含蚯蚓活性蛋白的化妆品的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，特别是涉及一种含蚯蚓活性蛋白的化妆品。
【背景技术】
[0002] 随着药妆品工业的持续发展，研究和开发策略将更多地转向医药类型的产品， 利用先进医学技术的药妆品已经得到了快速发展，而且这一趋势还将会更加强劲。目前， 美容手术包括微晶磨皮术和化学磨皮术、肉毒素护理和激光更新皮肤等，这些方法都能消 除不平滑的皮肤表面、老年斑和细小的皱纹，然而，大部分消费者更加青睐于使用乳霜、乳 液、凝胶、油脂和面膜等化妆品来美化肌肤。
[0003] 本研究所使用的蚯蚓品种为赤子爱胜蚓，本品种在分类学上属于正蚓科爱胜属。 赤子爱胜蚓繁殖率高、适应性强，很适合人工养殖，是目前世界上养殖最为普遍的一个品 种，其体内的药用成分也十分丰富，所以临床上的制剂多以赤子爱胜蚓为原料。随着生物技 术的发展，赤子爱胜蚓的药用价值越来越多的被人们研究和关注。
[0004] 蚯蚓的药用价值与其体内的活性物质关系密切；实验室前期的研究中发现蚯蚓活 性蛋白提取物在动物水平上能够促进烫伤创面的愈合，在细胞水平上能够促进纤维细胞的 增殖和迁移；但是，还未见从蚯蚓中提取抗皱成分的资料，现有技术中蚯蚓提取物提取工艺 还不是很完善，提取的往往是包含小分子成分的混合物；本发明的研究的主要任务是科学 提取出赤子爱胜蚓中促进成纤维细胞增殖的活性蛋白，并以其为原料研制出具有抗皱活性 的优质化妆品。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种具有使皮肤柔滑、补水保湿及延缓衰老的作用的含蚯 蚓活性蛋白的化妆品。
[0006] 为了实现上述目的，本发明的含蚯蚓活性蛋白的化妆品，包括主料和辅料，所述主 料由甘油、透明质酸、芦芭胶、海藻糖、水溶性维生素E、杰马、蚯蚓活性蛋白、人参提取液和 纯化水组成，所述辅料为香精、乳化剂、水溶性霍霍巴油、葡萄籽油、卡波姆、三乙醇胺尿囊 素的一种或两种以上的组合物。
[0007] 根据所选辅料的不同，这种面部化妆品可以制成化妆水、祛皱精华、乳液、面霜、面 膜。
[0008] 当辅料为香精时，可以制备化妆水，每100g化妆水中含有1~1. 5g甘油、8~10g1% 的透明质酸、〇. 8~lg芦芭胶、l~2g海藻糖、0. 1~0. 2g水溶性维生素E、0. 3~0. 5g杰马、4~6g 蚯蚓活性蛋白、4~6g人参提取液、0. 01~0. 02g香精，余量为纯化水。
[0009] 所选辅料为香精和水溶性霍霍巴油的组成物时，可以制备成祛皱精华，每100g祛 皱精华中含有2~3g甘油、20~30gl%透明质酸、l~2g芦芭胶、2~4g海藻糖、0. 1~0. 2g水溶性 维生素E、0. 3~0. 5g杰马、10~20g蚯蚓活性蛋白、10~20g人参提取液、0. 01-0. 02g香精和 2~3g水溶性霍霍巴油，余量为纯化水。
[0010] 所选辅料为葡萄籽油、香精、乳化剂和水溶性霍霍巴油的组合物时，可以制备成乳 液；每100g乳液中含有2~4g甘油、15~20gl%透明质酸、2~3g芦芭胶、3~4g海藻糖、4~5g葡 萄籽油、l~2g水溶性霍霍巴油、0. 4~0. 5g水溶性维生素E、0. 3~0. 5g杰马、10~20g蚯蚓活性 蛋白、10~20g人参提取液、I. 3~1. 5g乳化剂和0. 01-0. 02g香精，余量为纯化水。
[0011] 所选辅料为葡萄籽油、香精、乳化剂和水溶性霍霍巴油的组合物时，根据各组分的 配比不同还可以制备成面霜；每100g面霜中含有2~4g甘油、15~20gl%透明质酸、2~3g芦芭 胶、3~4g海藻糖、0. 4~0. 5g水溶性维生素E、0. 3~0. 5g杰马、10~20g蚯蚓活性蛋白、10~20g 人参提取液、2~3g乳化剂、0. 01-0. 02g香精、4~5g葡萄籽油和l~2g水溶性霍霍巴油，余量 为纯化水。
[0012] 所选辅料为卡波姆、香精、三乙醇胺和尿囊素的组合物时，可以制备成面膜；其中 每100g面膜中含有2~4g甘油、4~6 gl%透明质酸、2~3g芦芭胶、2~3g海藻糖、0. 4~0. 6g水 溶性维生素E、0. 3~0. 5g杰马、8~10g蚯蚓活性蛋白、10~20g人参提取液、0. 01-0. 02g香精、 0. 2~0. 3g卡波姆、0. 2~3g三乙醇胺和0. 2~0. 3g尿囊素，余量为纯化水。
[0013] 优选的，所述透明质酸为分子量25~100万的透明质酸粉末。
[0014] 进一步，所述的蚯蚓活性蛋白采用如下步骤提取而成： a、 取清洗干净的鲜蚯蚓，加入20mmol/L、pH为6. 8~7. 2的磷酸盐缓冲液，冰浴条件下高 速匀浆，得到蚯蚓匀浆液，并在4°C下静置2~3h，使蛋白充分溶出； b、 将蚯蚓匀浆液分装于离心管中，在4°C下，高速离心20~30min，取上清液；在室温条 件下，加研细的硫酸铵进行盐析，达到50%饱和度，使杂蛋白沉淀析出，得盐析液； c、 将盐析液分装于离心管中，在4°C下，高速离心20~30min，取上清液过0. 45Mm的膜， 取滤液； d、 盐析所述滤液采用0. 2Mm的中空纤维膜组件超滤的方式除去大分子物质，然后用截 留分子量为20k-50k中空纤维膜组件超滤的方式脱盐，最后冷冻干燥即得所述化妆品用蚯 蚓活性蛋白。
[0015] 本发明的有益效果是：本方法以新鲜的赤子爱胜蚓为原料，采用匀浆、离心、盐析、 微滤、超滤、冷冻干燥等技术对其中的活性蛋白进行分离纯化、采用NIH3T3纤维细胞进行 活性跟踪，获得了具有较高增殖活性的蚯蚓活性蛋白；将本发明方法制备的蚯蚓活性蛋白 应用于化妆品，具有使皮肤柔滑、补水保湿及延缓衰老的作用，可作为护肤品，直接用于皮 肤。
【具体实施方式】
[0016] 实施例1:化妆水的制备 配方为： 甘油：Ig 1%透明质酸：IOg 芦芭胶=Ig 海藻糖：2g 水溶性维生素E :0. 2g 杰马：〇. 4g 蚯蚓活性蛋白：5g 人参提取液：5g 香精：〇. Olg 纯化水：75. 39g 方法为：按照以上配方精确称量甘油，1%透明质酸溶液，海藻糖，水溶性维生素E及杰 马置烧杯中，玻璃棒搅匀后，加入5g人参提取液及5g蚯蚓活性蛋白提取液；继续搅拌至均 匀后加纯化水75. 39g，全部溶解后加入0.0 lg香精对化妆品的香型进行调节，即制得100 g 化妆水。
[0017] 实施例2:祛皱精华的制备 配方为： 甘油：3g 1%透明质酸：25g 芦芭胶：1. 5g 水溶性霍霍巴油：2g 海藻糖：3g 水溶性维生素E :0. 2g 杰马：〇. 4g 蚯蚓活性蛋白：15g 人参提取液：15 g 香精：〇2g 纯化水：34. 88g 方法为：按照以上配方精确称量甘油，1%透明质酸溶液，芦芭胶，水溶性霍霍巴油，海 藻糖，水溶性维生素E及杰马置烧杯中，玻璃棒搅匀后，加入15g人参提取液及15g蚯蚓活 性蛋白提取液，继续搅拌至均匀后，加纯化水34. 88g，全部溶解后，加入0. 02g香精对化妆 品的香型进行调节，即制得100 g祛皱精华。
[0018] 实施例3:乳液的制备 配方为： 甘油：3g 1%透明质酸：20g 芦芭胶：2g 海藻糖：3g 葡萄籽油：5g 霍霍巴油；Ig 杰马：〇. 4g 水溶性维生素E:0. 5g 蚯蚓活性蛋白：15g 人参提取液：15g 乳化剂：1. 5g 香精：〇. 〇2g 纯化水：33. 58g 方法为：按照以上配方精确称量甘油，1%透明质酸溶液，芦芭胶，海藻糖，蚯蚓活性蛋 白提取液及人参提取液置烧杯中，玻璃棒搅拌均匀。再按照配方加入葡萄籽油，霍霍巴油， 杰马，水溶性维E和香精，并加入纯化水33. 58g，搅拌均匀后，加入乳化剂大力搅拌至形成 初乳，最后用匀楽机乳化，即制得100 g乳液。
[0019] 实施例4:面霜的制备 配方为： 甘油：3g 1%透明质酸：20g 芦芭胶：2g 海藻糖：3g 葡萄籽油：5g 霍霍巴油：Ig 杰马：〇. 4g 水溶性维生素E :0. 5g 蚯蚓活性蛋白：15g 人参提取液：15g 乳化剂：2. 5g 香精：〇. 〇2g 纯化水：32. 58g 方法为：按照以上配方精确称量甘油，1%透明质酸溶液，芦芭胶，海藻糖，蚯蚓活性蛋 白提取液及人参提取液置烧杯中，玻璃棒搅拌均匀。再按照配方加入葡萄籽油，霍霍巴油， 杰马，水溶性维E和香精，并加入纯化水32. 58g，搅拌均匀后加入乳化剂大力搅拌，即制得 100 g面霜。
[0020] 实施例5:面膜的制备 配方为： 甘油：3g 1%透明质酸：5g 芦芭胶：2g 卡波姆：〇. 2g 三乙醇胺：0. 2g 海藻糖：2g 水溶性维生素E :0. 5g 尿囊素：0. 2g 杰马：〇. 4g 蚯蚓活性蛋白：IOg 人参提取液：15g 香精：〇. Olg 纯化水