后立即逃避到安全部位，在5min内经多次电击， 小鼠形成记忆，记录24h后测验时5min内小鼠受到电击的次数（错误次数）以及首次犯 错误的时间（逃避潜伏期）来反映小鼠记忆的巩固和再现能力。因此，本发明选用跳台实 验和避暗实验来观察复方胎蛇粉胶囊对D-半乳糖致衰老小鼠被动学习记忆能力的影响。
[0150] 研宄表明，学习记忆能力与胆碱能神经系统密切相关，乙酞胆碱（Ach)是此系统 重要的神经传导介质，它由胆碱乙酞转移酶（CAT)催化合成，释放后作用于M受体，之后 被乙酞胆碱酯酶催化分解，由囊泡运输到突出前膜，释放到突出间隙，作用于突触后膜上 的受体发挥生物学效应。研宄表明，老年痴呆症患者脑组织中，胆碱乙酞转移酶活性明显 减低，而乙酞胆碱酯酶活性却明显升高，造成脑内乙酞胆碱含量不足，导致中枢神经系统 功能障碍，造成学习-记忆能力减退，学习记忆，认知能力的迅速减退，是脑衰老的主要 临床表现。研宄表明，D-半乳糖模型小鼠脑组织乙酞胆碱酯酶（AChE)活性明显升高，单 胺氧化酶活性明显下降，胆碱能系统与学习记忆关系密切，乙酞胆碱（Ach)为促进学习记 忆的神经递质，而乙酞胆碱酯酶是降解乙酞胆碱的酶，乙酞胆碱酯酶活性升高，间接说明 胆碱能功能衰退，故D-半乳糖致衰老小鼠脑组织乙酞胆碱酯酶活性升高提示其中枢胆碱 能功能发生障碍，从而使其学习能力下降。生化实验结果发现D-半乳糖衰老小鼠脑组织 内乙酞胆碱酯酶活性明显升高，本发明观察到一定剂量下的复方胎蛇粉胶囊能显著降低 乙酞胆碱酯酶的活性，提示其对胆碱能系统有一定的保护作用，其增强D-半乳糖致衰老 模型小鼠学习记忆的作用机制可能与抑制胆碱酷酶活性，减少乙酞胆碱分解有关。
[0151] 采用跳台法实验检测小鼠被动学习记忆能力，实验装置是10cmxl0cmx30cm的小 鼠跳台反应箱，测试箱由5个小房间构成，一次可同时试验5只动物，箱底是可通36V 连续电刺激的铜栅，每间右后角置一直径和高均为4. SCm的橡皮垫，作为小鼠回避电击的 安全区"实验时先将小鼠置于跳台仪中，适应环境3min，打开电源，设定时间5min，电压 36V，打开测试箱电源使底面铜栅通电，按跳台测试仪"启/停"键开始实验，跳台测试仪 即开始记录5分钟内动物跳下橡皮台的次数作为训练期错误次数，为学习成绩。24h后将 小鼠置于跳台仪中适应3min，再将其置于橡皮垫上，底部铜栅通电，此时测试仪记录小鼠 第一次跳下平台的时间即潜伏期和5min内的跳下橡皮台的次数即测试期错误次数，作为 记忆保持成绩。
[0152] 避暗箱是利用鼠类嗜暗习性而设计，这个箱体有明暗两间隔间，用一个手动操作 门插入隔开，当动物进入黑暗隔间时，地板格将产生电流，小鼠受到电击后立即逃避到安 全的明部位，在5min内经多次电击，小鼠形成记忆，记录24h后测验时5min内小鼠受到 电击的次数（错误次数）以及首次犯错误的时间（逃避潜伏期）来反映小鼠记忆的巩固和 再现能力。避暗实验训练前将小鼠头背着洞口放入明室，先适应环境3min，然后给暗室铜 栅通以36V电流，小鼠一进入暗室即受电击，其正确反应是回到明室，铜栅通电持续5min， 此为训练过程。24h后对小鼠进行记忆测验，记录小鼠第一次进入暗室的时间，此为避暗 潜伏期，并记录s/min内小鼠进入暗室的次数（即避暗错误次数），s/min内未进入暗室的 小鼠其潜伏期按300s计算。
[0153] 跳台和避暗实验结束后，禁食24h，应用乙醚将动物深度麻醉，在并带上快速剥 离小鼠大脑，用0.9%冰冷生理盐水冲洗表面血渍，称重。用冰冷生理盐水制成10%的脑 匀浆，低温离心（4000rpm)离心15min后，取上清液进行测定。乙酞胆碱酯酶的测定按照 本领域常规方法测定。
[0154] 数据表示均用均值士标准差（mean 士 S.D.)，采用SPSS12.0进行数据分析，各指 标采用单因素方差分析及t检验.
[0155] 将D-半乳糖致衰老模型小鼠分为7组，每组20只，治疗1-5组分别给予本发明实 施例1-5的复方胎蛇粉处理（悬浮液灌胃），每日一剂，每次0. 5克。对照组1-2组分别给 予本发明对照组1-2的复方胎蛇粉治疗，每日一剂，每次0. 5克。对照组3只灌胃生理盐水。
[0156] 两组均为15天为一疗程。服用3个疗程后进行实验。
[0157] 用跳台法检测各组小鼠学习记忆能力，结果显示：在第1天学习训练中，对照组 小鼠反应时间比治疗组明显增长，错误次数比空白对照组明显增加。在第二天记忆训练 中，各个治疗组组的潜伏期与对照组组相比明显延长，结果如表1所示。
[0158] 表1 D-半乳糖致衰老小鼠跳台实验的影响
【主权项】
1. 一种复方胎蛇粉，由以下重量份数原料组成： 複蛇胎蛇粉：30-40份， 乌梢胎蛇粉：15-20份， 赤链胎蛇粉：50-65份， 壳聚糖：5-10份 黄芪：10-15份， 生姜：5-10份， 半枝莲：5-10份， 冬瓜皮：5-8份， 佛手：3_5份， 党参：2-3份， 益母草：6-9份。
2. -种复方胎蛇粉片剂，其特征在于其包含权利要求1所述的粉剂。
3. -种复方胎蛇粉胶囊，其特征在于其包含权利要求1所述的粉剂。
4. 权利要求1所述的复方胎蛇粉胶囊的制备方法，其特征在于其步骤如下： (1) 将蝮蛇胎蛇、乌梢蛇胎蛇、赤链蛇胎蛇经零下25-40度急冻2-5小时； (2) 进入真空冷冻干燥设备中，在温度为零下30-40度下预冻6小时；停止冷冻，开始 抽真空，加热隔板温度至40~50度，冷冻干燥18小时以上；每小时观察记录压力数据，真空 室压力降至维持20~30pa，冷冻干燥结束，水分控制在3%以内，将蝮蛇胎蛇、乌梢蛇胎蛇、 赤链蛇胎蛇一起放入粉碎机中粉碎，过250-400目筛，得到药末A; (3) 取上述重量份的黄芪，生姜，半枝莲，冬瓜皮，佛手，党参，益母草浸入600份水中 煎煮3小时，滤液后药渣加入300份水煎30分钟，滤液弃渣，将两次滤液合并煎熬，浓缩至 稠膏后烘干粉碎过筛至300-400目细粉，得药末B; ⑷将粉碎药末A和药末B，以及壳聚糖按照比例混勾，进行辐射灭菌，然后进行胶囊填 充和外包装。
【专利摘要】本发明公开了一种复方胎蛇粉组合物及其制备方法，所得的复方胎蛇粉具有非常好的提高免疫力，抗衰老，改善记忆的效果，能治疗强直性脊椎炎,还对肠胃癌的治疗和症状缓解有显著效果。所述复方胎蛇粉，由以下重量份数原料组成：蝮蛇胎蛇粉：30-40份，乌梢胎蛇粉：15-20份，赤链胎蛇粉：50-65份，壳聚糖：5-10份，黄芪：10-15份 ，生姜：5-10份，半枝莲：5-10份，冬瓜皮：5-8份，佛手：3-5份，党参：2-3份，益母草：6-9份。
【IPC分类】A61K31-722, A61P17-00, A61K35-583, A61K36-9068, A61P19-00, A61P35-00, A61P39-06, A61P37-04
【公开号】CN104758883
【申请号】CN201510121706
【发明人】杨芳, 杨洪昌, 甘凯旋
【申请人】德清县莫干山蛇类实业有限公司
【公开日】2015年7月8日
【申请日】2015年3月19日