和海藻糖溶液时，需要用无菌微孔滤器过滤，保存于4°C。糖液与母 液按1:100混合，新鲜配制的缓冲液，使用前室溫下通空气15-20min，储存不超过12h。
[0041 ] 2.3.2.果蛹成体屯、脏解剖
[0042] Fly化P麻搏果蛹2-5min，将麻醉的果蛹背部朝下，粘贴在有一层凡±林的培养皿 中，翅膀分开同时也固定在培养皿中。微型手术剪从果蛹腿下穿过，斜着剪下去，去除头、脚 和腹神经索。然后加入人造缓冲液，浸没果蛹。去除腹体节A7-8,随后沿侧面将腹部的表皮 剪开。綴子去除腹部表皮W及与其相连的内脏。用拉好的毛细管与真空累相连吸取去除脂 肪组织。屯、脏被暴露出来，并且跳动，重新换上新鲜的人造缓冲液。
[0043] 2.3.3果蛹活体屯、脏拍摄和数据分析
[0044] 高速EM-CCD摄像机拍摄连续1500张图片生成果蛹屯、跳视频，使用Image-J软件分 析果蛹屯、跳产生M-mode图，计算屯、动周期（Heart Period，HP)，收缩间期（Systol ic Interval，SI)和舒张间期（Diastolic Interval，DI)时长，屯、管侧向舒张直径(Diastolic Diameter，DD)、收缩直径（Systol ic Diameter，SD)及收缩幅度百分比（Fractional 8}1〇的611^肖术5=(舒张直径-收缩直径)/舒张直径，代表着屯、脏每次收缩时的射血体积）， W及屯、律不齐指数(Arrhythmia Index，AI每只果蛹屯、动周期标准差比均值，即每个果蛹屯、 脏中每个屯、跳周期与整个屯、脏周期中值的差异大小，代表着果蛹的不规律屯、跳）。
[0045] 2.4定量?〔1?检测果蛹屯、管4669、969。4 1111?酷表达量
[0046] 随机每组20只果蛹解剖后取屯、管组织，样品总RNA提取采用化izol提取方法。通过 A260/A280测定RNA浓度和纯度，取总RNA lyg逆转录成cDNA。采用SYBR巧光法进行检测。PCR 结果用内参基因巧49进行校准，方法进行相对定量，对照组的基因表达设定为1，其 他组的基因表达进行相应的转换。
[0047] 2.5统计学方法
[004引所有数据由GraphPad Prism 5.0软件计算完成。多组均数间的比较采用单因素方 差分析(0肥-WAY AN0VA)Turk巧法进行各组均数的比较。统计学分析结果冲<0.05;*冲< 0.01;** 冲 <0.001。
[0049] 蛹果
[0050] 3.1金巧降糖片对高脂饮食果蛹甘油Ξ醋及海藻糖含量的影响
[0051] 10 %高脂饮食2周后WD组果蛹平均海藻糖和甘油Ξ醋含量较正常饮食的果蛹NCD 组均明显升高(P<〇.05) ;1%金巧降糖片给药治疗2周后果蛹1%JQ组海藻糖较高脂组含量 有所下降(P<〇.05)，甘油Ξ醋含量明显下降(P<0.01)，几乎达到正常水平。见图1。
[0化2]
[0053] 3.2金巧降糖片对高脂饮食果蛹屯、功能的影响
[0054] 10%高脂饮食2周后果蛹收缩直径与舒张直径均变长(P<0.01 ;P<0.01)，收缩幅 度百分比减小（P<〇.〇5)，收缩间期、舒张间期、屯、动周期延长（P<0.05;P<0.05;P< 0.05)，屯、律不齐指数变大(p<0.05) ;1%金巧降糖片给药治疗2周后收缩直径、舒张直径减 小(P<0.05;P<0.001)，收缩幅度百分比增加(P<0.001)，收缩间期、舒张间期、屯、动周期 缩短。<0.01;口<0.05;口<0.01)，屯、率不齐指数变小化<0.05)。见图2。
[0化5]
[0化6]
[0化7] 3.3金巧降糖片对高脂饮食果蛹屯、管4669、969。4 1111?^4表达量的影响 [0化引10%高脂饮食2周后果蛹屯、管pepck mRNA含量明显升高(P<0.001)，提示糖异生 增加，金巧降糖片给药治疗后pepck mRNA含量与高脂组比明显下降(P<0.001)，提示糖异 生得到抑制；而高脂组较正常饮食组4ebp mRNA表达量明显下降（P<0.05)，提示屯、脏保护 作用下降，给药后4ebp mRNA表达量明显上升(P<0.01)。见图3。
[0059] 3.4金巧降糖片对高脂饮食果蛹4EBP蛋白憐酸化的影响
[0060] 10%高脂饮食2周后Η抑组果蛹4EBP蛋白憐酸化较正常饮食组明显升高，而金巧降 糖片给药治疗后4ΕΒΡ蛋白憐酸化明显下降。见图4。
[0061] 基于上述发现，本发明现已完成。为了便于理解，下面通过附图和具体实施例对本 发明的金巧降糖片在治疗糖尿病屯、肌病中的用途进行详细的描述。需要特别指出的是，具 体实施例和附图仅是为了说明，显然本领域的技术人员可W根据本文说明，对本发明进行 各种修正或改变，运些修正和改变也将纳入本发明范围之内。
【具体实施方式】
[0062] 实施例1
[0063] 金巧降糖片在制备治疗糖尿病屯、血管并发症的组合物的应用，金巧降糖片由黄连 10.3重量份黄巧15.4重量份金银花61.8重量份制成。
[0064] 实施例2
[0065] 金巧降糖片在制备治疗糖尿病屯、血管并发症的组合物的应用，用于治疗糖尿病并 发屯、衰。金巧降糖片由黄连10.3重量份黄巧15.4重量份金银花61.8重量份制成。
[0066] 实施例3
[0067] 金巧降糖片在制备治疗糖尿病屯、血管并发症的组合物的应用，用于治疗高脂饮食 引起的糖脂代谢素乱。金巧降糖片由黄连10.3重量份黄巧15.4重量份金银花61.8重量份 制成。
[0068] 实施例4
[0069] 金巧降糖片在制备治疗糖尿病屯、血管并发症的组合物的应用，用于治疗屯、功能损 伤。金巧降糖片由黄连10.3重量份黄巧15.4重量份金银花61.8重量份制成。
[0070] 实施例5
[0071] 金巧降糖片由黄连10.3重量份黄巧15.4重量份金银花61.8重量份制成，其具体 方法如下：
[0072] 黄连加70%乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度 为1.15~1.20(60°C )的浸膏，用盐酸调节PH值至1~2，加氯化钢适量，静置12小时，滤过，沉 淀加水适量，用20 %氨氧化钢调节PH值至6~7，揽拌使溶解，滤过，取沉淀减压干燥粉碎备 用；
[0073] 黄巧加80%乙醇回流提取Ξ次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度 为1.25~1.30(60°C)的浸膏，减压干燥粉碎备用；
[0074] 金银花加水溫浸二次，每次1小时，合并提取液，滤过，减压浓缩至相对密度为1.17 ~1.22(60°C)的浸膏，待溫度降至40°C时，揽拌下缓慢加入乙醇，使含醇量达70%，静置24 小时，滤过，减压浓缩至相对密度为1.22~1.28(60°C)的浸膏，减压干燥粉碎备用。
[0075] 取上述Ξ种粉末，加入辅料适量，制成颗粒，压制成1000片，包薄膜衣，即得金巧降 糖片。
【主权项】
1. 金芪降糖片在制备治疗糖尿病心血管并发症的组合物的应用， 金芪降糖片由黄连10.3重量份黄芪15.4重量份金银花61.8重量份制成。2. 根据权利要求1中的组合物，其特征为:用于治疗糖尿病并发心衰。3. 根据权利要求1中的组合物，其特征为:用于治疗高脂饮食引起的糖脂代谢紊乱。4. 根据权利要求1中的组合物，其特征为:用于治疗心功能损伤。
【专利摘要】本发明涉及金芪降糖片在制备治疗糖尿病心血管并发症的组合物的应用，金芪降糖片以黄连、黄芪、金银花为原料制备。
【IPC分类】A61P9/04, A61P9/00, A61K36/718, A61K9/30, A61P3/06, A61P3/10, A61P9/14
【公开号】CN105596458
【申请号】CN201610157035
【发明人】徐晓军, 赵有红, 卢翀
【申请人】中国药科大学
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2016年3月16日