一种东革阿里提取物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种东哥阿里提取物的制备方法，本发明同时涉及该提取物在抗肿瘤 和抗炎功效方面的应用，属保健食品与生物医药领域。 技术背景
[0002] 东革阿里（Eurycomalongifolia)是生长在东南亚一带的一种灌木植物，主 产于马来西亚（称为TongkatAli)。在东南亚，东革阿里主要以根入药，长期以来都 作为能量滋补药、退热药、催情药和蛇毒解药等药物使用，被誉为马来参、天然伟哥。现 代研究表明，东革阿里具有改善男性性功能障碍抗疟疾、抗糖尿病、抗癌和退热等功效， 其主要活性成分为苦木素（quassinoid)类二萜，此外还含有生物碱、木脂素、三萜等类 成分[(1)RajeevBhat.TongkatAli(EurycomalongifoliaJack)：Areviewonits ethnobotanyandpharmacologicalimportance，Fitoterapia，2010,81 :669-679 ; (2) LeeSuanChua，LC-MS/MS-basedmetabolitesofEurycomalongifolia(TongkatAli)in Malaysia(PerakandPahang).JournalofChromatographyB,2011,879 :3909-3919]〇
[0003] 现有的东革阿里提取物市售品一般为水提物，其中指标成分东革阿里酮 (eurycomanone)含量约为1-3%，但其有效成分含量低，服用剂量相对较大。Kit-LamChan 等报道，东革阿里根采用甲醇60度浸提5天，提取液浓缩后再采用DiaionHP20树脂经 甲醇-水梯度洗脱，精制获得的苦木素类组分F2中含有东革酮（7. 16-7. 34% )、东革醇 (5.0-5.31% )、东革醇苷（9.08-9.70% )，以及 13α，21-环氧东革酮（L44-L75 % )、 13α，21-二氢东革酮（0.45-0.51% )等主成分[Kit-LamChan，Developingavalidated liquidchromatography-massspectrometricmethodforthesimultaneousanalysis offivebioactivequassinoidmarkersforthestandardizationofmanufactured batchesofEurycomalongifoliaJackextractasantimalarialmedicaments.Journal ofChromatographyA，2011，1218 ; 1861-1877]。该工艺可获得富含高纯度苦木素的东革阿 里提取物，但选用甲醇有机溶剂浸提，与传统使用的水提物在物质组成方面有一定差异，并 存在生产周期长、效率低等不足之处。为此，本发明拟对东革阿里提取物的有效成分进行研 究，并在此基础上建立一种生产工艺可行、质量可控的先进制备工艺。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种生产工艺和质量可控的东革阿里提取物。
[0005] 本发明提供的东革阿里提取物由以下步骤制备获得：
[0006] (1)选取东革阿里根药材，采用水进行提取，提取液合并，得东革阿里提取液；
[0007] (2)由（1)所得东革阿里提取液，上大孔树脂柱进行吸附，先用水洗脱，再用 20-50%乙醇洗脱，收集20-50%乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即得。
[0008] 所述工艺步骤（1)选用东革阿里根，并可根据需要适当切片；所述水提取温度为 60-100度，用量为原药材的20-60倍，提取方式为回流提取或渗漉提取，提取时间为每次 1-8小时，共提取2-3次。提取液可根据需要进行适当浓缩，优选方式为不进行浓缩。
[0009] 所述工艺步骤（2)中所述大孔树脂优选弱极性苯乙烯型大孔树脂；洗脱时先用水 洗脱除去杂质，再用20-50%乙醇洗脱，其中优选米用30-40%乙醇进彳丁洗脱。
[0010]采用HPLC分析，所述东革阿里提取物中含有东革酮、东革醇、东革醇苷、13β，21-二羟基东革酮和14,15β-二羟基克莱尼酮等五种主要苦木素类成分。其中，东革酮、 东革醇、东革醇苷三种成分含量总和大于20% ; 13β，21-二羟基东革酮含量大于1%，14， 15β-二羟基克莱尼酮含量大于1 %。此外，进一步分离鉴定研究结果表明，所述东革阿里 提取物中还含有13α，21-二氢东革酮、13β，21-二羟基东革醇、龙革内酯、Δ4'5,14-羟基 乐园树醇、A4'16,6α-羟基异东革内酯Ε、13β，18-二氢东革醇等六种成分。
[0011] 本发明进一步公布一种高纯度东革阿里提取物的制备方法，特征在于所述工艺 步骤（2)中东革阿里提取物进一步用10-15%甲醇溶解，上样于反相碳十八柱，依次用 10-15%、40-60%甲醇洗脱，收集40-60%甲醇洗脱液，浓缩，干燥，即得。所述高纯度东革阿 里提取物中，东革阿里酮、东革阿里醇、东革阿里醇苷三种成分含量大于40 %，13β，21-二 羟基东革阿里酮含量大于2%，14,15β-二羟基克莱尼酮含量大于2%。
[0012] 本发明遵循东革阿里水提取物传统使用工艺，并选用大孔树脂工艺对其苦木素类 组分进行精制。研制过程中发现，该类组分水溶性强，在树脂工艺精制中优选低浓度乙醇洗 脱，可以除去主要的低级性杂质，提高产品纯度。在此基础上，选用水提取液直接通过大孔 树脂柱吸附，从而避免了提取液浓缩工序带来的高能耗、有效成分降解、含量降低等不利因 素。通过反相硅胶柱层析等系统分离纯化实验研究，证实本发明工艺获得的东革阿里提取 物中含有东革酮、东革醇、东革醇苷、13β，21-二羟基东革酮和14,15β-二羟基克莱尼酮 等五种主要苦木素类成分，其中13β，21-二羟基东革酮和14,15β-二羟基克莱尼酮仅在 本发明提取物中发现含量较高（大于1% )，同时本发明提取物中还含有13α，21-二氢东 革酮等六种成分。需要指出，本发明所述东革阿里提取物中未发现13α，21_环氧东革酮， 该成分在东革阿里甲醇提取物中含量较高。这些成分差异表明，不同提取溶剂和工艺对终 产品的成分组成有显著影响。综上所述，本发明所述制备工艺完整保留了东革阿里水提物 中的苦木素类有效成分，并具有生产工艺简洁、产品质量可控等显著优点。
[0013] 本发明同时对所述东革阿里提取物（ELQE)的抗肿瘤和抗炎作用进行了考察。研 究结果表明，东革阿里提取物中含有α，β不饱和烯酮结构的苦木素类化合物如东革酮、 13β，21-二羟基东革酮、14,15β-二羟基克莱尼酮等对Α549人非小细胞肺癌细胞等5种 人肿瘤细胞株均有显著抑制作用；ELQE(100、200mg/kg)对二甲苯所致小鼠耳廓急性炎症 有显著抑制作用。结果表明所述东革阿里提取物具有明确的抗肿瘤、抗炎等作用，因而可以 应用于具有抗肿瘤和抗炎功能的相关药物或保健食品中。
[0014] 本
【发明内容】
通过大量实验研究和工艺优化分析完成，并对提取物中主要苦木素类 活性成分进行了分离纯化和结构鉴定和定量分析。所述东革阿里提取物具有有效成分含量 高、制备工艺容易产业化、产品质量可控等显著优势。以下述具体实施例进行说明。
【附图说明】
[0015]附图为实施例1中东革阿里提取物的液相色谱图。图中，色谱峰1-5依次为13β， 21-二羟基东革酮（1)、东革酮（2)、东革醇苷（3)、东革醇（4)和14,15β-二羟基克莱尼酮 (5)。
【具体实施方式】
[0016] 本发明所述的东革阿里提取物是按以下实施例所表示的方法制造，所涉及到的方 法是本领域的技术人员能够掌握和运用的技术手段。但以下实施例不得理解为任何意义上 的对本领域发明权利要求的限制。
[0017] 实施例1 :东革阿里提取物的制备
[0018] 东革阿里根于2014年购自马来西亚（批次EL20141001)，经鉴定为东革阿里 (EurycomalongifoliaJack)干燥根。
[0019] 东革阿里提取物的制备：
[0020] (1)称取15kg东革阿里根药材，切片，加入20倍量水回流提取2次，每次提取时间 2h，提取液合并，过滤，得东革阿里提取液；
[0021] (2)由（1)所得东革阿里提取液，上AB-8型大孔树脂（柱体积20L/BV)，依次 用5BV水、4BV30%乙醇洗脱，收集30%乙醇洗脱液，减压浓缩、干燥，得东革阿里提取物 (CLQE)120g〇
[0022] 含量测定：采用Agilent1260InfinitySeries高效液相色谱仪，ELSD检测器； 色谱柱为CosmosilAR-II-C1S(4. 6mmX250mm，5ym);流动相为水（A)-甲醇⑶，梯度洗脱 (0 ~20min，20%B- 40%B;20 ~25min，40%B- 95%B);流速lmL.min\柱温 35Γ。 采用外标两点法，测得CLQE样品中主要成分1-5的含量依次为13β，21-二羟基东革酮 (1.47% )、东革酮（14.49% )、东革醇苷（5.98% )、东革醇（17.06% )、14,15β-二羟基克 莱尼酮（1.74% )。
[0023] CLQE的HPLC色谱图参见附图。
[0024] 实施例2 :东革阿里提取物的制备
[0025] 选用药材来源同实施例1。东革阿里提取物的制备：
[0026] (1)称取15kg东革阿里根药材，切片，分别加入20、20、15倍量水于60度提取3 次，每次提取时间8h，提取液合并，过滤，得东革阿里提取液；
[0027](2)由（1)所得东革阿里提取液，上HPD-450型大孔树脂（柱体积20L/BV)，依次 用5BV水、3BV50%乙醇洗脱，收集50%乙醇洗脱液，减压浓缩、干燥，得东革阿里提取物 155g〇
[0028] 含量测定：采用实施例1方法，测得本批次东革阿里提取物样品中主要成分1-5的 含量依次为13β，21-二羟基东革酮（1.14%)、东革酮（13. 05%)、东革醇苷（4. 53%)、东 革醇（13. 18% )、14,15β-二羟基克莱尼酮（1. 32% )。
[0029] 实施例3 :东革阿里提取物的制备
[0030] 高纯度东革阿里提取物的制备：选取实施例1中CLQE样品10g，用10%甲醇50ml 溶解，上DaisogelRP-18柱（40-60μπι，柱体积500ml)，用10%甲醇