一种鸡六价铬解毒剂的制作方法
【专利摘要】本发明涉及畜禽免疫技术领域，具体公开了一种鸡六价铬解毒剂，所述的解毒剂为含硒化合物，其中硒元素用量为0.143mg/kg?0.571mg/kg，所述的硒元素可来源于各种硒的化合物，尤其是Na2SeO3或C5H11NO2Se，使用时将其直接按计量添加入鸡饮用水中即可；采用本发明提供的这种解毒剂，作为天然解毒剂，带负电荷的非金属硒离子与带正电的六价铬离子，发生拮抗反应，形成硒铬复合物，消除了六价铬的毒害作用。同时,硒祛除体内多余的六价铬，限制自由基活动，影响减少了MDA含量，恢复组织中抗氧化酶的活性，可以保护鸡的肝、肾、脑免受六价铬毒性影响。
【专利说明】
_种鸡六价絡解毒剂
技术领域
[0001] 本发明属于畜禽免疫技术领域，具体公开了一种鸡六价铬解毒剂。
【背景技术】
[0002] 随着我国畜牧业生产向集约化和产业化发展，动物中毒病已成为威胁动物健康的 主要疾病之一，不仅给养殖业造成巨大的经济损失，而且还会直接影响动物源性食品的质 量和安全。近年来，随着对动物体内微量元素的深入研究，铬元素正在成为研究的热点。铬 广泛存在与动物源性饲料中，大量研究结果表明，铬作为人和动物所必需的微量元素，适量 的摄入络，可增强动物抗应激能力，提尚动物的生长性能，提尚免疫机能。然而，络(VI)则是 确定的有毒元素，摄入过量会产生直接或间接的毒性作用。肝和肾是铬(VI)分布和排泄的 重要组织器官，同时也是铬(VI)毒性作用的主要靶器官。铬(VI)的急性和亚慢性中毒均会 导致机体的肝肾出现病理损伤且随染毒时间的延长，血清中某些酶类水平发生改变。同时 脑也会受到严重的毒性损害。
[0003] 硒，初始被看做是砷、汞一类的剧毒物质，仅限于对其毒理的认识。20世纪中期人 们才发现硒的营养价值与解毒价值，硒迅速成为研究的热点。随后发现硒是动物体内谷胱 甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的必需组分，从此开始正确认识硒的生物化学作用。某些研究表 明，硒能够提高动物体抗氧化能力。动物在生长发育过程中，不可避免地遭遇周围环境中的 不利因素侵害，从而激发自身体内的免疫系统，硒在一定程度上可以提高能够清除自由基 的GSH-Px和S0D活性，并阻止自由基指示物MDA水平的提高，从而减少机体细胞受自由基的 攻击程度，增强机体清除氧自由基和不饱和氢过氧化物的能力，帮助动物机体提高抗应激 能力，保护生物膜的结构与功能。而且，硒对维持动物免疫系统的正常运转必不可少，能够 提高机体的免疫地位和抗炎功能。硒对禽畜的生产性能、生长发育和繁殖功能也有重要影 响。至今，硒的生物化学特性仍在不断挖掘中，但是现有技术中缺乏硒元素对铬(VI)是否具 有解毒作用的技术启示，也没有对应的文献公开这一内容。
【发明内容】
[0004] 基于上述理由，本发明提供了一种鸡六价铬解毒剂，所述的解毒剂为含硒化合物， 其中硒元素用量为0.143mg/kg-0.571mg/kg，所述的硒元素可来源于各种硒的化合物，尤其 是Na 2Se〇^C5HnN02S e，使用时将其直接按计量添加入鸡饮用水中即可;采用本发明提供的 这种解毒剂，作为天然解毒剂，带负电荷的非金属硒离子与带正电的六价铬离子，发生拮抗 反应，形成硒铬复合物，消除了六价铬的毒害作用，硒减少了 MDA含量，恢复组织中抗氧化酶 的活性，可以保护鸡的肝、肾、脑免受六价铬毒性影响。
[0005] 本发明的具体技术方案如下：
[0006] 一种鸡六价铬解毒剂，所述的解毒剂为含硒化合物，其中硒元素用量为〇.143mg/ kg-〇. 571mg/kg，所述的硒元素来源于 Na2Se〇3 或 C5HnN〇2Se。
[0007]更进一步的，发明人将所述硒元素用量优化为0.285mg/kg。
[0008] 更好的，所述的硒元素来源于Na2Se〇3。
[0009] 发明人经过长期研究后发现在饮水中添加六价铬能造成鸡中毒，导致肝、肾、脑损 伤:在饮水中添加22.14mg/l^^K2Cr 2〇7(Cr(VI)，7.832mg/kg)，鸡的肝脏、肾脏和脑的生长 发育受阻，肝脏、肾脏、脑组织受到不同程度的损伤。S0D和Ca 2+-ATPase的活性下降，GSH含量 减少，MDA的含量增加，线粒体膜电位下降。
[0010] 而当饮水中含Cr(VI)的同时添加本发明所提供剂量的硒元素时，即添加0.143mg/ kg-0.571mg/kg的Se元素，能修复Cr( VI)造成的肝、肾、脑组织损伤。SOD和Ca2+-ATPase的活 性升高，GSH含量增加，MDA的含量下降，线粒体膜电位升高。尤其当添加0.285mg/kg的Se时 解毒效果最好，各检测指标数据接近空白对照组，由此发明人进一步确定了 Se元素的最佳 解毒剂量为〇.285mg/kg。
[0011 ] 而当饮水中含Cr (VI)的同时添加高剂量即添加1 · 142mg/kg，2 · 283mg/kg的Se元素 能加重Cr(VI)造成的肝、肾、脑组织损伤，生长发育严重受阻，因此最终确定硒元素用量为 0·143mg/kg-〇·571mg/kg。
[0012] 鸡如果摄入含有六价铬的水，体内会产生自由基和过氧化产物，促使细胞死亡，导 致鸡的生长发育受阻；同时肝、肾、脑中铬元素含量增多，会导致肝肾脑受到不同程度的损 伤。本发明的发明人正是为了解决该问题而进行了研究，提出了采用补充硒元素的方式，结 果如下：
[0013] ①在饮水中同时补充硒，可以与六价铬产生拮抗作用，祛除鸡体内多余的六价铬， 铬元素的含量与六价铬单独攻毒组相比明显下降，使铬元素的含量接近正常值，从而限制 自由基活动，减缓重金属络对机体的危害；
[0014]②硒作为带负电荷的非金属尚子，与金属有很强的未和力，在饮水中同时补充硒， 可以与六价铬离子结合，形成硒铬复合物，从而将有毒物质直接排出体外，起到解毒作用， 而这与现有技术中的金属-硒-蛋白质复合物完全不同，属于全新的解毒理论和方法；
[0015] ③此外，硒是动物和人体中谷胱甘肽过氧化物酶和硒-P蛋白的重要组成部分，在 体内起着平衡氧化还原氛围的作用，补充硒元素，S0D、Ca-ATP酶的活性显著增强，GSH含量 增加，抑制自由基的产生和脂质过氧化反应的发生，保护生物膜免受损伤，维持线粒体膜电 位的稳定；
[0016] 因此补充硒元素后，即使体内依然含有六价铬，但各个指标已接近正常值，可见本 发明提供的技术方案对六价铬具有明显的解毒功效。
[0017] 综上所述，采用本发明提供的这种解毒剂，作为天然解毒剂，带负电荷的非金属硒 离子与带正电的六价铬离子，发生拮抗反应，形成硒铬复合物，消除了六价铬的毒害作用， 硒减少了 MDA含量，恢复组织中抗氧化酶的活性，可以保护鸡的肝、肾、脑免受六价铬毒性影 响。
【附图说明】
[0018] 图1为实验42天肝脏线粒体膜电位变化结果示意灰度图，
[0019] 图中A为空白组;B为7.832mg/kg Cr(VI)中毒组;C为0.143mg/kg Se添加组;D为 0.285mg/kg Se添加组;E为0.571mg/kg Se添加组;F为 1.142mg/kg Se添加组;G为2.283mg/ kg Se添加组，红色荧光表示线粒体膜电位正常，绿色荧光表示线粒体膜电位下降，图中柱 状图内标注不同字母表示差异(P〈〇. 05);
[0020]图2为实验42天肾脏线粒体膜电位变化结果示意灰度图，
[0021] 图中A为空白组;B为7.832mg/kg Cr(VI)中毒组;C为0.143mg/kg Se添加组;D为 0.285mg/kg Se添加组;E为0.571mg/kg Se添加组;F为 1.142mg/kg Se添加组;G为2.283mg/ kg Se添加组，红色荧光表示线粒体膜电位正常，绿色荧光表示线粒体膜电位下降，图中柱 状图内标注不同字母表示差异显著(P〈〇.05);
[0022]图3为实验42天脑的线粒体膜电位变化结果示意灰度图，
[0023] 图中A为空白组;B为7.832mg/kg Cr(VI)中毒组；C为0.143mg/kg Se添加组；D为 0.285mg/kg Se添加组;E为0.571mg/kg Se添加组;F为 1.142mg/kg Se添加组;G为2.283mg/ kg Se添加组，红色荧光表示线粒体膜电位正常，蓝色荧光表示线粒体膜电位下降；
[0024]图4为鸡肝脏的病理组织切片灰度图（400x)，
[0025] 图中A为空白组;B为Cr(VI)中毒组;C为0.285mg/kg Se添加组;D为1.142mg/kg Se 添加组；
[0026]图5为鸡肾脏的组织病理损伤组织切片灰度图（200X )，
[0027] 图中A为0 · 285mg/kg Se添加组;B为Cr (VI)中毒组;C为空白对照组;D为1 · 142mg/ kg Se添加组；
[0028]图6为鸡脑组织病理切片灰度图；
[0029] 图中A为对照组鸡大脑组织(200x);B、C为中毒组(400x);D为0.285mg/kg Se添加 组(400x)〇
【具体实施方式】
[0030] 设计K2Cr2〇7急性试验，通过查询相关资料，确定急性试验的分为6组，每组5只鸡， 各组浓度分别为 46 · 4mg/kg，100mg/kg，215mg/kg，464mg/kg，1000mg/kg，2150mg/kg;
[0031] 根据Horn表计算K2Cr2〇7对鸡的LD5Q为369mg/kg，确定实验K 2Cr2〇7溶液的剂量为6% LD50,即22.14mg/kg，含Cr(VI)，7.832mg/kg〇
[0032] Na2Se03对鸡的安全剂量为0~5mg/kg，设计实验中Na2Se0 3的解毒剂量:0.3125mg/ kg，0 · 625mg/kg，1 · 25mg/kg，2 · 5mg/kg，5mg/kg。测得各组 Se 元素的解毒剂量：0 · 143mg/kg， 0 · 285mg/kg，0 · 571mg/kg，1 · 142mg/kg，2 · 283mg/kg。实验共 7组，每组15 只鸡。
[0033] 正式试验：
[0034]空白组(蒸馏水）
[0035] 染毒组：Cr(VI)，7.832mg/kg;
[0036] 解毒组:5组，分别为
[0037] Cr(VI)+Se(0.143mg/kg)；
[0038] Cr( VI)+Se(0.285mg/kg),；
[0039] Cr( VI)+Se(0.571mg/kg)；
[0040] Cr(VI)+Se(l.l42mg/kg)；
[0041] Cr( VI)+Se(2.283mg/kg)〇
[0042] 选购1日龄蛋鸡，动物房饲养7天，然后开始正式实验。在实验的14、28、42天，采集 鸡肝肾脑样品，检测各项指标，脏体比、总超氧化物歧化(T-S0D)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛 (MDA)、Ca2+-ATP酶、线粒体膜电位、组织病理切片。各个硒添加组数据、图片与空白组，络中 毒组相比较，来判断硒的解毒效果。
[0043]实验例1肝、肾、脑的脏体比变化
[0044] (1)肝体比：在实验期间，Cr(VI)攻毒后，鸡肝体比显著高于其他实验组(p〈0.05); 0.143mg/kg Se添加组、0.285mg/kg Se添加组和0.571mg/kg Se添加组的肝体比介于Cr (VI)中毒组和空白组之间；1.142mg/kg Se添加组，2.283mg/kg Se添加组肝体比高于Cr (VI)中毒组。实验第14天，空白组与0.285mg/kg Se添加组相比无显著差异(p>0.05)，与其 他各组间差异显著(P〈〇.〇5)，Cr(VI)中毒组与0.143mg/kg Se添加组、0.571mg/kg Se添加 组无显著差异(P>〇.05)。实验第28天，各实验组之间差异显著(p〈0.05)。实验第42天，空白 组与〇.143mg/kg Se添加组、0.285mg/kg Se添加组、0.571mg/kg Se添加组相比无显著差异 (p>0.05) ;Cr( VI)中毒组与1.142mg/kg Se添加组比无显著差异(p>0.05)。由此表明，Cr (VI)攻毒后，肝体比升高，当同时添加低剂量的硒时，肝体比下降，尤其是添加〇.285mg/kg Se时效果最佳。当添加1.14211^/1^、2.28311^/1^的56时，脏体比显著增高，中毒加重。
[0045] (2)肾体比：在14d，实验组的肾脏脏器指数均高于对照组，除了 1.142mg/kg硒Se添 加组和2.283mg/kg Se添加组和对照组差异显著外(P〈0.05)，其余的实验组与对照组差异 不显著(？>0.05)。28(1和42d时，Cr(VI)中毒组的肾脏脏器指数显著(P〈0.05)高于对照组。在 含铬饮水中再添加一定量的硒时，肾脏脏器指数有所下降，当加硒组Se的添加量为 0.285mg/kg时，此时的肾脏脏器指数与染铬组差异显著(P〈0.05)，与对照组差异不显著(P> 0.05)。加硒组Se的添加量为2.283mg/kg时，肾脏脏器指数显著(P〈0.05)高于染铬组和对照 组。由此表明饮水中添加7.832mg/kg Cr(VI)时，能引起肾脏脏器指数升高，在含7.832mg/ kg Cr( VI)饮水中再添加一定量的硒时，肾脏脏器指数有所下降，其中Se的添加量为 0.285mg/kg时效果最佳。但是当Se的添加量为1.142mg/kg和2.283mg/kg时，肾脏脏器指数 甚至高于染铬组。
[0046] (3)脑体比：各组的脑体比都随时间延长而降低，其中2.283mg/kg的硒添加组比空 白组和其余各组在14d、28d、42d脑体比都有明显的升高，与同期对照组相比都具有统计学 意义(P〈〇 .05)。在14d，对照组与Cr( VI)中毒组和0 · 143mg/kg Se添加组、0 · 285mg/kg Se添 加组、0 · 57lmg/kg Se添加组、1 · 142mg/kg Se添加组脑体比差异不明显(p>0 · 05)。28d，各组 间也无明显差异(p>〇.〇5)。42(1，0(￥1)中毒组明显高于对照组(p〈0.05)，0.143mg/kg Se添 加组和〇.285mg/kg Se添加组都明显高于对照组(ρ〈0·05)，。由此表明，2.283mg/kg Se添加 组促使脑体比增大，并随日龄增长脑体比逐渐降低，对鸡动物体具有一定损伤作用， 0.143mg/kg Se添加组和0.285mg/kg Se添加组脑体比与对照组相近，对鸡本身有一定保护 作用。
[0047]表1肝、肾、脑的脏体比变化(单位:g/kg)
[0048]
[0049] 注：同列数据标注不同字母者差异显著(P〈0.05)。
[0050] 实验例2总超氧化物歧化(T-S0D)在肝、肾、脑中的变化
[0051 ] (1)肝中T-S0D变化:实验期间，鸡Cr( VI)攻毒后，鸡肝脏的T-S0D的活性显著下降， 明显低于空白组。实验14d，空白组与Cr(VI)中毒组、0.143mg/kg Se添加组、0.285mg/kg Se 添加组、0 · 57lmg/kg Se添加组的T-S0D活性无显著差异(p>0 · 05)。实验28d，0 · 143mg/kg Se 添加组、0 · 285mg/kg Se添加组、0 · 571mg/kg Se添加组之间的T-S0D活性无显著差异性(p> 〇.05)，与其他各组差异显著(P〈0.05)。实验42d，各个实验组之间差异显著(P〈0.05)。因此， 饮水中添加7.832mg/kg的Cr( VI)时，导致T-S0D活性下降，同时添加低剂量的Se(0.285mg/ kg)能显著减弱Cr(VI)对T-S0D的影响。同时，Se的剂量超过0.571mg/kg时，加重中毒。
[0052] (2)肾中T-S0D变化：14d、28d和42d，各实验组肾脏T-S0D的活性均低于对照组。 14d，Cr(VI)中毒组和加硒组之间差异不显著(P>0.05)。在28d和42d时，加硒组Se的添加量 为1.142mg/kg和2.283mg/kg时，T-S0D的活性与Cr( VI)中毒组差异不显著，而且，当Se添加 量为2.283mg/kg时，T-S0D的活性甚至低于Cr(VI)中毒组。然而，当加硒组Se的添加量为 0.285mg/kg时，此时T-S0D的活性在所有加硒组中最高，与Cr( VI)中毒组相比，差异显著(P〈 0.05)。由此表明饮水中添加7.832mg/kg Cr (VI)时，能引起鸡肾脏组织的T-S0D的活性降 低，在含7.832mg/kg Cr(VI)饮水中再添加一定量的硒时，T-SOD的活性得到恢复，其中Se的 添加量为〇. 285mg/kg时效果最佳。但是当Se的添加量为1.142mg/kg和2.283mg/kg时，鸡肾 脏组织的T-S0D的活性甚至比染铬组的更低。
[0053] (3)脑中S0D变化:T-S0D含量在空白与各实验组中除2.283mg/kg Se添加组外，在 14d、28d、42d均变化不明显。2.283mg/kg Se添加组在14d、28d和42d T-S0D含量随日龄增加 下降显著(p〈〇 .05)。在14和28日龄时，中毒组、0 · 143mg/kg Se添加组和0· 285mg/kg Se添加 组变化差异不显著化>0.05)。0.57111^/1^36添加组和1.14211^/1^36添加组1'-300含量高 于对照组，并与对照组差异显著(P〈〇. 05)。在42d时，只有0.285mg/kg Se添加组与对照组无 明显差异(Ρ>〇·〇5)，中毒组、0.143mg/kg Se添加组、0.571mg/kg Se添加组和 1.142mg/kg Se添加组T-S0D含量均高于对照组，差异显著(p〈0.05)。结果表明，0.285mg/kg Se添加组T-S0D含量与对照组最接近即效果最好，2.283mg/kgSe添加组中总超氧化物歧化酶含量极高， 但随日龄增长其T-S0D含量急速下降，即清除氧自由基的能力不断减弱。
[0054] 表2肝、肾、脑的T-S0D变化(单位:U/mgprot)
[0055]
[0057] 注：同列数据标注不同字母者差异显著(P〈0.05)。
[0058] 实验例3谷胱甘肽GSH在肝、肾、脑中的变化
[0059] (1)肝中GSH的变化:实验期间，Cr(VI)攻毒后，鸡肝脏GSH含量显著下降，明显低于 空白组;添加〇.571mg/kg Se后下降的趋势有所缓解;添加1.142mg/kg Se、2.283mg/kg Se 导致GSH含量低于Cr(VI)中毒组。实验14d，空白组与0 · 143mg/kgSe添加组、0 · 285mg/kg Se 添加组的GSH含量无显著差异(ρ>0·05)，Cr(VI)中毒组与0· 143mg/kg Se添加组、0.285mg/ kg Se添加组、0.571mg/kg Se添加组的GSH含量无显著差异（口>0.05)。28(1，空白组与 0.285mg/kg Se添加组的GSH含量无显著差异(p>0.05)，与其他各组差异显著（P〈0.05)。 42d，各个组之间差异显著（P〈0.05)。因此，饮水中添加7.832mg/kg的Cr(VI)，导致GSH含量 减少，同时在饮水中添加低剂量的Se(0.285mg/kg)能显著减弱Cr(VI)对GSH的影响，使GSH 含量回升，接近空白组。同时，Se的剂量超过0.571mg/kg时，加重中毒，GSH含量显著减少。 [0060] (2)肾中GSH的变化:在14d、28d和42d时，Cr(VI)中毒组GSH含量显著(Ρ〈0·05)低于 对照组。14d，在所有加硒组中，除了Se的添加量为0.143mg/kg的加硒组与Cr(VI)中毒组之 间差异显著(P〈〇.〇5)外，其余的加硒组与Cr(VI)中毒组差异不显著(P>0.05)。在28d和42d， 加硒组Se的添加量为0.285mg/kg时，此时GSH含量在所有加硒组中最高，与Cr( VI)中毒组相 比，差异显著(P〈〇.〇5)，并且与对照组差异不显著(P>0.05)。但是当Se的添加量为1.142mg/ kg和2.283mg/kg时，此时的GSH含量与Cr( VI)中毒组差异不显著(P>0.05)。由此表明饮水中 添加7.832mg/kg Cr(VI)时，能引起鸡肾脏组织的GSH含量下降，在含7.832mg/kg Cr(VI)饮 水中再添加一定量的硒时，GSH含量与Cr(VI)中毒组相比又得到了升高。其中Se的添加量为 0 · 285mg/kg时效果最佳。然而在含7 · 832mg/kg Cr (VI)饮水中在添加2 · 283mg/kg Se时，GSH 含量甚至比Cr(VI)中毒组的还低。
[0061 ] (3)脑中GSH的变化:在14d、28d和42d这三个时期中，空白组与0.143mg/kg Se添加 组、0.285mg/kg Se添加组、0.571mg/kg Se添加组都随时间增加而抗氧化能力逐渐增大，Cr (VI)中毒组则随时间延长而抗氧化能力逐渐减弱，其中2.283mg/kg Se添加组与空白组相 比显著降低，其两者之差也随时间变化而显著增大（p〈〇. 05)。在各种硒含量添加组中 0.571mg/kg Se添加组在各个时期的抗氧化能力最强，与空白组比差异显著（p〈0.05)。在 14d，Cr(VI)中毒组、0· 143mg/kg Se添加组和0.285mg/kg Se添加组无显著差异（ρ>0·05)， 0· 571mg/kg Se添加组和 1 · 142mg/kg Se添加组显著高于对照组(ρ〈0.05)。28(1，0 · 143mg/kg Se添加组、0 · 285mg/kg Se添加组、0 · 571mg/kg Se添加组与对照组相比差异不明显（p> 0 · 05)。42(1，中毒组与对照组相比抗氧化能力显著降低(p〈0.05)，0 · 143mg/kg Se添加组、 0.571mg/kg Se添加组抗氧化能力比对照组低，但0.143mg/kg Se添加组和0.571mg/kg Se 添加组GSH含量比中毒组高，与中毒组和空白组都差异显著(p〈0.05)。由此表明，0.285mg/ kg Se添加组与对照组差异最小，0.571mg/kg Se添加组GSH含量最高抗氧化能力最强并有 最日龄增长，抗氧化能力增加趋势对鸡脑有一定保护作用，2.283mg/kg Se添加组抗氧化能 力减弱，即对鸡脑有一定损伤作用。
[0062] 表3肝、肾、脑的GSH变化(单位:mgGSH/gprot)
[0063]
[0065] 注：同列数据标注不同字母者差异显著(P〈0.05)。
[0066] 实验例4脂质过氧化物丙二醛(MDA)在肝、肾、脑中的变化
[0067] (1)肝中MDA的变化:实验期间，鸡Cr( VI)攻毒后，鸡肝脏MDA含量显著上升，明显高 于空白组。第14天，Cr(VI)中毒组与0.571mg/kg Se添加组的MDA含量无显著差异(p>0.05)， 与其他各组差异显著（Ρ〈〇·〇5)。第28天，0· 143mg/kg Se添加组和0.285mg/kg Se添加组之 间MDA含量无显著差异(p>0.05)，与其他各组差异显著(P〈0.05)。第42天，0.143mg/kg Se添 加组、0.571mg/kg Se添加组之间MDA含量无显著差异(p>0.05)，空白组、Cr(VI)中毒组与其 他各组的MDA含量差异显著(P〈0.05)。因此，饮水中添加7.832mg/kg Cr(VI)时，能引起鸡肝 脏组织的MDA含量升高，同时再添加一定量的Se时，MDA含量与Cr( VI)中毒组相比降低，但是 仍然无法恢复到对照组的水平，其中Se添加量为0.285mg/kg时效果最佳。当Se的添加量超 过0.571mg/kg时，GSH含量甚至高于染毒组。
[0068] (2)肾中MDA的变化：14日龄、28日龄和42日龄实验组MDA含量均高于对照组，并且 随着攻毒时间的增加，MDA含量逐渐增加。在14日龄、28日龄和42日龄时，Cr( VI)中毒组MDA 含量显著(P〈〇.〇5)高于对照组。14日龄时，在所有加硒组中，除了Se的添加量为2.283mg/kg 的硒添加组与Cr(VI)中毒组之间差异不显著(P>0.05)外，其余的加硒组与Cr(VI)中毒组差 异显著(P〈0.05)，与对照组相比，差异不显著(P>0.05)。在28日龄和42日龄时，在所有加硒 组中，当Se的添加量为1.142mg/kg和2.283mg/kg时，此时的MDA含量与Cr (VI)中毒组差异不 显著(P>0.05)，其余的加硒组MDA的含量与Cr(VI)中毒组差异显著(P〈0.05)降低。由此表明 饮水中添加 7.832mg/kg Cr(VI)时，能引起鸡肾脏组织的MDA含量升高，在含7.832mg/kg Cr (VI)饮水中再添加一定量的硒时，MDA含量与Cr(VI)中毒组相比降低，但是仍然无法恢复到 对照组的水平，其中Se的添加量为0.285mg/kg时效果最佳。当Se的添加量为2.283mg/kg时， GSH含量甚至高于Cr(VI)中毒组。
[0069] (3)脑中MDA的变化：空白组与1.142mg/kg和2.283mg/kg Se添加组在14d、28d和 42d均差异不显著(p>0.05)，Cr(VI)中毒组的丙二醛MDA含量在三个时期中，与同期各组相 比都达到了极大值并与空白组差异显著，随时间增加而含量增大。14d，Cr(VI)中毒组与 0.14311^/1^36添加组显著高于对照组，差异显著（口〈0.05)，0.28511^/1^36添加组、 0.571mg/kg Se添加组、1.142mg/kg Se添加组和2.283mg/kg Se添加组差异不显著（p> 0.05)，但0 · 285mg/kg Se添加组和0 · 571mg/kg Se添加组显著高于对照组(p〈0.05)。28(1和 42d时0.143mg/kg Se添加组和0.571mg/kg Se添加组与对照组比差异显著，MDA含量显著高 于对照组(p〈〇 . 05)，0.285mg/kg Se添加组与对照组差异不显著（p>0.05)。由此可知，Cr (VI)中毒组鸡脑中脂质过氧化物MDA含量极具增长，对鸡脑有一定损伤作用。添加硒会在一 定程度上降低由于中毒而增加的MDA含量。
[0070] 表4肝、肾、脑的MDA变化(单位:nmol/mgprot)
[0071]
[0072] 注：同列数据标注不同字母者差异显著(P〈0.05)。
[0073] 实验例5实验42天Ca2+_ATP酶在肝、肾、脑中的变化
[0074] (1)肝脏Ca2+_ATP酶的变化:42d，Cr (VI)攻毒后，鸡肝脏ATPase活性显著下降，并且 低于空白组。除加0.143mg/kg Se加硒组和0.285mg/kg Se加硒组之间无显著差异（p> 〇. 05)，与其他各组均差异显著(P〈0.05)。
[0075] (2)肾Ca2+-ATP酶的变化:在42d，Cr (VI)中毒组Ca2+-ATPase活性显著(P〈0 · 05)低 于对照组。添加一定量Na2Se03的加硒组，恢复了部分Ca2+-ATPase活性，其中Se的添加量为 0 · 285mg/kg时效果最佳。但是当Se的添加量为1 · 142mg/kg和2 · 283mg/kg时，此时的Ca2+-ATPase活性与Cr(VI)中毒组差异不显著(P>0.05)。
[0076] (3)脑Ca2+_ATP酶的变化：空白组的Ca2+-ATPase与其他实验组相比含量最高并且 差异显著(p〈〇 · 05) <Xr( VI)中毒组与1 · 142mg/kg和2 · 283mg/kg Se添加组无显著性差异(P> 0.05)，0.285mg/kg Se添加组与0.571mg/kg Se添加组与Cr(VI)中毒组相比含量升高差异 显著（p〈0.05)，0.285mg/kg Se添加组，与Cr( VI)中毒组和各硒添加组相比差异显著（p〈 0.05)〇
[0077]结果表明，含六价铬的中毒组会使细胞膜上的Ca2+-ATPase显著性降低，0.285mg/ kg与0.5715mg/kg Se添加组对鸡的Ca2+-ATPase具有一定保护作用，但随硒含量的增加， 1 · 142mg/kg和2.283mg/kg Se添加组中鸡的Ca2+-ATPase逐渐降低，有一定损害作用。
[0078] 表5肝、肾、脑的Ca2+_ATP酶变化(单位:U/mgprot)
[0079]
[0080] 注：同列数据标注不同字母者差异显著(P〈〇.05)。
[0081 ]实验例6实验42天肝、肾、脑的线粒体膜电位变化
[0082] (1)肝:如图1所示，实验42天，K2Cr2〇7攻毒后，鸡肝细胞内线粒体功能受到损害，导 致线粒体膜电位显著下降。除加 Se(0.143mg/kg，0.571mg/kg)两组之间差异不显著（P> 0 · 05)，其他各组均差异显著(P〈0 · 05)。补充0 · 143mg/kg、0 · 285mg/kg和0 · 571mg/kg Se组相 比Cr(VI)中毒组，线粒体膜电位都有所升高，特别是补充0.285mg/kg的Se之后，恢复效果最 佳，线粒体膜电位接近正常。
[0083] (2)肾：如图2所示，在42日龄时，Cr(VI)中毒组线粒体膜电位与对照组相比显著(P 〈0 · 05)下降，添加0 · 143mg/kg、0 · 285mg/kg和0 · 571mg/kg Se的加硒组相比Cr(VI)中毒组， 线粒体膜电位都有所升高，其中Se的添加量为0.285mg/kg时效果最佳。然而Se的添加量为 1.142mg/kg和2.283mg/kg时，此时的线粒体膜电位与Cr(VI)中毒组差不显著。
[0084] (3)脑:如图3所示，存活率在空白组可达到最高，即图3A所示可达88.0733 %，图3B 中毒组线粒体凋亡和坏死率为各实验组中最大值，其凋亡坏死率可高达45.6933 %。5组硒 添加组中线粒体存活率呈波峰式变化，图3D0.285mg/kg Se添加组达到最高，随后线粒体存 活率随硒含量的添加增大而逐渐减小。在整个实验中线粒体的存活率与凋亡坏死率始终呈 水平对称结构。结果表明，中毒组会损害线粒体，造成线粒体的大量凋亡和坏死，硒的添加 对由于六价铬中毒有一定的缓解作用，其中〇.285mg/kg Se添加组效果最好，对线粒体起到 了很好的保护作用。
[0085] 实验例7肝、肾、脑的组织病理切片变化
[0086] (1)肝脏:如图4所示，空白组，肝细胞结构正常肝细胞排列整齐，紧密，细胞结构完 整(4-A);Cr(VI)中毒组，可以看到炎性细胞浸润，肝细胞液泡化，肝组织间隙变宽，肝索排 列紊乱(4-B);0.285mg/kg Se添加组解毒效果最好，肝组织与中毒组相比得到一定的修复， 肝组织间隙稍宽，少数细胞胞核消失，无明显变化无炎性浸润(4-C); 1.142mg/kg Se添加组 加重中毒，切片中可看到大量肝细胞空泡，炎性浸润(4-D)。
[0087] (2)肾脏:如图5所示，光镜下对照组鸡肾组织切片显示正常的组织学图像，肾小球 形状完整规则，肾小管的上皮细胞排列整齐（图5-C)。六价铬单独处理后，可见肾组织显示 病理改变，主要病变在肾小管。肾小囊囊腔增大，肾小管上皮细胞变性肿胀，部分崩解，上皮 细胞排列凌乱，肾小管管腔变窄，细胞结构不清晰（图5-B)。加硒组显示出硒对铬致肾小球 和肾小管损伤的保护作用，Se添加量为0.285mg/kg的加硒组大多数显示出与对照组相似的 正常肾组织学图像，有部分肾小管上皮细胞轻微变性(图5-AhSe添加量为1.142mg/kg的加 硒组可见肾组织病理变化主要是肾小管上皮细胞严重变性肿胀，崩解坏死，正常的肾组织 结构消失，出现明显的间隙（图5-D)。
[0088] ⑶脑:如图6所示，6B和6C分别为中毒情况下的脑组织病理切片，由6B可看出胶质 细胞和神经元水肿明显，小血管和毛细血管都出现严重水肿现象。6C可看到小动脉血管腔 闭锁，水肿严重。不同剂量硒与铬相互作用中〇.285mg Se添加组对鸡脑起到良好的保护作 用，如6D所示神经元和胶质细胞水肿现象明显减轻，小血管水肿不明显，即证明0.285mg Se 添加组与铬在脑中起拮抗作用。
[0089]具体实施例
[0090] 因靠近电镀厂，泰安某养鸡场内养殖鸡出现精神沉郁，羽毛脱落，食欲不振或废绝 的现象，鸡生长发育受损，到兽医院就诊，根据解剖及鸡场饲养环境的调查，初步诊断为铬 中毒。经水质检测，饮水中铬浓度为2.5mg/L，确定鸡为铬中毒；
[0091] 解毒方法:更换饮水，并在饮用水中按照0.285mg/kg的用量添加硒元素，所述的硒 元素来源于Na2Se0 3，连续使用一个月，经检测鸡体内铬元素含量回复正常值，其其他各项生 理指标均恢复正常，生长速率恢复，羽毛生长正常，食欲正常。
[0092] 可见采用本发明提供的这种解毒剂，作为天然解毒剂，带负电荷的非金属硒离子 与带正电的六价铬离子，发生拮抗反应，形成硒铬复合物，消除了六价铬的毒害作用，硒减 少了 MDA含量，恢复组织中抗氧化酶的活性，可以保护鸡的肝、肾、脑免受六价铬毒性影响。
【主权项】
1. 一种鸡六价铬解毒剂，其特征在于:所述的解毒剂为含硒化合物，其中硒元素用量为 0· 143mg/kg-〇. 571mg/kg，所述的硒元素来源于 Na2Se〇3 或 C5HnN〇2Se。2. 根据权利要求1所述的鸡六价铬解毒剂，其特征在于：所述硒元素用量为O . 285mg/ kg 〇3. 根据权利要求1或2所述的鸡六价铬解毒剂，其特征在于：所述的硒元素来源于 Na2Se〇3〇
【文档编号】A61P39/02GK105902563SQ201610472921
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年6月24日
【发明人】刘建柱, 王洋, 郝盼, 万惠愚, 朱毅然, 陈鹏, 刘永夏
【申请人】山东农业大学