一种改良伸直位固定法制作兔骨关节炎模型的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于骨关节炎技术领域，尤其设及一种改良伸直位固定法制作兔骨关节炎 模型的方法。
【背景技术】
[0002] 骨关节炎是(Osteoarthritis, OA)是由多种原因所致的慢性退行性关节病变。目 前临床上尚缺乏有效的根治措施，通过建立OA动物模型来深入探讨其病理机制并寻找合理 有效的治疗手段是研究OA的重要方法。关节制动法可用于制作OA模型，W管型石膏过伸位 固定膝关节的方法最为常见。但研究表明，此方法石膏末端哨隧情况严重，导致造模过程中 多次拆除石膏、重新固定，导致试验繁琐并影响造模成功率。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种改良伸直位固定法制作兔骨关节炎模型的方法，旨在 解决现有的石膏末端哨隧情况严重，导致造模过程中多次拆除石膏、重新固定，导致试验繁 琐并影响造模成功率的问题。
[0004] 本发明是运样实现的，一种改良伸直位固定法制作兔骨关节炎模型的方法，该改 良伸直位固定法制作兔骨关节炎模型的方法石膏干硬前在石膏外W环绕方式缠 W细铁丝， 铁丝圈间距3~5mm;
[0005] 具体包括:适应性喂养1周后，将兔毛剪短至0.5cm，左后肢膝关节完全屈曲，用管 型石膏固定于过屈位，长度从髓关节远端2cm至踩关节上缘2cm，石膏干硬前在石膏外W环 绕方式缠 W细铁丝，铁丝圈间距3~5mm，待石膏干硬后，再将兔放回兔笼，造模过程中观察 家兔状态、双腿活动情况、造模肢体改变，发现有肢端明显肿胀、张力性水泡或溃烂感染及 石膏松脱、咬损严重现象，则立即卸掉重打，固定7周成模。
[0006] 进一步，该改良伸直位固定法制作兔骨关节炎模型的方法还包括:影像学检查，于 第7周末行左膝关节正位片DR摄影;具体方法:OA组提前拆卸石膏；拍摄时W黑色布袋套住 动物头部，将左下肢伸直后安抚动物，快速进行DR摄影;按X线Kel Igren-Lawrence分级标准 进行分级。
[0007] 进一步，该改良伸直位固定法制作兔骨关节炎模型的方法还包括:取材；
[000引于DR摄影后处死全部动物；处死及取材方法:3%戊己比妥钢按30mg/kg耳缘静脉 注射麻醉动物，打开左膝关节腔，切断交叉初带，肉眼观察并记录关节软骨整体变化情况， 并着重观察股骨内裸、股骨外裸，并进行分级。
[0009] 进一步，该改良伸直位固定法制作兔骨关节炎模型的方法还包括:病理学检查软 骨组织制作蜡块、切片，经梯度酒精、二甲苯脱水、透明，进行皿染色和甲苯胺蓝染色，采用 Mankin骨关节炎评分法对软骨标本进行评分；
[0010] 本发明提供的改良伸直位固定法制作兔骨关节炎模型的方法，采用伸直位固定法 制作兔OA模型，从影像学、大体形态学及病理学等方面对OA进行了鉴定及评估，本发明的兔 OA模型中X线检查发现了与人OA类似的病变，骨寶形成、关节间隙狭窄，从影像学上证实兔 OA模型的制备成功;兔OA模型软骨呈现灰黄色，表面粗糖不平甚至可见局部糜烂，证实了 OA 软骨的破坏;软骨采用甲苯胺蓝染色可出现基质异染性，主要是由于硫酸软骨素的存在，而 实验中OA软骨出现明显的失染现象，提示硫酸软骨素的丢失，运与人OA软骨基质的丢失相 符;实验中兔OA软骨细胞变形，排列素乱，潮线中断或消失，均提示软骨细胞的退化，符合人 OA的特点;软骨细胞调亡是OA发病机制中的重要环节。
【附图说明】
[0011] 图1是本发明实施例提供的改良伸直位固定法制作兔骨关节炎模型的方法流程 图；
[0012] 图2是本发明实施例提供的对照组及OA组膝关节影像学特点示意图；
[001引图中：（a化常对照组膝关节D姻像，关节面光滑，关节间隙正常(K-L分级0级）；
[0014] (b)0A模型组膝关节DR图像，可见关节骨寶形成，关节间隙变窄化-L分级3级）；
[0015] 图3是本发明实施例提供的兔膝关节软骨大体观察及大体形态学评分示意图；
[0016] 图中：（a)为正常对照组:软骨表面光滑，色泽光亮(大体形态学评分0分）；
[0017] (b)为OA模型组:滑膜增厚，软骨表面粗糖、欠光滑，局部出现轻度糜烂，病变W内 侧裸为重(大体形态学评分2分）；
[0018] 图4是本发明实施例提供的兔膝关节软骨病理学特点（甲苯胺蓝染色，X200倍)示 意图；
[0019] 图中；（a)关节面平整，潮线完整，细胞形态正常、排列整齐，基质均匀(简单病理分 级:〇级）；
[0020] (b)破坏只在表层，软骨表面粗糖断裂，潮线改变，细胞排列素乱，出现细胞聚集现 象(简单病理分级:2级）；
[0021] (C)破坏只在中层，软骨表面粗糖断裂，潮线改变，细胞排列素乱，出现细胞聚集现 象(简单病理分级:2级）；
[0022] (d)和(e)破坏到达软骨深层，潮线完全消失，细胞大量聚集，排列素乱(简单病理 分级:3级）；
[0023] (f)破坏到达软骨深层，潮线完全消失，细胞变形、大量聚集、排列素乱，软骨基质 明显失染(简单病理分级:4级）。
【具体实施方式】
[0024] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，W下结合实施例，对本发明 进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用W解释本发明，并不用于 限定本发明。
[0025] 下面结合附图及具体实施例对本发明的应用原理作进一步描述。
[0026] 如图1所示，本发明实施例的改良伸直位固定法制作兔骨关节炎模型的方法包括 W下步骤：
[0027] SlOl:将兔毛剪短至0.5cm左右，左后肢膝关节完全屈曲，用管型石膏将其固定于 过屈位，长度从髓关节远端约2cm至踩关节上缘2cm;
[002引S102:石膏干硬前在石膏外W环绕方式缠 W细铁丝，铁丝圈间距3~5mm;待石膏干 硬后，再将兔放回兔笼；
[0029] S103:造模过程中观察家兔一般状态、双腿活动情况、造模肢体改变等;若发现有 肢端明显肿胀、张力性水泡或溃烂感染及石膏松脱、咬损严重等现象，则立即卸掉重打；固 定7周成模。
[0030] 本发明的具体实施例：
[0031] 1材料与方法
[0032] 1.1实验动物及试剂，6月龄健康普通级新西兰大耳兔16只，雄性，体重2~2.化g， 复合饲料喂养；
[0033] 1.2 造模
[0034] 适应性喂养1周后随机分为OA组(8只）和正常对照组(8只），正常对照组不做处理； OA组进行改良造模，具体方法如下:将兔毛剪短至0.5cm左右，左后肢膝关节完全屈曲，用管 型石膏将其固定于过屈位，长度从髓关节远端约2cm至踩关节上缘2cm，石膏干硬前在石膏 外W环绕方式缠 W细铁丝，铁丝圈间距3~5mm;待石膏干硬后，再将兔放回兔笼;造模过程 中观察家兔一般状态、双腿活动情况、造模肢体改变等;若发现有肢端明显肿胀、张力性水 泡或溃烂感染及石膏松脱、咬损严重等现象，则立即卸掉重打；固定7周成模；
[0035] 1.3影像学检查
[0036] 于第7周末行左膝关节正位片DR摄影;具体方法:OA组提前拆卸石膏；拍摄时W黑 色布袋套住动物头部，将左下肢伸直后安抚动物，快速进行DR摄影；按X线Kellgren-Lawrence分级标准(简称K-L分级)进行分级：
[0037] 1.4 取材
[003引于DR摄影后处死全部动物；处死及取材方法:3%戊己比妥钢按30mg/kg耳缘静脉 注射麻醉动物，打开左膝关节腔，切断交叉初带，肉眼观察并记录关节软骨整体变化情况， 并着重观察股骨内裸、股骨外裸，并进行分级：0分:关节面光整，色泽如常；1分:关节面粗 糖，有小的裂隙且色泽灰暗；2分:关节面糜烂，软骨缺损深达软骨表中层;3分:关节面溃瘍 形成，缺损深达软骨深层;4分:软骨剥脱，软骨下骨质暴露;生理盐水冲洗膝关节腔，取股骨 内侧