M柠檬酸钾、Trace郡咼压火囷。配制3淞时，其成分使用无菌技术依次添 加，现配现用。lml胆固醇（5mg/mL，溶于乙醇）。
[0027] 3?大肠杆菌0P50的制备： 挑取一个大肠杆菌0P50单菌落，接种于无菌的50mLLB中，置于37 °C恒温摇床 (220rpm)培养12h。将大肠杆菌0P50按20%接种于灭过菌后的LB培养基中，于37°C， 130rpm摇床过夜培养，次日第一次以lOOOOrpm离心lOmin，第二次以8000rpm离心lOmin， 得到固体菌，4°C冰箱保存，临用前以S液稀释至10mg/mL，可用来接种液体培养基或加96 孔板。
[0028] 4 ?实施步骤 (1)实验组设置： 空白对照组（Control) :S液 极低浓度玫瑰花水煎液组（1600R):玫瑰花0. 025g加水383ml，加热至沸腾并保持30 分钟，定容至191mL，过滤除菌，备用。
[0029] 低浓度玫瑰花水煎液组（800R):玫瑰花0. 05g加水383ml，加热至沸腾并保持30 分钟，定容至191mL，过滤除菌，备用。
[0030] 中浓度玫瑰花水煎液组（400R):玫瑰花0.lg加水383ml，加热至沸腾并保持30分 钟，定容至191mL，过滤除菌，备用。
[0031] 高浓度玫瑰花水煎液组（200R):玫瑰花0. 2g加水383ml，加热至沸腾并保持30分 钟，定容至191mL，过滤除菌，备用。
[0032] 极低浓度玉液汤组（800Y):黄苗187. 5mg、山药375mg、知母225mg、葛根62. 5mg、 五味子112. 5mg、天花粉112. 5mg、鸡内金75mg，加水383ml，加热至沸腾并保持30分钟，定 容至191 mL，过滤除菌，备用。
[0033] 极低浓度玉液汤组（500Y):黄芪0. 3g、山药0. 6g、知母0. 36g、葛根0. lg、五味子 〇. 18g、天花粉0. 18g、鸡内金0. 12g，加水383ml，加热至沸腾并保持30分钟，定容至191 mL， 过滤除菌，备用。
[0034] 中浓度玉液汤组（200Y):黄芪0.75g、山药1.5g、知母0.9g、葛根0.25g、五味子 0.45g、天花粉0. 45g、鸡内金0. 3g，加水383ml，加热至沸腾并保持30分钟，定容至191 mL， 过滤除菌，备用。
[0035] 高浓度玉液汤组（50Y):黄苗3g、山药6g、知母3. 6g、葛根lg、五味子1. 8g、天花粉 1. 8g、鸡内金1. 2g，加水383ml，加热至沸腾并保持30分钟，定容至191mL，过滤除菌，备用。
[0036] 中药组合物1组（8仰即1:80(^+16001〇 :玫瑰花0.0258、黄芪187.511^、山药 375mg、知母225mg、葛根62. 5mg、五味子112. 5mg、天花粉112. 5mg、鸡内金75mg，加水 383ml，加热至沸腾并保持30分钟，定容至191mL，过滤除菌，备用。
[0037] 中药组合物 2 组（group2 :800Y+800R):玫瑰花 0? 05g、黄芪 187. 5mg、山药 375mg、 知母225mg、葛根62. 5mg、五味子112. 5mg、天花粉112. 5mg、鸡内金75mg，加水383ml，加热 至沸腾并保持30分钟，定容至191 mL，过滤除菌，备用。
[0038] 中药组合物 3 组（group3 :800Y+400R):玫瑰花 0? lg、黄苗 187. 5mg、山药 375mg、知 母225mg、葛根62. 5mg、五味子112. 5mg、天花粉112. 5mg、鸡内金75mg，加水383ml，加热至 沸腾并保持30分钟，定容至191 mL，过滤除菌，备用。
[0039] 中药组合物 4 组（group4 :800Y+200R):玫瑰花 0? 2g、黄苗 187. 5mg、山药 375mg、知 母225mg、葛根62. 5mg、五味子112. 5mg、天花粉112. 5mg、鸡内金75mg，加水383ml，加热至 沸腾并保持30分钟，定容至191 mL，过滤除菌，备用。
[0040] 中药组合物 5 组（group5 :500Y+1600R):玫瑰花 0? 025g、黄芪 0? 3g、山药 0? 6g、知 母0. 36g、葛根0. lg、五味子0. 18g、天花粉0. 18g、鸡内金0. 12g，加水383ml，加热至沸腾并 保持30分钟，定容至191 mL，过滤除菌，备用。
[0041] 中药组合物6组（group6 :500Y+800R):玫瑰花0? 05g、黄苗0? 3g、山药0? 6g、知母 0. 36g、葛根0. lg、五味子0. 18g、天花粉0. 18g、鸡内金0. 12g，加水383ml，加热至沸腾并保 持30分钟，定容至191 mL，过滤除菌，备用。
[0042] 中药组合物7组（group7 :500Y+400R):玫瑰花0? lg、黄苗0? 3g、山药0? 6g、知母 0. 36g、葛根0. lg、五味子0. 18g、天花粉0. 18g、鸡内金0. 12g，加水383ml，加热至沸腾并保 持30分钟，定容至191 mL，过滤除菌，备用。
[0043] 中药组合物8组（group8 :500Y+200R):玫瑰花0? 2g、黄苗0? 3g、山药0? 6g、知母 0. 36g、葛根0. lg、五味子0. 18g、天花粉0. 18g、鸡内金0. 12g，加水383ml，加热至沸腾并保 持30分钟，定容至191 mL，过滤除菌，备用。
[0044] (2)线虫的培养： 将线虫接在涂有大肠杆菌0P50的固体NGM板上，然后置于15°C的培养箱中培养，当线 虫长到成虫时进行同步化处理。
[0045] (3)线虫同步化： 挑选含有大量成虫并且有部分线虫卵已经孵出的NGM培养基，用M9液将线虫从培养基 上冲下，转移到离心管中，静置使线虫自由沉降至管底，弃上清。视线虫量多少向离心管中 加入裂解液[6. 4% (v/v)NaC103溶液和1MNaOH溶液按体积比1: 1混合，临用前配制]， 在漩祸搅拌器上振荡5-7分钟待线虫全部断裂时停止涡旋，并分装于1. 5mL离心管中，用M9 溶液洗线虫卵三次。
[0046] (4)药物处理： 在96孔多孔板中，每孔加入线虫80-100条，20yL上述制备的大肠杆菌0P50,给药组 分别加入20yL极低浓度玫瑰花水煎液、低浓度玫瑰花水煎液、中浓度玫瑰花水煎液、高浓 度玫瑰花水煎液、极低浓度玉液汤、低浓度玉液汤、中浓度玉液汤和高浓度玉液汤，以及中 药组合物1-8组，空白对照组仅加入等量的S液。所有孔以S液补足至200yL，每个组设 3个平行。放入130rpm/min，22°C的恒温振荡器中培养4天。4天后可用于镜检分别计数 成虫线虫数目和dauer期线虫数目。
[0047] (5)实验结果： 实验结果见图1，图1的纵坐标表示成虫线虫数占受试秀丽隐杆线虫总数（dauer期线 虫数+成虫数目）的百分比，即（adult/total) 100%。百分比越大说明受试药物治疗糖尿病 效果越好。
[0048] 实验结果表明，与空白组相比，玫瑰花剂量依赖地阻止了秀丽隐杆线虫进入dauer 期的休眠态（P〈〇. 05)，表明玫瑰花对糖尿病线虫具有显著的治疗作用，其中，低浓度玫瑰花 水煎液组（800R)的玫瑰花水煎液治疗糖尿病效果最为显著，当玫瑰花浓度进一步升高时， 其治疗作用反而下降。
[0049] 与空白组相比，玉液汤剂量依赖地阻止了秀丽隐杆线虫进入dauer期的休眠态 (P〈0. 05 )，表明玉液汤对糖尿病线虫具有显著的治疗作用，其中，高浓度玉液汤组（50Y)治 疗糖尿病效果最为显著。
[0050] 本发明所述中药组合物均比单独应用相同浓度的玫瑰花或玉液汤治疗糖尿病效 果显著，其中，中药组合物6组（500Y+800R)、中药组合物2组（800Y+800R)治疗糖尿病的效 果与玉液汤高浓度组（50Y)治疗糖尿病的效果相同，但是，50Y和500Y+800R和800Y+800R 相比，500Y+800R和800Y+800R中的天花粉量明显降低，毒副作用更低。本发明公开的组合 物实现了减毒增效的有益效果。
[0051] 综上所述，本发明提供的中药组合物可在不影响药效的前提下显著降低天花粉的 用量，从而降低由于使用天花粉带来的毒性，达到了减毒增效的有益效果，可在制备治疗糖 尿病的药物和/或保健品中应用。
【主权项】
1. 一种治疗糖尿病的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物含有黄芪、山药、知母、 葛根、五味子、天花粉、鸡内金、玫瑰花。2. 如权利要求1所述的一种治疗糖尿病的药组合物，其特征在于，所述中药组合物含 有下述重量比的原料药：黄芪〇. 3-15份、山药0. 6-30份、知母0. 36-18份、葛根0. 1-5份、 五味子0. 18-9份、天花粉0. 18-9份、鸡内金0. 12-6份，玫瑰花0. 05份-4份。3. 如权利要求1-2任意一项所述的一种治疗糖尿病的中药组合物，其特征在于，该中 药组合物作为药效成分的药物和/或保健品的剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液、 丸剂。4. 一种如权利要求1-2任意一项所述的治疗糖尿病的中药组合物在制备治疗糖尿病 的药物中的应用。5. -种如权利要求1-2任意一项所述的治疗糖尿病的中药组合物在制备治疗糖尿病 的保健品中的应用。
【专利摘要】本发明属于中药技术领域，具体涉及一种含玫瑰花的治疗糖尿病的中药组合物。所述中药组合物含有下述原料药：黄芪、山药、知母、葛根、五味子、天花粉、鸡内金、玫瑰花，使用本发明所述中药组合物治疗秀丽隐杆线虫糖尿病模型，结果表明：该中药组合物能显著减少糖尿病秀丽隐杆线虫的dauer表型，表明本发明提供的中药组合物可在制备治疗糖尿病的药物中应用。
【IPC分类】A61K35/57, A61P3/10, A61K36/8964
【公开号】CN105106577
【申请号】CN201510648719
【发明人】不公告发明人
【申请人】甘肃东方天润玫瑰科技发展有限公司
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年10月9日