充氯化高铁血红素和维生素 Kl。对琼脂高压灭菌并且放入 50°C水浴中直至琼脂温度平衡至50°C。（将1080ml布氏琼脂用于具有16种稀释液的3种 药物+每种药物2个对照平板）。加入已溶绵羊血液达5%的终浓度并且混合以便将绵羊 血液惨入琼脂中。
[0131 ] 用无菌吸管将18ml琼脂转入含有2ml药物溶液的试管中。温和地混合该溶液并 且倾入相应的培养皿中。立即燃烧培养皿中的液体琼脂以消除形成的任何气泡。
[0132] 琼脂固化后将平板储存在4°C。
[0133] -天后，即测试当天，通过将带盖的平板半开地放入培养箱中达约30分钟来干燥 平板。
[0134] F)用于测试的接种物制备
[0135] 之前已从阴道样本中分离出了待测试的每种分离物，将其鉴定细菌种类水平，并 且储存在石蕊牛奶中，储存在-80 °C。
[0136] 对照微生物：
[0137] ATCC 25285脆弱拟杆菌
[0138] ATCC 29741多形拟杆菌
[0139] ATCC 700057 艰难梭菌
[0140] 从冰箱中取出分离物，接种至补充了 5%绵羊血液的布氏琼脂上，在37°C下在厌 氧气氛中孵育2-4天。在接种至药物灌注的琼脂上之前2天传代培养分离物。
[0141] 在测试微生物的当天，在布氏肉汤（Brucella broth)中制备混悬液至池度等于 0· 5McFarland 标准。
[0142] G)琼脂稀释平板的接种
[0143] 用Steer复制器将约1-2 μ L沉积在琼脂表面上，从而得到105CFU/点的终浓度。 制备复制器图并且对相应的孔记录分离物数量。将约300 μ L每种微生物混悬液转入无菌 复制器的各孔中。将接种物涂布在每个平板的表面上，从标记"开始"的平板开始，然后是最 低至最高浓度，终止于标记为"结束"的平板。将平板在厌氧室或厌氧瓶中在37°C孵育48 小时。
[0144] 对琼脂稀释平板读数
[0145] 首先对对照平板读数以确证生长并且检查可能的污染。
[0146] 检查各孔之间的交叉污染。
[0147] 在测试平板上读取MIC终点。MIC是与对照平板上的生长量相比测试平板上生长 形态中出现明显减少的浓度。生长明显改变的实例包括从汇合生长改变成雾状浑浊、小于 10个小集落或1-3个正常大小的集落。CLSI手册中存在的示例性图应当用作指导。
[0148] 质量控制
[0149] 当用测试微生物平行测试时获得的脆弱拟杆菌、多形拟杆菌和艰难梭菌的ATCC 菌株的MIC值必须落入临床和实验室标准委员会手册（CLSI手册）中对每种抗微生物药报 道的可接受的范围内。如果对照菌株的MIC值不落入该范围，则必须重复测试微生物。表 5是来自CLSI的琼脂稀释测试的对照菌株的MIC的可接受范围（μ g/ml):
[0151] 定期监测终点解释以将观察者中的MIC终点的解释的差异减至最低限度。
[0152] MIC的报告
[0153] 对于大部分敏感性病原体，如果MIC>32 μ g/ml或8 XMIC，则将细菌菌株定义为对 利福昔明有抗性。
[0154] 对甲硝唑的抗性是>32 μ g/ml
[0155] 对克林霉素的抗性是>8 μ g/ml
[0156] 表4 :2009年-2012年从阴道中回收的阴道加德纳氏菌的100种分离物的最小抑 菌浓度（MIC)
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[0161] 表5 :2009年-2012年从阴道中回收的阴道陌生菌的62种分离物的最小抑菌浓 度（MIC)
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[0165] 表6 :2009年-2012年从阴道中回收的动弯杆菌属种类的40种分离物的最小抑 菌浓度（MIC)
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[0168] 表7 :2009年-2012年从阴道中回收的羊水普雷沃氏菌的33种分离物的最小抑菌 浓度（MIC)
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[0169] 表8 :2009年-2012年从阴道中回收的双路普雷沃氏菌的34种分离物的最小抑菌 浓度（MIC)
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[0170] 表9 :2009年-2012年从阴道中回收的谭氏普雷沃氏菌的33种分离物的最小抑菌 浓度（MIC) CN 105142636 A 说明书 29/34 页
[0171] 表10 :2009年-2012年从阴道中回收的四联厌氧球菌的21种分离物的最小抑菌 浓度（MIC)
[0172] 表11 :2009年-2012年从阴道中回收的大芬沟德氏菌的20种分离物的最小抑菌 浓度（MIC) CN 105142636 A 说明书 31/34 页
[0173] 表12 :2009年-2012年从阴道中回收的海氏嗜蛋白胨菌的23种分离物的最小抑 菌浓度（MIC) CN 105142636 A 说明书 32/34 页
[0174] 表13 :2009年-2012年从阴道中回收的泪嗜蛋白胨菌的20种分离物的最小抑菌 浓度（MIC) CN 105142636 A 说明书 33/34 页
[0175] 表14 :2009年-2012年从阴道中回收的巨球形菌属样细菌的25种分离物的最小 抑菌浓度（MIC)
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【主权项】
1. 用于治疗患者的细菌性阴道感染的利福昔明，包括给所述患者施用药学有效量的利 福昔明，其中所述细菌包括至少一种对利福昔明之外的抗生素有抗性的细菌菌株。2. 根据权利要求1所述的用于治疗细菌性阴道感染的利福昔明，其中所述抗生素是克 林霉素或甲硝唑。3. 根据权利要求1所述的用于治疗细菌性阴道感染的利福昔明，其中所述的至少一种 有抗性的细菌菌株选自普雷沃氏菌属（Prevotella)、厌氧球菌属（Anaerococcus)、芬沟德 氏菌属（Finegoldia)、嗜蛋白胨菌属（Peptoniphilus)、厌氧球菌属、嗜蛋白胨菌属、巨球 形菌属（Megasphera)、动弯杆菌属（Mobilincus)和陌生菌属（Atopobium)。4. 根据权利要求1所述的用于治疗细菌性阴道感染的利福昔明，其中所述的至少一种 有抗性的细菌菌株是普雷沃氏菌属。5. 根据权利要求1所述的用于治疗细菌性阴道感染的利福昔明，其中所述的至少一种 有抗性的细菌菌株是双路普雷沃氏菌（Prevotella bivia)。6. 根据权利要求1所述的用于治疗细菌性阴道感染的利福昔明，其中所述感染是细菌 性阴道病。7. 根据权利要求1所述的用于治疗细菌性阴道感染的利福昔明，其中所述利福昔明以 20-2000mg的日剂量施用，其中剂型选自片剂、包衣的和未包衣的片剂、生物粘附片、控制释 放片剂、多层片、胶囊剂、软膏剂、乳膏剂、凝胶剂、泡沫和阴道溶液。8. 根据权利要求6所述的用于治疗细菌性阴道感染的利福昔明，其中所述日剂量低于 IOOmg09. 根据权利要求1所述的用于治疗细菌性阴道感染的利福昔明，其中所述患者对克林 霉素无响应。10. 根据权利要求1所述的用于治疗细菌性阴道感染的利福昔明，其中所述患者对甲 硝挫无响应。11. 用于治疗患者的细菌性阴道感染的利福昔明，包括给所述患者施用与一种或多种 另外的抗生素组合的药学有效量的利福昔明，其中所述细菌是对所述一种或多种另外的抗 生素有抗性或敏感性较低的至少一种菌株。12. 根据权利要求11所述的用于治疗细菌性阴道感染的利福昔明，其中所述一种或多 种另外的抗生素相继或与利福昔明联合被施用于所述患者。13. 根据权利要求11所述的用于治疗细菌性阴道感染的利福昔明，其中所述一种或多 种另外的抗生素选自克林霉素和甲硝唑。14. 用于治疗患者的复发性细菌性阴道感染的利福昔明，包括给所述患者施用药学有 效量的利福昔明，其中之前的感染是用一种或多种利福昔明之外的抗生素治疗的。15. 根据权利要求14所述的用于治疗复发性细菌性阴道感染的利福昔明，其中所述感 染是细菌性阴道病。16. 根据权利要求14所述的用于治疗复发性细菌性阴道感染的利福昔明，其中所述细 菌包括对治疗之前的感染所用的所述一种或多种抗生素有抗性的至少一种细菌菌株。17. 根据权利要求14所述的用于治疗复发性细菌性阴道感染的利福昔明，其中所述的 之前的感染是用克林霉素或甲硝唑治疗的。18. 与克林霉素和甲硝唑联合用于治疗患者的复发性细菌性阴道感染的利福昔明，其 中治疗有效量选择性地减少阴道致病菌、包括普雷沃氏菌属菌株的量。19. 根据权利要求18所述的用于治疗细菌性阴道感染的利福昔明，其中所述感染是细 菌性阴道病。20. 根据权利要求18所述的用于治疗细菌性阴道感染的利福昔明，其中利福昔明被阴 道施用。21. 根据权利要求18所述的用于治疗细菌性阴道感染的利福昔明，其中利福昔明的治 疗有效量是20-2000mg的日剂量。22. 根据权利要求21所述的用于治疗细菌性阴道感染的利福昔明，其中利福昔明的治 疗有效量是低于500mg的日剂量。23. 根据权利要求21所述的用于治疗细菌性阴道感染的利福昔明，其中利福昔明的治 疗有效量是低于IOOmg的日剂量。
【专利摘要】本发明涉及用于治疗细菌性阴道感染的利福昔明。本发明还涉及治疗以存在细菌为特征的感染的用途，所述细菌可以是对克林霉素和/或甲硝唑有抗性的。本发明还涉及利福昔明用于治疗具有阴道感染的患者的用途，所述患者在先前的治疗后已经复发或者具有对利福昔明之外的抗生素有抗性的细菌。
【IPC分类】A61K31/437, A61P15/02
【公开号】CN105142636
【申请号】CN201480013209
【发明人】G·C·维斯科米, F·卡兰尼
【申请人】意大利阿尔法韦士曼制药公司
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2014年3月3日
【公告号】CA2897758A1, WO2014140988A1