一种生产低农残高(-)-表儿茶素3-o-没食子酸酯含量的葡萄籽提取物的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于葡萄籽多酚的提取纯化方法，特别涉及一种从葡萄籽中提取低农残高 (-)-表儿茶素3-0-没食子酸酯含量的葡萄籽多酚的方法。
【背景技术】
[0002] 20世纪70年代，法国科学家发现葡萄籽含有丰富的原花青素，原花青素是一种多 酚物质，研究发现，原花青素这种多酚物质具有强抗氧化性，其抗氧化性是维生素 C的20 倍，维生素 E的50倍，尤其是其体内活性，更是其他抗氧化剂无法比拟的。现在实验应用证 明，0PC可抗过敏、提高血管强度和通透性，对近70多种疾病具有直接或间接的预防和治疗 作用。
[0003] (-)-表儿茶素3-0-没食子酸酯，白色结晶，分子式：CuHifA。，分子量：442. 37， 可溶于热水、乙醇，不溶于苯、氯仿和石油醚。现代研究表明，（-)_表儿茶素3-0-没食子 酸酯有抗氧化、抗菌消炎、抑制癌细胞增殖、防治心血管疾病等功效。
[0004] 虽然葡萄籽被包裹在葡萄内部，但种植葡萄时所喷洒的农药，通过葡萄植株的吸 收和液体循环，依然会在葡萄籽中残留，按照EN15662和EN12393方法检测530项农残发 现，不论是进口还是国产葡萄籽中均残留几种或十几种农药。而欧美、日本等国家均对进口 葡萄籽提取物的农药残留提出了越来越高的要求。
[0005] 通过反复对比试验发现，仅用正己烷洗脱农残，还不能使得到的葡萄籽提取物中 的农残均小于定量限，而通过加入氯化钠辅助洗脱，使得按照EN15662和EN12393方法检测 的530项农残含量均小于定量限。例如：未加氯化钠洗脱，咯菌腈含量：0. 05mg/kg，烯酰吗 啉含量：〇. 〇3mg/kg ;而加入氯化钠辅助洗脱，略菌腈含量〈0. 01mg/kg，稀酰吗啉〈0.0 lmg/ kg，洗脱率分别提高3~5倍。
[0006] 28号大孔树脂，是纯化葡萄籽多酚的专用大孔树脂，通过对比试验发现，通过普 通水提上28号大孔树脂柱、乙醇洗脱工艺，就可以使纯化后的葡萄籽提取物多酚含量达到 80%以上，而其中（-)-表儿茶素3-0-没食子酸酯含量不足10% ;而按照本发明，通过初期 正己烷洗脱农残的同时，洗脱掉了大部分脂溶性物质，后期通过28号大孔树脂和聚酰胺树 脂的混合树脂进行纯化，不仅使得到的葡萄籽提取物多酚含量达到90%及以上，同时也使 (-)-表儿茶素3-0-没食子酸酯含量超过了 25%。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是充分利用自然资源，满足国内外对葡萄籽提取物农残越来越高的 要求，提供一种生产低农残高（-)-表儿茶素3-0-没食子酸酯含量的葡萄籽提取物的方 法。
[0008] 本发明的技术方案概述如下。
[0009] -种生产低农残高（-)-表儿茶素3-0-没食子酸酯含量的葡萄籽提取物的方法， 包括如下步骤： (1) 将葡萄籽，加入以去离子水饱和的正己烷中，葡萄籽和正己烷的质量（kg)体积比 (L)为1:3,然后加入氯化钠，氯化钠和正己烷的质量（kg)体积比（L)为1:200,搅拌洗脱30 分钟，过滤去掉正己烷； (2) 向葡萄籽中加入去离子水，葡萄籽和去离子水的质量（kg)体积比（L)为1:3~5， 在l〇〇°C提取40分钟，过滤，得葡萄籽粗提液； (3) 将所得提取液上混合树脂柱，用4~8倍柱体积去离子水、1倍柱体积的体积百分 浓度为20%乙醇水溶液、2倍柱体积的体积百分浓度为40%乙醇水溶液、2倍柱体积的百分 浓度为95%乙醇水溶液进行洗脱，收集合并百分浓度为40%乙醇水溶液和95%乙醇水溶液 洗脱液，减压浓缩至糖度40%，喷雾干燥，即得葡萄籽提取物。所述混合树脂为聚酰胺树脂与 28号大孔树脂两种树脂按质量比1:1的混合。
[0010] 所述葡萄籽为未经任何方式粉碎或破碎的完整葡萄籽。
[0011] 使用本发明生产的葡萄籽提取物，不仅（-)-表儿茶素3-0-没食子酸酯含量超过 25%，多酚含量超过90%，而且使得按照EN15662和EN12393方法检测的530项农残含量均小 于定量限。
【具体实施方式】
[0012] 下面通过具体的实施例说明本发明，下面的描述仅是为了使本领域的技术人员更 好地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
[0013] 实施例1 一种生产低农残高（-)-表儿茶素3-0-没食子酸酯含量的葡萄籽提取物的方法，包括 如下步骤： (1) 将葡萄籽，加入以去离子水饱和的正己烷中，葡萄籽和正己烷的质量（kg)体积比 (L)为1:3,然后加入氯化钠，氯化钠和正己烷的质量（kg)体积比（L)为1:200,搅拌洗脱30 分钟，过滤去掉正己烷； (2) 向葡萄籽中加入去离子水，葡萄籽和去离子水的质量（kg)体积比（L)为1:3,在 l〇〇°C提取40分钟，过滤，得葡萄籽粗提液； (3) 将所得提取液上混合树脂柱，混合树脂由质量比为1 :1的28号大孔树脂和30-60 目聚酰胺树脂的混合树脂组成，用4倍柱体积去离子水、1倍柱体积的体积百分浓度为20% 乙醇水溶液、2倍柱体积的体积百分浓度为40%乙醇水溶液、2倍柱体积的百分浓度为95% 乙醇水溶液进行洗脱，收集合并百分浓度为40%乙醇水溶液和95%乙醇水溶液洗脱液，减 压浓缩至糖度40%，喷雾干燥，即得葡萄籽提取物。（)-表儿茶素3-0-没食子酸酯含量 28. 9%，多酚含量92. 7%，使得按照EN15662和EN12393方法检测的530项农残含量均小于定 量限。
[0014] 实施例2 一种生产低农残高（-)-表儿茶素3-0-没食子酸酯含量的葡萄籽提取物的方法，包括 如下步骤： (1) 将葡萄籽，加入以去离子水饱和的正己烷中，葡萄籽和正己烷的质量（kg)体积比 (L)为1:3,然后加入氯化钠，氯化钠和正己烷的质量（kg)体积比（L)为1:200,搅拌洗脱30 分钟，过滤去掉正己烷； (2) 向葡萄籽中加入去离子水，葡萄籽和去离子水的质量（kg)体积比（L)为1:5,在 l〇〇°C提取40分钟，过滤，得葡萄籽粗提液； (3) 将所得提取液上混合树脂柱，混合树脂由质量比为1 :1的28号大孔树脂和30-60 目聚酰胺树脂的混合树脂组成，用8倍柱体积去离子水、1倍柱体积的体积百分浓度为20% 乙醇水溶液、2倍柱体积的体积百分浓度为40%乙醇水溶液、2倍柱体积的百分浓度为95% 乙醇水溶液进行洗脱，收集合并百分浓度为40%乙醇水溶液和95%乙醇水溶液洗脱液，减 压浓缩至糖度40%，喷雾干燥，即得葡萄籽提取物。（-)-表儿茶素3-0-没食子酸酯含量 31. 2%，多酚含量96. 3%，使得按照EN15662和EN12393方法检测的530项农残含量均小于定 量限。
[0015] 实施例3 一种生产低农残高（-)-表儿茶素3-0-没食子酸酯含量的葡萄籽提取物的方法，包括 如下步骤： (1) 将葡萄籽，加入以去离子水饱和的正己烷中，葡萄籽和正己烷的质量（kg)体积比 (L)为1:3,然后加入氯化钠，氯化钠和正己烷的质量（kg)体积比（L)为1:200,搅拌洗脱30 分钟，过滤去掉正己烷； (2) 向葡萄籽中加入去离子水，葡萄籽和去离子水的质量（kg)体积比（L)为1:4,在 l〇〇°C提取40分钟，过滤，得葡萄籽粗提液； (3) 将所得提取液上混合树脂柱，混合树脂由质量比为1 :1的28号大孔树脂和30-60 目聚酰胺树脂的混合树脂组成，用6倍柱体积去离子水、1倍柱体积的体积百分浓度为20% 乙醇水溶液、2倍柱体积的体积百分浓度为40%乙醇水溶液、2倍柱体积的百分浓度为95% 乙醇水溶液进行洗脱，收集合并百分浓度为40%乙醇水溶液和95%乙醇水溶液洗脱液，减 压浓缩至糖度40%，喷雾干燥，即得葡萄籽提取物。（-)-表儿茶素3-0-没食子酸酯含量 29. 5%，多酚含量94. 8%，使得按照EN15662和EN12393方法检测的530项农残含量均小于定 量限。
【主权项】
1. 一种生产低农残高（)-表儿茶素3-0-没食子酸酯含量的葡萄籽提取物的方法， 其特征是包括如下步骤： (1) 将葡萄籽，加入以去离子水饱和的正己烷中，葡萄籽和正己烷的质量（kg)体积比 (L)为1:3,然后加入氯化钠，氯化钠和正己烷的质量（kg)体积比（L)为1:200,搅拌洗脱30 分钟，过滤去掉正己烷； (2) 向葡萄籽中加入去离子水，葡萄籽和去离子水的质量（kg)体积比（L)为1:3~5， 在KKTC提取40分钟，过滤，得葡萄籽粗提液； (3) 将所得提取液上混合树脂柱，用4~8倍柱体积去离子水、1倍柱体积的体积百分 浓度为20%乙醇水溶液、2倍柱体积的体积百分浓度为40%乙醇水溶液、2倍柱体积的百分 浓度为95%乙醇水溶液进行洗脱，收集合并百分浓度为40%乙醇水溶液和95%乙醇水溶液 洗脱液，减压浓缩至糖度40%，喷雾干燥，即得葡萄籽提取物；所述混合树脂为聚酰胺树脂 与28号大孔树脂两种树脂按质量比1:1的混合。2. 根据权利要求1 一种生产低农残高（-)_表儿茶素3-0-没食子酸酯含量的葡萄籽 提取物的方法，其特征在于所述葡萄籽为未经任何方式粉碎或破碎的完整葡萄籽。
【专利摘要】本发明公开了一种从葡萄籽中提取低农残高(?)-表儿茶素3-O-没食子酸酯含量的葡萄籽提取物的方法，该方法包括如下步骤：（1）将未经粉碎的葡萄籽，投入正己烷中，加入氯化钠，搅拌；（2）放出正己烷，加去离子水，搅拌，加热提取；（3）提取液上大孔树脂和聚酰胺混合层析柱，并进行洗脱分离纯化。本发明提取的葡萄籽提取物为天然提取物，不仅多酚含量高，而且具有农药残留低、(?)-表儿茶素3-O-没食子酸酯含量高的特点，可以用于食品、保健品。
【IPC分类】A61K36/87
【公开号】CN105232803
【申请号】CN201510756610
【发明人】吴巍
【申请人】天津市尖峰天然产物研究开发有限公司
【公开日】2016年1月13日
【申请日】2015年11月10日