照品盐酸氯苯嗦1Cw(+UV)在0. 1-3. 0yg/ml的范围之内， 1(；。(-1^)在7.0-90.0^邑/1111的范围之内，且口伴>6，表明试验系统成立。
[0168] 试验中，加样时及处理结束后，样品各浓度组均未观察到受试品沉淀析出和细胞 形态学异常；W化Ototox软件计算试验结果，样品的PIF值为*1，即：受试物在达到允许的 最高浓度值（1000. 0yg/mL)也不表现细胞毒性；因而受试物样品无潜在的光毒性；样品的 MPE值也均小于0. 1，进一步说明受试物样品预期无光毒性。
[0169] 表11复方神秘果叶提取物光毒性试验结果 阳170]
阳171] 备注：*1 :在达到允许的最高浓度值（1000. 0iig/血）也不表现细胞毒性；+ :预期 存在光毒性；-:预期无光毒性。
[0172] 因此，在本试验条件下，受试样品的体外3T3中性红摄取光毒性试验为阴性反应， 预期无光毒性。 阳173] 5、皮肤变态反应试验
[0174] 皮肤变态反应试验参照化妆品卫生规范（2007版），采用局部封闭涂皮试验 度uehlerTest,BT)方法，确定复方神秘果叶提取物的是否引起皮肤变态反应及程度。变 态反应试验皮肤反应评分如表12所示。
[01巧]表12变态反应试验皮肤反应评分 阳 176]
[0177] 结果评价：当受试物组动物出现皮肤反应积分> 2时，判为该动物出现皮肤变态 反应阳性，按表13判定受试物的致敏强度。
[0178] 表13致敏率分类 阳 179]
[0180] 复方神秘果叶提取物巧％、1〇%两个浓度下）对豚鼠皮肤变态反应的激发试验结 果如表14所示。结果显示，豚鼠皮肤未见变态反应，致敏率为0,动物活动及体重正常。 阳181] 表14复方神秘果叶提取物对豚鼠皮肤变态反应的激发试验结果 阳182]
阳183]备注： 阳184] 植物油为阴性对照； 阳化5] 2, 4二硝基氯代苯为阳性对照； 阳186]样品1为5%复方神秘果叶提取物溶液；
[0187]样品2为10%复方神秘果叶提取物溶液。 阳1蝴S、结论
[0189] 1、功效评估结论
[0190] 经过系统的功效性评估实验，对复方神秘果叶提取物提取液的功效总结如下： 阳191] (1)复方神秘果叶提取物提取液具有良好的抗氧化活性，受试浓度在2.0%时， DPPH清除率即达到88%左右，且神秘果叶的抗氧化活性优于市售竞品。
[0192] (2)复方神秘果叶提取物提取液具有良好的抑制酪氨酸酶活性，受试浓度在 1. 0%时，酪氨酸酶抑制率即达到80%左右。
[019引 做复方神秘果叶提取物提取液具有一定抗炎活性，受试浓度在5. 0%时，透明质 酸酶抑制率约为65%，且复方神秘果叶提取物的抗炎活性优于市售竞品。
[0194] (4)改善微循环实验结果显示，复方神秘果叶提取物具有良好的改善肌肤微循环 血流量的功效。
[0195] (5)黑色素细胞试验结果显示，复方神秘果叶提取物在受试浓度0.5%、1%及2% =个受试浓度下具有一定的黑色素合成抑制率，同时可W保证黑色素细胞的相对活率在 80%W上。表明，复方神秘果叶提取物在细胞水平具有一定的美白功效。 阳196] 2、安全性评估结论
[0197] 通过红细胞溶血实验、小鼠多次皮肤刺激试验、人体斑贴试验、光毒性试验及皮肤 变态反应试验，评估复方神秘果叶提取物提取液的安全性，五个安全性实验结果一致显示， 复方神秘果叶提取物提取液安全、无刺激，对人体无不良反应产生。
[0198] W上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范 围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方 案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
【主权项】
1. 一种复方神秘果叶提取物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤： (1) 按比例准备中草药原料：所述中草药原料由主料和辅料构成，所述主料为神秘果 叶，重量百分比为30%~50%，辅料为赤苟，白蒺藜，黄苗，红景天，黄苳，姜黄，乳香，丹参， 三七中的任意三种的组合，重量百分比分别为20 %~30 %，10 %~30 %以及10 %~20 % ; (2) 预处理：将上述中草药原料中的异物挑出后进行烘干粉碎处理，得中草药原料粉 末，将四种中草药粉末混合均匀，制成神秘果叶复配物； (3) 提取：将所述神秘果叶复配物和溶剂混合并提取，得提取溶液； (4) 粗滤：将所述提取溶液粗滤，得复方神秘果叶提取物粗滤液； (5) 精滤：将所述复方神秘果叶提取物粗滤液精滤，得复方神秘果叶提取物精滤液； (6) 浓缩：将所述复方神秘果叶提取物精滤液，得复方神秘果叶提取物浓缩液； (7) 复溶：将所述复方神秘果叶提取物浓缩液复溶，得复方神秘果叶提取物复溶物； (8) 灭菌，将所述复方神秘果叶提取物复溶物灭菌，得复方神秘果叶提取物。2. 根据权利要求1所述的复方神秘果叶提取物的制备方法，其特征在于：步骤（3)中 所述神秘果叶复配物和溶剂按重量比1:10~40进行混合，在25~90°C的温度下提取 0.5~3小时，得提取溶液。3. 根据权利要求1所述的复方神秘果叶提取物的制备方法，其特征在于：步骤（7)中 所述复溶采用1:20的丁二醇水溶液复溶。4. 根据权利要求1所述的复方神秘果叶提取物的制备方法，其特征在于：所述溶剂为 纯水、40%~95%的乙醇溶液或40%~95%的丙酮溶液。5. 根据权利要求1所述的复方神秘果叶提取物的制备方法，其特征在于：步骤（3)中 所述提取为搅拌回流提取或者超声提取。6. 权利要求1~5中任意一项权利要求所述的复方神秘果叶提取物在化妆品中的应 用。7. -种化妆品，其特征在于：包括权利要求1~4中任意一项权利要求所述的复方神 秘果叶提取物，所述复方神秘果叶提取物所占重量百分比为0. 2%~8%。8. 根据权利要求7所述的化妆品，其特征在于：所述复方神秘果叶提取物的重量百分 比为0.4~6%。9. 根据权利要求7所述的化妆品，其特征在于：所述化妆品中还包括溶剂、润肤剂、增 溶剂、抗氧化剂、PH调节剂、促渗剂、乳化稳定剂、防腐剂、保湿剂、增稠剂、中和剂、螯合剂、 表面活性剂、乳化剂、香精、着色剂、防晒剂、皮肤调理剂、活性物以及功效添加剂中的一种 或几种。10. 根据权利要求7所述的化妆品，其特征在于：所述化妆品为化妆水，沐浴露、洁面 膏、面膜、面霜、啫喱、乳液、精华液、卸妆油或透明皂。
【专利摘要】本发明公开了一种复方神秘果叶提取物的制备方法，包括按比例准备中草药原料、预处理、提取、粗滤、精滤、浓缩、复溶和灭菌。本发明还公开了所述复方神秘果叶提取物在化妆品中的应用。本发明所述的复方神秘果叶提取物兼具抗氧化活性和酪氨酸酶抑制活性，弥补了神秘果叶仅具有较强的抗氧化活性的不足，本发明将神秘果叶复配物通过预处理、搅拌热回流提取、粗滤、精滤、浓缩、复溶、灭菌的处理制成复方神秘果叶提取物，其黄酮含量较高，DPPH自由基清除率、超氧阴离子自由基清除率、酪氨酸酶抑制率也比较高，可作为美白抗衰老功效成分应用于化妆品中。
【IPC分类】A61Q19/00, A61Q19/08, A61K8/97, A61Q19/02
【公开号】CN105213254
【申请号】CN201510638507
【发明人】赵仕芝
【申请人】上海上美化妆品有限公司
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2015年9月29日