驱虫斑鸠菊酚酸部位的制备方法及抗炎用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种驱虫斑鸠菊酚酸部位制备方法，以及抗炎的药物或保健品中的用 途，属于民族医药技术领域。
【背景技术】
[0002] 驱虫斑鸠菊，Vernonia anthelmintica (L. )Willd，别名印度山茴香，是菊科 (Asteraceae)斑鸠菊属（Vernonia) -年生高大草本，药用部位为成熟的果实，秋季采收、 晾干。其性三级干热，功效主要是清除异常粘液质、驱虫、消肿、散寒止痛，是历代传统维吾 尔医治疗白癜风的主要经典药物。
[0003] 驱虫斑鸠菊果实中含有倍半萜内酯类、黄酮类、括环氧十八碳烯酸及其甘油酯类、 三萜类和留醇类和咖啡酰基奎宁酸类等多种化合物。已有报道驱虫斑鸠菊总提取物能够抑 制免疫反应，但是驱虫斑鸠菊具有抗炎活性的部位未见报道。
[0004] 驱虫斑鸠菊在民间用药历史悠久，有着长期稳定的临床应用，因此其开发应用前 景广阔。维吾尔医药理论中，驱虫斑鸠菊性三级干热，功效主要是清除异常粘液质、驱虫、消 月中、散寒止痛。驱虫斑鸠菊种子为主药的上市药品和制剂有驱虫斑鸠菊注射液、卡力孜然蜜 膏、复方驱虫斑鸠菊丸、复方卡力孜然酊、复方卡力孜然片、驱白巴布斯片等。
[0005] 脂多糖（LPS)是革兰氏阴性菌细胞壁的组成成分，是常见的生物性致炎因子，可 引起发热、微循环障碍、内毒素休克及播散性血管内凝血等。在LPS刺激下，巨噬细胞通过 NF κ B信号通路被激活，并释放炎症介质NO (-氧化氮）和PGs (前列腺素），分泌IL-1、 IL-6、TNF-a等淋巴因子以及趋化因子。环氧合酶-2(C0X-2)是前列腺素合成步骤中的关 键限速酶，与炎症反应有密切关系。NO是体内重要的免疫炎性介质。NO主要由一氧化氮 合酶（NOS)催化生成。NOS主要有三个亚型：神经型NOS (nNOS)、内皮型NOS (eNOS)、诱导型 NOS (iNOS)。其中nNOS和eNOS又称为结构型NOS (cNOS)，而iNOS则在损伤或刺激后诱导表 达。
[0006] 通过对细菌脂多糖（LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264. 7炎症反应的抑制试验，观察 到驱虫斑鸠菊酚酸部位具有抑制炎症因子IL-6、TNF-a、IL-I和炎症介质NO产生的作用； 并降低炎症信号通路中的关键酶C0X-2的表达水平，以及NF κ B信号通路中NF κ B的磷酸 化水平，可见驱虫斑鸠菊酚酸部位具有良好的抗炎活性。
【发明内容】
[0007] 本发明目的在于，提供一种驱虫斑鸠菊酚酸部位的制备方法及抗炎用途，该方法 是将干燥的驱虫斑鸠菊果实粉碎，采用有机溶剂提取，树脂分离纯化获得驱虫斑鸠菊提取 物，主要成分为咖啡酰基奎宁酸、二咖啡酰基奎宁酸等酚酸类化合物。测定酚酸含量的质量 百分比20% -99%。驱虫斑鸠菊酚酸部位中主要活性成分3, 4-二咖啡酰基奎宁酸、3, 5-二 咖啡酰基奎宁酸、4, 5-二咖啡酰基奎宁酸的含量分别为3-26%、5-34%、5-40%。经初步实 验证明：通过本发明所述的方法获得的驱虫斑鸠菊酚酸部位可通过抑制诱导型一氧化氮合 酶（iNOS)的蛋白表达，降低一氧化氮合酶（NOS)活性，从而减少炎性介质NO的释放。此 外，驱虫斑鸠菊酚酸部位还具有抑制炎症因子IL-6、TNF-a、IL-I合成释放的作用，同时可 以抑制环氧酶2 (C0X-2)的过量表达，以及NFk Β(核因子κΒ)的磷酸化。驱虫斑鸠菊酚酸 部位具有具有良好的抗炎活性，可作为抗炎药物先导化合物用于预防或治疗由N0、TNF_a、 IL-6或IL-I过量而导致的炎症。
[0008] 本发明所述的一种驱虫斑鸠菊酚酸部位的制备方法，按下列步骤进行：
[0009] a.将干燥的驱虫斑鸠菊果实粉碎后，用浓度为0-95%甲醇、乙醇或水溶液，室 温-95°C提取1-5次，提取时间0. 5-3小时，冷却至室温，过滤，合并提取液，减压浓缩至无醇 味，得到醇提物，驱虫斑鸠菊果实与甲醇或乙醇水溶液的固液比为1:3-30 ;
[0010] b.将步骤a得到的提取物用浓度为0-15%甲醇、乙醇或水溶液溶解分散后，过滤， 再用树脂分离，先用水洗去杂质，再用浓度为10-95%甲醇或乙醇洗脱，收集甲醇或乙醇洗 脱液，减压浓缩除尽溶剂，干燥，即得到含有3, 5-二咖啡酰基奎宁酸、4, 5-二咖啡酰基奎宁 酸和3, 4-二咖啡酰基奎宁酸的驱虫斑鸠菊酚酸部位。
[0011] 步骤 b 中所述的树脂为 DM-130、AB-8、HPD-450、NKA-9、HPD-100、D101、HPD-400、 HPD-500、HPD-600、HPD-300、HPD-417、聚酰胺或十八烷基硅烷键合硅胶。
[0012] 所述方法获得的驱虫斑鸠菊酚酸部位中含有酚酸类化合物为质量百分比 20% -99%。
[0013] 所述方法获得的驱虫斑鸠菊酚酸部位中主要活性成分3, 4-二咖啡酰基奎宁酸、 3, 5-二咖啡酰基奎宁酸和4, 5-二咖啡酰基奎宁酸的含量分别为3-26%、5-34 %和5-40%。
[0014] 所述方法获得的驱虫斑鸠菊酚酸部位作为原料或辅助剂在制备治疗抗炎药物中 的用途。
[0015] 所述抗炎是由于巨噬细胞释放过量炎症细胞因子包括白介素 6、白介素 1和肿瘤 坏死因子α或炎症介质为巨噬细胞释放的一氧化碳而导致的炎症。
[0016] 所述方法获得的驱虫斑鸠菊酚酸部位在制备抗炎保健品中的用途。
【附图说明】
[0017] 图1为本发明驱虫斑鸠菊酚酸部位抑制LPS刺激RAW264. 7巨噬细胞表达iNOS ;
[0018] 图2为本发明驱虫斑鸠菊酚酸部位抑制LPS刺激RAW264. 7巨噬细胞表达C0X-2 ;
[0019] 图3为本发明驱虫斑鸠菊酚酸部位抑制LPS刺激RAW264. 7巨噬细胞NF κ B的磷 酸化。
【具体实施方式】
[0020] 实施例1 :驱虫斑鸠菊酚酸部位的制备：
[0021] 将干燥的驱虫斑鸠菊果实药材IOkg粉碎，加入30倍体积的水溶液，加热回流提取 3次，温度95°C，时间3小时，冷却至室温，过滤，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得到醇提 物；
[0022] 将得到的醇提物用浓度为5%乙醇分散至含生药100g/L，过滤，再用AB-8型大孔 吸附树脂柱，先用1倍柱体积水洗脱，再用8倍柱体积浓度为40%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱 液，减压浓缩，真空干燥成干粉，即得含有3, 5-二咖啡酰基奎宁酸、4, 5-二咖啡酰基奎宁酸 和3, 4-二咖啡酰基奎宁酸的驱虫斑鸠菊酚酸部位390g。
[0023] 实施例2 :驱虫斑鸠菊酚酸部位的制备：
[0024] 将干燥的驱虫斑鸠菊果实药材IOkg粉碎，加入3倍体积浓度为95%乙醇，加热回 流提取5次，室温，时间3小时，冷却至室温，过滤，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得到醇 提物；
[0025] 将得到的醇提物用浓度为5%乙醇分散至含生药50g/L，离心（4000转/分钟）， DM-130型大孔吸附树脂柱，先用3倍柱体积水洗脱，再用1倍柱体积浓度为95%乙醇洗脱， 收集乙醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥成干粉，即得含有3, 5-二咖啡酰基奎宁酸、4, 5-二咖 啡酰基奎宁酸和3, 4-二咖啡酰基奎宁酸的驱虫斑鸠菊酚酸部位420g。
[0026] 实施例3 :驱虫斑鸠菊酚酸部位的制备：
[0027] 将干燥的驱虫斑鸠菊果实药材IOkg粉碎，加入15倍体积浓度为30%乙醇，加热回 流提取3次，温度75°C，时间2小时，冷却至室温，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得到醇提 物；
[0028] 将得到的提取物用浓度为10 %甲醇分散至含生药80g/L，离心（4000转/分 钟），HPD-100型大孔吸附树脂柱，先用4倍柱体积水洗脱，再用6倍柱体积浓度为50 %乙 醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥成干粉，即得含有3, 5-二咖啡酰基奎宁酸、 4, 5-二咖啡酰基奎宁酸和3, 4-二咖啡酰基奎宁酸的驱虫斑鸠菊酚酸部位440g。
[0029] 实施例4 :驱虫斑鸠菊酚酸部位的制备：
[0030] 将干燥的驱虫斑鸠菊果实药材IOkg粉碎，加入18倍体积的浓度为60%甲醇，加热 回流提取2次，温度50°C，时间0. 5小时，冷却至室温，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得到 醇提物；
[0031] 将得到的提取物用浓度为15%甲醇分散至含生药100g/L，离心（4000转/分钟）， NKA-9型大孔吸附树脂柱，先用5倍柱体积水洗脱，再用5倍柱体积浓度为60%甲醇洗脱， 收集甲醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥成干粉，即得含有3, 5-二咖啡酰基奎宁酸、4, 5-二咖 啡酰基奎宁酸和3, 4-二咖啡酰基奎宁酸的驱虫斑鸠菊酚酸部位460g。
[0032] 实施例5 :驱虫斑鸠菊酚酸部位的制备：
[0033] 将干燥的驱虫斑鸠菊果实药材IOkg粉碎，加入12倍体积浓度为10%乙醇加热回 流提取2次，温度80°C，时间2小时，冷却至室温，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得到醇提 物；
[0034] 将得到的提取物用浓度为10 %乙醇分散至含生药30g/L，过滤，再用DlOl型大孔 吸附树脂柱，先用8倍柱体积水洗脱，再用6倍柱体积浓度为80%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱 液，减压浓缩，真空干燥成干粉，即得含有3, 5-二咖啡酰基奎宁酸、4, 5-二咖啡酰基奎宁酸 和3, 4-二咖啡酰基奎宁酸的驱虫斑鸠菊酚酸部位564g。
[0035] 实施例6 :驱虫斑鸠菊酚酸部位的制备：
[0036] 将干燥的驱虫斑鸠菊果实药材IOkg粉碎，加入18倍体积浓度为95 %乙醇，加热回 流提取2次，温度60°C，时间1小时，冷却至室温，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得到醇提 物；
[0037] 将得到的提取物用水分散至含生药50g/mL，离心（4000转/分钟），用HPD400型 大孔吸附树脂柱，先用6倍柱体积水洗脱，再用6倍柱体积浓度为65%甲醇洗脱，收集甲醇 洗脱液，减压浓缩，真空干燥成干粉，即得含有3, 5-二咖啡酰基奎宁酸、4, 5-二咖啡酰基奎 宁酸和3, 4-二咖啡酰基奎宁酸的驱虫斑鸠菊酚酸部位490g。
[0038] 实施例7