组合治疗的制作方法

组合治疗的制作方法
【专利说明】组合治疗
[0001] 本发明涉及包括8-[(IR)-1-(3, 5-二氟苯基氨基）乙基]-N，N-二甲基-2-吗 啉代-4-氧-4H-色烯-6-羧酰胺（以下"化合物[I]"）或其药学上可接受的盐和紫杉 烷的组合在癌症的治疗或预防中的用途。紫杉烷包括己确立的抗癌药物，例如多西他赛 (Taxotere?)和紫杉醇（Taxol?)。其他紫杉烷包括卡巴他赛、拉罗他赛、奥他赛、以及替司 他赛。本发明还涉及药用组合物，包括化合物[I]或其药学上可接受的盐和紫杉烷；并且涉 及试剂盒，包括化合物[I]或其药学上可接受的盐和紫杉烷，可任选地具有使用说明书。本 发明进一步涉及治疗方法，该治疗方法包括化合物[I]或其药学上可接受的盐和紫杉烷同 时的、顺序的或分别的给予至温血动物，例如人。
[0002] 已发现细胞可能由于它DNA的一部分转化成致癌基因而变成癌性的，致癌 基因是一种一旦激活即导致恶性肿瘤细胞形成的基因（布拉德肖(Bradshaw),诱变 (MutaRenesis), 1986，1，91)。若干此类致癌基因引起肽的产生，这些肽是生长因子的受体。 生长因子受体复合物的激活随后导致了细胞增殖的增加。例如已知若干致癌基因编码酪氨 酸激酶酶类，并且某些生长因子受体也是酪氨酸激酶酶类（亚登等人,牛物化学年鉴（Ann. Rev. Biochem), 1988,57,443 ;拉森等人，医药仆,学年 _艮（Ann. Reports in Med. Chem.), 1989,第13章）。待鉴定的第一组酪氨酸激酶来自于病毒癌基因，例如pp60v 酪氨酸激 酶（另外被称为v-Src))，和在正常细胞中的相应的酪氨酸激酶（例如pp60eSrc酪氨酸激酶 (另外被称为c-Src)。
[0003] 受体酪氨酸激酶在生物化学信号（其启动细胞复制）的传递中是十分重要的。它 们是跨越细胞膜的大型酶类，并且具有针对生长因子（例如表皮生长因子（EGF))的胞外结 合域、和用作激酶来磷酸化在蛋白质中的酪氨酸氨基酸的胞内部分，并因此来影响细胞增 殖。已知受体酪氨酸激酶的不同类别（威尔克斯(Wilks),癌症研究讲展，1993,60,43-73), 这些类别包括脂质激酶，其位于细胞内并且涉及生物化学信号（例如影响肿瘤细胞生长和 侵袭性的那些）的传递。已知脂质激酶的不同类别，这些类别包括PI 3-激酶家族，其被替 代性地称为磷脂酰肌醇-3-激酶家族。
[0004] 现充分了解，致癌基因和肿瘤抑制基因的失调促成恶性肿瘤形成，例如经由增加 细胞增殖或增加细胞存活。目前还已知，由PI 3-激酶家族介导的信号传导路径在多个 细胞过程（包括增殖和存活）中具有核心作用，并且这些路径的失调是广谱人类癌症和其 他疾病的病因因素（卡索(Katso)等人，细朐和发育牛物学年鉴（Annual Rev. Cell Dev. Biol. )，2001，1Z:615-617 和福斯特（Foster)等人，细朐科学杂志（L Cell Science)， 2003,116:3037-3040)。
[0005] 脂质激酶的PI 3-激酶家族是使磷脂酰肌醇（PI)的肌醇环的3-位磷酸化的一组 酶。已知主要的三组PI 3-激酶酶类，它们是根据其生理学底物特异性分类的（凡艾斯布鲁 艾克（Vanhaesebroeck)等人,牛物科学趋势（Trends in Biol. Sci.), 1997,22, 267) 〇 III 类PI 3-激酶酶类仅使PI磷酸化。相比之下，II类PI 3-激酶酶类使PI和PI 4-磷酸酯 [在下文中简称为PI(4)P]两者磷酸化。I类PI 3-激酶酶类使PI、PI(4)P以及PI 4,5_双 磷酸酯[在下文中简称为PI(4,5)P2]磷酸化，尽管只有PI(4,5)P2被认为是生理学细胞底 物。？1(4,5)?2的磷酸化产生脂质第二信使？13,4,5-三磷酸酯[在下文中简称为？1(3， 4, 5) P3]。与这一超家族的关系较疏远的成员是IV类激酶，如mTOR和DNA依赖性激酶，它 们使蛋白质底物内的丝氨酸/苏氨酸残基磷酸化。这些脂质激酶中被最多研究和了解的是 I类PI 3-激酶酶类。
[0006] I类PI 3-激酶是由pllO催化亚基和调节亚基组成的杂二聚体，并且基于调节配 偶体和调节机制，该家族进一步分为Ia类和Ib类酶类。Ia类酶类包括PI 3-激酶β，并 且由与五种不同的调节亚基（ρ85α、ρ55α、ρ5〇α、ρ85β和ρ55γ)二聚的三种不同的催化 亚基组成（PllO α、ρ110β和pllO δ)，其中所有催化亚基均能够与所有调节亚基相互作用 以形成各种杂二聚体。Ia类PI 3-激酶酶类总体上经由调节亚基SH2域与激活受体或衔接 蛋白（如IRS-1)的特异性磷酸化-酪氨酸残基的相互作用，响应于受体酪氨酸激酶的生长 因子刺激而被激活。PllOa和pllO β两者均在所有细胞类型中组成性地表达，而pllO δ 表达更受限于白细胞群体和一些上皮细胞。相比之下，单一 Ib类酶由与plOl调节亚基相 互作用的PllO γ催化亚基组成。此外，Ib类酶类响应于G蛋白偶联受体（GPCR)系统并且 通过上述机制激活。
[0007] 目前存在大量证据表明，在多种人类癌症中，Ia类PI 3-激酶酶类（其包括PI 3-激酶β)或者直接或者间接地促成肿瘤形成（维万科（Vivanco)和索耶斯（Sawyers)， 癌症自然评论（Nature Reviews Cancer)，2002,2,489-501)。例如，pllO α 亚基在如卵巢 肿瘤的一些肿瘤中扩增（沙耶斯迪（Shayesteh)等人，自然遗传学（Nature Genetics，）， 1999，?:99-102)和宫颈肿瘤（马（Ma)等人，致癌基_ (Oncogene), 2000,19:2739-2744) 〇 在PllOa的催化部位内激活突变与多种其他肿瘤（例如结肠直肠区域的和乳腺与肺的肿 瘤）有关（塞缪尔斯（Samuels)等人，科学（Science), 2004, 304, 554)。也已在如卵巢癌和 结肠癌的癌症中鉴别出ρ85α中的肿瘤相关突变（菲利普（Philp)等人，癌症研究（Cancer Research)，2001，紅，7426-7429)。PI 3激酶-β在B-细胞功能中发挥着关键作用并且显示 出是在一系列B-细胞恶性肿瘤中的存活信号的介体。这包括但不限于慢性淋巴细胞白血 病（CLL)、急性淋巴细胞白血病（ALL)、滤泡性淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL)和套 细胞淋巴瘤（池田（Ikeda)等人，血液（Blood), 2010,116,1460-1468 ;赫尔曼（Herman)等 人，血液（Blood) ,2010,116,2078-2088 ;兰努蒂（Lannutti)等人，血液（Blood), 2011,117, 591-594 ;郝伦理盖尔（Hoellenriegel)等人，血液（Blood), 2011,118,3603-3612)。除直接 作用以外，据信Ia类PI 3-激酶的激活促成信号传导路径上游发生的肿瘤形成事件，例如 经由受体酪氨酸激酶、GPCR系统或整合素的配体依赖性或非配体依赖性激活（瓦拉（Vara) 等人,癌症治疗综述（Cancer Treatment Reviews)，2004,並，193-204)。这些上游信号传导 路径的实例包括在多种肿瘤中使得PI 3-激酶介导的路径激活的受体酪氨酸激酶Erb2的 过表达（哈拉瑞（Harari)等人，致癌基因 （Oncogene), 2000,19,6102-6114),以及致癌基 因 Ras 的过表达（考夫曼-泽（Kauffmann-Zeh)等人，自然（Nature)，1997,385,544-548)。 另外，Ia类PI 3-激酶可能直接促成由不同下游信号传导事件造成的肿瘤形成。举例来 说，催化PI (3，4，5) P3转化回PI (4，5) P2的PTEN肿瘤抑制因子磷酸酶的作用的缺失经由 PI 3-激酶介导产生PI (3,4,5)P3的失调而与肿瘤的极宽范围相关（辛普森（Simpson)和 帕森斯（Parsons),实验细朐研究（Exd. Cell Res. ),2001,264,29-41) 〇此外，加强其他PI 3_激酶介导的信号传导事件的作用被认为促成了各种癌症，例如通过AKT的激活（尼克尔 森（Nicholson)和安德森(Anderson),细胞信号传导（Cellular Signalling), 2002,14, 381-395)。
[0008] 除在肿瘤细胞中介导增殖和存活信号传导中的作用之外，还存在充分证据表明Ia 类PI 3-激酶酶类还经由其在肿瘤相关的基质细胞中的功能促成肿瘤形成。举例来说， PI 3-激酶信号传导已知在内皮细胞中响应于如VEGF的促血管生成因子来介导血管生成 事件方面起重要作用（阿比德（Abid)等人,动脉硬化、血抢和血管牛物学（Arterioscler. Thromb. Vase. Biol.)，2004，M，294-300)。因为I类PI 3-激酶酶类还涉及运动和迀移（索 耳β (Sawyer),研究药物的?家意见（Expert Opinion Investig. Drugs), 2004,13,1~19),所 以PI 3-激酶抑制剂应经由肿瘤细胞侵袭和转移的抑制提供治疗效益。
[0009] 另外，I类PI 3-激酶酶类在调节具有PI 3-激酶活性的促成炎性细胞的促肿瘤 形成作用的免疫细胞方面起重要作用（库曾斯（Coussens)和韦布(Werb),自然，2002,420, 860-867)〇
[0010] 这些发现表明，I类PI 3-激酶酶类的药理学抑制剂应针对不同形式癌症疾病的 治疗具有治疗价值，该癌症疾病包括实体肿瘤（如癌瘤和肉瘤）和白血病以及淋巴性恶性 疾病。具体来说，例如，I类PI 3-激酶酶类的抑制应当针对乳腺癌、结肠直肠癌、肺癌（包 括小细胞肺癌、非小细胞肺癌和细支气管肺泡癌）以及前列腺癌的治疗，和胆管癌、骨癌、 膀胱癌、脑癌、头颈癌、肾癌、肝癌、胃肠组织的癌症、食道癌、卵巢癌、胰脏癌、皮肤癌、睾丸 癌、甲状腺癌、子宫癌、宫颈癌以及外阴癌、还有白血病（包括急性淋巴细胞白血病、慢性淋 巴细胞白血病和慢性骨髓性白血病）、多发性骨髓瘤以及淋巴瘤（包括非何杰金氏淋巴瘤 例如弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、和套细胞淋巴瘤）的治疗具有治疗价值。
[0011] 总体来说，调查者使用上述的PI 3-激酶抑制剂LY294002和渥曼青霉素探究了 PI 3-激酶家族的生理学和病理学作用。尽管使用那些化合物能够表明细胞事件中的PI 3-激 酶的作用，但他们在PI 3-激酶家族中没有充分地选择性来允许家族成员的个体作用的剖 析。由于这个原因，更强效的并且更具有选择性的药用PI 3-激酶抑制剂对于允许PI 3-激 酶作用的更全面理解和提供有效的治疗剂将是有用的。
[0012] 除肿瘤形成之外，有证据表明I类PI 3激酶酶类在其他疾病中起作用（怀 曼（Wymann)等人,药理学科学趋势（Trends in Pharmacological Science) , 2003,24, 366-376)。Ia类PI 3-激酶酶类与单一的Ib类酶在免疫系统的细胞中具有重要作用（小 保(Koyasu),自然免疫学（Nature Immunology)，2003,4, 313-319)，并且因此它们是炎性 和过敏性适应症的治疗靶标。如前所述，PI 3-激酶的抑制还有用于经由消炎作用或直接 通过影响心肌细胞来治疗心血管疾病（普拉萨德（Prasad)等人，心血管医学趋势（Trends in Cardiovascu